Efectes de Cistanche sobre els canvis d'ATPasa en mitocondris hepàtics de rates de septicèmia

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

Wang Zhiqiang Yin Gang

Resum: Objectiu:Estudiar el canvi deActivitat ATPasa dels mitocondris hepàtics en la sèpsiai l'efecte deCistanchesobre ell.Mètodes:40 rates SD es van dividir aleatòriament en grup d'operacions simulades, 12-grup de control d'hores, 12-grup d'administració d'hores, 16-grup de control d'hores i grup d'administració de 16-hores. ElsèpsiaEl model es va replicar mitjançant lligament i perforació cecal (C LP) i es va comparar. La taxa de supervivència del grup, pressió arterial mitjana (MAP), fetgemitocondrial ATPasacanvis d'activitat.Resultats:Després que les rates van replicar el model de sèpsia, elATPasaactivitat del fetgemitocondrisva disminuir i la taxa de supervivència 24-hores va disminuir significativament. ElATPasaactivitat dels mitocondris hepàtics després de l'administració deCistancheva millorar significativament en comparació amb el grup control (P<0.05), which="" was="" significantly="" positively="" correlated="" with="" the="" reduction="" of="" rat="" mortality.="">Conclusió:Disminució mitocondrialActivitat ATPasa en la sèpsia, la sobrecàrrega de calci cel·lular i l'edema i la necrosi són les causes directes de mort arates sèptiques. Cistanche millora l'activitat de l'ATPasaés un mecanisme important per al tractament desèpsia.

Paraules clau: Cistanche, cistanche sepsis mitocondris enzim ATP

Sèpsiaés una malaltia clínicament crítica. Tot i que els antibiòtics s'han actualitzat en els darrers 30 anys, la taxa de mortalitat per sèpsia no ha disminuït significativament i encara arriba al 50% [1]. El tractament antibacterià occidental "eliminant el mal" per si sol no millora el pronòstic desèpsia.En la patogènesi de la TCM, la sèpsia pertany a la "justícia de la deficiència i el mal", el tractament s'ha de basar en el principi de "enfortir el cos" i "eliminar el mal". La medicina tradicional xinesa ha demostrat un gran potencial en el tractament de la sèpsia.Sèpsiacomplicada per insuficiència múltiple d'òrgans és la causa principal de l'alta taxa de mortalitat, i el dany a l'estructura cel·lular és la base microscòpica patològica de la insuficiència múltiple d'òrgans [2]. Cistanche és una medicina tradicional xinesa per a la tònica, els estudis farmacològics moderns ho han demostratCistancheté l'efecte de resistir la peroxidació dels èsters de membrana i protegir la funció cel·lular [3]. La funció deenergia mitocondrialEl metabolisme és una de les funcions bàsiques de les cèl·lules, i l'activitat deATPasaés un indicador important per mesurar la funcióenergia mitocondrialmetabolisme. En aquest experiment, hem observat els canvis deATPasaactivitat de les cèl·lules hepàtiques arates sèptiquesi la relació entre els efectes deCistanchesobre ell i la mortalitat de rates i tenia com a objectiu proporcionar una base teòrica i una exploració eficaç per al tractament clínic de "enfortiment" desèpsia.

Cistanche

1. Materials i mètodes

1.1 Reactius

Cistancheva ser comprat a Xinjiang (identificat pel professor Tan Defu de la Facultat de Medicina de la Universitat de les Tres Gorges). Es van prendre 200 g de Cistanche sec i es van decotar dues vegades en aigua destil·lada. El filtrat es va evaporar i es va concentrar a una concentració d'1 g/ml. Pentobarbital sòdic (001104), grup farmacèutic nacional de la Xina Shanghai ChemicalReactiuempresa;Reactiu ATPasa(20030108), Nanjing Jiancheng Institut d'Investigació en Bioenginyeria.

1.2 Model animal experimental i agrupació

40 rates SD mascles (compradas al Centre d'Animals Experimentals de la Facultat de Medicina de Tongji, Universitat de Ciència i Tecnologia de Huazhong), es van dividir aleatòriament en 5 grups: grup d'operacions simulades (n=8), control 12-hores grup (n=8), 12-grup d'administració d'hores (n=8), 16-grup de control d'hores (n{=8), 16-hora grup d'administració (n=8). Al grup d'operacions simulades i al grup control se'ls va donar solució salina normal per sonda, i al grup d'administració se'ls va donar una sonda amb 1 g/ml de Cistanche, dues vegades al dia, durant un màxim de 15 dies. Elmodel de sèpsiaes va replicar per lligament i perforació cecal [4]. Abans de l'operació, els animals estaven lliures per beure aigua i van dejunar durant 12 hores.

1.3 Determinació de la pressió arterial mitjana

La vena jugular es va inserir amb una agulla del cuir cabellut, es va utilitzar heparina per a l'anticoagulació, l'artèria caròtida comuna esquerra es va canular a l'arc aòrtic i el catèter fet a si mateix es va connectar a l'instrument biològic multicanal i la mitjana.pressió arterial(MAP) es va registrar. Experimenta després que el MAP s'estabilitzi.

1.4 Determinació de l'activitat de l'ATPasa mitocondrial

Agafeu 6 g de fetge de rata i poseu-lo ràpidament en un medi de separació de 0 graus [250mmol de sacarosa, 2 mmol d'àcid etoxi-etil piperazina 2-etilsulfònic, 0,1 mmol d'àcid etilendiaminotetraacètic, pH 7,4], obrir-lo i rentar les impureses, separar la suspensió mitjana (1:10), homogeneïtzar amb un homogeneïtzador elèctric de tefló (1200r/min), centrifugar a 2000r/min durant 10 minuts, conservar el sobrenedant, centrifugar a 10000r /min durant 15 minuts, descartar el sobrenedant, agafar el precipitat i suspendre-lo en 2 ml de medi de separació per obtenir unsuspensió mitocondrial. Tot el procés es porta a terme entre 0 i 4 graus . Per mesurar es va utilitzar el mètode de determinació del fòsfor [5].Activitat ATPasa(el kit es va comprar a l'Institut d'Enginyeria Biològica de Nanjing Jiancheng).

1.5 Tractament estadístic

Totes les dades experimentals s'expressen com a mitjana ± desviació estàndard (X ± S) i el programari SPSS realitza una anàlisi unidireccional de la variància i l'anàlisi de correlació.

Extracte de Cistanche

2. resultats

2.1 L'efecte de Cistanche sobre la pressió arterial mitjana i la mortalitat 24-hora de rates

La pressió arterial del grup control va disminuir significativament a les 12 hores després de la lligadura i la perforació del cecal, i es va fer més evident a les 16 hores. En comparació amb el grup d'operacions simulades, hi va haver una diferència significativa. La pressió arterial de laTractament de Cistanchegrup es va millorar. La taxa de mortalitat del grup de control va ser significativament més alta que la del grup d'operacions simulades i la taxa de mortalitat del grup d'administració va ser significativament menor que la del grup de control corresponent.

2.2 L'efecte de Cistanche sobre l'activitat de l'ATPasa mitocondrial

Les activitats deATPasa de sodi i potassi, ATPasa de calci, ATPasa de magnesi i ATPasa de calci i magnesien el grup d'administració van ser significativament superiors als del grup control corresponent, aconseguint el nivell del grup d'operacions simulades, que es va correlacionar significativament positivament amb la reducció demortalitat de rates (r=0.834) ).

Cistanche

3. Discussió

Na més -K més -ATPasa, també coneguda com a bomba de sodi i potassi, té un paper fisiològic important en el manteniment de les activitats fisiològiques cel·lulars, la temperatura corporal i el metabolisme normal, i en la regulació de l'equilibri d'ions dins i fora de la cèl·lula.En sèpsia, hi ha una disfunció severa de la bomba de sodi a la membrana mitocondrial interna, causantmitocondrialedema. ElNa més -K més -ATPenzim està danyat, el desequilibri demitocondrialLa concentració d'ions augmenta, l'activitat enzimàtica del metabolisme energètic s'inhibeix, el subministrament d'energia cel·lular s'esgota i es produeix un edema citotòxic. Al mateix temps, augmenta la permeabilitat de la membrana, la qual cosa, finalment, condueix a la mort cel·lular. En l'experiment, vam trobar que el mitocondrialNa més -K més -ATPasaL'activitat dels hepatòcits sèptics es va reduir significativament (P<0.01), indicating="" that="" the="" liver="" tissue="" is="" seriously="" damaged.="" after="" administration="" of="" cistanche,="" the="">Na més -K més -ATPasaactivitat demitocondris hepàticsva augmentar significativament (P<0.05), and="" the="" mortality="" of="">rates sèptiqueses va reduir significativament. Els resultats experimentals suggereixen que la disminució deNa més -K més activitat -ATPasaestà significativament correlacionada positivament amb el desenvolupament desèpsia en rates. La inhibició deNa més -K més activitat -ATPasa, l'edema cel·lular i la mort que condueix a una fallada múltiple d'òrgans poden ser el ràpid desenvolupament de la sèpsia. Un dels mecanismes importants. En els darrers anys, hi ha hagut molts informes sobreNa més -K més -ATPasai moltes malalties, que han cridat l'atenció dels treballadors clínics i bàsics. És de gran importància estudiar la llei dels canvis en l'activitat deNa més -K més -ATPasai la seva regulació [6]. Se sap poc sobre el mecanisme específic deNa més -K més -ATPasaen el desenvolupament i el resultat desèpsia,i cal més investigació.

L'estabilitat del calci intracel·lular i el magnesi és la base material necessària per mantenir la resposta d'alliberament intracel·lular i la transmissió d'informació [7]. En l'experiment, la disminució deActivitat de Ca2 més -ATPasaen el grup de control afecta directament l'activitat de la bomba de calci, i la disminució de l'activitat de la bomba de calci debilita el paper demitocondrialbomba de calci per excretar Ca2 més fora de la cèl·lula i Ca2 més sobrecàrrega cap a dinsmitocondris. La sobrecàrrega de calci en els mitocondris és una causa importantmitocondrialtrastorn de la fosforilació oxidativa, dany estructural i necrosi cel·lular [8, 9]. La sobrecàrrega de Ca2 més redueix el potencial de la membrana mitocondrial i el contingut d'ATP dels teixits [10], i la utilització d'energia de les cèl·lules dels teixits es veu afectada. Ca2 plus pot activar la fosfolipasa en els mitocondris, causar danys a lamembrana mitocondrial, destrueixen la funció normal de síntesi d'ATP dels mitocondris i dificulten la producció d'energia mitocondrial [11]. Trastorns demetabolisme del calci mitocondrialpot afectar directamentfunció respiratòria mitocondrial, provocantoxigen mitocondrialtrastorns de captació i oxidació de protons a la cadena de transport d'electrons [12]. Al mateix temps, l'augment de Ca2 plus pot agreujar el dany de la peroxidació d'èsters als mitocondris [13]. Tot això condueix directament o indirectament a la fallada del subministrament d'energia cel·lular i a la mort de teixits i òrgans i acceleren el desenvolupament de canvis patològics en la sèpsia. En l'experiment, també hem trobat que les activitats deM g2 més -ATPasa i Ca2 més -M g2 més -ATPasa en rates sèptiquestambé es van reduir significativament.Mg2 més -ATPasa i Ca2 més -M g2 més -ATPasaSón substàncies importants per mantenir l'equilibri intracel·lular de calci i magnesi. Widner va informar que la disminució dels ions de magnesi intracel·lulars és el factor inductor del dany irreversible de les cèl·lules, i la proporció de Mg 2 més /Ca2 plus és un indicador important que reflecteix el dany irreversible de les cèl·lules [14]. ElMg2 més -ATPasa i Ca2 més -M g2 més -ATPasaactivitats de laCistanche-el grup administrat es va millorar, A TPasa és una sulfhidrilasa iCistancheté un efecte de peroxidació d'èsters anti-membrana, que pot ser degut a la millora deATPasaactivitat de Cistanche Bases de Química i Bases de Farmacologia [15].

En la sèpsia, mitocondrialtrastorn del metabolisme energètic, disminuïtActivitat enzimàtica ATP, l'edema mitocondrial, la sobrecàrrega de calci intracel·lular i el trastorn de l'equilibri calci-magnesi són les causes directes de la mort de les cèl·lules per sèpsia i la fallada múltiple d'òrgans.Cistancheantagonitza la peroxidació de l'èster de membrana, millora l'activitat de l'ATPasa, manté l'homeòstasi intracel·lular de calci i magnesi i protegeix el funcionament normal de les funcions cel·lulars.Cistancheés un mecanisme important per reduir la mortalitat derates sèptiques. Demostra les bones perspectives deCistanche en el tractament de la sèpsia