Medicina Xinesa Cistanche Composició química i anàlisi dels components del cos Ⅲ

Capítol 3 Anàlisi quantitativa de components multicomponent de Cistanche deserticola basat en RPLC-HILIC-MS/MS

La composició química de la medicina tradicional xinesa és complexa i conté una varietat de compostos com els metabòlits primaris i secundaris [55-561. Aconseguir una anàlisi exhaustiva i fiable dels components químics de la medicina tradicional xinesa (inclosos els components hidròfils i hidròfobs) segueix sent un problema tècnic important. A més, el contingut de cada component en la medicina tradicional xinesa varia molt, i els mètodes convencionals d'espectrometria de masses líquides són difícils de quantificar amb precisió tant els components principals com els rastres alhora. 1571 La separació tradicional d'una sola columna no és suficient, i l'anàlisi de compostos traça en la medicina tradicional xinesa estarà limitada per constants. A causa de la interferència dels compostos, el fenomen de superposició màxima és greu. Tot i que s'han utilitzat una varietat de tècniques de cromatografia avançades per millorar la separació de matrius complexes, com ara columnes de cromatografia de partícules nucli-shell i submicròniques, columnes de cromatografia d'interacció hidròfila, etc., encara és difícil aconseguir una separació completa de diferents compostos mitjançant un columna única [58 -59. La cromatografia multicolumna que combina almenys dos mecanismes cromatogràfics ortogonals, com ara LC bidimensional, LC de canvi de columnes i LC en tàndem de dues columnes, s'ha considerat una eina factible que pot ampliar significativament la cobertura de metabòlits. No hi ha dubte que tant el LC bidimensional com el LC de commutació de columnes poden augmentar significativament la capacitat màxima 160). Tanmateix, tots dos mètodes depenen de la vàlvula, la instrumentació és complexa i requereix molt de temps i els tubs de connexió i els reguladors són fàcils d'instal·lar. Existeixen residus, i aquests dos mètodes són propensos a introduir una sèrie de factors d'incertesa que condueixen a la irreproducibilitat quantitativa1571. Tot i que la cromatografia en tàndem d'interacció hidròfila en fase inversa (RPLC-HILIC) no pot augmentar significativament la capacitat màxima, l'equip de l'instrument és senzill, no hi ha residus en tubs de connexió i reguladors i encara pot adonar-se del canvi de hidròfil a hidròfob. Retenció integral d'un gran nombre de compostos àmpliament polars [61-66. A més, el mode de monitorització de reaccions múltiples (MRM) exclusiu de l'espectròmetre de masses triple quadrupol (QgQ) es pot utilitzar com una altra dimensió de separació per millorar encara més la capacitat de separació de RPLC-HILIC. En resum, RPLC-HILIC-MRM integra els avantatges inherents de RPLC, HILIC i MRM i s'espera que es converteixi en un mètode analític fiable.

QUANT TEMPS TREGA A FUNCIONAR CISTANCHE?

El contingut de cada component de la medicina tradicional xinesa varia molt. En comparació amb els components principals, la gent presta més atenció al desenvolupament de mètodes més sensibles per completar la detecció d'aquests compostos traces o fins i tot ultratraces. Sovint es recomana el mode MRM per la seva excel·lent sensibilitat i un bon rang dinàmic lineal167. Tanmateix, i a causa de la saturació de la multiplicació d'electrons terminals de la cambra Q3 de l'espectròmetre de masses QqQ, el rang lineal sol ser reduït i el límit superior de quantificació (ULOQ) no pot cobrir completament el contingut d'alguns compostos principals sense un seguiment fiable. aquests components traça. Per tant, la supressió de la producció d'ions de producte pot expandir ULOO. Utilitzant paràmetres compostos debilitats, com ara parells d'ions,depotencial(DP) ienergia de col·lisió(CE) pot reduir el nombre d'ions del producte objectiu i, per tant, ampliar l'ULOQ[68-69]

La medicina tradicional xinesaCistanches Herbaés la tija carnosa seca amb fulles escamoses de laPlanta de cistanches. És una de les medicines tradicionals xineses més utilitzades i es coneix com el "ginseng del desert". Els glucòsids feniletanoides sempre han estat un tema d'investigació candent a Cistanche deserticola, però en els darrers anys, els efectes farmacològics d'altres components hidròfils com el manitol també han estat ben reconeguts! 70-721. Tanmateix, en la nostra anàlisi quantitativa de CH rutinària, el contingut dels components principals com araequinàcea,verbascosid, i el manitol de vegades eren massa alts per superar el rang de mesura del detector d'UV o del detector de dispersió de la llum evaporativa (ELSD). Per tant, des de la perspectiva de l'avaluació de la qualitat global, és important establir un mètode analític que pugui controlar simultàniament els components hidròfils i hidròfobs i quantificar amb precisió tant els components principals com els rastres.

L'experiment d'aquest capítol va establir un mètode fiable adequat per a l'anàlisi de matrius complexes - RPLC-HILIC-MS/MS espectrometria de masses líquides (cromatografia d'interacció de fase inversa-hidrofílica acoblada en sèrie-espectrometria de masses en tàndem), que va aconseguir la detecció de 23 polaritats a Cistanche deserticola. . Separació, anàlisi i determinació del contingut simultàniament d'una àmplia gamma de compostos (que cobreixen components hidròfils i hidròfobs); mentre s'utilitza el mode SMRM per garantir la reproductibilitat d'aquest mètode, utilitzant valors CE adequats i diferents parells d'ions per expandir la pinya. eina factible per millorar el control de qualitat de Cistanche deserticola i ajudar a aconseguir un metabolisme objectiu generalitzat de les plantes. Genòmica.

Secció 1 Materials experimentals

1. Instrument

L'espectròmetre de masses líquides HPLC-Qtap-MS està equipat amb Shimadzu HPLC (equipat amb 2 bombes LC-20ADxR, mostreig automàtic SIL-20ACxR, detector UV SPD-M20A, CTO-20AC termòstat, desgasificació en línia DGU-20A3R Consta d'una màquina, CBM-20Un controlador, Shimadzu Corporation, Japó) i espectròmetre de masses SCIEX5500 Qtrap (font d'ions ESI, SCIEX, Foster City, CA, EUA) . L'adquisició i el càlcul de dades es van completar amb el programari Analyst Software1.6.2. Sistema de purificació d'aigua ultrapura Mili-Q (Milipore Company, EUA), balança analítica electrònica Mettler ME204 (Mettler Toledo Company, Suïssa), extractor d'ultrasons (230V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, EUA).

2. Materials i reactius

Columna Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 mm, 1,8 μm), columna Waters XBridge Amide (4,6 mm x 150 mm, 3,5 μm).Polieteretercetona(PEEK) (Agilent Company, EUA). El metanol, l'acetonitril i l'àcid fòrmic de grau de cromatografia i espectrometria de masses es van comprar a ThermoFisher (Pittsburgh, PA, EUA) i l'aigua era aigua ultrapura Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, EUA) feta al laboratori. . La niacina (àcid nicotínic, cLogP, 0.799), l'àcid succínic (cLogP, -0.526) es van comprar a Sigma-Aldrich Company (St. Louis, MO, EUA): uridina (cLogP, -2.219), adenoide adenosina (cLogP, -2.158), inosina (cLogP, {{10}}.1{06) i guanosina (cLogP , -3.326) es van comprar a Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Salidroside (cLogP -0.296), 6-desoxicatalpol (cLogP, -3.071), fenilalanina (cLogP, -1,556), 8-àcid epilogànic (cLogP, -2,366), manitol (cLogP, -2,046), sacarosa (cLogP). , -3.087), gluròsid (cLogP, -1.757), alascaniòsid A (alascaniòsid A, cLogP -0.971 ), echinacòsid (echinacòsid, cLogP, -1 .811), àcid ferúlic (cLogP, 1.421), acteòsid (cLogP, -0.890), isoacteòsid (cLogP, -0.057) i pinoresinol- -D-glucopiranòsid (cLogP, -0.384) va ser proporcionat pel Laboratori clau de fàrmacs naturals i biomimètics de la Universitat de Pequín, cistanoside F (cistanoside F, cLogP, -2.211) adquirit a Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., El cistàsid A (cistanoside A, cLogP, -1.365), 2'-acetilacteòsid (cLogP, -0.040) i liquiritina apioside (cLogP, -0.267) es van comprar a Xangai Shidande Biotechnology Co., Ltd., i el tubuloside A (tubulosideA, cLogP, 0,287) es van comprar a Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd. La puresa de totes les substàncies de referència va ser provada per HPLC-DAD-IT-TOF-MS i el la puresa era superior al 98%. Tots els valors de cLogP de la substància de control es van calcular mitjançant el programari ChemBioDraw Ultra14.0 (CambridgeSoftCambridge, MA, EUA).