Resum:S'ha informat que les arrels de Vitis amurensis tenen el potencial de blanquejar la pell mitjançant l'avaluació de la melanogènesi i les activitats inhibidores de la tirosinasa. En aquest estudi, es van utilitzar arrels de V. amurensis per seleccionar ràpidament ingredients per blanquejar mitjançant LC-Q-TOF-MS juntament amb un assaig inhibidor de la tirosinasa i per optimitzar el procés d'extracció per utilitzar-lo com a material funcional per blanquejar la pell mitjançant la metodologia de la superfície de resposta. Els resultats van mostrar que les arrels de V. amurensis van mostrar efectes inhibidors de la tirosinasa per dos oligòmers d'estilben, ε-vinífera (1) i vitamina B (2), tal com va predir LC-Q-TOF-MS juntament amb un bioassaig. Les condicions òptimes d'extracció (concentració de metanol 66 per cent, volum de dissolvent 140 ml i temps d'extracció 100 min) per als ingredients per blanquejar la pell es van establir amb rendiments del 6,20 per cent, i l'activitat inhibidora de la tirosinasa va ser del 87,27 per cent. La relació entre cada factor i la seva resposta corresponent es va confirmar mitjançant l'anàlisi de correlació de Pearson. El volum de dissolvent va mostrar una clara relació lineal amb els rendiments, i la concentració de metanol tenia una forta relació lineal amb l'activitat inhibidora de la tirosinasa per als compostos 1 i 2, així com la seva combinació. En general, es va demostrar que LC-Q-TOF-MS juntament amb un bioassaig té el potencial de trobar de manera efectiva nous constituents actius, així com components actius coneguts; les vitamines es poden proposar com un nou agent blanquejador potencial natural.

Segons estudis rellevants,Cistancheés una herba comuna que es coneix com "l'herba miracle que allarga la vida". El seu component principal éscistanòsid, que té diversos efectes com araantioxidant, antiinflamatori, ipromoció de la funció immune. El mecanisme entre cistanche iblanqueig de la pellrau en l'efecte antioxidant del cistancheglucòsids. La melanina a la pell humana es produeix per l'oxidació de la tirosina catalitzada pertirosinasa, i la reacció d'oxidació requereix la participació d'oxigen, de manera que els radicals lliures d'oxigen del cos esdevenen un factor important que afecta la producció de melanina. Cistanche contécistanòsid, que és un antioxidant i pot reduir la generació de radicals lliures al cos, inhibint així la producció de melanina.

Feu clic a Cistanche venut a prop meu

Per a més informació:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Paraules clau:Vitis amurensis; LC-Q-TOF-MS juntament amb un assaig inhibidor de la tirosinasa; metodologia de la superfície de resposta; Correlació de Pearson

1. Introducció

La melanina és responsable del color de la pell i el cabell dels mamífers i protegeix la pell dels raigs ultraviolats, però la producció excessiva de melanina i l'acumulació de melanina a la pell causen trastorns de la hiperpigmentació de la pell com ara pigues, melasma, taques de l'edat, efèlids i lentigins senils. La tirosinasa, coneguda com a enzim oxidasa que conté coure, té un paper crucial en la biosíntesi de melanina. L'enzim va catalitzar dues reaccions d'oxidació consecutives: el primer pas, la hidroxilació de la L-tirosina a 3,4-dihidroxi-L-fenilalanina (L-DOPA), i el segon pas, l'oxidació de la L-DOPA a dopaquinona. La dopaquinona és una substància altament reactiva que es pot polimeritzar espontàniament per generar melanina [1–3]. Per tant, els inhibidors de la tirosinasa es poden utilitzar com a tractaments per a trastorns de la pell relacionats amb la hiperpigmentació i com a agents per blanquejar la pell.

Vitis amurensis, una espècie de raïm silvestre, es distribueix principalment a Àsia (Corea, Xina i Japó). Les fruites totalment madures es consumeixen crues i contenen nutrients abundants com sacarosa, glucosa, proteïnes i vitamines, per la qual cosa s'utilitzen com a material per al vi, sucs, gelees i melmelada. A més, les seves fulles s'utilitzen en una amanida [4]. Les seves arrels i tiges s'han utilitzat com a medicina tradicional per al tractament del càncer, el dolor neuràlgic i el dolor abdominal [5,6]. Les seves arrels consisteixen en estilbens (un constituent principal), procianidines, flflavonoides, triterpenoides i altres compostos fenòlics. Fins ara, les composicions químiques de l'arrel s'han estudiat amb prou detall. En particular, es van informar diversos oligòmers d'estilben, com el resveratrol, amurensina A, vitamina A, (a més)-ε-vinífera, amurensines C–M, ampelopsina A, D i ampelopsina E [6]. L'extracte metanòlic de l'arrel presenta un efecte anti-melanogènic contra la melanogènesi induïda per hormones estimulants de melanòcits a les cèl·lules B16F10 i en l'oxidació de 3,4-dihidroxifenilalanina (L-DOPA) mitjançant tirosinasa de bolets [7]. A més, els extractes de V. amurensis i els seus compostos actius presenten efectes antioxidants, antiinflamatoris, neuroprotectors i antitumorals [7–10].

La LC-MS combinada amb un bioassaig pot confirmar simultàniament el perfil químic i l'activitat biològica dels components en productes naturals sense necessitat d'extracció i aïllament. Per tant, recentment s'ha utilitzat per identificar de manera eficient i ràpida compostos bioactius en productes naturals [11-13].

L'optimització és un procés que permet la màxima eficiència dels sistemes o productes experimentals. La metodologia de la superfície de resposta (RSM), l'anàlisi multivariant, el disseny d'experiments mitjançant tècniques matemàtiques i estadístiques basades en models empírics i l'expressió de la correlació entre disseny experimental i resultats com a funció polinomial, són algunes de les tècniques que proporcionen condicions d'optimització ideals amb la màxima eficiència. RSM és un mètode d'optimització precís i eficient àmpliament utilitzat en diversos camps, com ara el processament d'aliments, la química, la biologia i l'agricultura [14–16]. Durant les últimes dècades, ha augmentat l'interès pels productes farmacèutics, cosmètics i aliments funcionals que contenen productes naturals; en conseqüència, hi ha investigacions en curs tant a l'acadèmia com a la indústria destinades a desenvolupar aquests productes [17,18]. El primer pas d'aquests estudis consisteix en l'extracció del constituent bioactiu de productes naturals. En aquest moment, com que nombrosos factors com el temps d'extracció, la temperatura, la relació líquid-sòlid i el volum del dissolvent afectaven els constituents extrets, es requereix una optimització per extreure al màxim els constituents bioactius.

Segons el nostre coneixement, poques vegades s'han informat constituents inhibidors de la tirosinasa i optimització dels extractes d'arrels de V. amurensis [5,19]. Per tant, aquest estudi pretenia obtenir ràpidament l'inhibidor de la tirosinasa de les arrels de V. amurensis mitjançant LC-Q-TOF-MS juntament amb un assaig inhibidor de la tirosinasa i optimitzar les condicions d'extracció per ampliar la utilització de les arrels de V. amurensis com a agent blanquejador de la pell. per RSM.

2. Resultats i discussió

2.1. LC-QTOF MS combinat amb un assaig inhibidor de la tirosinasa utilitzant l'extracte d'arrel de V. amurensis

L'extracte de MeOH al 80 per cent de l'arrel de V. amurensis va mostrar una activitat inhibidora de la tirosinasa significativa (80,7 ± 0,8 per cent a 50 µg/mL, taula S1). Per identificar els compostos inhibidors de la tirosinasa a l'arrel de V. amurensis sense aïllar, es va realitzar LC-QTOF-MS juntament amb un assaig inhibidor de la tirosinasa. El perfil químic de l'extracte d'arrel de V. amurensis es va obtenir a la primera prova (figura S1) i els compostos bioactius es van identificar mitjançant un assaig inhibidor de la tirosinasa de fraccions recollides cada 30 s a partir de la segona prova (figura 1). Hi va haver dos pics entre 19 i 22 min al cromatograma de masses que es va predir que tindrien una activitat inhibidora de la tirosinasa significativa, i es van identificar les seves estructures com a dímer d'estilbene (1) i tetràmer d'estilbene (2) mitjançant un perfil químic (taula 1).

2.2. Identificació dels constituents inhibidors de la tirosinasa de l'arrel de V. amurensis

En primer lloc, es van aïllar dos constituents que s'esperava que tinguessin activitat inhibidora de la tirosinasa de la fracció EtOAc i es va avaluar la seva bioactivitat. Les estructures dels compostos aïllats 1 i 2 es van identificar com a ε-vinífera (1) [20,21] i vitamina B (-vinifera, 2) [21–23], respectivament, utilitzant 1H-NMR, 13C-NMR i ESI-MS (figura 2, figures S2 i S3 i taula S2). En l'assaig inhibidor de la tirosinasa, els valors IC50 dels compostos 1, 2 i àcid cògic van ser de 3,51, 10,74 i 27,09 µM, respectivament. Tots dos compostos van mostrar efectes inhibidors de la tirosinasa més alts que el control positiu, l'àcid cògic, que és el constituent conegut per blanquejar la pell (taula 1 i figura S4). En estudis anteriors, s'ha informat que ε-vinifera (1) té activitat inhibidora de la tirosinasa [23]; tanmateix, la vitamina B (2) es va identificar per primera vegada al nostre estudi.

En general, els resultats, correlacionats amb les dades previstes de LC-MS juntament amb un assaig inhibidor de la tirosinasa i vitamina B (2), mostren potencial com a nou inhibidor de la tirosinasa. A més, es van realitzar estudis d'acoblament molecular per donar suport al resultat de l'activitat inhibidora de la tirosinasa significativa dels dos oligòmers d'estilben. Tal com es mostra a la taula 1, els compostos 1 i 2 van mostrar una puntuació d'acoblament més alta que el control positiu, l'àcid cògic, d'acord amb les nostres dades experimentals. Tanmateix, els resultats d'acoblament dels compostos eren contraris als nostres resultats experimentals. Els modes d'interacció dels compostos 1 i 2 es van descriure a la figura 3. El compost 1 va formar 4 enllaços d'hidrogen, 2 interaccions hidrofòbiques i 1 interacció de parell pi-sol, i el compost 2 va formar 11 enllaços d'hidrogen, 7 interaccions hidrofòbiques, 1 interacció de van der Waals. , i 3 interaccions de parell pi-sol. Com a resultat, es va confirmar que els compostos es poden inserir al lloc actiu de la proteïna diana i unir-se a residus d'aminoàcids catalítics que poden inhibir l'activitat de la tirosinasa. A més, ε-vinifera (1) s'informa com un inhibidor competitiu que s'uneix al mateix lloc que la L-DOPA s'uneix a la tirosinasa [23]. Es va observar que la vitamina B (2) s'uneix al mateix lloc que ε-vinífera (1), la qual cosa va confirmar que la vitamina B (2) és un nou inhibidor competitiu.

2.3. Optimització de l'extracció d'arrel de V. amurensis mitjançant RSM

Per utilitzar les arrels de V. amurensis com a material funcional per blanquejar la pell, el disseny de Box-Behnken (BBD) va dissenyar les condicions òptimes d'extracció per maximitzar el rendiment d'extracció i l'activitat inhibidora de la tirosinasa. Els efectes de les respostes independents, com ara el rendiment d'extracció, l'activitat inhibidora de la tirosinasa, la quantitat de compost 1, la quantitat de compost 2 i la quantitat de la suma dels compostos 1 i 2, sobre les tres variables independents (temps d'extracció, concentració de MeOH/aigua i volum de dissolvent), es van mesurar (taula 2). El rang de variables es va establir com el temps d'extracció (40, 70 i 100 min), la concentració de MeOH (40, 70 i 100 per cent) i el volum de dissolvent ( 35, 87, 5 i 140 ml) basat en un experiment preliminar d'un sol factor (dades no mostrades). Els valors obtinguts dels experiments dissenyats es van expressar com a polinomis de correlacions entre variables mitjançant l'anàlisi de regressió (Taules S4-S13 i Figura S5). Com a resultat de realitzar una optimització individual per a cada reacció (taula 3), s'esperava que el rendiment representés el 6,21 per cent quan s'extreu amb 100.00 min, MeOH 64,78 per cent, 140.{{42} } ml. L'activitat inhibidora de la tirosinasa (per cent) es va extreure amb 65,22 min, MeOH 100.00 per cent, condicions de 140,00 ml, i es va predir que mostraria un valor del 90,37 per cent. La quantitat de compost 1 a 65,74 min, MeOH 100.{00 per cent, 35,00 ml es va predir en 37,45 µg/mg, i la quantitat de compost 2 a 70,00 min, MeOH 70,00 per cent i 92,24 mL es va predir com a 86,77 µg/mg. A més, s'esperava que el contingut total dels compostos 1 i 2 mostrés un valor màxim de 108,10 µg/mg quan s'extreu en condicions de 75,20 min, MeOH 100,00 per cent i 35,00 mL. Els experiments basats en condicions optimitzades van donar un 6,19 ± 0,36 per cent, una activitat inhibidora de la tirosinasa un 91,72 ± 3,48 per cent, un contingut de compost 1 36,54 ± 1,78 µg/mg, un contingut de compost 2 85,74 ± 16,57 µg de compostos, 16,57 µg i {8gs, 5 µg/m Es van obtenir },10 ± 19,11 µg/mg i les respostes individuals per a cada variable van mostrar una diferència del 5 per cent o menys dels valors teòricament predits. Es va realitzar una optimització de respostes múltiples per maximitzar el rendiment d'extracció i l'activitat inhibidora de la tirosinasa (taula 3). Les condicions optimitzades van ser les següents: temps d'extracció, 100 min; concentració de MeOH, 66,38 per cent; i volum de dissolvent, 140 ml. Utilitzant aquestes condicions, es va determinar que el rendiment era del 5,95 ± 1,13 per cent i l'activitat inhibidora de la tirosinasa era del 85,93 ± 1,57 per cent; aquests valors eren similars als valors previstos, 6,20 i 87,25 per cent, respectivament. A més, es va analitzar la correlació entre cada variable i la resposta corresponent mitjançant la correlació de Pearson (taula 4). El rendiment d'extracció va mostrar una clara relació lineal entre el temps d'extracció i la concentració de MeOH i una relació lineal negativa amb la quantitat de compost 1. A més, l'activitat inhibidora de la tirosinasa va mostrar una forta relació lineal entre la quantitat de compost 2 i la quantitat de la suma. dels compostos 1 i 2 i una clara relació lineal amb el compost 1. Per tant, l'activitat inhibidora de la tirosinasa de l'arrel de V. amurensis era proporcional als dos compostos 1 i 2, però presentava una relació lineal més forta amb la quantitat de compost 2 que el compost 1.

3. Materials i Mètodes

3.1. Procediments Experimentals Generals

La cromatografia líquida a pressió mitjana (MPLC) es va realitzar mitjançant una Biotage Isolera (Biotage AB, Uppsala, Suècia). Un sistema està equipat amb una bomba de cromatografia flaix d'alt rendiment (HPFC), un detector de doble longitud d'ona variable i un col·lector. Els espectres de RMN es van adquirir mitjançant un espectròmetre Bruker SPECTROSPIN 300 MHz (Bruker Corporation, Billerica, MA, EUA). El metanol-d4, un dissolvent de RMN, es va comprar a Cambridge Isotope Laboratories, Inc. Es van comprar acetonitril (ACN), aigua i metanol (MeOH) de grau cromatogràfic a ThermoFisher Scientific Korea Ltd. (Seül, República de Corea). La L-tirosina, la tirosinasa de bolets, l'àcid cògic i l'àcid fòrmic es van comprar a Sigma–Aldrich Co (St. Louis, MO, EUA).

3.2. Material vegetal

L'arrel de V. amurensis es va obtenir de Gyeongbuk, Corea, i també es va comprar a Omniherb (Daegu, República de Corea). Van ser identificats pel Dr. Prof. Ki Yong Lee, de la Facultat de Farmàcia de la Universitat de Corea. Es va dipositar un exemplar de val (KUP-HD071) al Laboratori de Farmacognòsia del Col·legi de Farmàcia de la Universitat de Corea.

3.3. Espectrometria de masses LC-Q-TOF

La LC es va realitzar mitjançant una sèrie Agilent 1260 (Agilent, Santa Clara, CA, EUA) que inclou una bomba binària, un desgasificador en línia, un mostreig automàtic, un compartiment de columna controlat termostàticament i un detector de matriu de fotodíodes. La separació cromatogràfica es va realitzar mitjançant una columna Shiseido CapCell PAK C18 (5 µm, 4, 6 mm, ID × 15 0 nm). La fase mòbil constava d'aigua (solvent A) i ACN (solvent B), ambdós contenint 0,1 per cent d'àcid fòrmic. Les condicions del gradient eren les següents: 0–5 min, 10 per cent de B, 5–30 min i augment lineal de B del 10 al 90 per cent. La taxa de companys es va establir a 0,6 ml/min; Es van injectar 5 µL i 20 µL de les mostres per a l'anàlisi LC-Q-TOF-MS i LC-Q-TOF-MS juntament amb un assaig inhibidor de la tirosinasa, respectivament. L'espectrometria de masses es va realitzar mitjançant un espectròmetre de masses Agilent 6530 Q-TOF (Agilent, Santa Clara, CA, EUA) amb una interfície d'ionització per electrospray (ESI) en mode negatiu. Les dades de l'interval de masses des de m/z 50–1000 es van recollir en mode centroide. Els paràmetres de massa van ser els següents: tensió capil·lar, 4000 V; pressió del nebulitzador, 40 psi; tensió del fragment, 175 V; tensió del skimmer, 65 V; temperatura del gas d'assecat, 325 ◦C; índex de gas d'assecat, 12,0 L/min; energia de col·lisió 10, 20, 30 i 40 eV. L'ajust dels paràmetres d'adquisició i el processament de dades es van realitzar mitjançant l'adquisició de dades LC-MS/MS mitjançant l'ús de la sèrie 6530 Q-TOF (versió B.05.00) (programari MassHunter Workstation, Agilent, Santa Clara, CA, EUA).

3.4. LC-Q-TOF-MS combinat amb un assaig inhibidor de la tirosinasa

El LC-Q-TOF-MS juntament amb un assaig inhibidor de la tirosinasa es va realitzar mitjançant el mètode establert a l'estudi anterior [24]. En resum, l'assaig es va procedir en dues tirades. En la primera prova, es va obtenir el perfil químic de la mostra mitjançant LC-Q-TOF-MS. A la següent tirada, l'eluït després de passar pel sistema LC en les condicions LC-Q-TOF establertes es va recollir en plaques de 96-pous cada 30 s. L'activitat inhibidora de la tirosinasa de les fraccions recollides es va avaluar mitjançant un assaig inhibidor de la tirosinasa.

3.5. Aïllament de compostos inhibidors de la tirosinasa de l'arrel de V. amurensis

Per a l'aïllament dels compostos inhibidors de la tirosinasa identificats mitjançant LC-Q-TOF-MS juntament amb l'assaig inhibidor de la tirosinasa, es va extreure l'arrel de V. amurensis (3,01 kg) tres vegades amb un 80 per cent MeOH durant 60 min a temperatura ambient mitjançant ultrasons. El dissolvent extret es va filtrar i es va concentrar per obtenir un extracte brut (215, 7 g), que es va suspendre en aigua i es va repartir seqüencialment amb n-hexà, acetat d'etil (EtOAc) i n-BuOH. La fracció EtOAc (25, 85 g) es va sotmetre a cromatografia en columna de gel de sílice mitjançant n-hexà: EtOAc en condicions de gradient (20:1 → 0:1) per produir set fraccions (E1–E7). La fracció E4 es va separar mitjançant MPLC i 100 g SNAP KP-Sil, un cartutx de gel de sílice i diclorometà: MeOH en condicions de gradient (97:3 → 0:100) per produir set subfraccions (E4-1 a E4-7) . El compost 2 (417,0 mg) es va obtenir a partir de E4–5. La subfracció E4-4 es va tornar a cromatografiar en MPLC mitjançant SNAP 25 g Ultra, un cartutx de gel de sílice i cloroform:MeOH:H2O en condicions de gradient (50:4:1 → 15:4:1) per produir set fraccions ( E4–4–1 a E4–4–7). El compost 1 (396,0 mg) es va obtenir a partir de E4–4–5, que es va observar com un sol punt en una placa de cromatografia en capa fina (TLC).

3.6. Assaig inhibidor de la tirosinasa

L'activitat inhibidora de la tirosinasa es va avaluar mitjançant un mètode descrit anteriorment amb una lleugera modificació [25]. Els dos microlitres de mostra i 50 µL de 0,1 U/µL de tirosinasa de bolets es van tractar en plaques de 96-pous i es van incubar a 37 ◦C. Després de 15 min, es van afegir 50 µL de L-tirosina 1 mM i després es va fer reaccionar a 37 ◦ C durant 15 min. La quantitat de dopacrom format es va mesurar a 495 nm mitjançant un lector de microplaques Spectra Max 19{{20}} (Molecular Devices, San Jose, CA, EUA). L'activitat inhibidora de la tirosinasa es va calcular mitjançant l'equació següent: inhibició de la tirosinasa (per cent)=[1 - (S - S0)/(C - C0)] × 100, on S és l'absorbància de la mostra, la tirosinasa i L - tirosina; S0 és l'absorbància de la mostra i la L-tirosina; C és l'absorbància de la tirosinasa i la L-tirosina, i C0 és l'absorbància de la L-tirosina. L'àcid kòjic, un conegut inhibidor de la tirosinasa, es va utilitzar com a control positiu. Els valors IC50 es van calcular mitjançant GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, EUA).

3.7. Estudis d'acoblament molecular

L'acoblament molecular es va realitzar mitjançant el programari SYBYL-X 2.1.1 (Tripos Ltd., St. Louis, MO, EUA) amb estructures cristal·lines de PPO3, una tirosinasa d'Agaricus bisporus (ID de Protein Data Bank (PDB): 2Y9W). Es van eliminar totes les molècules d'aigua de la proteïna diana i la preparació de lligands es va dur a terme mitjançant el protocol de preparació "desinfectar" a SYBYL-X 2.1.1. L'afinitat proteïna-lligant es va calcular pel camp de força de Tripos i es va expressar com a puntuacions totals. La posició acoblada del lligand del complex proteïna-lligant es va visualitzar al programa Discovery Studio 2017 R2 Client (Biovia Co., San Diego, CA, EUA).

3.8. Disseny Experimental i Anàlisi Estadística

Es va establir una condició optimitzada per extreure els components amb la màxima activitat inhibidora de la tirosinasa de l'arrel de V. amurensis mitjançant el BBD amb tres variables i tres nivells (MINITAB Release 14.12.0 Statistical Software). A partir dels resultats preliminars de l'experiment d'un sol factor, es van seleccionar les variables independents que inclouen el temps d'extracció (X1), la concentració de MeOH i aigua (X2) i el volum de líquid (X3) i un rang de les seves variables (taula S3). Les variables per a RSM es van codificar mitjançant tres nivells, -1, 0 i 1. En total, es van dissenyar 15 experiments que inclouen 3 rèpliques al centre del disseny (taula 2). Com a respostes independents, es van mesurar el rendiment (per cent), l'activitat inhibidora de la tirosinasa (percentatge), la quantitat de compost (1) (µg/mg) i la quantitat de compost (2) (µg/mg). L'activitat inhibidora de la tirosinasa de l'extracte es va avaluar a una concentració de 50 µg/mL. Cada resposta s'expressa mitjançant l'equació polinomial de segon ordre següent:

on R denota la resposta; 1, 2 i 3 són els coeficients lineals; 12, 23 i 13 són els coeficients d'interacció entre tres variables; i 11, 22 i 33 són els coeficients quadrats.
A més, es va realitzar l'anàlisi de correlació de Pearson per determinar l'existència d'una relació lineal entre cada variable i resposta. El coeficient de correlació de Pearson té una relació lineal forta entre {{0}}.7 i 1.0, una relació lineal clara entre 0.3 i 0.7, una relació lineal feble entre {{10}},1 i 0,3, i una relació lineal nula o insignificant entre 0,0 i 0,1. La correlació positiva i negativa s'expressa en funció de si el coeficient de correlació de Pearson és positiu o negatiu.

3.9. Anàlisi quantitativa dels compostos inhibidors de la tirosinasa 1 i 2

La quantitat de cada compost 1 i 2 en extractes obtinguts mitjançant les 15 condicions experimentals dissenyades es va mesurar mitjançant les corbes de calibratge (taula 2). Les corbes de calibratge dels compostos 1 i 2 es van determinar mitjançant l'àrea sota la corba del cromatograma UV (33 0 nm adquirits a concentracions de 0,1-1000 µg/mL i 7,81-1000 µg/mL, respectivament). La LC es va realitzar mitjançant un sistema LC Waters 2695 (Waters, Santa Clara, CA, EUA) amb les mateixes condicions que les del sistema LC detallat a Materials i mètodes, espectrometria de masses LC-Q-TOF.

4. Conclusions

La ε-Viniferina (1) i la vitamina B (2) de les arrels de V. amurensis es van caracteritzar com a constituents per blanquejar la pell mitjançant LC-Q-TOF-MS juntament amb un assaig inhibidor de la tirosinasa. En particular, la vitamina B (2) es va identificar per primera vegada com un compost inhibidor de la tirosinasa en aquest estudi i ε-vinifera (1) i la vitamina B (2) van mostrar efectes inhibidors de la tirosinasa més alts que el control positiu, l'àcid cògic. Les condicions d'optimització amb el màxim efecte inhibidor de la tirosinasa i el rendiment de les arrels de V. amurensis es van establir mitjançant el temps d'extracció (100 min), la concentració de MeOH (66, 38 per cent) i el volum de líquid (140 ml). El resultat va mostrar una bona correspondència entre els valors experimentals i predits. En conseqüència, el LC-Q-TOF-MS juntament amb el bioassaig ha demostrat el potencial per trobar eficaçment nous constituents actius, així com components actius coneguts, la vitamina B (2), que es poden proposar com a nou agent blanquejador potencial natural.

Materials complementaris: Els següents estan disponibles en línia, Figura S1: Cromatograma MS en mode d'ionització negativa (A); Cromatograma UV a 280 nm (B) d'extractes d'arrels de V. amurensis, Figura S2: espectres de RMN 1H i 13C del compost 1 (300 i 75 MHz, CD3OD), Figura S3: espectres de RMN 1H i 13C del compost 2 (300 i 75 MHz, CD3OD), Figura S4: Gràfic sigmoïdal i IC50 de control positiu, compostos 1 i 2, Figura S5: Gràfics de superfície i contorn de resposta que mostren l'efecte dels paràmetres d'extracció (X1: temps d'extracció, min; X2: Concentració de MeOH, percentatge; X3: volum de dissolvent, ml). (A) rendiment; (B) activitat inhibidora de la tirosinasa; (C) compost 1; (D) compost 2; (E) suma dels compostos 1 i 2, taula S1. Activitat inhibidora de la tirosinasa d'extractes d'arrels de V. amurensis, Taula S2: Dades de RMN 1H- i 13C dels compostos 1 i 2 en CD3OD (δ en ppm), Taula S3: Variables independents i nivells per a la metodologia de la superfície de resposta, Taula S4: Regressió estimada coeficient per al rendiment, Taula S5: Anàlisi de la variància per al rendiment, Taula S6: Coeficient de regressió estimat per a l'activitat inhibidora de la tirosinasa, Taula S7: Anàlisi de la variància per a l'activitat inhibidora de la tirosinasa, Taula S8: Coeficient de regressió estimat per al compost 1, Taula S9: Anàlisi de variància per al compost 1, taula S10: coeficient de regressió estimat per al compost 2, taula S11. Anàlisi de la variància per al compost 2, Taula S12: Coeficient de regressió estimat per a la suma dels compostos 1 i 2, Taula S13: Anàlisi de la variància per a la suma dels compostos 1 i 2.
Contribucions de l'autor: Conceptualització, KYL; metodologia, K.-EO, HS i KYL; programari, K.-EO i HS; validació, HS; anàlisi formal, K.-EO, i HS; investigació, K.-EO, HS, MKL i KYL; curació de dades, K.-EO, HS, BP i KYL; redacció: preparació de l'esborrany original, K.-EO i HS; redacció: revisió i edició, HS, MKL, BP i KYL; supervisió, MKL, BP i KYL Tots els autors han llegit i han acceptat la versió publicada del manuscrit.
Finançament: Aquesta investigació va comptar amb el suport de la subvenció de la National Research Foundation of Korea finançada pel govern de Corea (NRF-2017R1A2B4003403 i NRF-2019R1A6A1A03031807) i una subvenció del Projecte de R+D de Tecnologia de la Salut de Corea a través del desenvolupament de la indústria de la salut de Corea. Institute (KHIDI), finançat pel Ministeri de Salut i Benestar de la República de Corea (HF20C0038).
Declaració de disponibilitat de dades: Les dades presentades en aquest estudi estan disponibles al material complementari.
Conflictes d'interès:Els autors declaren no conflicte d'interessos.
Disponibilitat de mostra: No disponible

Referències

1. Ranjbar, S.; Shahvaran, PS; Edraki, N.; Khoshneviszadeh, M.; Darroudi, M.; Sarrafifi, Y.; Hamzehloueian, M.; Khoshneviszadeh, M. 1, 2, 3-Barbitúrics de benzilidè (tio) lligats a 3-triazols com a nous inhibidors de la tirosinasa i eliminadors de radicals lliures. Arc. Farmàcia. 2020, 353, 2000058. [CrossRef] [PubMed]

2. Chang, T.-S.; Ding, H.-Y.; Lin, H.-C. Identificació de la 6, 7, 40 -trihidroxiisoflflavona com a potent inhibidor de la tirosinasa. Biosci. Biotecnologia. Bioquímica. 2005, 69, 1999–2001. [CrossRef] [PubMed]

3. Miyazawa, M.; Oshima, T.; Koshio, K.; Itsuzaki, Y.; Anzai, J. Inhibidor de la tirosinasa del segó d'arròs negre. J. Agric. Química dels Aliments. 2003, 51, 6953–6956. [Ref creuat]

4. Chen, Q.; Diao, L.; Cançó, H.; Zhu, X. Vitis amurensis Rupr: una revisió de la química i la farmacologia. Phytomedicine 2018, 49, 111–122. [CrossRef] [PubMed]

5. Jin, K.-S.; Oh, YN; Hyun, SK; Kwon, HJ; L'àcid betulínic Kim, BW aïllat de l'arrel de Vitis amurensis inhibeix la melanogènesi induïda per 3-isobutil-1- metilxantina mitjançant la regulació de les vies MEK/ERK i PI3K/Akt a les cèl·lules B16F10. Química dels Aliments. Toxicol. 2014, 68, 38–43. [Ref creuat]

6. Kim, H.; Thuong, PT; Ngoc, TM; Lee, I.; Hung, ND; Bae, K. Activitat antioxidant i inhibidora de la lipoxigenasa dels oligostilbens de la fulla i la tija de Vitis amurensis. J. Etnofarmacol. 2009, 125, 304–309. [Ref creuat]

7. Jin, K.-S.; Oh, YN; Hyun, SK; Kwon, HJ; Kim, BW Vitis amurensis L'arrel de Ruprecht va inhibir la melanogènesi induïda per l'hormona estimulant dels melanòcits a les cèl·lules B16F10. Nutr. Res. Practiqueu. 2014, 8, 509–515. [Ref creuat]

8. Jang, MH; Piao, XL; Kim, HY; Cho, EJ; Baek, SH; Kwon, SW; Park, JH Els oligòmers de resveratrol de Vitis amurensis atenuen l'estrès oxidatiu induït per amiloide a les cèl·lules PC12. Biol. Farmàcia. Bou. 2007, 30, 1130–1134. [Ref creuat]

9. Lee, E.-O.; Lee, H.-J.; Hwang, H.-S.; Ahn, K.-S.; Chae, C.; Kang, K.-S.; Lu, J.; Kim, S.-H. Potent inhibició del creixement del càncer de pulmó de Lewis per part de l'hexanol A de les arrels de Vitis amurensis mitjançant activitats apoptòtiques i antiangiogèniques. Carcinogen 2006, 27, 2059–2069. [Ref creuat]

10. Bak, M.-J.; Truong, VL; Kang, H.-S.; Juny, M.; Jeong, W.-S. Efecte antiinflamatori de les procianidines de les llavors de raïm silvestre (Vitis amurensis) en cèl·lules RAW 264.7 induïdes per LPS. Òxid. Med. Cèl·lula. Longev. 2013, 2013. [CrossRef]

11. Shin, H.; Chung, H.; Parc, B.; Lee, KY Identificació de components antioxidants de Polygonum aviculare mitjançant LC-MS juntament amb assaig DPPH. Nat. Prod. Ciència. 2016, 22, 64–69. [Ref creuat]

12. Parc, S.; Shin, H.; Park, Y.; Choi, I.; Parc, B.; Lee, KY Caracterització dels constituents inhibidors de la producció de NO a partir de Catalpa ovata mitjançant LC-MS juntament amb un assaig basat en cèl·lules. Bioorg. Chem. 2018, 80, 57–63. [CrossRef] [PubMed]

13. Ingkaninan, K.; De Best, C.; Van Der Heijden, R.; Hofte, A.; Karabatak, B.; Irth, H.; Tjaden, Estats Units; Van der Greef, J.; Verpoorte, R. Cromatografia líquida d'alt rendiment amb UV acoblada en línia, espectrometria de masses i detecció bioquímica per a la identificació d'inhibidors de l'acetilcolinesterasa a partir de productes naturals. J. Cromatogr. 2000, 872, 61–73. [Ref creuat]

14. Bezerra, MA; Santelli, RE; Oliveira, EP; Villar, LS; Escaleira, LA Metodologia de la superfície de resposta (RSM) com a eina d'optimització en química analítica. Talanta 2008, 76, 965–977. [CrossRef] [PubMed]

15. Witek-Krowiak, A.; Chojnacka, K.; Podstawczyk, D.; Dawiec, A.; Pokomeda, K. Aplicació de la metodologia de superfície de resposta i mètodes de xarxes neuronals artificials en la modelització i optimització del procés de biosorció. Biorecurs. Tecnol. 2014, 160, 150–160. [CrossRef] [PubMed]

16. Araujo, PW; Brereton, RG Disseny experimental I. Screening. Analista de tendències. Chem. 1996, 15, 26–31. [Ref creuat]

17. Wang, Y.; Zhao, L.; Zhang, R.; Yang, X.; Sol, Y.; Shi, L.; Xue, P. Optimització de l'extracció assistida per ultrasons per metodologia de superfície de resposta, capacitat antioxidant i activitat inhibidora de la tirosinasa de les antocianines del segó d'arròs vermell. Ciència de l'alimentació. Nutr. 2020, 8, 921–932. [Ref creuat]

18. Weremfo, A.; Adulley, F.; Adarkwah-Yiadom, M. Optimització simultània de l'extracció assistida per microones de compostos fenòlics i activitat antioxidant de llavors d'alvocat (Persea americana Mill.) mitjançant la metodologia de la superfície de resposta. J. Anal. Mètodes Químics. 2020, 2020, 7541927. [CrossRef]

19. Ko, J.; Choi, J.; Bae, SK; Kim, J.; Yoon, KD Separació de cinc oligostilbens de V itis amurensis mitjançant cromatografia a contracorrent d'alt rendiment amb gradient d'alt rendiment. J. Set. Sci. 2013, 36, 3860–3865. [Ref creuat]

20. Wang, K.-T.; Chen, L.-G.; Tseng, S.-H.; Huang, J.-S.; Hsieh, M.-S.; Wang, C.-C. Efectes antiinflamatoris del resveratrol i oligostilbens de Vitis thunbergii var. taiwaniana contra l'artritis induïda per lipopolisacàrids. J. Agric. Química dels Aliments. 2011, 59, 3649–3656. [Ref creuat]

21. Hu, J.; Lin, T.; Xu, J.; Ding, R.; Wang, G.; Shen, R.; Zhang, Y.-W.; Chen, H. Polifenols aïllats de fulles de Vitis thunbergii var. taiwaniana regula la via relacionada amb l'APP. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2016, 26, 505–511. [CrossRef] [PubMed]

22. Oshima, Y.; Kamijou, A.; Ohizumi, Y.; Niwa, M.; Ito, J.; Hisamichi, K.; Takeshita, M. Novel oligostilbenes de Vitis coignetiae. Tetraedre 1995, 51, 11979–11986. [Ref creuat]

23. Anna Malinowska, M.; Billet, K.; Drouet, S.; Munsch, T.; Unlubayir, M.; Tungmunnithum, D.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Hano, C.; Lanoue, A. Extractes de canya de raïm com a ingredient cosmètic rejovenidor multifuncional: avaluació de l'activitat de la sirtuïna, la inhibició de la tirosinasa i el potencial de biodisponibilitat. Molècules 2020, 25, 2203. [CrossRef] [PubMed]

24. Yang, HH; Oh, K.-E.; Jo, YH; Ahn, JH; Liu, Q.; Turc, A.; Jang, JY; Hwang, BY; Lee, KY; Lee, MK Caracterització dels constituents inhibidors de la tirosinasa de les parts aèries d'Humulus japonicus mitjançant assaig en línia acoblat LC-MS/MS. Bioorg. Med. Chem. 2018, 26, 509–515. [CrossRef] [PubMed]

25. Liu, Q.; Kim, C.; Jo, YH; Kim, SB; Hwang, BY; Lee, MK Síntesi i avaluació biològica dels derivats del resveratrol com a inhibidors de la melanogènesi. Molècules 2015, 20, 16933–16945. [CrossRef] [PubMed]

Per a més informació: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501