El nivell d'exercici adequat atenua la disbiosi intestinal i l'augment de l'àcid valeric per millorar la neuroplasticitat i la funció cognitiva després de la cirurgia en ratolins Part 4

Perfil de la microbiota intestinal

Es van recollir femtes fresques de ratolins per al perfil de la microbiota intestinal. Els ratolins es van col·locar individualment en una gàbia autoclau per recollir les femtes i es van permetre defecar lliurement. Les femtes es van recollir immediatament als tubs Eppendorf estèrils sobre gel sec i després es van emmagatzemar a -80 graus fins a un posterior processament. L'ADN de bacteris es va extreure amb un kit d'aïllament d'ADN del sòl Power Lyzer Power segons els nostres protocols anteriors [11].

Investigacions recents mostren que el microbioma intestinal té un impacte molt important en la nostra memòria. Precisament, els bacteris de la microbiota intestinal poden influir en el sistema nerviós del cervell humà, alterant així la seva funció de memòria. Aquesta és una troballa sorprenent perquè significa que podem millorar la nostra memòria canviant el nostre microbioma intestinal.

Per tant, com a algú que està intentant millorar la seva memòria, què pots fer per millorar el teu microbioma intestinal? La resposta és senzilla: centra't en una dieta equilibrada. Una dieta equilibrada no només ajuda a regular l'equilibri de la microbiota intestinal sinó que també millora tots els aspectes de la funció corporal.

En primer lloc, hem de centrar-nos en una dieta diversificada que sigui rica en fibra dietètica. Una dieta rica en fibra pot ajudar a mantenir la diversitat del vostre microbioma intestinal, un factor clau per promoure una bona salut. Al mateix temps, també hem d'assegurar-nos que consumim prou proteïnes d'alta qualitat i greixos saludables als nostres àpats. Aquests nutrients poden promoure la funció de memòria i la conducció nerviosa.

A més, l'exercici regular i la reducció de l'estrès també poden promoure l'equilibri i la diversitat en el microbioma intestinal. Tant si es tracta de respirar profundament, meditar o practicar ioga, totes aquestes són maneres efectives de reduir l'estrès. L'exercici pot millorar la contractilitat intestinal, augmentar la vitalitat intestinal i promoure la desintoxicació cíclica, ajudant així a promoure l'equilibri i la diversitat de la microbiota intestinal.

En definitiva, no només hem de centrar-nos en la nostra dieta i salut física, sinó també en la nostra microbiota intestinal. Canviar els nostres hàbits alimentaris i reduir l'estrès pot promoure l'equilibri i la diversitat de la nostra microbiota intestinal, cosa que ens pot ajudar a millorar la memòria i la funció del sistema nerviós. Així doncs, prestem atenció a la nostra salut intestinal junts i millorem la nostra memòria i la nostra forma física!

Es pot veure que hem de millorar la memòria, i Cistanche deserticola pot millorar significativament la memòria perquè Cistanche deserticola és un material medicinal tradicional xinès que té molts efectes únics, un dels quals és millorar la memòria. L'eficàcia de Cistanche deserticola prové dels molts ingredients actius que conté, com l'àcid tànnic, polisacàrids, glicòsids flavonoides, etc. Aquests ingredients poden promoure la salut del cervell de diverses maneres.

Feu clic a conèixer maneres de millorar la funció cerebral

Les biblioteques de seqüenciació de la regió hipervariable V3-V4 es van preparar segons les instruccions del sistema Illumina MiSeq. Breument, es va utilitzar 12,5 ng d'ADN com a plantilla d'ADN per a la primera PCR d'ARNr de 16 S. Els imprimadors utilitzats van ser els següents: F: 5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGCCTACGGGNGGCWGCAG-3′i R: 5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGACTACHVGGGTATCTAATCC-3′.
Els amplicons es van netejar amb perles AMPure XPmagnetic i després es van utilitzar per a Index PCR mitjançant el kit Nextera XTIndex. El kit d'assaig dsDNA HS Qubit i la cinta D1000ScreenTape d'alta sensibilitat TapeStation (Agilent, Blacksburg, VA, EUA) es van utilitzar per mesurar les concentracions de productes de PCR i normalitzar la quantitat per a la preparació de la biblioteca.

La seqüenciació es va operar amb un instrument Illumina MiSeq mitjançant el kit de reactius MiSeq v2 (500 cicles). Les dades es van analitzar amb el programari MiSeqReporter Metagenomics workflow v2.5.1.3 (Illumina, San Diego, CA, EUA). Les lectures aparellades obtingudes per seqüenciació de doble terminal es van empalmar en una seqüència mitjançant el programari Pandaseq. Es van obtenir lectures llargues amb regions d'alta variable.

Es van retallar les lectures la puntuació mitjana de phred a la finestra (5 bp de mida, 1 pb de longitud de pas) era inferior a 20. Es van descartar les lectures que contenien "N" ambigües o amb una longitud < 220 bp. Després del control de qualitat de les dades originals, Les seqüències d'alta qualitat sense quimeres es van organitzar segons l'abundància de grans a petites i després es van agrupar amb un 97% de similitud en unitats taxòmiques operatives (OTU). Es va considerar que cada OTU representava una espècie. Per evitar la desviació de l'anàlisi causada per les diferents mides de les dades de seqüenciació de mostres, es va introduir el nombre de lectures a l'OTU segons el número de seqüència mínim coincident amb l'OTU quan la profunditat de seqüenciació era suficient. La diversitat alfa es va analitzar mitjançant l'anivellament aleatori.

ARead es va extreure de cada OTU com una seqüència representativa. La seqüència representativa es va comparar amb la base de dades del projecte de la base de dades ribosòmica. Es van classificar les espècies per a cada OTU i es van obtenir taules d'abundància d'espècies per a una anàlisi posterior. La selecció d'OTU es va realitzar mitjançant Uclust a la plataforma de programari QIIME v1.9.1.

La diversitat alfa, inclòs l'índex Chao1 i l'índex de cobertura de mercaderies, es va utilitzar per a l'anàlisi de la diversitat d'espècies en una mostra. L'anàlisi de la diversitat beta es va utilitzar per comparar les diferències en la diversitat d'espècies entre mostres i es va caracteritzar per l'anàlisi de coordenades principals (PCoA) basada en la distància Bray-Curtis. Les diferències entre els grups es van provar mitjançant l'anàlisi de similitud (ANOSIM).

Perfil de plasma SCFA

Les concentracions de plasma SCFA es van quantificar mitjançant una gascromatografia-espectrometria de masses de 7890-5977 (GC-MS, Agilent, Blacksburg, VA, EUA). Es van recollir mostres de plasma de ratolins en els moments descrits anteriorment, emmagatzemats a -8{ {20}} grau ràpidament i després es descongela a temperatura ambient per al processament. Breument, es va barrejar amb vòrtex una mostra de plasma de 100 ul amb 900 uletanol (que contenia HCl al 0,5%, V/V). Es va aplicar tractament per ultrasons durant 40 min i després les mostres es van centrifugar a 14,000 RPM durant 10 min. El sobrenedant de les mostres es va mesurar mitjançant anàlisi GC-MS en un GC-MS Agilent 7890–5977 amb ionització per impacte electrònic i un Columna capil·lar DB-FFAP (30 m × 0,25 mm × 0,25 μm).

Quantificació de l'àcid valeric cortical

La quantitat d'àcid valeric a l'escorça cerebral recollida 24 hores després de l'última injecció intraperitoneal d'àcid valeric es va determinar mitjançant un mètode semblant al que es va informar abans [51, 52]. Breument, es va homogenitzar 0,1 g d'escorça cerebral en 500 µl d'acetonitril aquós. El sobrenedant es va extreure amb 8 ml de tampó d'extracció (hexà: èter dietílic=1:1) i es va centrifugar a 1800 g durant 5 min. Es van recollir 7,5 ml de sobrenedant, es van barrejar amb 93 µl de 20 mMKOH en metanol i es van assecar a 40 graus sota nitrogen gasós. El residu sec es va reconstituir en 50 µl de 18-Crown{-6 al 2,5% en acetonitril i es va derivar més amb 9-clorometil antracè en acetonitril amb l'addició d'hidròxid de sovinttrametilamoni.

Finalment, es van carregar 30 µl de solució de derivatització a la columna Acclaim C18 (3 µm, 4,6 × 100 mm, Thermo Scientific) i es van separar en cromatografia líquida d'alt rendiment Ultimate 3000 (HPLC, Thermo Scientific) equipada amb detector UV visible. El pic de l'àcid valeric derivat es va detectar a una longitud d'ona de 254 nm. 2-Es va afegir àcid etilbutíric (2-EA) com a control de referència intern. L'àrea del pic de l'àcid valeric es va mesurar com a mAU*min i la seva àrea màxima de cada mostra es va normalitzar amb la de 2-EA a la mostra. Els resultats finals es van presentar com a proporcions del grup d'àcid valeric al grup NS.

Recull de teixit cerebral

Els ratolins es van pesar i anestesiar amb isoflurà a les 6 h, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h i 7 dies després de la cirurgia i es van perfondre amb 4 graus NS per a la recollida de teixit cerebral. Aquests hipocamps es van utilitzar per a l'anàlisi ELISA o l'anàlisi d'ARN. Es va utilitzar tot el cervell a Bregma de -3 a -6 mm per a la tinció immunofluorescent. Tots els procediments de dissecció es van realitzar sobre gel.

Preparació de la biblioteca d'ARNm i seqüenciació d'Illumina Hiseq

The hippocampi harvested at 24 h after surgery from the control group, surgery group, and Exe+Sur group in the first experiment were placed in liquid nitrogen for 1 h and then stored in a −80 °C freezer quickly for no >1 setmana. La purificació de l'ARN, la transcripció inversa, la construcció de biblioteques i la seqüenciació es van realitzar a WuXi NextCODE a Xangai segons les instruccions del fabricant (Illumina).

Les biblioteques de seqüenciació centrades en l'ARNm de l'ARN total es van preparar mitjançant el kit de preparació de mostres d'ARN Illumina TruSeq®. L'ARNm de PolyA es va purificar de l'ARN total mitjançant perles magnètiques unides a oligo-dT i després es va fragmentar mitjançant tampó de fragmentació. Prenent aquests fragments curts com a plantilles, es va sintetitzar l'ADNc de la primera cadena mitjançant transcriptasa inversa i cebadors aleatoris, seguit de la síntesi d'ADNc de la segona cadena. A continuació, l'ADNc sintetitzat es va sotmetre a reparació final, fosforilació i addició de base "A" segons el protocol de construcció de biblioteques d'Illumina.

Es van afegir adaptadors de seqüenciació Illumina als fragments d'ADNc. Després de l'amplificació per PCR per a l'enriquiment de l'ADN, es van utilitzar els AMPure XPBeads (Beckman) per netejar els fragments objectiu de 200-300 pb. Després de la construcció de la biblioteca, es va fer el test dsDNA HS del fluoròmetre Qubit 3.0 (Thermo Fisher Scientific) s'utilitza per quantificar les concentracions de les biblioteques de seqüenciació resultants, mentre que la distribució de la mida s'analitza mitjançant Agilent BioAnalyzer 2100 (Agilent). La seqüenciació es va realitzar mitjançant un sistema Illumina seguint els protocols proporcionats per Illumina per a una seqüenciació d'extrems aparellats 2 × 150 a WuXi NextCODE a Xangai, Xina.

Expressió d'ARNm de l'hipocamp per reacció quantitativa en cadena de la polimerasa (Q-PCR)

L'hipocamp recollit a les 24 h després de la cirurgia del grup control, grup d'exercici, grup de cirurgia, grup Exe+Sur, grup Trans-Control+Sur, grup Trans-Exe+Sur, grup Exe+Sur+NS i Exe+Sur+ El grup Val es va col·locar en nitrogen líquid durant 1 h i després es va emmagatzemar al congelador de -80 graus durant més de 3 dies. L'extracció d'ARN, la transcripció inversa d'ARN a ADNc i la q-PCR es van realitzar tal com hem descrit anteriorment [49, 53]. Breument, l'ARN es va extreure mitjançant el kit RNeasy Micro. La transcripció inversa es va acabar utilitzant 5X All-in-One MasterMix. Finalment, es va utilitzar un sistema en temps real de connexió CFX (Bio-Rad) per a la quantificació quantitativa. Els primers per a qPCR van ser: C3ar1-F:TGGGCTGGTGCTGTGGGGTAG i C3ar1-R: GATGGCGAAGGCGGTTCTCAC. L'expressió gènica relativa de C3ar1 es va calcular mitjançant el cicle de llindar comparatiu ΔΔCt i l'expressió del gen -actina per a la normalització del gen. Els nivells d'ARNm dels gens diana s'expressen com a augments de plegat respecte al grup rellevant, respectivament.

Determinació de citocines i GDNF a l'hipocamp

IL{{0}}, IL{-6, C3 i GDNF a l'hipocamp es van detectar mitjançant ELISAkits. Per provar IL-1, IL,-6 i GDNF, els teixits cerebrals es van homogeneïtzar en gel al tampó RIPA que contenia 25 mM de Tris-HCl amb pH 7,6, 150 mMNaCl, 1% desoxicolat de sodi, 0,1% SDS i un còctel inhibidor de la proteasa que conté 10 mg/ml d'aprotinina, 5 mg/ml de pepstatina, 5 mg/ml de leupeptina i 1 mM de fluorur de fenilmetà sulfonil.

Per a les proves C3, els teixits cerebrals es van homogeneïtzar en gel al tampó PTR (subministrat al kit). El sobrenedant es va recollir per a la detecció ELISA després de centrifugar l'homogeneïtat a 13, 000 g durant 20 min a 4 graus i la concentració de proteïnes es va determinar mitjançant l'assaig de proteïnes BCA (Bio-Rad, Hemel Hempstead, Herts, Regne Unit). IL-1, IL6, C3 i GDNF al sobrenedant del cervell es van detectar segons les instruccions del fabricant per a ELISA, i la quantitat d'ells en cada mostra del cervell es va normalitzar pel seu contingut total de proteïnes i es va expressar com a pg/ mg de proteïna.

Western blotting

Western blotting es va realitzar tal com es va descriure anteriorment [49]. En resum, es van determinar les concentracions de proteïnes de les mostres mitjançant l'assaig de proteïnes BCA. Vint micrograms de cada mostra es van sotmetre a l'anàlisi Westernblotting mitjançant els anticossos primaris següents: proteïna de densitat policlonal anti-postsinàptica de conill 95 (PSD95) a una dilució 1:1000, anti-sinapsina policlonal de conill 1 a una dilució 1:1000 i anti-{10} de conill. Anticòs tubulinà dilució 1:1000. Les imatges es van escanejar amb un Image Master IIscanner (GE Healthcare, Milwaukee, WI, EUA) i es van analitzar mitjançant el programari ImageQuant TL v2003.03 (GE Healthcare). Els senyals de banda de proteïnes interessades es van normalitzar als de la tubulina corresponent i es van expressar com a fraccions de la mostra de control dels mateixos gels.

Tinció immunofluorescent

L'etiquetatge immunofluorescent i la quantificació de la tinció es van realitzar tal com hem descrit abans [6, 54]. Breument, el cervell es va fixar en paraformaldehid al 4% a 4 graus durant 24 hores i després es va incubar en sacarosa al 30% durant la nit a 4 graus abans de congelar-se en un compost de temperatura de tall òptima. -3 a -6 mm utilitzant un criostat i muntat en portaobjectes de microscopi.

Després de rentar-se en solució salina tamponada amb Tris (TBS), les seccions es van bloquejar en sèrum d'ase a l'10% més 1% d'albúmina sèrica bovina (BSA) en TBS que contenia un 0,3% de tritó-X100 durant 2 h a temperatura ambient i després es van incubar a 4 graus durant la nit amb els següents anticossos primaris: anticossos monoclonals anti-C3 de conill (1:50), anticossos monoclonals anti-GFAP de cabra (1:200), anticossos monoclonals anti-C3ar de rata (1:50) i anti-Iba monoclonals de conill. 21}} anticòs (1:200).

Les seccions es van esbandir amb TBS amb 0,1% Triton-x 100. L'anticòs IgG anti-conill d'ase conjugat amb Alexa Fluor 594 (1:200), anticòs IgG anti-cabra d'ase conjugat amb Alexa Fluor 488 (1:200) , l'anticòs IgG anti-rata d'ase conjugat amb AlexaFluor 594 (1:200) o l'anticòs IgG anti-conill de ruc conjugat amb AlexaFluor 647 (1:200) es van incubar amb les seccions durant 1 h a temperatura ambient a la foscor.

Les seccions es van rentar a TBS, es van incubar amb Hoechst 33342 (1:1000) per a la tinció nuclear, es van esbandir i es van muntar amb Vectashield mountingmedium (H-1000; Vector Labs, Burlingame, CA). Les imatges d'immunotinció es van adquirir mitjançant z-stack amb un sistema de microscòpia LSM710 (ZEISS) i es va incloure un control negatiu que omet la incubació amb l'anticòs primari en tots els experiments.

La quantificació es va realitzar tal com es va descriure anteriorment [6, 54]. Breument, es va fer una imatge de tota la regió del gir dentat (DG) que estava coberta per 2-3 camps no superposats de cadascuna de les sis seccions seqüencials de l'hipocamp d'un ratolí. El nombre de píxels per imatge amb una intensitat per sobre d'un nivell de llindar predeterminat es va considerar una àrea tacada positivament per a un marcador interessat i es va quantificar mitjançant l'Image-pro plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Rockville, MD, EUA) i presenta un percentatge de superfície positiva en la superfície total. A continuació, es van promediar sis mesures per ratolí per reflectir el nivell de tinció positiva. Totes les anàlisis quantitatives es van realitzar de manera cega.

Administració de BrdU i tinció immunofluorescent

Set dies després de la cirurgia, els ratolins van rebre 7 injeccions intraperitoneals consecutives de 80 mg/kg 5′-bromo-2′-desoxiuridina (BrdU) al migdia una vegada al dia, tal com es va descriure anteriorment [14]. Els ratolins es van sacrificar 5 dies després per collir l'hipocamp. L'hipocamp es va fixar en un 4% de paraformaldehideïna 0, 1 M de solució salina tamponada amb fosfat a 4 graus durant 24 hores i es va incrustar en parafina. Es van tallar seccions cerebrals coronals de cinc micres de gruix seqüencial de Bregma -2 a -4 mm. La recuperació d'antígen es va realitzar incubant seccions amb tampó de citrat de sodi que contenia 10 mM de citrat de sodi, 0, 05% de Tween 20 (pH 6, 0) a 95-100 graus durant 20 min.

La desnaturalització de l'ADN es va fer incubant amb HCl 1 N en gel durant 3 min, 2 N HCL a temperatura ambient durant 3 min i a 37 graus durant 6 min. Les seccions es van bloquejar amb sèrum d'ase al 5% en solució salina tamponada amb fosfat (PBS) que contenia 0,5% tritó-X 100 durant 2 h a temperatura ambient. Les seccions es van incubar durant la nit a 4 graus amb els següents anticossos primaris: anticòs anti-BrdU monoclonal de rata (1:100) i anticòs monoclonal anti-GFAP de cabra (1:200). Les seccions es van incubar amb IgGantibody anti-rata d'ase conjugat amb Alexa Fluor 594 (1:200) o IgGantibody anti-cabra d'ase conjugat amb Alexa Fluor 488 (1:200) durant 1 h a temperatura ambient en una habitació fosca. Després de rentar-les en PBS, les seccions es van tacar amb Hoechst 33342 (1:1000), es van esbandir i es van muntar amb el medi de muntatge Vectashield (Vector Labs).

Les imatges es van adquirir amb un microscopi d'afluorescència amb una càmera de dispositiu acoblada a càrrega (High MagOlympus BX51) i un sistema de microscòpia confocal LSM710 (ZEISS). En tots els experiments es va incloure un control negatiu que omet la incubació amb l'anticossos primari. Per a cada cervell de ratolí, es van utilitzar sis seccions seqüencials de l'hipocamp per al recompte de cèl·lules. Es va comptar el nombre de totes les cèl·lules tacades positivament per a un marcador interessat o la combinació de dos marcadors a la zona subgranular de la DG de cada secció. Les anàlisis quantitatives es van realitzar de manera cega.

Taca de Golgi

La tinció de Golgi es va realitzar mitjançant el kit FD Rapid GolgiStainTM. Dinou dies després de la cirurgia, els cervells de 6 ratolins de cada grup es van submergir a la solució d'impregnació (solucions A i B: 1:1) durant 2 setmanes i després es van transferir a la solució C durant 3 dies. Es van tallar seccions cerebrals coronals d'un gruix de 100 μm i al voltant de -2, 7 mm de bregma en un vibratom (Microslicer® 10110, Ted Pella, Inc. Califòrnia, EUA).

Tal com es va descriure abans[55, 56], es van seleccionar aleatòriament més d'10 neurones ben individualitzades a la regió DG de l'hipocamp de cada ratolí i es van prendre imatges d'escaneig seqüencial òptiques de múltiples capes a un interval de 2, 0 μ al llarg de l'eix z. (3DHISTECH, Pannoramic MIDI, Hongria) amb 20 × objectiu. Els fitxers d'escaneig de múltiples capes es van superposar per convertir-se en un fitxer d'escaneig clar que es pot veure amb Caseviewer (3DHISTECH, Hongria) en un ordinador. El nombre total de branques i la longitud dendrítica es van mesurar mitjançant el programari de Fiji (Fiji-win64, NIH, EUA). La complexitat dels arbres dendrítics totals (interseccions) es va estimar mitjançant l'anàlisi de Sholl. Mesurament de la densitat de la columna vertebral, es van seleccionar 5 neurones de cada animal.

Es van fotografiar cinc camps microscòpics seleccionats aleatòriament a les dendrites apicals o basals dels fitxers d'escaneig. Els números de la columna vertebral en segments de 40 μm van ser comptats per un observador que estava cec a l'assignació de grup. Els resultats es van expressar com el nombre d'espines/10 μmsegments. Les dades del nombre de branques dendrítiques, la longitud i les interseccions, així com la densitat de la columna vertebral d'un ratolí es van promediar per reflectir el nivell del ratolí.

Anàlisi estadística

No es va realitzar el càlcul de la mida de la mostra per a cada experiment. La determinació de la mida de la mostra es va basar principalment en la nostra experiència: es van utilitzar mides de mostra més grans per a experiments de prova d'aprenentatge i memòria que els d'estudis bioquímics. Totes les dades que es van recollir es van incloure en les anàlisis. Les dades que faltaven incloïen els animals que complien els criteris d'exclusió predeterminats per a l'entrenament d'exercici i els animals que van morir abans del període d'observació previst. El nombre d'animals que van aportar dades per a l'anàlisi per a cada condició experimental s'indica a les llegendes de la figura.

Els resultats es presenten com a mitjanes ± SD (dades de distribució normal) o mediana ± rang interquartil (no dades de distribució normal) amb la presentació de dades individuals d'animals al gràfic de barres i mitjans ± SD a les gràfics de línies. Les dades de les sessions d'entrenament de BarnesMaze es van analitzar mitjançant una anàlisi repetida de variància bidireccional (ANOVA) seguida de la prova de Tukey.

Les dades de la microbiota intestinal es van analitzar tal com es descriu a la secció Perfil de la microbiota intestinal. Les altres dades es van analitzar mitjançant ANOVA unidireccional seguida de la prova de Tukey si les dades estaven distribuïdes de manera normal, per ANOVA unidireccional de rang seguit del mètode Tukey testor Student-Newman-Keuls si les dades no estaven distribuïdes normalment, mitjançant ANOVA bidireccional. , mitjançant test t o prova de suma de rangs. Es va definir una diferència significativa com P < 0.05 basat en una hipòtesi de dues cues.

No es van realitzar ajustos per a comparacions múltiples. Totes les anàlisis estadístiques es van realitzar amb SigmaStat (Systat Software, Inc., Point Richmond, CA, EUA).

REFERÈNCIES

1. Moller JT, Cluitmans P, Rasmussen LS, Houx P, Rasmussen H, Canet J, et al. Disfunció cognitiva postoperatòria a llarg termini en l'estudi ISPOCD1 de la gent gran. Investigadors ISPOCD. Estudi internacional de la disfunció cognitiva postoperatòria. Lancet.1998;351:857–61.

2. Monk TG, Weldon BC, Garvan CW, Dede DE, van der Aa MT, Heilman KM, et al. Predictors of cognitive dysfunction after major nocardiac surgery. Anestesiologia. 2008;108:18–30.

3. Newman MF, Kirchner JL, Phillips-Bute B, Gaver V, Grocott H, Jones RH, et al. Avaluació longitudinal de la funció neurocognitiva després de la cirurgia de derivació de l'artèria coronària. N. Engl J Med. 2001;344:395–402.

4. Hall M, Schwartzman A, Zhang J, Liu X. Dades de cirurgia ambulatòria d'hospitals i centres de cirurgia ambulatòria: 2010. National Health StatisticsReport 2017.

5. Li Y, Chen D, Wang H, Wang Z, Song F, Li H, et al. Efectes intravenosos versus volàtils sobre la cognició postoperatòria en pacients grans sotmesos a cirurgia abdominal laparoscòpica. Anestesiologia. 2021;134:381–94.

For more information:1950477648nn@gmail.com