Aplicació d'extracte de fulles d'Hibiscus Cannabinus L. (kenaf) com a blanquejador de la pell i agents antienvelliment en un prototip de cosmètica natural

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

Yan Yi Sim i Kar Lin Nyam

RESUM

A Malàisia, els residus industrials de laHibiscus cannabinusL. (kenaf) la indústria, sobretot les sortides, provoquen reptes en sostenibilitat. L'activitat biològica de les fulles de kenaf va ser informada per alguns estudis anteriors, per tant, és creïble que l'extracte de fulles de kenaf (KLE) es pugui utilitzar com a ingredient funcional en formulacions cosmètiques. Així, l'objectiu d'aquest estudi va ser desenvolupar una formulació cosmètica natural que contingués KLE i avaluar-ne les característiques fisicoquímiques, propietats microbiològiques, estabilitat a l'emmagatzematge, activitats biològiques (antioxidant, antitirosinasa ianti edat), citotoxicitat in vitro (en fibroblast dèrmic humà normal i cèl·lules de melanoma B16F10) i assaig de melanogènesi (activitat de tirosinasa intracel·lular i reducció de la producció de melanina). Els resultats van mostrar que la loció KLE (KLEL) preparada amb un 15 per cent d'oli de llavors de kenaf (KSO) (F2) amb 0,1 per cent p/p de KLE ofereix la millor estabilitat física i microbiològica, sense toxicitat per a les cèl·lules humanes. El KLEL també va presentar un contingut antioxidant de fins a 1,84 ± 0.07 mg equivalent d'àcid cafeic (CAE)/g i 21,62 ± 0,76 mg equivalent d'hidrat de catequina (CHE)/g per al contingut fenòlic total (TPC). ) i el contingut total de flavonoides (TFC), respectivament. A més, el KLEL va presentar capacitat antitirosinasa en la inhibició de la formació de micofenolats (30,28 ± 3,90 per cent) i difenols (11,40 ± 0,29 per cent) i va revelar, per primera vegada,anti edatpropietats inhibint les activitats de col·lagenasa (36,41 ± 0,54 per cent) i elastasa (23,13 ± 1,56 per cent). Pel que fa a l'activitat inhibidora de la melanogènesi, KLEL va presentar una alta eficàcia per suprimir l'activitat de la tirosinasa cel·lular i el contingut de melanina a les cèl·lules B16F10. En general, els resultats d'aquest estudi són molt prometedors per al desenvolupament de prototips de cosmètica natural amb fulles de kenaf.

herbes del drac de cistanche del desert: anti-envelliment

1. Introducció

Recentment, el model econòmic circular que pot millorar la sostenibilitat de la gestió de residus minimitzant la producció de residus i mantenint el valor a llarg termini, alhora que disminueix les conseqüències negatives de l'escassetat de recursos i la degradació ambiental ha guanyat interès públic (Morseletto, 2020). En general, cada any les indústries de cultius industrials generen una quantitat important de subproductes de baix valor econòmic.Hibiscus cannabinusLa indústria de L. KR9 (kenaf), és un dels sectors agrícoles que contribueix al PIB (producte interior brut) de Malàisia, amb el pes de producció de tija seca de kenaf que va augmentar de 7,1 (000 tones) el 2013 a 7,6 ({{7} } ton) el 2014, i el mercat mundial de kenaf es preveu que superi els 854 milions de dòlars EUA el 2025 (Abdelrhman et al., 2016). No obstant això, es generen grans quantitats de subproductes, com ara llavors i fulles de kenaf, que contribueixen a problemes de sostenibilitat.

Les fulles de Kenaf, que representen una quantitat important de subproductes totals, són les menys caracteritzades i valorades entre tots els subproductes generats. A causa de l'enfocament circular, és important reutilitzar o recuperar les fulles de kenaf en productes de valor afegit, ja que ofereix múltiples beneficis en els àmbits econòmic, ambiental i social (Coderoni i Perito, 2019). Les fulles de Kenaf consisteixen en fonts riques de compostos bioactius com l'àcid clorogènic, l'ajuda del cafeic, el kaempferol i l'hidrat de catequina, com ho demostren els estudis realitzats per Kho et al. (2019); Sim i Nyam (2019) i Haw et al. (2020). Tanmateix, normalment es destina a la producció de productes de baix valor econòmic: fibra dietètica i pinsos (Lim et al., 2020).

El terme "retorn a la natura" s'ha utilitzat àmpliament en la investigació i desenvolupament de la indústria cosmètica, ja que l'ús d'extractes d'origen botànic ha donat lloc a una bona acceptació per part dels consumidors. Segons l'estudi realitzat per Sim et al. (2019), l'extracte de fulles de kenaf (KLE) va demostrar propietats antioxidants i antitirosinases prometedores, tenia el potencial d'utilitzar-se com a ingredients de valor afegit en el desenvolupament de productes cosmètics. És important desenvolupar formulacions estables i segures que continguin KLE, ja que conté molts compostos de polifenols que demostren la pell.blanqueigianti edatpropietats. Hi ha diversos requisits que cal tenir en compte a l'hora de desenvolupar noves formulacions cosmètiques, com ara el tipus de formulació, la intenció d'ús i la possible interacció entre els ingredients utilitzats en les formulacions, que en conjunt contribueixen a la necessitat d'estudis d'estabilitat i seguretat. (Garbossa i Maia Campos, 2016).

Els estudis d'estabilitat, que inclouen l'estudi de les característiques físiques, químiques i microbianes, són necessaris per a les formulacions cosmètiques després del procés de desenvolupament. A més, per prevenir qualsevol efecte advers o reacció al·lèrgica, els productes cosmètics també s'han de provar mitjançant un assaig de citotoxicitat in vitro en una línia cel·lular normal de la pell humana. Així, l'objectiu d'aquest treball és desenvolupar una formulació cosmètica natural que contingui KLE (KLE lotion- KLEL). A continuació, es va avaluar el KLEL per les seves característiques fisicoquímiques, propietats microbiològiques, estabilitat d'emmagatzematge, citotoxicitat in vitro (en fibroblasts dèrmics humans normals i cèl·lules de melanoma B16F10) i assaig de melanogènesi (activitat de tirosinasa intracel·lular i reducció de la producció de melanina). Aquest estudi també ens va permetre determinar, per primera vegada, no només l'activitat antioxidant i antitirosinasa de KLEL sinó també la seva activitat inhibidora sobre la col·lagenasa i l'elastasa.

Benefici de cistanche: Anti-envelliment

2. Materials i mètodes

2.1. Materials vegetals i productes químics

FrescHibiscus cannabinusLes fulles de L. KR9 (kenaf) 90 dies després de la sembra i les llavors es van obtenir de Lembaga Kenaf & Tembakau Negara (LKTN, Malàisia). Span 20 i Tween 80 es van comprar a Sigma Aldrich (Munic, Alemanya), Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG i Emulgade® SE-PF es van comprar a BASF (Malàisia) i la glicerina es va comprar a Croda International Plc. (Regne Unit). La línia cel·lular de fibroblast dèrmic humà normal (NHDF) es va obtenir de Lonza (Basilea, Suïssa) i el melanoma de ratolí (B16F10) es va comprar a l'ATCC (Manassas, VA, EUA). El mitjà d'àguila modificat de Dulbecco (DMEM) es va comprar a Nacalai Tesque (Japó). Tots els altres productes químics utilitzats eren de grau de reactiu analític (Bèlgica, Alemanya, Malàisia). Durant l'anàlisi es va utilitzar l'aigua ultrapura (Millipore, EUA).

2.2. Mètodes

2.2.1. Assecat de fulles de kenaf

Les fulles de kenaf es van netejar amb aigua ultra pura, es van assecar i després es van mantenir a -8 0 ◦C durant la nit. A continuació, la mostra es va assecar en un assecador de congelació (Christ, Alemanya), a menys de 0,0004 bar durant 48 h, mòlta, envasada al buit i emmagatzemada a -20 graus.

2.2.2. Preparació d'extracte de fulles de kenaf parcialment purificat (KLE)

L'extracció polsada assistida per ultrasons (PUAE) de KLE es va dur a terme segons Sim et al. (2019). Les mostres es van pesar amb dissolvents d'extracció (etanol) en una proporció d'1:10. A continuació, la barreja es va sotmetre a l'extracció assistida per ultrasons polsats (Sartorius, Alemanya) amb una amplitud de sonicació del 50 per cent, un període de durada del pols d'1 min i un període d'interval de pols d'1 min amb una temperatura mantinguda entre 18 i 22 ± 3 graus (tres cicles). ). A continuació, l'extracte es va filtrar i es va concentrar en un evaporador rotatiu al buit (Buchi, Suïssa). La purificació parcial de KLE es va dur a terme segons Seabra et al. (2010) amb una lleugera modificació. L'extracte brut es va aplicar a una columna plena de gel de sílice i es va eluir amb un dissolvent de gradient de n-hexà-acetat d'etil (100:{00, 90:10, 80:20, 50:50). , 20:80, 10:90, 00:1{00) i acetat d'etil metanol (100:00, 90:10, 80:20, 50:50, 20:80, 10:90 , 00:100). El KLE parcialment purificat es va concentrar fins a sequedat mitjançant un evaporador rotatiu i es va emmagatzemar a -20 graus per a un ús futur.

2.2.3. Extracció amb dissolvent d'oli de llavors de kenaf (KSO)

El KSO es va extreure segons Chew et al. (2015). Les llavors de Kenaf es van triturar en una pols fina amb un molinet (Panasonic, Japó) i es van afegir amb hexà en una proporció d'1:5. Els olis es van extreure utilitzant un extractor Soxhlet a 60 ◦ C durant 3 h, i l'hexà es va eliminar mitjançant un evaporador rotatiu. Després de rentar amb nitrogen, el KSO es va emmagatzemar a -20 graus per a un ús futur (Chew et al., 2015).

2.2.4. Desenvolupament experimental de formulacions de locions que contenen el KLE

Al principi, la formulació de base de loció (sense KLE) es va optimitzar utilitzant 4 concentracions diferents d'oli de llavors de kenaf (KSO) (10 per cent, 15 per cent, 20 per cent i 25 per cent). La base de la loció es va avaluar comparativament per a diversos paràmetres: aspecte físic, olor, homogeneïtat, pH, viscositat, centrifugació i avaluació de congelació-descongelació, per seleccionar la millor formulació de base de loció per a un estudi posterior. Pel que fa als resultats dels paràmetres anteriors, es va seleccionar la formulació de base de loció més adequada (15 per cent de KSO) per incorporar-la al KLE (0,1 per cent p/p) (KLEL). Breument, els ingredients de fase no polar (Emulgade® SE PF, Span 20 i KSO) i fase polar (aigua, Tween 80 i glicerina) es van escalfar fins a 75 ± 2 graus. A continuació, la fase no polar es va afegir gota a gota a la fase polar amb agitació ràpida mitjançant un agitador magnètic (Thermo Fisher Scientific, EUA) a 350 rpm per formar una emulsió primària, seguida d'una homogeneïtzació d'alt cisallament mitjançant IKA T25 digital ULTRA. -TURRAX® (IKA Laboratory Equipment, Alemanya) a 3200 rpm durant 3 min i homogeneïtzació ultrasònica a un 40 per cent d'amplitud durant 3 min. Es van afegir Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG i KLE i es van barrejar a l'emulsió O/W a temperatura ambient. La base de loció KSO sense KLE serveix de control (KSOL). Mentre que la base de loció afegida amb àcid cògic (0, 1 per cent p/p) (KAL) va servir com a control positiu per a l'activitat anti-tirosinasa i l'assaig de melanogènesi. La base de loció afegida amb hidrat de catequina (0,1 per cent p/p) (CHL) va servir com a control positiu de l'activitat anti colagenasa i antielastasa.

2.2.5. Anàlisi fisicoquímica

2.2.5.1. Aparences, olor i homogeneïtat.

Segons Hanifah i Jufri (2018), les formulacions de locions es van inspeccionar pel seu color, olor i homogeneïtat i separació de fases.

2.2.5.2. pH. Les solucions estàndard es van utilitzar per calibrar l'elèctrode del mesurador de pH abans de la mesura.

El pH de les mostres es va determinar amb un pH-metre (Mettler Toledo, Suïssa) a temperatura ambient.

2.2.5.3. Color.

El color s'avaluarà mitjançant un colorímetre (Hunter Lab, Estats Units). Els resultats s'expressaran segons l'espai de color L* (lluminositat), a* (verd), b* (groc) i el diferencial total de color (ΔE). El diferencial de color total (ΔE) per a totes les mostres es va calcular mitjançant l'equació de la següent manera: ΔE = ̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅ (L ∗ - L ∗ 0) 2 Plus (a ∗ - a ∗ 0) 2 més (b ∗ - b ∗ 0) 2√

2.2.5.4. Viscositat.

La viscositat de les mostres es va avaluar al viscosímetre de camp Brook mitjançant l'eix LV-64 segons Gyawali et al. (2016) amb una lleugera modificació. La mostra es va submergir directament a l'eix amb una velocitat de rotació de 100 rpm i es va mesurar la viscositat (cP).

2.2.5.5. Extensió.

La capacitat de propagació de les mostres es va determinar pel mètode de plaques paral·leles (Gyawali et al., 2016). La mostra es va pesar amb precisió (1 g) i es va col·locar sobre una de les diapositives de vidre (20 × 20 cm2). A continuació, es va col·locar l'altra diapositiva a la part superior de la mostra i es van col·locar 100 g de pes a la diapositiva superior, per assegurar-se que la mostra es prement uniformement. Després d'1 minut, es va eliminar el pes i es va mesurar el diàmetre de propagació (cm).

2.2.5.6. Avaluació de la centrifugació.

La mostra es va carregar en un tub de centrifugació i després es va centrifugar a 3750 rpm durant 30 min (Eppendorf 5417R, EUA). Aquesta prova de centrifugació (igual a 1-any de gravetat) determina l'estabilitat de la mostra (Hiola et al., 2018).

2.2.5.7. Avaluació de congelació-descongelació.

Els estudis de congelació-descongelació es van dur a terme segons els mètodes anteriors amb algunes modificacions (Krongrawa et al., 2018). Cada mostra es va mantenir alternativament a temperatura freda, 4 ± 1 ◦ C (24 h) i temperatura calenta, 45 ± 1 ◦ C (24 h) amb un 75 per cent ± 2 per cent d'humitat relativa (humitat relativa) durant 6 cicles en recipients de vidre hermètics. La viscositat de les mostres es va determinar després del cicle d'estrès de temperatura.

2.2.6. Determinant del contingut d'antioxidants

2.2.6.1. Contingut fenòlic total (TPC).

El contingut fenòlic total es va determinar segons Lim et al. (2007). La mostra (10 mg/mL) es va barrejar amb un 10 per cent de reactiu Folin-Ciocalteu i un 7,5 per cent (p/p) de Na2CO3, seguit d'una incubació de 30 minuts a la foscor. L'absorbància es va prendre a 765 nm mitjançant un espectrofotòmetre UV-vis (Secoman, França). L'equació de calibratge de l'àcid cafeic va ser y=0,0269 més 9,69x (r{2=0,999) (Sim et al., 2019). Els resultats es van expressar com a mg d'equivalent d'àcid cafeic (CAE)/g de mostra.

2.2.6.2. Contingut total de flavonoides (TFC).

El contingut total de flavonoides es va avaluar segons Ogbunugafo et al. (2011). En general, la mostra (10 mg/mL) es va barrejar amb un 15% de NaNO2, una solució d'AlCl3 al 10%, aigua ultrapura i NaOH 1 M. L'absorbància es va mesurar immediatament a 510 nm en comparació amb l'estàndard preparat amb hidrat de catequina (0,02-0,1 mg/mL). L'equació de calibratge per a l'hidrat de catequina va ser y=0,004 més 3,1x (r{2=0,999) (Sim et al., 2019). El contingut total de flavonoides (TFC) es va expressar com a mil·ligrams d'equivalents d'hidrat de catequina (CHE) / g de mostra.

Beneficis de l'extracte de cistanche: anti-envelliment

2.2.7. Activitat anticolagenasa

L'activitat anti-colagenasa basada en la degradació proteolítica entre la col·lagenasa i el substrat sintètic (FALGPA-N-(3-[{2-Furil]-acriloil)-Leu-Gly-Pro-Ala) a 345 nm en el La presència d'inhibidors de col·lagenasa es va dur a terme segons Barrantes i Guinea (2003) amb alguna modificació. Es va deixar que la col·lagenasa de 0, 25 unitats/ml (40 μL) derivada de Clostridium histolyticum reaccionés amb mostres de prova de 10 μl i 20 μl de tampó de tricina 50 mM (pH 7, 5, amb 100 mM de CaCl2 i 5 mM de NaCl) a la foscor durant 15 min. Després de la preincubació, es va afegir una quantitat de 40 μL de la solució FALGPA 2 mM a cada pou. Cada mostra anava acompanyada d'un blanc que tenia tots els components excepte FALGPA i es va determinar l'absorbància després d'incubar-se durant 20 min.

2.2.8. Anàlisi bacteriològica de la vida útil de KLEL

Els mètodes utilitzats per al recompte total de microbis aeròbics (TAMC) i el recompte total de llevats i motlles (TYMC) del KLEL es van modificar a partir del manual analític bacteriològic (BAM) de la FDA (Huang et al., 2017). La mostra (1 g) es va barrejar amb 1 mL de Tween 80 estèril i es va ajustar el volum amb aigua de peptona estèril per obtenir una sèrie de dilucions completa de 10−1 a 10−3. Per al TAMC, les mostres es van inocular amb agar nutrient mitjançant un mètode de placa d'escampament, i després les plaques es van incubar a 30 ± 2 ◦ C durant 48 h. En el cas TYMC, les mostres es van inocular en plaques d'agar dextrosa de patata mitjançant un mètode de placa d'escampament, i les plaques es van incubar posteriorment a 30 ± 2 ◦ C durant 7 dies. Les plaques es van examinar pel creixement microbià després del període d'incubació.

2.3. Anàlisi estadística

Tots els resultats es van analitzar mitjançant el paquet estadístic Minitab 16.2.1 (Minitab Inc., Pennsilvània, EUA), es va realitzar una anàlisi de variància unidireccional (ANOVA), seguida de la prova de Tukey per determinar la diferència significativa (p < 0="" .05).="" es="" van="" presentar="" mitjanes="" ±="" desviació="" estàndard="" (sd)="" (n="3)" per="" a="" l'anàlisi="" de="">

3. Resultats i discussions

3.1. Optimització de la formulació de base de locions

Segons Hiola et al. (2018), l'optimització de la base de loció (preformulació) té un paper important per obtenir una formulació bona i estable. Per tant, la base de la loció es va optimitzar utilitzant 4 percentatges diferents de KSO tal com es mostra a la taula 1. Es van avaluar per aspecte, olor, homogeneïtat, estabilitat física, pH, extensibilitat, viscositat i anàlisi de congelació-descongelació (materials suplementaris: S1 i S2). Totes les formulacions de base de loció preparades utilitzant KSO tenien un color groc lletós a groc lletós, ​​amb bona olor (Chu i Nyam, 2020). A partir dels resultats obtinguts, els valors de pH de totes les formulacions de base de locions estaven dins del rang de pH de la pell (4-6), i això és important per minimitzar la reacció al·lèrgica i garantir l'estabilitat de la formulació cosmètica durant el temps d'emmagatzematge (Chu i Nyam). , 2020). Totes les formulacions de base de loció van mostrar una caiguda de la viscositat després de l'anàlisi de congelació-descongelació, però encara dins del rang d'una bona loció (500-5000 cP) (Kusuma et al., 2017). Per a l'extensió, com més gran sigui la concentració de KSO, menor serà el diàmetre d'extensió a causa de l'alta viscositat. Com més gran sigui la extensibilitat, més fàcil es pot aplicar la formulació cosmètica a la superfície de la pell. Per a la prova d'estabilitat per resistència a la centrifugació, F2 i F3 no van mostrar separació de fases, cosa que suggereix que ambdues formulacions van ser estables durant 1 any. No obstant això, F3 no es pot abocar fàcilment i donava un aspecte semblant a la preparació de crema, ja que tenia una viscositat més alta que la F2. Per tant, es va seleccionar F2 com a base de loció optimitzada per incorporar-la al KLE.

per a què serveix el cistanche: anti-envelliment

3.2. Avaluació de la formulació de la loció KLE (KLEL).

3.2.1. Anàlisi fisicoquímica

A partir dels resultats de la taula 2, la base de loció afegida amb KLE va mostrar un color lletós clar amb una olor agradable i no s'observava separació de fases. El KLEL va mostrar un valor de pH més alt que el control, cosa que indica que l'addició de KLE a la formulació cosmètica pot augmentar el valor del pH. Tots els valors de pH de les mostres eren compatibles amb el rang de pH de la pell i segurs per a la pell. No hi va haver diferències significatives en viscositat i extensibilitat entre KLEL i control, la qual cosa va indicar que l'addició de KLE a l'emulsió no va afectar la viscositat i l'extensió. Es van observar canvis significatius en els valors L*, a* i b* de KLEL en comparació amb el control, la qual cosa va demostrar que el color de la loció estava afectat pel color verd natural de les fulles de kenaf. KLEL té el més verd per al valor a* (-2,24 ± 0.03) i el més groc per al valor b* (15,54 ± 0.{{13} }1). La diferència total de color (ΔE) del KLEL en comparació amb el control va ser estadísticament significativa p<0,05, amb="" un="" valor="" de="" 6,82="" ±="" 0,04="" per="" a="" klel.="" estudis="" anteriors="" consideraven="" δe="2" com="" el="" llindar="" de="" discriminació="" visual="" (zhou="" et="" al.,="" 2009).="" així,="" els="" resultats="" de="" δe="" van="" demostrar="" que="" l'addició="" de="" kle="" pot="" afectar="" el="" color="" de="" la="" formulació="">

3.2.2. Anàlisi del contingut d'antioxidants

La taula 3 presenta la quantitat de contingut fenòlic total (TPC) i flavonoides (TFC). Els resultats obtinguts van indicar que la base de loció formulada amb KLE conté un TPC significativament més gran (1,84 ± 0.07 mgCAE/g) que el control (1,64 ± 0.0 6 mg CAE/g). Mentre que, per a TFC, KLEL també va mostrar un major nivell de TFC (21,62 ± 0,76 mgCHE/g) en comparació amb el control (19,42 ± 0,27 mgCHE/g). En la mateixa gamma d'alguns subproductes vegetals, la inclusió de KLE de forma dermatològica encara presenta alts continguts antioxidants, destacant la seva font potencial de compostos polifenolics a la indústria cosmètica (Adhikari et al., 2019; Rodrigues et al., 2014). ). Segons l'estudi de Haw et al. (2020), les fulles de kenaf són riques en diferents tipus de compostos polifenolics com l'àcid cafeic, l'àcid tànic, la catequina i l'àcid clorogènic.

3.2.3. Anàlisi de l'activitat antioxidant

Les habilitats d'eliminació de radicals lliures de les locions es van investigar mitjançant l'assaig DPPH i ABTS. La taula 3 indica que el KLEL va demostrar un DPPH més alt (1,16 ± 0,18 mgTEAC/g) i ABTS (0,50 ± 0.0 4 mgTEAC/g) activitat d'eliminació de radicals en comparació amb el control. Les troballes dels assaigs de DPPH i ABTS han mostrat patrons similars als de TPC i TFC, on pot millorar molt l'activitat antioxidant afegint KLE a la base de la loció, aquestes troballes han suggerit que KLE conté eliminadors de radicals lliures que, quan s'aplica a les formulacions cosmètiques, poden tenir un paper important. paper important com a antioxidant primari en la supressió dels radicals lliures que van causar l'envelliment de la pell. A més, el KLEL (0,69 ± 0,20 mgTEAC/g) també va demostrar una capacitat de reducció d'ions fèrrics més alta que el control (0,46 ± 0,09 mgTEAC/g), d'acord amb el DPPH i l'ABTS. Hi ha una necessitat d'un subministrament constant de compostos antioxidants de fonts externes, com ara cosmètics, per restaurar el sistema de defensa antioxidant de la pell individual contra les ROS que van causar l'envelliment de la pell (Działo et al., 2016). A més, es poden utilitzar com a pell les formulacions de locions amb activitat d'eliminació radical i poder reductorblanqueigagent per la producció de melanina induïda per UV regulada a la baixa (Działo et al., 2016).

3.2.4. Activitat inhibidora enzimàtica

Les locions es van provar contra la tirosinasa, un enzim metaloproteic que conté coure implicat en la biosíntesi de melanina, per a l'avaluació de l'activitat antitirosinasa in vitro. La taula 5 mostra que el KLEL (30,28 ± 3,90 per cent) no va mostrar diferències significatives en l'activitat anti-tirosinasa amb el control positiu (34,05 ± 4,60 per cent) quan s'utilitzava L-tirosina com a substrat. . Tanmateix, ALL (11,40 ± 0,29 per cent) va demostrar una activitat antitirosinasa menor que el control positiu (15,01 ± 0,84 per cent), quan s'utilitzava L-DOPA com a substrat. Això va demostrar que KLEL inhibia principalment el micofenolat en lloc dels difenols. El in vitroanti edatLes propietats es van avaluar mitjançant l'activitat inhibidora de la col·lagenasa i l'elastasa. Un enzim com la col·lagenasa i l'elastasa pot degradar el col·lagen i l'elastina, que són els responsables de la integritat i l'elasticitat de la pell (Jesumani et al., 2019). Així doncs, la inhibició de l'activitat de l'elastasa i la col·lagena reduiria la degradació de l'elastina i el col·lagen evitant així la formació d'arrugues, un dels principals signes de l'envelliment. Tal com es mostra a la taula 5, KLEL va demostrar una notable activitat anti-colagenasa (36,41 ± 0,54 per cent) i antielastasa (23,13 ± 1,56 per cent) en comparació amb el control positiu (CHL). El KSOL també va demostrar antitirosinasa (18,82 ± 0,17 per cent (L-tirosina com a substrat); 8,48 ± 0,29 per cent (L-DOPA com a substrat), anti-colagenasa (18,84 ± {{26) }},63 per cent ) i activitat antielastasa (5,78 ± 0,59 per cent ), però inferior a ALL. Això podria indicar que la combinació de KLE i KSO va demostrar un efecte sinèrgic amb una millor activitat inhibidora de l'enzim. Això està recolzat pels estudis realitzats per Pascoal et al (2015) i Chew et al (2016), en què el KSO és ric en tocoferols, mentre que el KLE és ric en derivats de quercetina i kaempferol. Aquests compostos van demostrar la pell.blanqueigianti edatpropietats, amb interès en la reducció de la hiperpigmentació de la pell i la producció d'arrugues (Lin et al., 2007; Keen i Hassan, 2016).

3.2.5. Assaig de melanogènesi in vitro

Per explorar més la pellblanqueigpropietats del KLEL, es va utilitzar el model de cèl·lules de melanoma B16F10 per estudiar l'efecte inhibidor sobre la melanogènesi. Per a l'activitat de la tirosinasa cel·lular, tal com es mostra a la figura 5a, KLEL (32,35 per cent) a 500 ug/mL va demostrar una inhibició significativament més forta de l'activitat de la tirosinasa cel·lular que la KAL (14,85 per cent) i KSOL (13,64 per cent), en comparació amb a-MSH. cèl·lula control tractada. Per al contingut de melanina extracel·lular i intracel·lular, KLEL va reduir en funció de la dosi el contingut de melanina de les cèl·lules B16F10 (Fig. 5b i c). Es va trobar que la LLA (500 ug/mL) tenia un efecte inhibidor comparable sobre el contingut de melanina extracel·lular (56,13 per cent) (en comparació amb una cèl·lula control tractada amb MSH) amb KAL (54,53 per cent). A més, el KLEL (36,52 per cent) també va demostrar un efecte inhibidor més fort sobre el contingut de melanina intracel·lular que el KAL (7,98 per cent). Mentre que, KSOL també va mostrar un efecte inhibidor sobre el contingut de melanina extracel·lular (17,73 per cent), però cap efecte sobre el contingut de melanina intracel·lular. En comparació amb KAL, l'impacte inhibidor més fort de KLEL en la inhibició de la melanogènesi es pot aclarir per l'activitat sinèrgica entre KSO i KLE, que pot millorar les propietats de blanquejament de la pell de KLE a la base de la loció. Aquests resultats van demostrar a més que el KLE es pot utilitzar com a agent blanquejador de la pell eficaç en el prototip cosmètic natural.

3.2.6. Assaig de citotoxicitat in vitro

Mitjançant l'avaluació de la biocompatibilitat del KLEL (anàlisi MTT), es va mantenir la viabilitat de les cèl·lules NHEF (després de 24, 48, 72 h) cultivades en presència de diferents concentracions de KLEL (0.125− 2 mg/mL) anteriorment. 95 per cent (Fig. 4a). Això va demostrar que el KLEL no causarà toxicitat per als humans. Mentre que les cèl·lules de melanoma B1610 s'utilitzen àmpliament en estudis per a la pellblanqueigagents (Chatatikun et al., 2019; Lee et al., 2019). Abans de la mesura de la capacitat de KLEL per suprimir la melanogènesi a les cèl·lules de melanoma B16F10, es va avaluar la citotoxicitat de KLEL. Com es mostra a la figura 4b, es va confirmar que KLEL no era tòxic per a les cèl·lules de melanoma B16F10 a una concentració inferior a 500 ug/ml. Com a tal, es va utilitzar 32,5-500 ug/mL KLEL per als experiments següents.

4. Conclusió

Aquest estudi va demostrar ser de gran importància en el model econòmic circular complert, ja que introdueix noves possibles aplicacions per a les fulles de kenaf com a ingredients d'alt valor afegit amb propietats per a la cura de la pell per a la indústria cosmètica, a saber, antioxidants,anti edat, i activitats anti melanogèniques. Les troballes presentades a l'estudi també van indicar que la formulació de loció preparada amb un 15 per cent de KSO (F2) amb 0,1 per cent de KLE ofereix la millor estabilitat física i microbiològica, sense toxicitat per a les cèl·lules humanes. A continuació, els estudis posteriors també s'han de centrar en la prova de desafiament microbià KLEL i l'eficàcia clínica.

suplement de cistanche