Estratègia anti-irritant contra el retinol basada en l'anàlisi genètica de la població coreana: un enfocament de dalt a baix guiat genèticament

Paraules clau: retinol; retinoide;cosmètics; anti-irritació; personalitzat genèticament; polimorfismes d'un sol nucleòtid

Feu clic aquí per obtenir més informació sobre el tractament antienvelliment Cistanche

1. Introducció

Els retinoides, una família de compostos derivats de la vitamina A que inclou compostos tant sintètics com naturals, s'han estudiat intensament i s'han utilitzat en diverses aplicacions biomèdiques com aratractament del càncer(leucèmia mieloide aguda), neoplàsia cervical, itrastorns de la pellen les darreres dècades. L'àmplia aplicació dels retinoides, especialment l'àcid retinoic, es basa en la premissa científica queàcid retinoicestà implicat en nombroses vies biològiques a la natura provocant interaccions entre receptors nuclears que controlen l'expressió gènica [1–5]. Una de les aplicacions més sorprenents dels retinoides és l'enfocament dermatològic, juntament amb els medicaments farmacèutics i els productes cosmètics. Com que els retinoides es van utilitzar per primera vegada per al tractament de l'acne a la dècada de 1940, s'informa de la seva eficàcia terapèutica contra trastorns de la pell com la queratosi actínica, la psoriasi i la ictiosi [6]. Com que molts estudis científics i estudis clínics van demostrar l'eficàcia terapèutica de la tretinoïna (àcid retinoic tot trans) en el fotoenvelliment, es va desencadenar el desenvolupament de derivats retinoides per utilitzar-los com a ingredients cosmètics. Els retinoides cosmètics, que inclouen el palmitat de retinil, l'acetat de retinil, el retinol i la retina, s'han investigat intensament al mercat comercial des que l'àcid retinoic estava prohibit en productes cosmètics per regulacions globals com l'annex II 375 (CE 1223/2009). Alguns estudis han revelat que aquests retinoides cosmètics també són efectius per al tractament del fotoenvelliment, les característiques patològiques del qual inclouen arrugues fines i gruixudes, rugositat de la pell i pigmentació anormal, i fins i tot van argumentar que són potents com la tretinoïna [7].

Tanmateix, els retinoides causen irritació i alguns efectes secundaris caracteritzats per eritema, descamació, ardor i picor, que també s'anomenen dermatitis retinoide [8]. Alguns estudis han investigat el mecanisme de la irritació, i es suggereix que diversos mecanismes estan implicats en la irritació induïda per retinoides, que inclouen una inflamació extensa i generalitzada caracteritzada per l'alliberament de citocines i la infifiltració de cèl·lules immunitàries [9], i la ruptura de la barrera cutània caracteritzada. pel desequilibri genètic dels factors relacionats amb l'embolcall cornificat (CE) [10,11]. A més, s'ha suggerit àmpliament que la fototoxicitat del retinoide i els seus subproductes degradats a causa de la seva inestabilitat sota UV i calor contribueix a la irritació induïda pels retinoides [12]. Tanmateix, aquestes observacions són insuficients per explicar a fons la irritació induïda pels retinoides i fins ara no s'ha arribat a una conclusió clara. Per aquest motiu, els productes actuals a base de retinol solen tenir una fórmula antiinflamatòria "tediosa", que s'utilitza generalment i universalment en productes comercials generals. Per tant, encara no s'ha establert una estratègia anti-irritació contra el retinol basada en una forta formació científica.

Un enfocament genètic pot ser una altra solució per establir una estratègia contra la irritació contra el retinol. Les variacions genètiques es van estudiar àmpliament per descobrir gens associats amb l'eficàcia dels fàrmacs i els efectes secundaris [13]. Nelson et al. va demostrar que els fàrmacs predits per associacions genètiques conegudes representen només el 2,0 per cent dels fàrmacs en l'etapa preclínica, tot i que la proporció augmenta fins al 8,2 per cent en els medicaments aprovats [14]. Això implica que centrar-se en els objectius descoberts per estudis genètics augmentaria dràsticament les possibilitats de desenvolupament exitós de fàrmacs, tal com es demostra amb els fàrmacs per al colesterol o l'artritis reumatoide [15–18].

El tractament amb retinol indueix canvis en l'expressió de factors de transcripció relacionats amb el creixement cel·lular [19] i proteïnes estructurals [11]. Més específicament, una varietat de proteïnes estaven implicades en la irritació induïda pel retinol, que inclouen citocines relacionades amb la inflamació (MCP-1, TNF-a, interferons i interleucines) [9], receptor d'àcid retinoic (RARG) [9] 20], vanilloide potencial del receptor transitori del canal de detecció del dolor 1 (TRPV1) [21] i GPCR activador de mastòcits (MRGPRX2) [22]. Tanmateix, la majoria dels estudis genètics s'han restringit a un sol gen o via, i el mecanisme complet de la dermatitis retinoide encara està per dilucidar. Per tant, es va realitzar una anàlisi del "gen candidat" de la irritació induïda per retinoides per detectar anti-irritants contra la dermatitis retinoide, i els resultats de la mateixa s'afegiran al conjunt actual de gens objectiu per estudiar la dermatitis retinoide.

2. Materials i Mètodes

2.1. Estudiar disseny

Aquest estudi es va dissenyar tal com es mostra a la figura 1. Breument, es va realitzar un fenotipat per a la irritació induïda per retinol a partir de la primera avaluació clínica de 173 coreans. Mitjançant l'anàlisi genètica, es van examinar marcadors genètics i es van investigar anti-irritants i fórmules. A continuació, es va realitzar un estudi pilot a petita escala (n=7) i una avaluació clínica a gran escala (2n, n=91) ​​per verificar l'eficàcia anti-irritant de la fórmula recentment desenvolupada.

Figura 1.Disseny de l'estudi. El diagrama superior (diagrama de flux) representa el procediment global de l'estudi. La taula inferior indica les tres proves principals basades en humans. Retinol1IU es refereix a 3 × 10−5 per cent amb la formulació. w;5000IU=0,15 per cent p/p).

2.2. Fenotipat de la irritació induïda pel retinol

van ser informats dels ingredients de la crema abans de l'experiment, i els participants que havien experimentat irritació de la pell amb qualsevol dels ingredients de la crema, excepte el retinol, van ser exclosos de l'experiment. El procediment detallat es descriu a la informació de suport.

2.3. Microarray de polimorfisme de nucleòtids únics (SNP).

L'ADN genòmic es va extreure de mostres de saliva mitjançant el QIAmp Mini Prep Kit (QIAGEN, Germantown, MD, EUA). El genotipat es va realitzar mitjançant el xip de la versió 2 de l'assaig Global Screening segons el protocol d'assaig Illumina Infifinium High-Throughput Screening (HTS) (Illumina, San Diego, CA, EUA). La intensitat de les perles es va obtenir mitjançant l'instrument iScan® i, posteriorment, es va utilitzar per obtenir dades de genotip mitjançant el programari GenomeStudio® (Illumina, San Diego, CA, EUA).

El control de qualitat de les dades del genotip es va realitzar preferentment en les condicions següents: entre les mostres genotipades, es van excloure els individus amb una taxa de trucades de genotip inferior al 98 per cent. Per a les variants genotipades, es van excloure els SNP amb taxes de trucada inferiors al 98 per cent, freqüències d'al·lels menors inferiors a l'1 per cent, desviació de l'equilibri Hardy-Weinberg (valor de p HWE < 1 × 10-6) i aquells que tenien més de dos al·lels. Entre els 173 individus genotipats, 159 van aprovar els criteris de control de qualitat i van ser seleccionats per a una anàlisi posterior.

2.4. Valoració de la irritació

Els dos tipus de cremes, és a dir, la crema de control amb 5.000 UI de retinol i la crema a base de fórmula anti-irritant (FA) amb 5.000 UI de retinol, es van administrar a set individus (tres homes i quatre dones) en l'estudi pilot. Els individus s'aplicaven les cremes a la cara abans d'anar a dormir de la següent manera: una crema a una meitat de la cara i una altra a l'altra meitat de la cara. Els subjectes de prova estaven cegats a la crema que contenia la fórmula anti-irritant (simple cec). Després de tres dies de sol·licitud, es va demanar als subjectes que cessessin la sol·licitud durant 4 dies. L'envermelliment de la pell i la pèrdua d'aigua transepidèrmica (TEWL) es van mesurar mitjançant un cromàmetre (CR-400, Konica Minolta, Osaka, Japó) i Tewameter® (TM 300 E, Courage plus Khazaka electronic GmbH, Köln, Alemanya), respectivament. Per mesurar el llindar de pressió del dolor (PPT), es va fabricar i utilitzar un algometre amb un diàmetre de sonda d'1 mm combinat amb un cilindre. Abans de la mesura, les cares dels subjectes es van netejar i aclimatar durant 20 minuts en una habitació amb aire condicionat (temperatura, 23 ± 2 ◦ C; humitat relativa, 50 ± 10 per cent).

Tenint en compte que la irritació induïda per retinoides desencadena una gamma extremadament àmplia de tipus i gravetat d'irritació, sembla que les directrius tradicionals de mesura de la irritació centrades principalment en l'eritema proposades per les directrius Frosh i CTFA [23] no qualifiquen ni quantifiquen aquestes irritacions de manera efectiva. Per tant, vam redissenyar la guia d'autoavaluació per a la irritació de la pell, tal com es mostra a la taula S1 (vegeu Materials suplementaris). Aquesta autoavaluació es va realitzar en un petit estudi pilot i una segona avaluació clínica a gran escala.

2.5. Preparació cel·lular i experiment in vitro

A la informació complementària es proporciona informació detallada sobre la preparació de cèl·lules i els procediments experimentals in vitro. Breument, es van cultivar queratinòcits, fibroblasts, mastòcits i HEK que sobreexpressaven TRPV{{{0}} mitjançant els seus propis protocols de cultiu i experiments. Es van analitzar la RT-PCR, l'alliberament d'hexosaminidasa i el flux d'influència de calci. 2.6. Anàlisi estadística L'anàlisi estadística es va realitzar mitjançant SNP i Variation Suit (SVS) v8.9.0 (Golden Helix, Bozeman, MT, EUA) i PLINK 1.90 (Cambridge, MA, EUA) [24]. Per a l'anàlisi del gen candidat, es van extreure SNP dins dels gens candidats (incloent la regió promotora -2 kb i la regió aigües avall de 500 pb). La significació estadística de les associacions i les probabilitats es va determinar mitjançant una prova d'associació de genotips amb un model additiu. Abans del càlcul de la puntuació de risc poligènic, es va examinar el desequilibri d'enllaç (LD) i es van seleccionar SNP mitjançant Haploview 4.2 (Cambridge, MA, EUA). [25]. Per a l'anàlisi es van utilitzar al·lels que mostraven una tendència augmentada a la irritació induïda pel retinol. La puntuació de risc poligènic es va calcular com la suma ponderada de les probabilitats de cada al·lel [26]. El preprocessament de dades d'entrada, la generació d'un subconjunt aleatori de participants per a la validació repetida i el càlcul de la puntuació de risc poligènic es van dur a terme mitjançant un codi escrit a mida a R v.4.0.3. Es va utilitzar GraphPad Prism v7.04 (GraphPad Software, San Diego, CA, EUA) per a la visualització de dades. A les figures es mostren barres d'error els valors de les quals es van derivar dividint cada desviació estàndard per l'arrel quadrada del nombre de mostres.

En l'anàlisi de la taxa d'aparició d'irritació basada en la pregunta dicotòmica (si la crema de retinol és irritant: S/N), es va realitzar la prova de chi quadrat per investigar la significació estadística.

3. Resultats i discussió

3.1. Proposar gens objectiu per a la detecció d'anti-irritants a la irritació induïda pel retinol

3.1.1. 1a avaluació clínica: aplicació tòpica del retinol i anàlisi de les seves propietats irritants

Hem investigat les propietats irritants del retinol i la seva relació amb la sensibilitat de la pell en 173 individus coreans. Van aplicar retinol durant 3 dies, seguit d'un descans de 4 dies a la setmana durant 3 setmanes, amb cada concentració de retinol augmentant gradualment cada setmana (2500 UI la 1a setmana, 3300 UI la 2a setmana i 5000 UI en la 2a setmana). la 3a setmana). A continuació, es va analitzar el qüestionari rebut després de l'experiment per investigar els factors relacionats amb la irritació induïda pel retinol.

Una proporció més alta de participants del grup de pell sensible va informar que van experimentar irritació en comparació amb el grup de pell no sensible (figura 2a). També es va demostrar que les persones que pertanyen al grup de pell sensible tenien aproximadament tres vegades més probabilitats de tenir experiència passada d'aturar l'ús de productes cosmètics a causa de la irritació de la pell (figura 2b). Entre els que tenien experiències d'irritació passades, la majoria de les persones van respondre que els cosmètics bàsics van provocar irritació, seguida de productes protectors solars, netejadors i cosmecèutics (figura 2c). Una proporció més alta d'individus que tenien irritació de la pell amb productes de retinol en el passat van respondre que tenien irritació en aquest experiment en comparació amb aquells que no havien experimentat irritació quan utilitzaven productes de retinol en el passat (figura 2d). Aquest resultat va revelar que la irritació induïda pel retinol tendeix a produir-se repetidament segons els individus, la qual cosa dóna suport a la hipòtesi que els factors genètics podrien afectar la sensibilitat al retinol. Estudis anteriors han demostrat que les variacions genètiques afecten significativament la biodisponibilitat del retinol i el retinoide, que donen suport que els factors genètics també podrien governar la irritació induïda pel retinol [27,28].

El tipus d'irritació induïda per l'ús de retinol varia molt entre les persones. No obstant això, la picada era la més freqüent, que comprenia aproximadament tres quartes parts de les irritacions i va anar seguida de ardor, picor i eritema (figura 2e).

(c) La proporció d'individus que experimenten irritació quan utilitzen productes cosmètics bàsics. (d) La proporció d'individus amb una experiència passada d'irritació als productes que contenen retinol. (e) Els tipus d'irritació que les persones han experimentat durant l'ús de productes tòpics que contenen retinol; * valor p < 0.05; *** valor p < 0,001; ns, no significatiu.

3.1.2. Anàlisi de gens candidats per a la irritació induïda per retinol

Per descobrir variants genètiques associades a la sensibilitat de la pell al retinol, vam triar 14 gens candidats coneguts per les seves funcions en el metabolisme dels retinoides i la sensibilitat de la pell (taula S2). Ens hem referit a l'anàlisi transcriptòmica anterior de la pell reconstituïda en 3D sota tractament de sensibilitzants [29].

Es van seleccionar un total de 319 SNP situats dins dels gens candidats i es van utilitzar per a l'anàlisi d'associació mitjançant el model additiu. Trenta SNP es van associar significativament amb la irritació induïda pel retinol, cap dels quals s'havia informat prèviament (p <0.05; Taula 1). En detall, es van trobar un total de 12 SNP a RARB, tres a EGFR, tres a CD44, dos a IL18, dos a IL4R i quatre a BCL2. Els altres quatre gens, CD86, RXRB, MMP10 i COL6A2, incloïen SNP únics. Els SNP descoberts pertanyien a 10 gens, dos dels quals eren gens relacionats amb el retinol, i els vuit restants estaven relacionats amb la sensibilitat general de la pell segons estudis anteriors. Entre els 10 gens, vam seleccionar els tres gens més importants pel que fa a la irritació de la pell: COL6A2, EGFR i IL-4R.

S'ha demostrat que COL6A2, que codifica una de les tres cadenes alfa del col·lagen de tipus VI que es troben a la majoria dels teixits connectius, regula l'assemblatge de la matriu dèrmica i la motilitat dels fibroblasts [30], i contribueix a la remodelació dels teixits i a la cicatrització de ferides [31,32]. Aquest defecte condueix a la formació de queloides [33] i fenotips anormals de la pell [34]. El receptor del factor de creixement epidèrmic (EGFR) és un important regulador de la funció de barrera epidèrmica. S'ha demostrat que la senyalització EGFR inhibeix la competència de l'embolcall cornificat i altera la funció de barrera de la unió estreta en els queratinòcits epidèrmics [35,36]. A més de la senyalització EGFR, també es creu que una altra àmplia gamma de factors com ADAM17 (una desintegració i metaloproteinasa 17) [37] i el canal TRP [38] afecten la funció de barrera epidèrmica associada sistemàticament amb EGFR.

En les últimes dècades, s'han investigat àmpliament les funcions i els papers de la interleucina 4 (IL-4) i el seu receptor, IL-4R. Com a regulador clau del sistema immunitari humoral i adaptatiu, IL-4, que es secreta principalment pels mastòcits i les cèl·lules Th2, indueix la diferenciació de les cèl·lules Th2 i estimula les cèl·lules B. Tot i que el seu paper no s'entén clarament, molts estudis han assenyalat que la IL-4 pot impulsar processos pro-inflamatoris i extensos, mentre que s'ha demostrat que el seu defecte provoca la malaltia al·lèrgica, la malaltia d'Alzheimer i els tumors [39]. Al llarg del mateix eix per a la resposta immune relacionada amb IL-4-, IL-4R s'expressa de manera ubiqua en diverses cèl·lules immunitàries tant en el sistema immunitari innat com en el sistema immunitari adaptatiu. IL-4R és un receptor comú tant per a IL-4 com per a IL{-13 [40]. A diferència de la IL-4, que afecta directament la diferenciació de Th2, la IL-13 també és responsable d'activar els mastocits, que controlen la funció dels eosinòfils, i té efectes immunosupressors i antiinflamatoris sobre els macròfags en suprimir les citocines proinflamatòries. i quimiocines [41].

3.2. Enfocament de dalt a baix: detecció d'anti-irritants in vitro

3.2.1. Gens relacionats amb la reparació de teixits, COL6A2 i EGFR

A partir dels gens seleccionats, vam cercar anti-irritants que poguessin modular la patogènesi molecular, com ara controlar l'expressió dels gens diana.

Informes anteriors van revelar que els retinoides indueixen canvis fisiològics i morfològics a la barrera cutània [8,42,43]. Es va observar que el tractament del teixit de la pell amb àcid retinoic ex vivo i in vivo augmenta la pèrdua d'aigua transepidèrmica (TEWL), i diversos estudis han revelat que aquesta interrupció de la funció de barrera cutània està mediada per un patró d'expressió desequilibrat de l'embolcall cornificat i estret. gens relacionats amb la unió. En un estudi anterior es va observar la regulació a la baixa de la filagrina (FLG), la loricrina i el CLDN1, i la regulació a l'alça de CLDN2, CLDN4 i una expressió significativament diferent dels gens de la família de les serpines, que es creu que és la principal causa de la irritació induïda per retinoides. [10,11]. \ Vam plantejar la hipòtesi que els individus amb variacions genètiques en COL6A2 i EGFR tendeixen a ser susceptibles al debilitament de la funció de barrera cutània per part del retinol, la qual cosa provoca una irritació induïda pel retinol (figura 3a). També vam considerar que, a part del col·lagen VI, el col·lagen IV també és un factor important en la membrana basal epidèrmica i en el procés de cicatrització de ferides, tot i que el seu paper exacte en el teixit de la pell no està clar [44]. Vam plantejar la hipòtesi que una deficiència o anormalitat del col·lagen VI i IV condueix a la susceptibilitat a la irritació induïda pel retinol i la sobreexpressió d'ambdós tipus de col·lagen podria atenuar el debilitament de la barrera cutània induït pel retinol. Entre les diverses substàncies, vam observar que la glucosamina augmentava l'expressió de COL6A2 i COL4A2 en 1.5-vegament i 1.7- vegades, respectivament (figura 3a, panell central). El paper modulador de la glucosamina en COL6A2 i COL4A2 no s'ha informat abans, la qual cosa implica que aquestes observacions són científicament importants.

En el cas de l'EGFR, vam considerar acuradament les investigacions anteriors que indicaven que l'àcid retinoic indueix la sobreexpressió de l'aquaporina 3 (AQP3) a través de la via EGFR/ERK en queratinòcits humans [45]. En el primer informe, vam observar que no només l'àcid retinoic sinó també el retinol induïen l'expressió AQP3 aproximadament dues vegades en fibroblasts (figura 3a panell dret). L'efecte d'atenuació de la sobreexpressió d'AQP3 per niacinamida (nicotinamida) és similar al trobat en un estudi anterior. Entre les diverses substàncies, la trehalosa i l'eupatilina van atenuar la sobreexpressió d'AQP3 induïda pel retinol. S'ha informat que l'eupatilina (5,7-dihidroxi{-3',4',6-trimetoxiflavona), un tipus de flavonoide que es troba a Artemisa asiatica, millora la funció de barrera cutània en condicions patològiques in vivo [46].

A més, vam investigar l'expressió de FLG, que és un indicador principal de la funció de barrera cutània. De manera similar als estudis anteriors in vivo [47], vam observar que el retinol va disminuir significativament l'expressió de FLG aproximadament un 45 per cent, i aquesta disminució es va revertir per niacinamida, glucosamina i sucralfat (figura S1a, vegeu Materials suplementaris).

Col·lectivament, la glucosamina, la trehalosa i el sucralfat podrien alleujar la interrupció de la barrera cutània induïda pel retinol modulant l'expressió de COL6A2, AQP3 i FLG.

3.2.2. Gen inflamatori: IL-4R

Després, vam intentar identificar anti-irritants relacionats amb gens inflamatoris. A partir dels nostres resultats de l'anàlisi genètica, s'ha demostrat que les persones que són propenses a la irritació induïda pel retinol tendeixen a tenir marcadors SNP per IL-4R però no IL-4. En primer lloc, vam investigar si el tractament amb retinol modula l'expressió d'IL-4 o IL{-4R als mastòcits, que també és un factor principal de la inflamació relacionada amb IL-4-. El retinol va induir la sobreexpressió de IL-4R 1.74-fold. Tot i que el retinol no va induir la sobreexpressió d'IL-4 (figura S1b, vegeu Materials suplementaris), es va observar que l'ectoïna disminueix efectivament l'expressió d'IL-4 del mastòcit, cosa que coincideix amb estudis anteriors. que va argumentar els efectes antiinflamatoris de l'ectoïna en alguns models de malaltia com la MII (malaltia inflamatòria intestinal) i la malaltia al·lèrgica de les vies respiratòries [48,49]. Més específicament, estudis anteriors van demostrar que l'ectoïna podria normalitzar l'expressió d'IL-4 en la inflamació pulmonar induïda per CNP (nanopartícules de carboni) en un model in vivo, donant suport als nostres resultats experimentals [50].

La crocina, la glucosamina i l'ectoïna van alleujar la sobreexpressió d'IL-4R provocada pel retinol als mastòcits, amb una disminució del 37,03 per cent, 41,97 per cent i 82,59 per cent, respectivament. S'ha demostrat que l'ectoïna (àcid 1,4,5,6-tetrahidro-2-metil-4-pirimidincarboxílic), un compost natural que es troba en diversos bacteris halòfils, modula moltes citocines i quimiocines en condicions inflamatòries, encara que el paper de l'ectoïna en la millora de l'expressió d'IL-4R encara no s'ha dilucidat. Les nostres observacions ofereixen noves idees sobre la funció de l'ectoïna. Un estudi previ del nostre grup va demostrar que l'ectoïna a una concentració òptima de 100 ppm va mostrar l'efecte antiinflamatori més alt contra els efectes dels retinoides i una citotoxicitat insignificant en l'experiment in vitro basat en cèl·lules (dades no mostrades). També vam mesurar la taxa d'alliberament de -hexosaminidasa dels mastòcits, que és un indicador de la desgranulació dels mastòcits (figura 3b, panell dret). L'ectoïna no va reduir l'alliberament d'hexosaminidasa induït per retinol en el retinol de 400 ppm, tot i que va reduir l'alliberament d'hexosaminidasa induït pel retinol en el retinol de 200 ppm. Col·lectivament, es pot concloure que l'ectoïna pot millorar la inflamació relacionada amb IL-4 i IL-4R induïda pel retinol. Tenint en compte la investigació anterior que l'ectoïna intervé en l'activació de l'EGFR en la inflamació pulmonar induïda per CNP [50], l'ectoïna també sembla ser beneficiosa per a la interrupció de la barrera cutània induïda pel retinol.

3.2.3. Inflamació neurogènica, adiponectina i TRPV1

Una característica distintiva de la irritació induïda pel retinol en pacients extremadament sensibles als retinoides són les reaccions semblants a les al·lèrgies, com ara una sensació ràpida d'ardor i picor, picor, edema difusiu ràpid i erupció cutània. Un estudi va revelar que els retinoides, inclosos el retinol i l'àcid retinoic, activen TRPV1 [21]. Per tant, suposem que la irritació induïda pel retinol, que es produeix especialment ràpidament en pocs minuts, està mediada per l'activació de TRPV1 per retinol.

Figura 3. L'anàlisi de l'expressió d'ARNm per detectar anti-irritants que podrien modular la patogènesi molecular associada a la irritació. ( a ) Investigació de la patogènesi molecular associada a la interrupció de la barrera de la pell Diagrama esquemàtic per a l'enfocament de la modulació genètica del retinol (alteració de la barrera cutània induïda per ROL. (esquerra) L'expressió relativa de l'ARNm de COL4A2 i COL6A2 quan es van tractar els fifibroblasts amb glucosamina (mig) i expressió relativa d'ARNm d'AQP3 (queratinòcit, dreta). (b) Investigació de la patogènesi molecular associada a la inflamació (impulsada pels mastòcits). Expressió relativa de l'ARNm d'IL-4R quan RBL-2H3 es va tractar amb 1 0 Retinol µM i diversos candidats. (c) Inflamació neurogènica mediada per TRPV1 induïda pel retinol i efecte antagònic per 4-t-butilciclohexanol i omega-9; Tres condicions per a la combinació: (1) 4-t-butilciclohexanol 25 µM i omega-9 5 µM, (2) 4-t-butilciclohexanol 50 µM i omega-9 10 µM, i (3) 4- t-butilciclohexanol 100 µM i omega-9 20 µM, BC, 4-t-butilciclohexanol; OA, àcid oleic omega-9; Es va mostrar una barra d'escala de 50 µm (blanca); * p <0,05; ns, no significatiu; es va mostrar la barra d'errors; ppm, parts per milió.

TRPV1, un catió no selectiu activat per diversos estímuls fisicoquímics, ha estat àmpliament estudiat, especialment el seu paper a la pell. [51–54] Tot i que TRPV1 no va sorgir en l'anàlisi genètica anterior, cal assenyalar que l'adiponectina (ADIPQ) va aparèixer en alguns models d'anàlisi amb significació estadística baixa a moderada. Un estudi anterior de la població coreana va demostrar que el fenotip de la pell "sensible" sembla estar relacionat amb la deficiència d'adiponectina, que en conseqüència contribueix a la regulació de TRPV1 [55]. Les cèl·lules HEK293 que sobreexpressaven TRPV1-es van tractar amb retinol i es va confirmar l'activació de TRPV1 mitjançant la imatge d'influx de calci. Vam observar que el retinol podria activar TRPV1 de manera dependent de la dosi (figura S1c, vegeu Materials suplementaris). A concentracions superiors a 50 µM, l'efecte agonístic sobre TRPV1 semblava arribar a un altiplà. A partir d'un estudi anterior, vam investigar si l'àcid oleic 4-t-butilciclohexanol i omega-9 poden antagonitzar l'activació de TRPV1 induïda pel retinol. Com era d'esperar, ambdues substàncies poden antagonitzar TRPV1, mentre que a dosis baixes, l'àcid oleic omega-9 era més potent que el 4-t-butilciclohexanol (figura S1d, vegeu Materials suplementaris). La combinació d'aquests dos materials va mostrar un lleuger efecte sinèrgic sobre la inhibició de TRPV1 per part del retinol. Tres concentracions diferents de la combinació de 4-t-butilciclohexanol i omega-9 van mostrar una activació reduïda de TRPV1 induïda pel retinol, 28,25 per cent, 43,73 per cent i 68,50 per cent, respectivament. Es va observar un flux de calci a les cèl·lules mediat per l'activació de TRPV1 sota microscòpia fluorescent (figura 3c). En conclusió, vam verificar que la irritació induïda pel retinol també podria estar relacionada amb la inflamació neurogènica mediada per l'activació de TRPV1 en un model in vitro, i l'àcid oleic 4-tbutilciclohexanol i omega-9 es podrien utilitzar per mitigar la neurogènia. inflamació per antagonisme de TRPV1.

Correu electrònic:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp més 86 15292862950