Efectes dels glucòsids de Cistanche sobre la funció immune dels ratolins model d'envelliment induït per D-galactosa
Mar 08, 2022
Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com
〔Abstracte〕 Objectiu:
Estudiar el mecanisme immunològic de l'efecte anti-envelliment dels glucòsids Cistanche en ratolins envellits induïts per D-galactosa.Mètodes: es va utilitzar el mètode d'incorporació de 3 H-TdR per determinar la capacitat de transformació de limfòcits, la prova vermella neutra es va utilitzar per determinar la funció fagocítica dels macròfags peritoneals del ratolí, el mètode d'immunofluorescència es va utilitzar per detectar subconjunts de limfòcits i es va utilitzar el radioimmunoassaig per determinar el nivell d'IL-2 a la sang perifèrica. , Mètode d'alliberament de l'enzim Trace NAG per mesurar l'activitat de les cèl·lules NK.Resultats: La funció immune dels ratolins envellits induïts per la D-galactosa es va reduir significativament, cosa que es va manifestar en la capacitat de transformació de limfòcits, contingut IL-2 de sang perifèrica, cèl·lules CD4 més T i contingut de cèl·lules CD8 més T, un fagocític. funció dels macròfags peritoneals i activitat de les cèl·lules NK. Disminuir (p<>el cistanche del glucòsidpot millorar la capacitat de transformació dels limfòcits, el contingut IL-2 de la sang perifèrica, la funció fagocítica dels macròfags peritoneals, l'activitat de les cèl·lules NK, el contingut de cèl·lules CD4 més T i CD8 més T (P<0.05). 0.="" 05).="">Conclusió: el cistanche de glicòsid pot millorar significativament la funció immune dels ratolins envellits induïts per la D-galactosa, restaurar o aproximar-se a l'estat dels ratolins joves i tenir l'efecte de retardar l'envelliment.
[Paraules clau]: glucòsids totals de Cistanche; D-galactosa; model d'envelliment; immunitat
Cistanche de glucòsid:anti edat
Cistancheés el fàrmac més utilitzat en fórmules antienvelliment i longevitat. Els glucòsids totals de Cistanche (GCS) és el terme general per a una classe de glucòsids feniletanoides en cistanche i és la principal activitat biològica extreta del cistanche productor de sal al component nord de Xinjiang [1], s'ha demostrat que GCS té un anti-lípid. efecte de peroxidació [2], però hi ha pocs informes d'investigació al respectemecanisme immunitari anti-envelliment.
1. Materials i Mètodes
1. 1 Agrupació animal i medicina
60 ratolins Kunming, mascles i femelles, de 3 mesos d'edat, amb un pes de 18-21 g, cedits per la Sala d'Animals de l'Institut de Productes Biològics, Ministeri de Sanitat. Els ratolins de cada grup estaven allotjats a la mateixa habitació en gàbies separades i eren lliures de menjar i beure. Els animals es van dividir aleatòriament en tres grups: el grup de control juvenil, el grup del model d'envelliment i el grup d'administració del model, amb 20 animals a cada grup. GCS va ser extret i identificat pel Departament de Fitoquímica, Escola de Farmàcia, Universitat de Jiamusi segons la literatura [1].
Millorar la immunitatSuplement de Cistanche
1.2 Mètode
Al grup jove se li va injectar una solució salina normal per via subcutània al coll durant 30 dies cada dia i se li va donar aigua tèbia durant 15 dies a partir del 15è dia. Els ratolins del grup del model d'envelliment van ser injectats amb D-galactosa (autoclau) 100 mg/kg per via subcutània a la part posterior del coll cada dia. Pes corporal durant 30 dies consecutius. Al grup d'administració del model, es va injectar D-galactosa 100 mg/kg de pes corporal per via subcutània a la part posterior del coll cada dia i es va administrar GCS 125 mg·kg-1·d-1 al mateix temps. temps a partir del dia 15, i l'administració es va administrar contínuament durant 15 dies. Tots els animals es van sacrificar al mateix temps el dia 30 i es van determinar diversos índexs d'observació.
1. 2. 1 Experiment de transformació de limfòcits
La suspensió de cèl·lules de la melsa del ratolí es va ajustar a una concentració cel·lular de 2 × 106 i es va utilitzar Con A com a estímul per cultivar-se in vitro durant 5 dies, i es va provar la seva capacitat de transformació mitjançant el mètode d'incorporació 3 H-Td R. Els resultats s'expressen com a índex d'estímul SI (grup d'estimulació SI=ConA/grup de control).
1. 2. 2 Funció fagocítica del macròfag peritoneal del ratolí (prova vermella neutra [3])
Recollir el líquid peritoneal del ratolímacròfagsuspensió asèptica. Després de la centrifugació, flota el precipitat al medi de cultiu cel·lular. Utilitzeu un hemocitòmetre per comptar i ajustar la concentració cel·lular de la solució a 2×106. Col·loqueu-lo en una incubadora de 37 graus durant 2 hores. , Descartar el sobrenedant i les cèl·lules no adherents. Agafeu els macròfags de paret i afegiu un 0,1 per cent de solució salina fisiològica vermella neutra a 37 graus i continueu cultivant durant 30 min, descarteu el vermell neutre i renteu-los repetidament amb PBS a 37 graus, diluïu-los amb un 50 per cent d'àcid acètic i un 50 per cent d'etanol, establiu 722. Espectrofotòmetre colorimètric a 540 nm de longitud d'ona, valor d'absorbància mesurat A.
1. 2. 3 Detecció de subconjunts de limfòcits
Preneu 0,1 ml d'1×107/mlsuspensió de limfòcits, afegiu 10 ul d'anticossos monoclonals CD3, CD4 i CD8 de ratolí anti-ratolí respectivament, barregeu bé, incubeu a 4 graus durant 30 min, 1 per cent de FC S en PBS (0, 2 M, pH 7,4) Rentar 3 vegades, detecció de citometria de flux: citòmetre de flux làser (FACScan, empresa BD dels EUA), làser d'argó, longitud d'ona d'excitació 488 nm, espectre de detecció FITC 480-630 nm, recompte de 800/s de cèl·lules, 200,000 cèl·lules en total. Els resultats es van analitzar i registrar amb un ordinador HP340 i el programari professional LYSI SⅡ.
1. 2. 4 Determinació de IL-2 en sang perifèrica mitjançant radioimmunoassaig
Agafeu 1 ml de sang dels globus oculars del ratolí en un tub d'assaig. Després de la coagulació, el sèrum es separa. Segons el funcionament del kit, el nombre de CPM es mesura al comptador.
1. 2. 5 Activitat de cèl·lules NK
Prendre sang de l'ull del ratolí de manera asèptica i afegir heparina per anticoagular. Consulteu la literatura [4] per obtenir més informació. 1.3 Processament estadístic Les dades experimentals s'expressen en x±s, es processen pel programari S AS i s'analitzen mitjançant l'anàlisi de la variància, la prova F i la prova t.
benefici del cistanche: Millorar la immunitat
2. resultats
2.1 Els efectes del GCS sobre la capacitat de transformació dels limfòcits i els subconjunts de cèl·lules T de cada grup de ratolins es mostren a la taula 1.
Taula 1. L'efecte de GCS sobre la capacitat de transformació dels limfòcits i els subconjunts de cèl·lules T a cada grup de ratolins (n= 16,x±s)
| Grup | CD4 plus | CD8 plus | CD4 plus /CD8 plus | SI |
| Grup de control juvenil (Ⅰ) | 38.7±4.1 | 33.5±3.1 | 1.16±0.12 | 70.0±7.2 |
| Grup de models d'envelliment (Ⅱ) | 29.5±3.71) | 27.0±2.31) | 1.09±0.11 | 58.2±2.41) |
| Grup d'administració del model (Ⅲ) | 37.6±4.02) | 32.8±2.92) | 1.15±0.12 | 68.2±6.42) |
En comparació amb Ⅰ: 1) P<0.05, 2)="" p.="" 05;="" compared="" with="" ⅱ:="" 2)="" p=""><0.05; the="" same="" as="" the="" table="">
2.2 Els efectes dels GC sobre la funció fagocítica, el contingut IL-2 i l'activitat de cèl·lules NK dels macròfags peritoneals de cada grup de ratolins es mostren a la taula 2.
Taula 2. L'efecte del GCS sobre la funció fagocítica, l'activitat de les cèl·lules NK i el contingut IL-2 dels macròfags peritoneals a cada grup de ratolins (n= 16,x±s)
| Grup | Mф empassa el valor A540nm vermell neutre | Contingut IL-2 (ng /ml) | Activitat de cèl·lules NK (percentatge) |
| Grup de control juvenil (Ⅰ) | 0. 143± 0. 031 | 10. 68± 2. 12 | 26. 3± 3. 8 |
| Grup de models d'envelliment (Ⅱ) | 0. 089± 0. 0121) | 6. 87± 1. 451) | 15. 9± 4. 11) |
| Grup d'administració del model (Ⅲ) | 0. 141± 0. 0272) | 9. 98± 1. 562) | 24. 1± 3. 72) |
3. Discussió
En aquest experiment, es va reduir la funció fagocítica dels macròfags peritoneals i l'activitat de les cèl·lules NK dels ratolins model d'envelliment (P<0.05). gcs="" can="" increase="" the="" phagocytic="" function="" and="" nk="" cell="" activity="" of="" peritoneal="" macrophages="" in="" aging="" model="" mice=""><0.05), which="" is="" close="" to="" the="" youth="" model="" group.="" from="" this,="" it="" can="" be="" inferred="" that="" gcs="" can="">millorar la immunitat cel·lular inespecífica del cos i les funcions de regulació immune, imillora Anti-tumoral i anti-infecciódel cos envellit és una de les maneres de retardar l'envelliment [4]. IL-2 és una citocina indispensable per a la proliferació i diferenciació dels limfòcits T, i pot regular les funcions dels limfòcits, els monòcits-macròfags i les cèl·lules NK. IL-2 pot promoure la proliferació i diferenciació dels limfòcits T, regular laresposta immune, indueixen l'activitat de Tc i promouen la producció d'anticossos i interferó- .Té un paper important en el sistema immunitari. En aquest experiment, el contingut IL-2 dels ratolins model d'envelliment va disminuir (P<0.05). after="" gcs="" were="" given,="" the="" il-2="" content="" increased=""><0.05), which="" was="" close="" to="" the="" youth="" model="" group,="" indicating="" that="" gcs="" produced="" il="" by="" increasing="" t="" lymphocytes.="" -2,="" enhance="" the="" immune="" function="" of="" elderly="" mice="" and="" achieve="" the="" effect="" of="" delaying="" immune="" aging.="" the="" content="" of="" cd4+="" t="" cells="" and="" cd8+="" t="" cells="" decreased="" significantly="" with="" increasing="" age.="" the="" low="" t="" cell="" function="" was="" also="" manifested="" by="" the="" decline="" of="" specific="" antigen="" and="" mitogen="" con="" a,="" and="" the="" decline="" of="" the="" ability="" of="" t="" cells="" to="" divide="" repeatedly.="" in="" this="" experimental="" model,="" the="" lymphocyte="" transformation="" ability,="" cd4+="" t="" cell="" and="" cd8+="" t="" cell="" content="" of="" the="" mouse="" was="" reduced="" (p=""><0.05), and="" gcs="" increased="" the="" mouse="" lymphocyte="" transformation="" ability,="" cd4="" +="" t="" cell="" and="" cd8="" +="" t="" cell="" content="" (p=""><0.05). 05),="" close="" to="" the="" youth="" model="" group.="" it="" shows="" that="" gcs="" can="" make="" the="" body="" resist="" aging="" and="" tend="" to="" be="" younger="" by="" promoting="" the="" proliferation="" of="" lymphocytes="" and="">millorar la funció immune cel·lular específica dels ratolins.
Millorar la immunitat suplement de cistanche
4. Referències
1. Du Niansheng, Wang Hong. Aïllament i identificació de glicòsids de fenoxietanol de Cistanche [J]. Recerca i Desenvolupament de Productes Naturals, 1993; 5(4): 7-8.
2. Li Linlin, Wang Xiaowen, Wang Xuefei, et al. Efectes anti-peroxidació lipídica i anti-radiació dels glucòsids totals de Cistanche 〔J〕. Chinese Journal of Chinese Materia Medica, 1997; 22(6): 364-367.
3. Xu Shuyun, Bian Rulian. Metodologia Experimental de Farmacologia [M]. 2a Edició. Beijing: People's Health Publishing House, 1994: 1221.
4. Liu Xiongbo, Liu Caiyu, Yang Xiuyun, et al. Detecció de l'activitat de les cèl·lules NK mitjançant el mètode d'alliberament de micro-NAG [J]. Journal of Clinical Laboratory Science, 1996; 14(2): 66-67.
