3.3. Estudis in vitro

3.3.1. Avaluació de la citotoxicitat en queratinòcits humans

Segons estudis rellevants,cistancheés una herba comuna que es coneix com "l'herba miracle que allarga la vida". El seu component principal éscistanòsid, que té diversos efectes com araantioxidant, antiinflamatori,ipromoció de la funció immune. El mecanisme entre cistanche iblanqueig de la pellrau en l'efecte antioxidant deglucòsids de cistanche. La melanina a la pell humana es produeix per l'oxidació de la tirosina catalitzada pertirosinasa, i la reacció d'oxidació requereix la participació d'oxigen, de manera que els radicals lliures d'oxigen del cos esdevenen un factor important que afecta la producció de melanina. Cistanche conté cistanòsid, que és un antioxidant i pot reduir la generació de radicals lliures al cos, per tantinhibint la producció de melanina.

Feu clic a Cistanche Powder Bulk

Per a més informació:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

El test MTT es va utilitzar per provar si PPEE, PPEE-SLN i KDPAG podrien afectar la viabilitat cel·lular mitjançant queratinòcits humans. Diferents concentracions de PPEE, PPEE-SLN, SLN sense extracte i KDPAG a 0.{{10}}625-1 mg/ml es van incubar durant 24 h amb una línia cel·lular de queratinòcits humans (Figura 2). Durant 24 hores, no es va observar una reducció significativa de la viabilitat de les cèl·lules dels queratinòcits humans en el rang de concentració de 0.{0625-0,5 mg/ml (p <0,05). Tanmateix, després del tractament amb 1 mg/ml de PPEE, PPEE-SLNS, SLN sense extracte i KDPAG durant 24 hores, es va observar una reducció significativa de la viabilitat cel·lular dels queratinòcits humans, 93 per cent, 90 per cent, 95 per cent i 95 per cent. El 89 per cent de les cèl·lules van sobreviure, respectivament. Així, es van utilitzar concentracions de PPEE, PPEE-SLN i KDPAG iguals o inferiors a 0, 5 mg/ml per a estudis posteriors.

L'activitat antioxidant es va avaluar mitjançant sistemes DPPH, ABTS i la prova de blanqueig amb carotè. En totes les mostres provades, es va trobar una manera depenent de la concentració. En l'assaig DPPH, KDPAG va mostrar l'activitat d'eliminació més alta seguida de PPEE-SLN i després PPEE. Els valors d'IC50 eren 6,35 ± 3,4{{30}} µg/mL, 8,79 ± 2,70 µg/mL i 10,5 ± 1,81 µg/mL respectivament en comparació amb la vitamina C s'utilitza com a estàndard amb un IC50 de 2 ± 0,01 µg/mL. Aquesta tendència també es va observar contra els radicals ABTS amb un valor de 3,91 ± 1,43 µg/mL, 4,29 ± 1,12 µg/mL i 6,10 ± 0,62 µg/mL, respectivament, en comparació amb el Vit estàndard. C amb un IC50 de 0,96 ± 0,02 µg/mL que confirma els resultats de l'assaig DPPH. Aquesta activitat d'eliminació d'extractes de fulles de PP i les seves fraccions ja s'ha assenyalat per als dos assaigs, però amb valors més alts que els obtinguts [14,49]. Aquestes troballes suggereixen que l'activitat dels antioxidants es veu afectada per les condicions ambientals, les parts de la planta, l'etapa de maduresa, el mètode de collita i els dissolvents utilitzats per a l'extracció. Aquests resultats són coherents amb la literatura, ja que es va trobar que l'extracte de fulla PP tenia una millor capacitat antioxidant que els extractes de llavors, pela, polpa i fruita en ambdós assaigs [14,20,50]. A més, es va pensar que l'alt contingut de flavonoides reportat de les fulles de PP, en particular, els flavonols es pensava que eren els responsables de l'activitat antioxidant [20].

Els PPEE, els PPEE-SLN i el KDPAG van mostrar activitat anti-elastasa, anti-collagenasa i anti-tirosinasa amb un alt percentatge d'inhibició a 300 µg/mL i valors d'IC50 relativament baixos (taula 3) en comparació amb els seus respectius controls positius.

3.4. Avaluació de PPEE-SLNs i PPEE-SLNs Crema

Les formulacions de PPEE-SLN preparades mostraven mides de partícules de 170 nm a 176 nm; això indica que l'addició de tensioactiu als sistemes de nanopartícules de lípids sòlids fa que la pel·lícula interfacial es condensi i s'estabilitzi. Les formulacions mostren valors baixos d'índex de polidispersitat (0.23{{1{0}}-0,450) que indiquen homogeneïtat de la distribució de la mida de partícules amb ZP entre -21,8 i -22,0 que garanteix productes d'alta estabilitat (Figura 3a, b). El 70-77 per cent de l'eficàcia d'encapsulació de PPEE-SLN registrada es deu al tipus de lípid (monoestearat de glicerol) que és capaç de tancar els porus superficials de les perles. Les micrografies TEM i SEM van revelar la formació de nanopartícules de distribució de mida de partícules estreta, nanovesícules llises, esfèriques i homogènies (figura 3c, d). En FTIR, el PPEE presenta pics característics a 3352 cm−1 corresponents a l'estirament de l'amina secundària aromàtica NH, 2974,23 cm−1 corresponents a l'estirament de CH aromàtic, 1735,93 cm−1 corresponents a l'estirament C=O i 1257,59 cm− 1 corresponent a l'estirament de l'amina alifàtica CN tal com apareix a (figura 4). Els espectres FTIR de PPEE i la barreja física de lípids presenten els mateixos pics característics a causa de l'estirament de l'amina secundària aromàtica NH a 3348,42 cm−1, C=O que s'estira a 1735,93 cm−1 i l'estirament de l'amina alifàtica CN a 1257,59 cm −1. Així, és evident que tots els pics característics que estaven presents en els espectres de PPEE es van replicar gairebé a la mateixa regió en els espectres de la barreja física de PPEE-SLNs indicant que no hi ha una interacció significativa entre els fàrmacs i els lípids. Les cremes de PPEE-SLN (2 per cent i 5 per cent) eren groguenques amb un aspecte llis, superfície llisa i un pH adequat que oscil·lava entre 5 i 5,8 ± 0,15, cosa que confirma la compatibilitat de les formulacions amb les secrecions de la pell, no irritant la pell humana, no. presència d'envermelliment o edema, fàcil de rentar amb aigua i un bon valor d'extensió oscil·la entre 10 i 13 g cm/s, amb viscositat en el rang de 500 ± 6,24 a 600 ± 7,52 CPS a 10 rpm, sense evidència de separació de fases i bona consistència durant el període d'estudis. La quantitat total de bacteris i motlles va ser inferior a 100 CFU/mL i en el rang d'acceptació dels productes per a la cura de la pell. La crema al 2 per cent va mostrar un alliberament inicial de PPEE-SLN d'un 15,21 ± 1,44 per cent durant la primera h; després d'això, els PPEE-SLN atrapats a la crema van ser alliberats gradualment; El 60,32 ± 2,54 per cent es van alliberar després de 12 i el 62 ± 1,44 per cent gairebé després de 24 h respectivament. D'altra banda, la crema al 5 per cent va mostrar un alliberament inicial de PPEE-SLN d'un 20,21 ± 2,70 per cent durant la primera h; després d'això, els PPEE-SLN atrapats a la crema es van alliberar gradualment, el 77,12 ± 2,88 per cent es van alliberar després del 12 i el 80 ± 2,91 per cent gairebé després de 24 h respectivament. Les dues fórmules de crema van mostrar un alliberament prolongat de PPEE durant 24 hores (figura 5). A més, el nostre estudi de recerca va presentar que les formulacions de crema (2 per cent i 5 per cent) són estables durant dos mesos.

3.5. Estudis in vivo

Després de vint dies de tractament amb la crema, es van avaluar les puntuacions antiarrugues. L'efecte anti-arrugues de la crema de PPEE-SLN depenia de la dosi, i l'efecte observat en el grup de crema de PPEE-SLN del 5% (G5) va ser comparable al resultat del grup de control positiu (G3), que es va tractar amb un producte de mercat (figura 6) i va mostrar puntuacions antiarrugues significativament millors en comparació amb la crema antiarrugues estàndard. Les fotografies es presenten a la figura 7. Els grups (G3-G5) mostraven superfícies de pell molt llises i millorades. No hi va haver canvis a la pell en animals G1. En canvi, G2 va mostrar arrugues gruixudes i profundes.

Les fibres elàstiques es van reduir significativament per la irradiació UV en comparació amb les del grup normal. Les imatges de la pell de ratolins no tractats i tractats es van observar al microscopi (figura 8). G1 tenia un gruix de pell normal tant de la dermis com de l'epidermis i contenia fibroblasts, a més d'un gruix de fibres elàstiques normals sense fragmentació. En comparació amb G1, la pell dels ratolins irradiats amb UV (G2) va mostrar un augment significatiu de l'engrossiment tant de l'epidermis com de la dermis, així com una disminució de la formació de fibroblast i de les fibres elàstiques per irradiació UV. L'aplicació tòpica de la crema SLNs PPEE del 5 per cent (G5) i del 2 per cent (G4) va ser comparable a la de G3 que va rebre el producte comercial. Tots els G4 i G5 van disminuir significativament el gruix de la dermis i l'epidermis i augmenten el contingut de fibroblasts, ja que el seu nombre determina el contingut de fibres de col·lagen, ajudant així a reparar la pell danyada i reduint l'efecte d'envelliment de la pell (Figura 9a, b) . A més, ambdós grups van mostrar efectes preventius contra la degradació de les fibres elàstiques per irradiació UV, de manera que podem concloure que el tractament amb qualsevol dosi de crema de PPEE-SLNs va mostrar un efecte protector contra la irradiació UV.

Per a més informació: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501