Acteòsid: investigació sobre l'activitat antioxidant i antihipertensiva

Contacte:joanna.jia@wecistanche.com

Activitats antioxidants i antihipertensives de l'acteòsid i els seus anàlegs

Chao-Hsiang CHEN1,2, Yin-Shiou LIN3, Mei-Yin CHIEN2,4, Wen-Chi HOU5,6,* i Miao-Lin HU1,*

Resum. Acteòsid(Act), un glucòsid feniletanoide, és un compost actiu en diverses plantes i herbes medicinals tradicionals. Actua juntament amb el seu isòmer estructural,isoacteòsid(Isoact) i un anàleg, 6-O-acety-lacteòsid (6-O-acetilacte), es van utilitzar en l'estudi per investigar elantioxidant, l'enzim convertidor de l'angiotensina (ACE) i activitats inhibidores de l'hemòlisien vitroi activitat antihipertensiva contra rates espontàniament hipertenses (SHR)en viu. Vam mostrar que Act, Isoact i 6-O-acetilac va eliminar eficaçment els radicals 1,1-difenil-2-picril-hidrazil (amb IC50 a 11,4, 9,48 i 9,55 μM, respectivament) i els radicals superòxid (amb IC50 a 66,0, 38,5,5). , i 39,1 μM, respectivament). Com a Isoact i 6-O-acetylact tenia activitats similars d'eliminació de radicals, només es van utilitzar Act i Isoact per als estudis següents. Tant Act com Isoact van inhibir l'activitat de la xantina oxidasa amb IC50 a 53,3 i 62,2 μM, respectivament. Tant Act com Isoact també van inhibir significativament l'activitat de l'ACE i l'hemòlisi induïda pel 2,2'-azo-bis(2-amidinopropà)dihidroclorur, però els efectes d'Act van ser més forts que Isoact. Després vam administrar oralment una dosi única d'Act o Isoact (10 mg/Kg de pes corporal) a SHR i vam mesurar els canvis de pressió arterial sistòlica (PAS) i pressió arterial diastòlica (PAD) durant 24 h. Act, però no Isoact, va mostrar activitat antihipertensiva per reduir la PAS i la PAD. Els resultats suggereixen la utilitat potencial de la Llei com a producte d'alimentació saludableantioxidantprotecció i regulació de la pressió arterial.

Paraules clau: Acteòsid; activitat antihipertensiva; enzim convertidor d'angiotensina (ACE); antioxidant; Hemòlisi.

ingredient actiu acteòsid en cistanche

Introducció

Acteòsid(Acta), un glicòsid feniletanoide que conté àcid cafeic, 3',4'-dihidroxifeniletanol, glucosa i ramnosa, es va aïllar per primera vegada de les flors deSyringa vul- garis(Birkofer et al., 1968), i juntament amb l'isòmer estructural deisoacteòsid(Isoact) i la derivada de6-O-acetillacteòsid(6-O-acetilacte), s'ha trobat en moltes plantes i herbes medicinals, com araLigstrum purpurascens(Wong et al., 2001),Calicarpa dicotoma(Koo et al., 2006; Lee et al., 2006),Cistanche deserticolaiBoschniakia rossica(Wu et al., 2006),Escrofulària ningpoenis(Huang et al., 2008),Rehmannia glutinosa(Li et al., 2006). Es va informar que l'acte presentava activitat antimetastàtica sobre cèl·lules de melanoma B16 en models de ratolins C57BL/6 (Ohno et al., 2002). Act, Isoact i 6-ORecentment s'ha demostrat que l'acetilacte inhibeix l'expressió activada per IL-1 -de CAM-1 intercel·lular i CAM-1 vascular a les cèl·lules endotelials de la vena umbilical humana (Chen et al., 2009). Act també protegeix les cèl·lules endotelials pulmonars bovines de l'estrès oxidatiu induït pel radical hidroxil (Chiou et al., 2004) i inhibeix la producció d'òxid nítric i TNF mitjançant el bloqueig de l'activació d'AP-1 en macròfags estimulats per lipopolisacàrids (Rao et al., 2004). , 2009). Act i Isoact presenten activitats neuroprotectoresen vitro(Koo et al., 2005). Koo et al. (2006) van informar que Act i les seves aglicones eliminaven eficaçment l'1,1-difenil-2-picril-hidrazil (DPPH) i l'òxid nítricen vitro. Tanmateix, pocs estudis han comparat elen vitro antioxidantactivitats de Act i els seus compostos estructuralment relacionats com Isoact i 6-O- acetilacte.

S'han utilitzat diverses classes d'agents farmacològics en el tractament de la hipertensió (Mark i Davis, 2000). Una classe de fàrmacs antihipertensius, coneguts com a inhibidors de l'enzim convertidor de l'angiotensina I (IEC) (és a dir, inhibidors de la peptidasa), té una baixa incidència d'efectes secundaris adversos i són la classe preferida d'antihipertensius.

agents en el tractament de pacients amb malalties secundàries concurrents (Fotherby i Panayiotou, 1999). L'ACE (peptidil-dipeptide hidrolasa EC 3.4.15.1) és una exopeptidasa que conté Zn alliberadora de dipèptids, que elimina un dipèptid de l'extrem C-terminal de l'angiotensina I per formar angiotensina II, un compost molt hipertens. Diversosantioxidantpèptids (glutatió reduït i pèptids relacionats amb la carnosina) presenten activitats inhibidores de l'ACE (Hou et al., 2003). El primer inhibidor de l'ACE actiu oralment disponible clínicament, captopril, es va desenvolupar per a tractaments hipertensius (Ondetti et al., 1977; Borer, 2007). S'ha informat que l'acte exerceix efectes relaxants mediats per l'òxid nítric sobre els anells aòrtics intactes amb l'endoteli de rates SD (Wong et al., 2001). Ahmad et al. (1995) han informat que Act indueix una disminució dependent de la dosi de la pressió arterial sistòlica (PAS) i la pressió arterial diastòlica (PAD) després de la seva injecció intravenosa a rates Wistar anestesiades normotenses. Tanmateix, no està clar si Acte administrat per via oral i/o els seus isòmers relacionats són antihipertensius.en viu. En el present estudi, hem investigaten vitro antioxidantcapacitat i activitats inhibidores de l'ACE, així com laen viuactivitat antihipertensiva d'Act, Isoact i/o 6-O-acetilacte utilitzant les rates hipertenses espontànies (SHR). S'espera que aquests estudis proporcionin dades útils per al desenvolupament d'Act com a producte d'alimentació saludable.

Materials i mètodes

Materials

2,2'-azo-bis(2-amidinopropà)diclorhidrat (AAPH), ACE (unitat I, pulmó de conill), hidroxitoluè butilat (BHT), DPPH, N-(3-[{{7 }}furil]acriloil)-Phe-Gly-Gly (FAPGG), NADH, fenazina metosulfat (PMS), xantina i xantina oxidasa es van comprar a Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, EUA). Captopril es va comprar a Calbiochem Co. (CA, EUA). Act, Isoact i 6-O-acetilact (figura 1) es van comprar a Equal Corp. (pureses > 98 per cent, Xangai, Xina). Altres productes químics i reactius eren de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, EUA).

Escombrant activitat de actuar, Isoact, i 6-O- acetilacte en contra dPPH radicals per espectrofotometria

Un volum (0,3 ml) d'Act, Isoact i 6-O-acetilac (les concentracions finals eren d'1,56 a 50 µM), BHT i àcid ascòrbic (les concentracions finals van ser de 2,4 a 60 µM) es van afegir a 0,1 ml de tampó Tris-HCl 1 M (pH 7,9). ) i després es barreja amb 0,6 ml de 100 µM DPPH en metanol fins a una concentració final de 60 µM durant 20 min sota protecció de la llum a temperatura ambient (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). La disminució de l'absorbància a 517 nm es va mesurar i es va expressar com a ΔA517 nm. Es va utilitzar aigua desionitzada com a experiment en blanc. L'activitat d'eliminació del radical DPPH (per cent) es va calcular amb l'equació: (ΔA517blank − ΔA517sample) ÷ ΔA517blank × 100. La IC50 representa la concentració de la meitat-inhibició.

Inhibitòria activitat de Actuar i Isoact en contra xantina oxidasa

L'activitat de la xantina oxidasa es va mesurar determinant la formació d'àcid úric a 295 nm utilitzant xantina com a substrat (Kalckar, 1947). Les diferents quantitats d'Act i Isoact (les concentracions finals eren 25, 50 i 75 µM) es van barrejar prèviament amb 50 µL d'1 mU/mL de xantina oxidasa a 4 graus durant 1 h, i després els 300 µL de xantina 1 mM. es van afegir. Els canvis d'absorbància a 295 nm es van registrar durant 2 min i es van expressar com ΔA295 nm/min. L'activitat inhibidora de la xantina oxidasa (per cent) es va calcular de la següent manera: (ΔA295 nm/min negre − ΔA295 nm/min mostra) ÷ ΔA295 nm/min negre × 100. Es va utilitzar aigua desionitzada en lloc de solució de mostra com a experiment en blanc. IC50 significa la concentració de semi-inhibició.

Escombrant activitat de actuar, Isoact, i 6-O- acetilacte en contra superòxid radicals per espectrofotometria

El radical superòxid va ser generat pel sistema PMS-NA-DH (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Totes les mostres de 0,2 ml, que contenen diferents quantitats d'Act, Isoact i 6-O-acetilat (la concentració final va ser de 15,6, 31,3, 62,5, 125 i 250 µM), es va afegir en seqüència a 0,2 mL de 630 µM de tetrazoli nitroblau, 0,2 ml de 33 µM PMS i 0,2 ml de 156 µM NADH en tampó fosfat de 100 mM (pH 7,4). Es va utilitzar aigua desionitzada en lloc de la solució de mostra com a experiment en blanc. L'àcid ascòrbic (la concentració final va ser de 6, 9, 12 i 24 µM) es va utilitzar com a control positiu. Els canvis d'absorbància a 560 nm es van registrar durant 2 min i es van expressar com ΔA560 nm/min. L'activitat d'eliminació dels radicals superòxid (per cent) es va calcular de la següent manera: (ΔA560 nm/min negre − ΔA560 nm/min mostra) ÷ ΔA560 nm/min negre × 100. IC50 significa la concentració de mitja inhibició.

determinació de As inhibidor activitat de Actuar i Isoact per HPLC

Cada 50 µL de Act (0.2, 0.4, 0.5 i 2.0 µmol) i Isoact ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0 i 2.0 µmol) es van barrejar prèviament amb 15 µL d'1U/mL ACE durant 5 min, i després es van afegir 200 µL de FAPGG 0,5 mM i es van fer reaccionar a temperatura ambient durant 10 min (Anzenbacherova et al., 2001). Es van afegir 800 µl de metanol per aturar la reacció. L'experiment en blanc només era FAPGG. A l'experiment de control, ACE va reaccionar amb FAPGG en les mateixes condicions. La separació cromatogràfica de FAPGG i FAP es va dur a terme al sistema cromatogràfic Hitachi (Japó) amb un bucle de 10 µL. L'anàlisi HPLC es va realitzar en una columna Biosil Aqua-ODS-W 5 µ (Biotic Chemical Co., Ltd., Taiwan, 250 × 4,6 mm id), mida de partícula 5 µm. La mescla reaccionada es va separar isocràticament amb una fase mòbil formada per nonilamina 0,02 M (ajustada a pH 2,4 amb àcid fosfòric) i acetonitril en una proporció de 67,5:32,5 (V/V) (Anzenbacherova et al., 2001). El cabal era d'1 ml/min; el volum d'injecció era de 10 µL; el detector es va establir a 345 nm. Les inhibicions de l'ACE (per cent) d'Act i Isoact es van calcular de la següent manera: [(Àrea de FAPGGblank − Àrea de control FAPGG) − (Àrea de FAPGGblank − Àrea de FAPGGsample) ÷ (Àrea de FAPGGblank − Àrea de control FAPGG) × 100.

Inhibitòria activitat de Actuar i Isoact en contra Mediat per AAPH hemòlisi

L'oxidació de la cadena de radicals lliures dels glòbuls vermells de rata (RBC) mitjançant hemòlisi mediada per AAPH (Miki et al., 1987). Es va col·locar sang de rata en tubs heparinitzats i es va centrifugar a 1000 ×gdurant 10 min. Després de rentar-se tres vegades amb NaCl 0,15 M, el RBC empaquetat es va obtenir per centrifugació a 1000 ×gdurant 10 min. Les diferents quantitats d'Act i Isoact (les concentracions finals eren de 2, 5 i 10 µM) es van barrejar 25 µL de suspensió de RBC al 20 per cent (V/V, en PBS 10 mM) i 25 µL de solució AAPH 500 mM a 37 graus per 0. , 1, 1,5, 2, 2,5, 3 i 3,5 h amb agitació suau. Cada mescla es va centrifugar a 1000 ×gdurant 10 min, i el sobrenedant es va mesurar a 536 nm. Es va utilitzar aigua desionitzada en lloc de la solució AAPH o la solució de mostra, respectivament, com a grup en blanc o com a grup control. La inhibició de l'hemòlisi (per cent) d'Act i Isoact a les 3 h o a les 3,5 h es va calcular de la següent manera: (ΔA536 nmcontrol - ΔA536 nmsample) ÷ ΔA536 nmcontrol × 100.

Antihipertensiu efectes de Actuar i Isoact activat SHr

Els efectes de Act, Isoact i captopril administrats per via oral per tub d'alimentació (2,0 × 8{0 mm) sobre la SBP reduïda i la DBP reduïda es van determinar segons el mètode dels informes anteriors (Lin et al., 2006; Lin et al., 2008; Han et al., 2011). Tots els procediments experimentals amb animals van seguir les directrius publicades (National Science Council, 1994). Els SHR masculins (8 setmanes d'edat, Centre Nacional d'Animals de Laboratori, Taipei) es van allotjar individualment en gàbies d'acer mantingudes a 24 graus amb un cicle de llum-foscor de 12- h i tenien accés gratuït a un menjar estàndard de ratolí/rata ( Prolab RMH2500, 5P14 Diet, PMI Nutrition International, Brentwood, MO) i aigua. Els SHR es van dividir aleatòriament en tractaments de control i mostra per a determinacions de SBP i DBP (sis rates per grup). Per a un experiment antihipertensiu a curt termini, es van administrar per via oral 0,5 ml de 10 mg Act o Isoac/Kg de SHR o 5 mg de captopril/Kg de SHR i es va mesurar la pressió arterial de la cua a 2, 4, 6 i 24. h després d'una única administració oral. Els 0,5 ml d'aigua destil·lada es van utilitzar per a un experiment en blanc. Es va utilitzar un mesurador de pressió arterial indirecta (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tòquio, Japó) per mesurar la PAS i la DBP quatre vegades en cada determinació per a cada tractament.

dades anàlisi

Els valors es presenten com a mitjanes ± SD i s'analitzen mitjançant ANOVA unidireccional, seguit de la prova de Tukey post hoc per a múltiples comparacions de mitjanes. Els estudiantstEs va realitzar una prova, quan només es van comparar dos grups de dades (com entre Act i Isoact a la mateixa concentració). Un valor p < 0,05="" es="" considera="" estadísticament="" significatiu.="" l'anàlisi="" estadística="" es="" va="" realitzar="" mitjançant="" spss="" per="" a="" windows,="" versió="" 10="" (spss,="" inc.,="" chicago,="" il,="">

acteòsiden cistanche per millorar la memòria

Resultats

Escombrant activitat de PPH i superòxid radicals

Act, Isoact i 6-O-acetilac va mostrar activitats d'eliminació de DPPH dependents de la dosi a pH 7, 9 (figura 2). Els valors IC50 eren 11,4, 9,48 i 9,55 µM, respectivament, per a Act, Isoact i 6-O-acetilacte. Els valors IC50 dels controls positius d'àcid ascòrbic i BHT van ser de 13,1 i 18,5 µM, respectivament.

Inhibició de xantina oxidasa activitat

Es va demostrar que Act i Isoact presentaven una inhibició de la xantina oxidasa depenent de la dosi (figura 3). Es va calcular que l'IC50 era de 53,3 i 62,2 µM, respectivament, per a Act i Isoact.

Inhibició de superòxid dismutasa activitat

Com que tant Act com Isoact van inhibir l'activitat de la xantina oxidasa, vam utilitzar el sistema PMS-NADH per generar radicals superòxid (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). actuar,

Isoact i 6-O-acetilac va mostrar activitats d'eliminació de radicals superòxid depenents de la dosi (figura 4). Els valors IC50 eren 66,0, 38,5 i 39,1 µM, respectivament, per a Act, Isoact i 6-O-acetilacte. Els valors IC50 del control positiu de l'àcid ascòrbic eren de 9,0 µM. A partir dels resultats de les figures 2 i 4, va quedar clar que Isoact i 6-O-acetilat tenia activitats similars d'eliminació de radicals contra els radicals DPPH i superòxid i, per tant, només es van seleccionar Act i Isoact per a més exàmens d'activitat biològica.

As inhibidor activitats de Actuar i Isoact

A la prova preliminar, vam trobar que Act i Isoact interferien amb l'absorbància del substrat ACE FAPGG i el seu producte hidrolitzat FAP a 345 nm tal com s'utilitza per a l'assaig espectrofotomètric continu (Holmquist et al., 1979). Per tant, la separació juntament amb la detecció d'Act o Isoact i FAPGG per HPLC es va utilitzar per controlar les activitats inhibidores de l'ACE. La figura 5A a la figura 5D són cromatogrames HPLC típics de mescles de reacció d'10 µl d'una prova en blanc (només FAPGG, figura 5A); prova de control (ACE va reaccionar amb FAPGG per produir FAP, figura 5B); 0,5 µmol d'Act (312,5 µg), ACE i FAPGG (figura 5C); i 0,5 µmol d'Isoact (312,5 µg), ACE i FAPGG (figura 5D). L'àrea de FAPGG de la figura 5B era la més baixa i la de la figura 5A la més alta dels quatre cromatogrames HPLC típics. Les àrees de FAPGG de les figures 5C i 5D depenen de les activitats inhibidores de l'ACE de diferents concentracions d'Ac i Isoact. Les inhibicions de l'ACE calculades d'Ac i Isoact es mostren a la figura 5E. L'acte va mostrar activitats inhibidores de l'ACE més altes que Isoact, i es va calcular que l'IC50 del primer era de 472 µM per àrea als cromatogrames HPLC.

Inhibitòria activitat de Actuar i Isoact en contra Mediat per AAPH hemòlisi

Les activitats inhibidores de Act i Isoact contra l'hemòlisi mediada per AAPH a concentracions de 2, 5 i 10 µM es van avaluar durant 3,5 h (Miki et al., 1987). Els resultats de la figura 6A demostren que l'hemòlisi en eritròcits de rata va augmentar dràsticament (s'expressa com a ΔA536 nm) després de reaccions de 3-h o 3.5-h en presència de radicals APH (com a grups de control, símbol del cicle blanc). ). Es va observar poca o cap hemòlisi en absència de radicals APH durant la reacció de 3.5-h (com a grups en blanc, símbol de cicle negre). Per tant, la inhibició de l'hemòlisi d'Act i Isoact a les 3 h o a les 3,5 h es va calcular de la següent manera: (ΔA536 nmcontrol − ΔA536 nmsample) ÷ ΔA536 nmcontrol × 100. Figura 6B

mostra que tant Act com Isoact a 2, 5 i 10 µM van mostrar una inhibició depenent de la concentració de l'hemòlisi induïda per AAPH, amb els efectes inhibidors d'Act significativament més forts que els d'Isoact a cada concentració utilitzada.

Antihipertensiu efectes de Actuar i Isoact activat SHr

Els SHR van rebre una única administració oral d'Act i Isoact (10 mg/Kg SHR) i es van registrar canvis en SBP i DBP durant 24 hores. Abans vam informar que la pressió arterial (SBP i DBP) de la SHR era variable durant 24- h (Lin et al., 2006; Han et al., 2011). Per tant, es va utilitzar una comparació en un temps determinat (com ara 2, 4, 6, 8 i 24 h) entre el blanc i la mostra en comptes d'abans i després de l'administració oral. Es va trobar que Act, però no Isoact, va reduir efectivament la SBP i la DBP de SHR en comparació amb el grup en blanc (aigua destil·lada). La PAS es va reduir significativament al grup Act a les 2, 4 i 6 h en 18,8, 16,5 i 14,9 mmHg, respectivament, però la reducció de la PAS (3,3 mmHg) a les 24 h després del tractament amb Act no va ser constant.

artísticament significatiu (figura 7A). Com es mostra a la figura 7B, la DBP es va reduir al grup Act a les 2, 4 i 6 h (en 8,5, 7,6 i 12,0 mmHg, respectivament), tot i que només el resultat obtingut a les 6 h va ser estadísticament significatiu. (P< 0.05).="" es="" va="" assenyalar="" que="" act="" i="" captopril="" (com="" a="" control="" positiu)="" van="" tenir="" efectes="" similars="" sobre="" la="" sbp="" en="" les="" primeres="" etapes="" (2,="" 4="" i="" 6="" h)="" després="" de="" l'administració="">

acteòsiden cistanche tenen bons efectes antioxidants

DISCUSSIÓ

Les espècies actives d'oxigen i les reaccions mediades per radicals lliures estan implicades en processos degeneratius o patològics com l'envelliment, el càncer, les malalties coronàries i la malaltia d'Alzheimer (Ames, 1983; Gey, 1990; Smith et al., 1996). Diversos informes s'han centrat en la deteccióantioxidantactivitats a partir dels recursos naturals. En el present estudi, primer hem comparatantioxidantactivitats d'Act, Isoact i 6-O-acetilat. Act i Isoact són isòmers estructurals en què el constituent de l'àcid cafeic s'uneix al grup hidroxil C-4 de la glucosa en el primer i al grup hidroxil C-6 de la glucosa en el segon. Mentre que els constituents de la ramnosa i el 3',4'-dihidroxi feniletanol, respectivament, estan units als grups hidroxil C{-3 i C{-1 de la part de glucosa en la mateixa molècula Act i Isoact, { {8}}O-acetilact és un derivat de l'Acte en el qual l'àcid acètic s'uneix al grup hidroxil C-6 del fragment de glucosa (figura 1). Koo et al. (2006) van informar que Act i les seves aglicones presentaven activitats d'eliminació de DPPH, i l'ordre d'aquestes activitats (expressat com IC50) era Act (1,28 µM) > àcid cafeic (2,22 µM) > 3',4'-dihidroxi feniletanol ( 7,72 µM) > -tocoferol (15,1 µM). En el present informe (figura 2), l'ordre de les activitats d'eliminació de DPPH (expressat com a IC50) és 6-O-acetilat (9,55 µM) ≈ Isoact (9,48 µM) > Act (11,4 µM). Aquests valors eren comparables o millors que els de l'àcid ascòrbic (IC50 de 13,1 µM) i BHT (IC50 de 18,5 µM) per eliminar els radicals DPPH. La IC50 més alta de l'Acta del present informe podria ser de la concentració final de 60 µM de DPPH en lloc dels 30 µM utilitzats per Koo et al. informat (2006). Com que l'assaig del radical DPPH pertany a la reacció de transferència d'electrons (Huang et al., 2005), s'especula que el derivat del grup hidroxil C-6 del fragment glucosa, com el grup acetil de {{21} }}O- La part d'acetilat i àcid cafeic a Isoact, pot proporcionar més fàcilment una reacció de transferència d'electrons que les del grup hidroxil lliure de C-6 a la part de glucosa d'Act per a l'assaig d'eliminació de DPPH.

Actuar, 6-OS'ha informat que -acetilat i Isoact posseeixen una activitat eliminadora de superòxids in vitro utilitzant el sistema xantina/xantina oxidasa per generar radicals superòxid (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999). Tanmateix, el nostre estudi actual va indicar que Act presentava activitats inhibidores de la xantina oxidasa (figura 3). Per tant, el radical superòxid es va generar utilitzant el sistema PMS-NADH en el present informe (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008) en lloc del sistema xantina/xantina oxidasa. De fet, utilitzant el sistema xantina/xantina oxidasa per generar radicals superòxid, Wang et al. (1996) van obtenir una IC50 de 63 µM Act contra radicals superòxid, i aquest valor és proper al de la inhibició de l'activitat de la xantina oxidasa per Act, tal com es va informar en el present estudi (53,3 µM). Es va informar que l'àcid cafeic presentava activitats inhibidores de la xantina oxidasa (Chiang et al., 1994). Es pot especular que les activitats d'eliminació de superòxids utilitzant el sistema generador de xantina/xantina oxidasa d'alguns fitoquímics amb estructures associades amb àcids cafeics, com Act o Isoact (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999), poden tenir ha contribuït, almenys en part, a les inhibicions de la xantina oxidasa. Curiosament, Wang et al. (1996) van trobar que l'Acte (0,5 i 2,5 mM) no inhibeix l'activitat de la xantina oxidasa que va ser determinada per un elèctrode d'oxigen per al consum d'oxigen durant l'oxidació de la xantina. Per tant, és important tenir en compte que diferents mètodes per avaluar l'activitat d'eliminació de superòxids poden produir dades contradictòries.

Li et al. (1993) han informat d'un grau similar d'inhibició d'Ac i Isoact contra l'hemòlisi mediada per AAPH en el globus vermell de ratolins. No obstant això, aquí vam demostrar que Act presentava una activitat inhibidora molt més gran contra l'hemòlisi induïda per AAPH en RBC de rates que Isoact (figura 6). No està clar si aquesta inconsistència pot haver estat deguda a la diferència d'espècies de rosegadors.

Kang et al. (2003) van informar que Act presentava activitats inhibidores de l'ACE i l'IC50 era de 373,3 µg/mL, que es va calcular que era de 598 µM utilitzant Hip-His-Leu com a substrats. En el present informe, la Llei va mostrar activitats inhibidores de l'ACE més altes que Isoact, i es va calcular que la IC50 del primer era de 472 µM per àrea als cromatogrames HPLC (figura 5). S'ha informat que l'acte exerceix efectes relaxants mediats per l'òxid nítric sobre els anells aòrtics intactes amb l'endoteli de rates SD (Wong et al., 2001). Tot i que s'ha demostrat que Act és antihipertensiu en rates Wistar,

l'estudi va utilitzar la injecció intravenosa d'Act en una rata anestesiada per descartar el factor d'adsorció (Ahmad et al., 1995). Aquí, vam administrar Acte oralment als SHR i vam determinar canvis en la pressió arterial. Vam trobar que el fet de l'administració oral, però no d'Isoact, presentava efectes antihipertensius en reduir la PAS i la PAD durant 24 hores després d'una única administració (figura 7). Actuar a una dosi de 10 mg/kg de pes corporal va tenir un efecte proper al del captopril a la dosi de 5 mg/kg SHR per reduir la PAS i va ser millor que el captopril per reduir la DBP.

En conclusió, Acte exhibitantioxidantactivitats, activitats inhibidores de l'ACE i efectes antihipertensius sobre els SHR. Els resultats que es presenten aquí beneficiaran l'esforç per desenvolupar herbes medicinals o productes relacionats amb la Llei, que s'ha trobat en moltes plantes i herbes medicinals, per a la protecció antioxidant i els efectes terapèutics en el futur.

Cistancheacteòsidper a l'antioxidació i l'envelliment

1Departament de Ciència i Biotecnologia dels Aliments, Universitat Nacional Chung Hsing, Taichung, Taiwan

2Ko Da Pharmaceutical Co., Ltd, Tao-Yuan, Taiwan

3Escola de Farmàcia, Universitat Mèdica de Taipei, Taipei, Taiwan

4 Institut de Grau de Materials Biomèdics i Enginyeria, Universitat Mèdica de Taipei, Taipei, Taiwan

5Centre d'Investigació en Medicina d'Herbes Tradicionals, Hospital Universitari Mèdic de Taipei, Taipei, Taiwan

6 Institut de Grau de Farmacognòsia, Universitat Mèdica de Taipei, Taipei, Taiwan

(Rebut el 12 de març de 2012; Acceptat el 20 d'abril de 2012)

LITERATURA CITADA

Ahmad, M., GH Rizwani, K. Aftab, VU Ahmad, AH Gilani i SP Ahmad. 1995.Acteòsid: un nou fàrmac antihipertensiu. Phytother. Res. 9: 525-527.

Ames, BN 1983. Carcinògens dietètics i anticancerígens: radicals d'oxigen i malalties degeneratives. Ciència 221:1256-1264.

Anzenbacherova, E., P. Anzenbacher, K. Macek i J. Kvetina. 2001. Determinació d'inhibidors de l'enzim (angiotensina convertasa) a partir de la reacció enzimàtica seguida de HPLC.J. Farmacèutic. Biomed. Anal. 24: 1151-1156.

Birkofer, L., C. Kaiser i U. Thomas. 1968.Acteòsidi neoacteòsid: Zuckerester aus Syringa vulgaris. Naturforsc- hung 23B: 1051-1058.

Borer, JS 2007. Inhibició de l'enzim convertidor d'angiotensina: un avenç històric en el tractament de les malalties cardiovasculars. Eur. Cor J. Supl. 9 (Suppl. E): E2-E9.

Chen, CH, TY Song, YC Liang i ML Hu. 2009.Acteòsidi 6-O-acetilacteòsids regulen a la baixa les molècules d'adhesió cel·lular induïdes per IL-1 mitjançant la inhibició d'ERK i JNK a les cèl·lules endotelials vasculars humanes. J. Agric. Menjar

Chem. 57: 8852-8859.

Chiang, HC, YJ Lo i FJ Lu. 1994. Inhibidors de la xantina oxidasa de fulles d'Alsophila spinulosa (Hook) Tryon. J. Inhibició enzimàtica. 8: 61-71.

Chiou, WF, LC Lin i CF Chen. 2004.Acteòsidprotegeix les cèl·lules endotelials contra l'estrès oxidatiu induït pels radicals lliures. J. Pharm. Pharmacol. 56: 743-748.

Fotherby, MD i B. Panayiotou. 1999. Teràpia antihipertensiva en la prevenció de l'ictus: què, quan i per a qui? Drogues 58: 663-674.

Gao, JJ, K. Igalashi i M. Nukina. 1999. Activitat d'eliminació radical dels glucòsids fenilpropanoides a Caryopteris incana. Biosci. Biotecnologia. Bioquímica. 63: 983-988.

Gey, KF 1990. Elantioxidanthipòtesi de la malaltia cardiovascular: epidemiologia i mecanismes. Bioquímica. Soc. Trans. 18: 1041-1045.428 Estudis Botànics, vol. 53, 2012

Han, CH, JC Liu, KH Chen, YS Lin, CT Chen, CT Fan, HL Lee, DZ Liu i WC Hou. 2011. Activitats antihipertensives d'all processat en rates espontàniament hipertenses i humans hipertensos. Bot. Semental. 52: 277-283.

Holmquist, B., P. Bunning i JF Riordan. 1979. Un assaig espectrofotomètric continu per a l'enzim convertidor d'angiotensina. Anal. Bioquímica. 95: 540-548.

Hou, WC, HJ Chen i YH Lin. 2003. Pèptids antioxidants amb activitats inhibidores de l'enzim convertidor d'angiotensina i aplicacions per a la purificació de l'enzim convertidor d'angiotensina. J. Agric. Química dels Aliments. 51: 1706-1709.

Huang, D., B. Ou i RL Prior. 2005. La química darrereantioxidantassajos de capacitat. J. Agric. Química dels Aliments. 53: 1841-1856.

Huang, CG, YJ Shang, J. Zhang, JR Zhang, WJ Li i BH Jiao. 2008. Efectes hipouricèmics dels glucòsids fenilpropanoidesacteòsidde Scrophularia ningpoenis sobre els nivells sèrics d'àcid úric en ratolins pretractats amb oxonat de potassi. Amer. J.

Barbeta. Med. 36: 149-157.

Lee, KY, EJ Jeong, HS Lee i YC Kim. 2006.Acteòsidde Callicarpa dichotoma atenua els problemes de memòria induïts per escopolamina. Biol. Farmàcia. Bou. 29: 71-74.

Li, J., P. Wang, R. Zheng, Z. Liu i Z. Jia. 1993. Protecció dels glicòsids fenilpropanoides de Pedicularis contra l'hemòlisi oxidativa in vitro. Planta Med. 59: 315-317.

Li, H., GX Chou, ZT Wang i ZB Hu. 2006. Determinació de HPLC deacteòsida Radix Rehmanniae. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 31: 822-824.

Lin, SY, CC Wang, YL Lu, WC Wu i WC Hou. 2008.Antioxidant, aminooxidasa sensible a antisemicarbazida i activitats antihipertensives de la geraniïna aïllada de Phyllanthus urinaria. Química dels Aliments. Toxicol. 46: 2485-2492.

Liu, DZ, YS Lin i WC Hou. 2004. Exhibeixen monohidroxamats d'àcid aspártic i àcid glutàmicantioxidanti activitats inhibidores de l'enzim convertidor d'angiotensina. J. Agric.Food Chem. 52: 2386-2390.

Kalckar, HM 1947. Espectrofotometria diferencial de compostos purínics mitjançant un enzim específic. J. Biol. Chem.167: 429-443.

Kang, DG, YS Lee, HJ Kim, YM Lee i HS Lee. 2003. Glicòsids fenilpropanoides inhibidors de l'enzim convertidor d'angiotensina de Clerodenron trichotomum. J. Etnofarmacol. 89: 151-154.

Koo, KA, SH Sung, JH Park, SH Kim, KY Lee i YC Kim. 2005. Activitats neuroprotectores in vitro dels glucòsids feniletanoides de Callicarpa dichotoma. Planta Med.71: 778-780.

Koo, KA, SH Kim, TH Oh i YC Kim. 2006.Acteòsidi les seves aglicones protegeixen els cultius primaris de cèl·lules corticals de rata de l'excitotoxicitat induïda pel glutamat. Ciència de la vida. 79:709-716.

Lin, CL, SY Lin, YH Lin i WC Hou. 2006. Efectes de la proteïna d'emmagatzematge de tubercles del ñame (Dioscorea alata cv. Tainong No.1) i els seus hidrolitzats pèptics en rates espontàniament hipertenses. J. Sci. Alimentació Agrícola. 86: 1489-1494.

Mark, KS i TP Davis. 2000. Ictus: desenvolupament, prevenció i tractament amb inhibidors de la peptidasa. Pèptids 21:1965-1973.

Miki, M., H. Tamai, M. Mino, Y. Yamamoto i E. Niki. 1987. Oxidació en cadena de radicals lliures de glòbuls vermells de rata per oxigen molecular i la seva inhibició per -tocoferol. Arch Biochem. Biofísica. 258: 373-380.

Consell Nacional de Ciència. 1994. Guia per a la cura i utilització d'animals de laboratori. Consell Nacional de Ciència, Taiwan.

Ohno, T., M. Inoue, Y. Ogihara i I. Saracoglu. 2002. L'activitat antimetastàtica deacteòsid, un glucòsid feniletanoide.Biol. Farmàcia. Bou. 25: 666-668.

Vendetti, MA, B. Rubin, DW Cushman. 1977. Disseny d'inhibidors específics de l'enzim convertidor d'angiotensina: una nova classe d'agents antihipertensius actius per via oral. Ciència 196: 441-444.

Rao, YK, SH Fang, SC Hsieh, TH Yeh i YM Tzeng. 2009. Els constituents d'Anisomeles Índia i les seves activitats antiinflamatòries. J. Etnofarmacol. 121: 292-296.

Smith, MA, G. Perry, PL Richey, LM Sayre, VE Anderson, MF Beal i N. Kowal 1996. Dany oxidatiu en l'Alzheimer. Nature 382: 120-121.Wang, P., J. Kang, R. Zheng, Z. Yang, J. Lu, J. Gao i Z. Jia.

1996. Efectes d'eliminació del glicòsid fenilpropanoide de Pedicularis sobre l'anió superòxid i el radical hidroxil mitjançant el mètode de captura de spin. Bioquímica. Pharmacol. 51: 687- 691.

Wong, IYF, Y. Huang, ZD He, CW Lau i ZY Chen. 2001. Efectes relaxants de l'extracte de Ligstrum purpurascens i purificatacteòsiden anells aòrtics de rata. Planta Med. 67:317-321.

Wu, YT, LC Lin, JS Sung i TH Tsai. 2006. Determinació deacteòsida Cistanche deserticola i Boschniakia rossica i la seva farmacocinètica en rates que es mouen lliurement mitjançant LC-MS/MS. J. Cromatogr. B 844: 89-95.