Les saunes són beneficioses o perjudicials per a la malaltia renal poliquística autosòmica dominant? Examen amb model de ratolí Ⅰ

Antecedents abstractes:Proteïnes de xoc tèrmic (Hsps), l'expressió de les quals és induïda pertractament tèrmic, funció en la protecció dels ronyonspersuprimint l'apoptosiimantenint la viabilitat tubular renal. A més, recentment, s'ha indicat que l'expressió de Hsps pot ser un objectiu terapèutic per a la malaltia renal poliquística autosòmica dominant (ADPKD). Hem investigat elefecte de la teràpia amb sauna secaen ratolins model ADPKD.

FEU CLIC AQUÍ PER OBTENIR EXTRACTE DE CISTANX ORGÀNIC NATURAL AMB 25% ECHINACOSIDE I 9% ACTEOSIDE PER A LA FUNCIÓ RENOLÓ

Mètodes i resultats:Els ratolins (ratolins mascles DBA/2FG-pay) es van classificar en tres grups: controls, TS: ratolins de pagament sotmesos a sauna prolongada amb aigua administrada que conté un 4% de sacarosa, SW: ratolins de pagament als quals s'administrava aigua que contenia un 4% de sacarosa. El grup TS va ser sotmès a sessions de sauna dues vegades per setmana durant quatre setmanes. El grup TS va aconseguir i es va mantenir a temperatures rectals d'aproximadament 39.0 graus fins que es van treure amb cura del dispositiu de raigs infrarojos llunyans. Després de 4 setmanes de tractament amb sauna, es van determinar els nivells de creatinina i nitrogen-urea en sang (BUN) mitjançant un mètode enzimàtic. La proteïna de xoc tèrmic (HSP) o el creixement cel·lular i les proteïnes relacionades amb la mida es van analitzar mitjançant western blotting. El grup TS va mostrar nivells de creatinina i BUN marginalment més alts que els grups control i SW, però, les diferències no van ser significatives. Tanmateix, l'ampliació del quist al grup TS es va reduir significativament en comparació amb la del grup control. L'expressió HSP90 es va reduir lleugerament als grups TS i SW en relació amb el grup control (p <0.01 o p <0,001, enfront del control), igual que l'expressió Erk , que està relacionat amb el desenvolupament i la proliferació de quists (p <0, 05, TS vs. control). L'expressió de Hsp27 i el nivell de fosforilació al grup SW eren comparables amb els del grup control. Tanmateix, el grup TS va augmentar els nivells de Hsp27 i fosforilació (NS). L'expressió de pro-caspasa-3 al grup TS va ser marginalment inferior a la del grup control. Tanmateix, l'activitat de la caspasa-3 en tots els grups no va mostrar diferències.

Conclusió:Els resultats d'aquest estudi van indicar que 4 setmanes de tractament amb sauna podrien provocar una deshidratació transitòria i una disfunció renal relacionada i conduir al risc d'estimular el creixement del quist mitjançant l'augment de l'expressió de Hsp27. A més, vam concloure que la prevenció de la deshidratació i el creixement dels quists es podria suprimir prenent una quantitat adequada d'aigua directament després del tractament de la sauna.

I. Introducció

Malaltia poliquística renal autosòmica dominant(ADPKD) és un trastorn genètic caracteritzat pel creixement de nombrosos quists als dos ronyons. L'ADPKD és causada principalment per mutacions en els gens de la malaltia renal poliquística 1 (PKD1) i PKD2, que codifiquen la policistina 1 (PC1) i la PC2, respectivament. Al llarg del curs de dècades de la malaltia, els pacients desenvolupen grans quists renals plens de líquid que perjudiquen la funció renal. Actualment, s'estima que el nombre de pacients amb ADPKD al Japó és d'un 31,000, que representa aproximadament el 3-5% de tots els pacients de diàlisi). Aproximadament el 50% dels pacients amb ADPKD desenvolupen malaltia renal en fase terminal als 602 anys). El tolvaptan, un antagonista del receptor de vasopressina 2 (V2), va ser aprovat com el primer agent terapèutic per a l'ADPKD i el seu ús clínic va començar el maig de 2014 al Japó). Tot i que és un fàrmac eficaç que redueix la taxa de creixement dels quists, actualment no hi ha cura per a l'ADPKD, i no és possible aturar la formació de quists als ronyons.

La teràpia termal, inclosa la balneoteràpia (BT) i la teràpia spa (ST), s'ha utilitzat freqüentment a nivell mundial com a fisioteràpia o teràpia alternativa. En entorns clínics, l'objectiu principal de la teràpia tèrmica és aconseguir resultats de tractament eficaços sense danyar els teixits normals. Una revisió sistemàtica recent va demostrar que BT i ST proporcionen un alleujament significatiu del dolor i una millor qualitat de vida en malalties cròniques del sistema musculoesquelètic o del teixit connectiu). L'estimulació tèrmica indueix proteïnes de xoc tèrmic (Hsps) que són essencials per a la supervivència cel·lular gràcies a la seva funció com a chaperones proteiques. El paper de les Hsps en la salut i la malaltia renal és variable. La inducció de Hsps pot ser beneficiosa o perjudicial per al ronyó, depenent de la Hsps específica, el tipus de cèl·lula i el context). En el teixit renal, les Hsps són una part important del sistema de defensa intracel·lular, que s'activa per diferents tipus d'estrès cel·lular. Les diferents Hsps dins de la cèl·lula estabilitzen les estructures cel·lulars i milloren la resistència cel·lular a l'apoptosi i la necrosi6), 7). En els darrers anys, s'ha informat que les Hsps tenen un paper perjudicial en l'ADPKD i, per tant, són dianes terapèutiques8), 9). Per tant, teníem com a objectiu investigar l'efecte de les saunes en animals model ADPKD, quan es repeteix la càrrega de calor que augmenta la temperatura rectal aproximadament 2 graus i la manté durant uns 30 min. II Materials i mètodes 1. Ratolí model de malaltia poliquística renal autosòmica dominant (ADPKD) Tots els procediments amb animals es van dur a terme d'acord amb les directrius per a la cura i l'ús d'animals de laboratori aprovades per la Universitat de Ciències de la Salut de Kumamoto (núm. 18-07). . Els ratolins DBA/2FG-pcy (pcy) mascles 10), 11) (8 setmanes d'edat, n=12) (Kyudo, Kumamoto, Japó) amb un pes corporal inicial de 20,9 ± 0,7 g es van utilitzar com a ratolins model ADPKD en aquest experiment. Es van utilitzar ratolins DBA mascles (8 setmanes, n=3) com a referència per al model de ratolí ADPKD. La figura 1 mostra l'aspecte i el ronyó extirpat com a exemples típics de ratolins pcy (Fig. 1A, B). Tots els animals van ser allotjats a una humitat i una temperatura controlades amb un cicle de llum/foscor de 12 h12- i se'ls va donar accés gratuït a menjar de ratolí estàndard i aigua de l'aixeta.

Nou ratolins pcy (8 setmanes d'edat) es van dividir aleatòriament en els tres grups següents: grup control: ratolins pcy com a control (n=3), grup TS: ratolins pcy exposats a una estimulació tèrmica sistèmica repetida (n {{3} }); i grup SW: ratolins pcy als quals se'ls va proporcionar aigua que contenia un 4% de sacarosa (n=3). Els ratolins del grup TS van rebre aigua que contenia un 4% de sacarosa durant la nit, després d'una estimulació tèrmica sistèmica per evitar la deshidratació. En un estudi anterior, havíem trobat que la pèrdua de pes corporal era aproximadament del 3-4% després de l'estimulació tèrmica sistèmica12). Quan es va donar un 4% d'aigua de sacarosa als ratolins pcy, la quantitat d'aigua consumida va augmentar significativament de 5,6 ± 0,6 ml a 7,4 ± 0,7 ml (p <0,001). , Fig. 1C). La ingesta d'aigua de sacarosa del 4% durant la nit va ser efectivament una ingesta elevada de líquids equivalent al 14 ± 7% del pes corporal. El grup SW va consumir aigua durant la nit amb la mateixa freqüència que el grup TS.

Fig. 1 A: ratolí DBA (Lt) i ratolí 2FG-pcy (Rt). B: Ronyó de DBA (Lt) o 2FG-pcy (Rt), Barra d'escala=1 cm. C: la quantitat d'aigua o el 4% d'aigua de sacarosa durant la nit després de la sauna als ratolins pcy a les 8 setmanes d'edat. Les dades es mostren com a mitjana ± SD. n=3. ＊＊＊ p <0.001 (L'anàlisi estadística va utilitzar la prova T aparellada).

2. Estimulació tèrmica sistèmica (sauna)

La intensitat de calor de la sauna es va establir en referència a un estudi anterior13). Tanmateix, la temperatura rectal d'alguns dels ratolins pcy va superar els 42 graus a causa del seu petit volum corporal en comparació amb els dels ratolins DBA normals i els ratolins 129X1/SvJ. Per tant, es va intentar augmentar la temperatura rectal en 1 grau, però a causa de la limitació del control del sistema de sauna sec de raigs infrarojos llunyans (proporcionat per la Universitat de Kagoshima), la temperatura rectal es va establir per augmentar a aproximadament 39 graus. No es van trobar informes sobre la freqüència de saunas per a l'ADPKD; per tant, es va adoptar la freqüència mínima efectiva de sauna (dues vegades/setmana) establerta en un estudi sobre la relació entre el bany de sauna i les malalties cardiovasculars i altres causes de mortalitat de Laukkanen et al.14). Concretament, els ratolins van rebre tractament de sauna a 43 graus durant deu minuts i després a 37 graus durant 35 minuts per elevar la temperatura rectal de 37,1 ± 0,1 graus a 39,3 ± 0,3 graus utilitzant el Sistema de sauna sec de raigs infrarojos llunyans. Les temperatures rectals dels ratolins es van mantenir a uns 39.0 graus , fins que es van treure del dispositiu de la sauna. El grup TS va estar exposat a la sauna durant quatre setmanes, dues vegades per setmana.

3. Procediment analític

Les dades fisiològiques es van obtenir de tots els ratolins al final del període d'estudi de quatre setmanes. Es van recollir mostres d'orina de vint-i-quatre hores en gàbies metabòliques i es va determinar la ingesta de líquids. Es van recollir mostres de sang de la vena cava inferior i es van mesurar els nivells de creatinina plasmàtica i nitrogen d'urea en sang (BUN) mitjançant un analitzador automàtic de bioquímica Hitachi 7180 (Hitachi High-Technologies Corporation, Tòquio, Japó), amb Aqua-auto Kainos CRE. - Kit de prova II o kit de prova UN-II (Kainos, Tòquio, Japó) mitjançant el mètode enzimàtic.

4. Estudis histològics

Els ronyons es van fixar amb una solució tampó fosfat de paraformaldehid al 4% i es van incrustar en parafina. Les mostres de ronyó es van seccionar a intervals de 2-µm i es van tacar amb hematoxilina i eosina (H&E), i els quists dels túbuls es van quantificar en 2 seccions/ratolí (ronyó dret) mitjançant ImageJ (Instituts Nacionals de Salut, Bethesda, Maryland, EUA). Les àrees amb llàgrimes i bombolles de teixit que es van identificar amb un augment més alt (× 40) es van excloure de l'anàlisi, tal com es va informar anteriorment15).

5. Occidental assecat

L'electroforesi en gel de dodecilsulfat de sodi-poliacrilamida (SDS-PAGE) i el blotting es van realitzar mitjançant procediments estàndard. Les alíquotes que contenien 15 µg de proteïna es van sotmetre a SDS-PAGE. Es van utilitzar anticossos generats contra les proteïnes següents: Hsp27 (1:1,000, sc{-9012, Santa Cruz Biotechnology), phospho-Hsp27 (1:1,{000, #2401S, Tecnologia de senyalització cel·lular), total-Akt (1:1,000, #9272, tecnologia de senyalització cel·lular), fosfo-Akt (1:1,000, #9275, tecnologia de senyalització cel·lular), Erk1 /2 (1:1,000, #9102, Tecnologia de senyalització cel·lular), fosfo-Erk1/2 (1:1,000, #9101, Tecnologia de senyalització cel·lular), mTOR (1:1 ,000, #2972, Tecnologia de senyalització cel·lular), fosfo-mTOR (1:1,000, #2971, Tecnologia de senyalització cel·lular), caspasa 3 (1:500, ab4051, Abcam, Cambridge, Regne Unit), caspasa escindida-3 (1:1,000, #9661, Cell Signaling Technology) i -actina (1:1,{000, sc{-130656, Santa Cruz Biotecnologia). Les taques es van detectar mitjançant el sistema de detecció de blotting occidental ECL Prime (GE Healthcare, Regne Unit) segons les instruccions del fabricant. Les dades van mostrar quantificació relativa contra -actina, que es va utilitzar com a control intern.

6. Anàlisi estadística

Per a l'anàlisi estadística, les dades entre els grups TS i SW es ​​van comparar mitjançant la prova U de Mann-Whitney. Es van comparar els grups mitjançant una anàlisi de variància unidireccional (ANOVA) seguida de la prova de Tukey per identificar diferències. Les diferències es van considerar estadísticament significatives a p < 0,05. Les dades s'expressen com a mitjana ± desviació estàndard (SD) o mitjana ± error estàndard de la mitjana (SEM). Per a l'anàlisi estadística es va utilitzar GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, San Diego, CA, EUA).

Servei de suport de Wecistanche: el major exportador de cistanche a la Xina:

Correu electrònic:wallence.suen@wecistanche.com

WhatsApp/Tel:+86 15292862950}

Compreu per obtenir més detalls de les especificacions:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop