Els polisacàrids de Cistanche Deserticola tenen un efecte neuroprotector

per a més informació:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu, et al

Resum:

L'ictus isquèmia és una malaltia amb alta morbiditat i mortalitat.Cistanchedeserticolapolisacàrids(CDP) posseeixen una àmplia gamma d'efectes beneficiosos, inclosa l'hepatoprotecció i l'homeòstasi immune. Pel que sabem, l'efecte protector del CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)sobre les neurones lesionades per la privació/reperfusió d'oxigen-glucosa (OGD/RP) no s'ha investigat. En aquest estudi, OGD/RP va lesionar un model de cèl·lules PC12. Breument, CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)({{0}},05, 0,5 i 5 ug/ml) es va administrar abans de la reperfusió. L'efecte protector del CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)Després es va avaluar sobre la base de la viabilitat cel·lular, la fuita de lactat deshidrogenasa (LDH), [Ca2 plus ] I, el potencial de membrana mitocondrial (MMP) i l'apoptosi cel·lular, i l'estat redox després de la reperfusió es va avaluar mitjançant l'anàlisi d'espècies reactives d'oxigen (ROS), catalasa ( CAT), glutatió peroxidasa (GSH-Px) i capacitat antioxidant total. Basat en el fet que la proteïna DJ-1 associada a la malaltia de Parkinson participa en l'antioxidació endògena i realitzaneuroprotectorefectes després de l'isquèmia, vam investigar la interacció entre CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)i DJ{{0}}. L'expressió DJ-1 es va detectar mitjançant ELISA i l'anàlisi Western blot, i la translocació de DJ-1 es va avaluar mitjançant immunofluorescència. Els resultats van mostrar que el CDP (0,05, 0,5 i 5 ug/ml) va atenuar la mort de les cèl·lules PC12, va preservar la MMP i l'homeòstasi del calci; inhibir l'estrès oxidatiu i disminuir l'apoptosi cel·lular. A més, el CDP (5 ug/ml) va estimular notablement la secreció i l'expressió de DJ-1. En general, els resultats van suggerir que CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)exerceix aneuroprotectorefecte contra lesions induïdes per OGD/RP mitjançant la inhibició de l'estrès oxidatiu i la regulació de la via DJ-1

Paraules clau:Cistanche deserticola, polisacàrids, neuroprotectors, privació/reperfusió d'oxigen glucosa, estrès oxidatiuDJ-1

Feu clic als productes Cistanche UK

1. Introducció

L'ictus isquèmic és la segona causa de mortalitat i la principal causa de discapacitat a llarg termini a nivell mundial [1]. S'espera que les morts per ictus augmentin fins als 7,8 milions el 2030 [2]. A la Xina, entre 58 i 142 per 100,000 persones moren per un ictus cada any. Per tant, s'han de desenvolupar estratègies efectives per revertir la lesió d'isquèmia-reperfusió. Una àmplia evidència avala que l'estrès oxidatiu és un factor important que promou el desenvolupament i la progressió de l'infart cerebral durant la reperfusió[3,4]. Per tant, descobrir efectiuneuroprotectorEls agents capaços de reduir ROS i suprimir l'estrès oxidatiu han despertat un interès considerable en la investigació. La proteinDJ-1 associada a la malaltia de Parkinson media la neuroprotecció estimulant l'expressió gènica antiapoptòtica i antioxidant [4,5]. DJ-1 es pot traslladar als mitocondris per estrès oxidatiu i estimulació de mitògens i es pot secretar a la matriu extracel·lular en condicions patològiques, com ara càncer de mama, melanoma i lesions OGD/RP [6]. A més, DJ-1 és útil en l'orientació terapèutica per a la neurodegeneració isquèmica a causa del seu paper crític en l'antioxidació [4,7]. En els últims 10 anys, diversos grups han confirmat que DJ-1 ho ha fetneuroprotectorefectes en models d'isquèmia cerebral in vivofocal i models in vitro OGD/RP [6–9]. Mentrestant, alguns fàrmacs, com la ciclosporina A i el fenilbutirat de sodi, abroguen la mort de les cèl·lules neuronals mitjançant l'ictus inisquèmia de regulació de DJ-1 [9,10] ].

Cistanchedeserticola, la planta seca integral deCistanchedeserticolaYCMa i Cistanche tubulosa Wight, es produeix principalment a les zones desèrtiques del nord i nord-oest de la Xina [11]. C. deserticola és comestible i ha estat reconeguda com el 'ginseng dels deserts'. En la prescripció de punts d'acupuntura, s'utilitza com a tractament de la malaltia renal crònica, la impotència sexual, la infertilitat femenina, la leucorrea, la metrorràgia i el restrenyiment senil [12].C. polisacàrids deserticola, un component actiu important aïllatCistanche deserticola. CDP, modulen la funció immune i l'equilibri de lípids i proporcionen protecció contra l'envelliment, l'oxidació i el dany hepàtic. A més, CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)prevé la lesió per isquèmia-reperfusió al cor i al fetge [13,14]. Estudis recents van informar que CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)no són tòxics[12,15,16], i altres fitoquímics extrets de C. Deserticola, inclòs l'echinacòsid, l'isoacteòsid, l'acteòsid i el salidroside, exhibeixenneuroprotectorefectes [11,12]. Tanmateix, fins ara no s'ha informat de l'ús potencial de CDP per a la millora del dany de l'ictus isquèmic.

En el present estudi, fem la hipòtesi que CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)inhibeix l'estrès oxidatiu per a la neuroprotecció. Els efectes protectors potencials del CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)Es van examinar els danys de l'ictus inisquèmia utilitzant cèl·lules PC12 lesionades amb OGD/RP. A continuació, es van explorar les interaccions subjacents associades amb DJ-1.

2. Mètodes

2.1. Cultiu cel·lular i model OGD/RP

Les cèl·lules PC12 es van cultivar en un medi RPMI 1640 que contenia un 10 per cent de FBS a 37 graus en una incubadora normòxica que contenia un 5 per cent de CO2. El medi es va substituir cada 48 h. Es va preparar el model OGD/RP. Les cèl·lules PC12 es van rentar i es van exposar a la solució salina equilibrada d'Earle. Aleshores, les cèl·lules es van transferir a una cambra anaeròbica que contenia un 5 per cent de CO2 i un 95 per cent de N2 a 37 graus durant 4 h i després es van deixar reoxigenar. Durant aquest pas, es va afegir el mateix volum de medi de cultiu a les cèl·lules. Després de la reoxigenació, les cèl·lules es van col·locar en una incubadora normoxica durant 24 h.

2.2. Administració de fàrmacs

CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)es va comprar a Yuanye Biological Technology Co., Xangai, Xina (C23J7Y18405, > 98 per cent de puresa). La nimodipina, un fàrmac preventiu de primera línia per a l'ictus isquèmic, es va utilitzar com a compost de control positiu [17–19]. La injecció de nimodipina era de Bayer Company. Les cèl·lules es van dividir aleatòriament en sis grups, a saber, el control, vehicle (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP.(Cisttambédeserticolapolisacàrids)(0,05 ug/ml), CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)(0,5 ug/ml) i CDP (5 ug/ml). Nimodipina i CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)es van afegir abans de la reperfusió. El grup control es va cultivar en un medi normal i es va incubar en condicions normoxiques.

2.3. Viabilitat cel·lular: assajos MTT i NRU

Les cèl·lules PC12 (6 × 103 per pou) es van sembrar en una placa de cultiu 96-pou. Les cèl·lules es van tractar d'acord amb els requisits de cada grup. Es va afegir MTT (Solarbio, Xina) a les cèl·lules a una concentració de 5 mg/ml i es va incubar durant 4 h a 37 graus. El formazan és el producte de reducció de la succinat deshidrogenasa a les cèl·lules vives [20]. Es va afegir DMSO per a la dissolució del formazà blau generat. Es va detectar l'absorbància a una longitud d'ona de 490 nm amb Microplate Reader (Thermo, EUA) després d'agitar les cèl·lules durant 10 minuts a 25 graus. Els resultats de la viabilitat cel·lular es van manifestar com a percentatge del grup control [21].

L'assaig de captació de vermell neutre (NRU) es va realitzar segons un protocol publicat prèviament [22]. Quan es van completar els períodes de reperfusió, es va afegir vermell neutre (Solarbio, Xina) a les cèl·lules a una concentració de 5 0 ug /ml. La mescla es va incubar durant 3 h. A continuació, les cèl·lules es van rentar ràpidament amb una solució que contenia un 0,5 per cent de formaldehid i un 1 per cent de clorur de calci. Les cèl·lules es van afegir posteriorment a una barreja que contenia un 1% d'àcid etílic i un 50% d'anhidretanol. Les plaques es van llegir a una absorbància de 540 nm després d'agitar les cèl·lules durant 20 minuts a 37 graus. Els resultats de la viabilitat cel·lular es van manifestar com un percentatge del grup control.

Polisacàrids de Cistanche deserticolatenir unEfecte neuroprotector

2.4. Valoració de la citotoxicitat

LDH és un enzim citoplasmàtic que catalitza l'oxidació del lactat topiruvat. La LDH s'allibera ràpidament al líquid extracel·lular quan la membrana cel·lular està danyada. Per tant, la detecció de LDH es realitza normalment per a l'avaluació de la citotoxicitat. [23]. El procediment experimental va seguir les instruccions del kit comercial subministrades pel kit d'assaig LDH (Jiancheng, Xina). L'absorbància de cada mostra es va detectar a 440 nm amb un lector de microplaques. El percentatge de mort cel·lular es va calcular mitjançant la fórmula següent: Viabilitat (percentatge)=(Tractament OD − Tractament ODT en blanc)/(Activitat OD Màx LDH - OD Max activitat LDH en blanc) × 100 per cent.

2.5. Detecció de Ca2 intracel·lular més concentració

La concentració intracel·lular de Ca2 plus es va mesurar amb Fluo-3/AM [15]. Les cèl·lules PC12 es van rentar tres vegades amb PBS i després es van incubar amb 2 μM Fluo-3/AM (Beyotime, Xina) durant 30 minuts a 37 graus a la foscor. A continuació, es van rentar les cèl·lules amb PBS tres vegades per a la purga del colorant extracel·lular. La intensitat de fluorescència del Fluo-3/AM es va determinar amb un microscopi confocal d'escaneig làser (Olympus, Japó). El paquet de programari Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer i ImageJ es van utilitzar per al càlcul de valors en escala de grisos

2.6. Mesura de MMP

JC-1 (5,5′,6,6′-Tetracloro-1,1′,3,3′-tetraetil-imidacarbocianina; Beyotime, Xina) és una sonda sensible al voltatge que s'utilitza generalment per a la tinció. cèl·lules i avaluant la MMP [24]. Les cèl·lules PC12 es van rentar dues vegades amb PBS fred i després es van incubar amb una barreja que contenia un 50 per cent de mitjà i un 50 per cent de líquid de treball durant 15 minuts a 37 graus a la foscor. Després, la barreja es va descartar i es va substituir per un medi fresc. Les imatges de fluorescència vermella i verda es van capturar mitjançant microscòpia confocal d'escaneig làser. La proporció relativa de senyals de fluorescència vermella i verda es va utilitzar per a la mesura de MMP [25]. El paquet de programari Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer i ImageJ es van utilitzar per al càlcul dels valors d'escala de grisos.

2.7. Assaig de detecció d'apoptosi, Hoechest33342 i anàlisi de citometria de flux

Hoechst33342, un colorant d'unió a l'ADN, es va utilitzar per a l'examen de l'apoptosi cel·lular [26]. Després de la reperfusió, les cèl·lules PC12 es van rentar tres vegades amb PBS i es van incubar amb Hoechst33342 (Beyotime, Xina) a una concentració de 5 ug/ml durant 15 min a 37 graus a la foscor. A continuació, es van observar les cèl·lules sota un microscopi confocal d'escaneig làser. Les cèl·lules teapoptòtiques van mostrar una intensa fluorescència blava i condensació del nucli. Per a cada experiment de tinció, es van capturar i quantificar tres camps aleatoris. Per al càlcul dels valors d'escala de grisos es van utilitzar Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer i ImageJ. Els percentatges de les cèl·lules apoptòtiques es van calcular mitjançant la fórmula següent: quantitat apoptòtica / quantitat total × 100 per cent [27].

2.8. Mesura de la generació de ROS

La sonda fluorescent 2′,7′-diacetat de diclorofluoresceïna (DCFH-DA; Jiancheng, Xina) pot penetrar a les membranes cel·lulars i es pot hidrolitzar a DCFH no fluorescent. DCFH s'oxida per DCF tofluorescent de ROS intracel·lular [29]. Després de la reperfusió, les cèl·lules es van rentar dues vegades amb PBS i després es van incubar amb DCFH-DA a una concentració final de 10 μM durant 45 min a 37 graus a la foscor. La fluorescència es va observar mitjançant un espectrofotòmetre d'afluorescència amb una longitud d'ona d'excitació de 485 nm i una longitud d'ona d'emissió de 535 nm.

Polisacàrids de Cistanche deserticolatenir unEfecte neuroprotector

2.9. Determinació d'indicadors d'estrès oxidatiu: CAT, GSH-Px i T-AOClevels

Les cèl·lules es van raspar i es van tornar a suspendre en PBS. Les suspensions cel·lulars obtingudes es van sonicar 45 vegades sobre gel i es van centrifugar a 1000 r/min durant 10 min a 4 graus. Els sobrenedants es van retenir i es van utilitzar per a la detecció [24]. El contingut total de proteïnes del sobrenedant cel·lular es va mesurar amb un kit de reactius d'assaig de proteïnes BCA (KeyGEN, Xina). Les activitats dels nivells de CAT, GSH-Px i T-AOC es van mesurar segons les instruccions dels fabricants (Jiancheng, Xina). L'absorbància de cada mostra es va detectar amb un lector de microplaques.

2.10. Mesura de la concentració extracel·lular de DJ-1

Les cèl·lules PC12 (6 × 103 per pou) es van sembrar en plaques de cultiu de 96-pous. Després de la reperfusió, el sobrenedant cel·lular es va recollir i analitzar per DJ-1/PARK-7 ELISA Kit (Raybio, EUA ) segons les instruccions del fabricant [9]. L'absorbància de cada mostra es va detectar amb Microplate Reader a una longitud d'ona dual de 450 nm o 540 nm.

2.11. Anàlisi Western blot

Les proteïnes cel·lulars es van extreure amb tampó de lisi freda amb gel segons les instruccions dels fabricants (KeyGEN, Xina). La concentració de proteïnes es va determinar amb un kit de reactius d'assaig de proteïnes BCA. Es van resoldre quantitats iguals de lisats de proteïnes (20 ug) de cada grup en electroforesi en gel de dodecilsulfat de sodi-poliacrilamida al 12% i posteriorment es van transferir a una membrana de nitrocel·lulosa. La membrana es va incubar amb PBS que contenia un 5% de llet desnatada durant 2 h a temperatura ambient i després es va sondar amb anticossos anti-PARK7/DJ-1 (ab76008, Abcam; dilució 1:1000) durant la nit a 4 graus. A continuació, es va rentar la membrana tres vegades amb PBST i es va incubar amb IgG anti-conill de cabra d'anticossos secundaris (SA00001-2, Proteintech Group; dilució 1:5000) a temperatura ambient durant 2 h. Es va considerar com a control l'anticòs anti- -tubulina (10759-1-AP, Proteintech Group; dilució 1:1000). Les bandes de proteïnes es van visualitzar mitjançant reactius de reacció de quimioluminescència millorada (ECL). Les densitats de bandes es van mesurar amb el programari QuantityOne Analysis v.4.6.9.

2.12. Anàlisi immunocitoquímica

Les cèl·lules PC12 es van fixar en un 4% de paraformaldehid durant 15 min a temperatura ambient després del tractament de reperfusió [9]. Després d'eliminar l'excés de paraformaldehid, les cèl·lules es van incubar en PBS que contenia 0,3 per cent de Tritó X-100 durant 10 min a temperatura ambient. A continuació, les cèl·lules es van rentar amb PBS tres vegades abans de ser incubades amb sèrum de cabra normal al 5% durant 1 h. A continuació, es van incubar les cèl·lules amb una cadena monoclonal anti-ATP sintasa de ratolí de conill (MABS1304, EMD Millipore, dilució 1:200) per a la tinció de mitocondris i posteriorment es van incubar amb anticossos anti-PARK7/DJ-1 (dilució 1: 100) per a la investigació de proteïnes DJ-1. Les cèl·lules es van rentar i es van incubar amb IgG-Alexa 488 anti-conill de cabra (verd; A11034, Invitrogen; dilució 1:1000) i IgG-Alexa 594 anti-ratolí de cabra (vermell; A11032; Invitrogen; dilució 1:1000) min. Finalment, les cèl·lules es van rentar tres vegades amb PBS i es van muntar sobre portaobjectes de vidre amb un medi de muntatge que contenia DAPI. Les imatges immunofluorescents es van visualitzar mitjançant un microscopi confocal d'exploració làser.

Polisacàrids de Cistanche deserticolatenir unEfecte neuroprotector

2.13. Dades/anàlisi estadística

Tots els valors es van mostrar com a mitjana ± SD. La importància es va determinar mitjançant una anàlisi de variància unidireccional (ANOVA), seguida de la prova de comparació múltiple de Dunnett. p < .05="" es="" va="" considerar="" com="" a="" significació="" estadística.="" les="" dades="" experimentals="" es="" van="" analitzar="" mitjançant="" el="" programari="" estadístic="" spss="">

3. Resultats

3.1. CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)va inhibir el dany cel·lular induït per OGD/RP

Les cèl·lules PC12 exposades a OGD/RP van mostrar una disminució significativa del nombre. Es va canviar la forma de la cèl·lula i es va trencar la membrana cel·lular. En l'assaig MTT, les viabilitats cel·lulars al CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)els grups ({{0}},05, 0,5 i 5 ug/ml) eren 58,91 per cent ± 5,40 per cent, 61,13 per cent ± 3,81 per cent i 68,57 per cent ± 3,24 per cent respectivament, p < 0,05="" (figura="" 1a)="" ,="" i="" que="" amb="" vehicle="" tenia="" un="" 51,68="" per="" cent="" ±="" 3,89="" per="" cent="" .="" aquests="" valors="" indicaven="" que="">(Cisttambédeserticolapolisacàrids)va protegir les cèl·lules contra lesions OGD/RP i va reduir la mort cel·lular. A més, la viabilitat cel·lular del grup Nimo va ser del 77,02% ± 5,22%, que és gairebé igual a la del CDP de 5 ug/ml.(Cisttambédeserticolapolisacàrids)grup tractat.

En l'assaig NRU, les viabilitats cel·lulars al CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)els grups ({{0}},05, 0,5 i 5 ug/ml) eren 52,03 per cent ± 4,72 per cent, 58,49 per cent ± 2,50 per cent i 69,17 per cent ± 3,91 per cent, respectivament, (figura 1B) i això amb vehicle tenia un 47,14 per cent ± 2,88 per cent. Els valors van indicar l'efecte protector de CDP depenent de la concentració.

A diferència d'un vehicle (44,73 per cent ± 3,30 per cent), l'alliberament de LDH es va reduir significativament al CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)grups. En CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)grups ({{0}},05, 0,5 i 5 ug/ml), les taxes de fuita de LDH van ser del 32,41 per cent ± 3,70 per cent, 27,13 ± 2,79 per cent i 23,13 per cent ± 4,59 per cent respectivament, p < 0,01="" (fig.="" .1c).="" a="" més,="" les="" taxes="" de="" fuites="" de="" ldh="" al="" grup="" nimo="" van="" ser="" del="" 21,99="" per="" cent="" ±="" 4,02="" per="" cent,="" que="" era="" gairebé="" igual="" a="" la="" del="" grup="" tractat="" amb="" 5="" ug/ml="">

3.2. CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)augment atenuat de [Ca2 més ]i induït per OGD/RP

Els nivells intracel·lulars de Ca2 plus a les cèl·lules PC12 es van millorar a 4146,60 ± 195,97 després de la lesió OGD/RP en contrast amb el grup control (373,62 ± 75,69). El CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)grups ({{0}},05, 0,5 i 5ug/ml) podrien disminuir depenent de la dosi el nivell de Ca2 més intracel·lular fins a 2921,25 ± 222,19, 2015,85 ± 230,53 i 1768,43 ± 426,43 ± 426,12A respectivament (Fig. ). A més, el nivell de Ca2 més en el grup tractat amb 5 ug/ml CDP va disminuir fins a un nivell comparable al del grup Nimo (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)dissipació atenuada de MMP induïda per OGD/RP

En comparació amb el grup control (1,67 ± 0,89), el grup de vehicles (0,48 ± 0,1{0) va mostrar més fluorescència FL verda que FL vermella fluorescència (Fig. 2B i D). Les proporcions entre la fluorescència FL vermella i verda es van reduir a 1,11 ± 0,26 i 1,18 ± 0,16 en el CDP de 0,5 i 5 ug/ml(Cisttambédeserticolapolisacàrids)grups tractats respectivament, p < .01.="" la="" fluorescència="" del="" fl="" verd="" es="" va="" reduir="">

3.4. CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)va prevenir l'apoptosi cel·lular induïda per OGD/RP

Les cèl·lules que presentaven cromatines condensades o nuclis fragmentats es van classificar com a cèl·lules apoptòtiques [30]. Els resultats de l'assaig Hoechst33342 van revelar l'aparició de nuclis condensats després d'OGD/RP (Fig. 3A i C). Es va observar una alta intensitat de fluorescència FL als nuclis del grup de vehicles. La intensitat de fluorescència FL dels nuclis es va afeblir al CDP de 5 ug/ml(Cisttambédeserticolapolisacàrids)grup tractat. Hem analitzat la taxa d'apoptòtica a les cèl·lules PC12 mitjançant citometria d'altres companys mitjançant la tinció doble FITC-Annexin V/PI (Fig. 3B i D). El grup de control tenia una taxa d'apoptòtica cel·lular del 4,16% ± 0,24%, mentre que el grup de vehicles tenia un 22,98% ± 0,66%. En el grup tractat amb 5 ug/ml de CDP, la taxa d'apoptosi cel·lular va ser del 7,86 per cent ± 1,16 per cent.

3.5. CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)acumulació de ROS intracel·lular induïda per OGD/RP atenuada i estat redox preservat

Els efectes del CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)sobre l'estrès oxidatiu es van demostrar a partir de la generació de ROS, GSH-Px, activitats CAT i nivells de T-AOC. Els nivells de ROS a les cèl·lules PC12 lesionades per OGD/RP van augmentar i es van fer significativament més alts que els del grup control (p < 0,01).="" mentrestant,="" els="" nivells="" de="" ros="" al="">(Cisttambédeserticolapolisacàrids)els grups ({{0}},05, 0,5 i 5 ug/ml) van disminuir de manera dependent de la dosi (p <.01; fig.="" 4a).="" a="" més,="" el="" cdp="" també="" va="" augmentar="" significativament="" els="" nivells="" de="" t-aoc="" (p=""><.05; fig.="" 4b),="" cat="" (p=""><.05; fig.="" 4c)="" i="" gsh-px="" (p=""><.05; fig.="" 4d)="" en="" comparació="" amb="" el="" vehicle.="" grup.="" les="" activitats="" dels="" antioxidants="" endògens="" en="">(Cisttambédeserticolapolisacàrids)van augmentar els grups.

3.6. CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)va estimular la secreció de DJ-1 i va millorar l'expressió de DJ-1

Es van detectar canvis de concentració de DJ-1 en el sobrenedant cel·lular i van revelar la possible relació entre DJ-1 i CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids). Es va observar l'alliberament de DJ-1 de les cèl·lules PC12 lesionades per OGD/RP (figura 5). DJ-1 es va incrementar considerablement en el CDP de 5 ug/ml(Cisttambédeserticolapolisacàrids)grup tractat (38,66 ± 8,44 pg/ml) i va augmentar significativament que el del grup de vehicles (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) i el grup control (9,67 ± 3,96 pg/ml, p < 0,01) .

Investigar els efectes del CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)sobre l'expressió intracel·lular de DJ-1, vam mesurar els nivells de proteïna DJ-1 mitjançant Western blotting. Els nivells d'expressió de proteïnes DJ-1 van augmentar significativament 24 h després de la reperfusió. Per contra, el posttractament de 5 ug/ml CDP va millorar significativament la sobreexpressió de DJ -1 en comparació amb el grup de vehicles (p <.01, figura="">

3.7. CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)translocació millorada de DJ-1 als mitocondris

Les cèl·lules PC12 es van tacar amb anticossos anti-PARK7/DJ-1 i anti-ATP sintasa (Figs. 7 i 8). L'anticòs anti-ATP sintasa - cadena enllaça amb el complex mitocondrial I, i l'antigen d'unió es va localitzar a la membrana interna mitocondrial. Els resultats van revelar que DJ-1 es va traslladar a la membrana interna mitocondrial després de l'insult OGD/RP (figura 8). Mentrestant, els resultats de la doble tinció de DJ-1 i mitocondris van revelar que el CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)va facilitar la translocació i la colocalització mitocondrial de DJ- 1 (Fig. 8). Aquests resultats van indicar una interacció directa entre DJ-1 ineuroprotectorefecte del CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)(Fig. 9).

4. Discussió

En aquest estudi, vam informar de primera mà que CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)redueix eficaçment el dany de les cèl·lules PC12 induïts per OGD/RP mitjançant la regulació de la proteïna DJ-1. CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)va millorar la viabilitat cel·lular, va reduir el dany a la membrana cel·lular, va mantenir el Ca2 intracel·lular més l'homeòstasi, va prevenir la pèrdua de MMP, va reduir l'apoptosi cel·lular, va suprimir l'estrès oxidatiu, va promoure l'expressió de DJ-1 i va millorar la translocació de DJ-1 als mitocondris. DJ-1 ha estat implicat recentment en la regulació deneuroprotectorefecte i integritat mitocondrial. Aquests resultats van proporcionar proves convincents de laneuroprotectorefectes del CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)contra la isquèmia. A més, la interacció entre CDP i DJ-1 reprodueix aneuroprotectorpaper en el dany cel·lular PC12 induït per OGD/RP. Els resultats anteriors poden desenvolupar la nostra comprensió de l'efecte beneficiós del CDP i poden proporcionar informació útil per a la teràpia de l'ictus en el futur.

L'ictus isquèmia s'ha atribuït a una sèrie complexa de mecanismes bioquímics i moleculars, inclosa l'excitotoxicitat, la sobrecàrrega de calci i l'estrès oxidatiu [31]. L'OGD/RP s'utilitza àmpliament com a model in vitro d'isquèmia-reperfusió i s'utilitza per a l'exploració de canvis neurològics i bioquímics. La línia cel·lular PC12 és sensible a la lesió OGD/RP [2]. Exhibeix una sèrie de propietats i característiques de les neurones simpàtiques [32] i, per tant, línies de cèl·lules neuronals àmpliament utilitzades per a investigacions relacionades amb els mecanismes de dany neurològic a causa de l'ictus [33,34]. Nombrosos estudis han indicat que l'estrès oxidatiu té un paper vital en l'ictus i el dany de la isquèmia cerebral [35–37]. La proteïna DJ associada a la malaltia de Parkinson-1 pot inhibir la neurodegeneració isquèmica i la disfunció del comportament reduint la lesió neuronal mediada per ROS [7]. Per tant, hem utilitzat el model de cèl·lules PC12 amb lesions OGD/RP per investigarneuroprotectorefecte del CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids).

El grau de lesió a les cèl·lules PC12 induïdes per OGD/RP es va avaluar mitjançant assajos d'alliberament MTT, NRU i LDH. Administració del CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)({{0}},05, 0,5 i 5 ug/ml) va millorar la supervivència cel·lular i va disminuir l'alliberament de LDH. Els efectes beneficiosos del tractament amb CDP també inclouen una disminució de la sobrecàrrega de calci intracel·lular i la preservació de la MMP. Les anomalies de la concentració intracel·lular de Ca2 més, especialment la sobrecàrrega de calci mitocondrial, s'han relacionat amb l'apoptosi neuronal i la mort induïda per un ictus isquèmic [38]. La MMP pot reflectir l'eficiència de la cadena de transport d'electrons i s'ha indicat com un índex de trastorn patològic d'aquest sistema [39]. Tant les elevacions de la concentració intracel·lular de Ca2 com la pèrdua de MMP poden provocar la desestabilització de l'estructura de la neurona i, finalment, provocar danys cel·lulars o mort cel·lular [21,40]. En aquest estudi, els resultats van demostrar que el CDP va inhibir significativament el Ca2 intracel·lular més la sobrecàrrega i va augmentar els nivells de MMP a les cèl·lules PC12 amb lesió OGD/RP. L'apoptosi té un paper vital en la fisiopatologia complexa de la lesió per isquèmia-reperfusió cerebral. L'augment de les dades suggereix que l'apoptosi ha estat implicada en la disfunció mitocondrial; la dissipació de MMP és un esdeveniment primerenc que resulta en apoptosi cel·lular [8,39]. L'apoptosi és un procés de mort cel·lular programada depenent de l'energia per eliminar les cèl·lules redundants. Moltes neurones de l'ictus isquèmic patiran apoptosi [41]. En aquest estudi, vam realitzar la tinció de Hoechst33342 i Annexin V-FITC/PI per examinar l'efecte del CDP sobre l'apoptosi [23, 28]. Els resultats van mostrar que el CDP manté la integritat del nucli i disminueix la taxa d'apoptosi cel·lular. Tots aquests resultats van indicar que l'activitat anti-apoptòtica de CDP va contribuir a l'efecte beneficiós en la lesió neuronal a les cèl·lules PC12.

Les cèl·lules que pateixen danys d'isquèmia causades per l'acumulació excessiva de ROS, que poden provocar peroxidació de lípids, danys a la membrana cel·lular, sobrecàrrega de calci i disfunció mitocondrial, donant lloc a l'apoptosi cel·lular i la mort [42]. El consum d'antioxidants endògens, com SOD, CAT i GSH-Px, també va indicar l'aparició Fig. 9. Possibles mecanismes per als efectes protectors de CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)contra el dany cel·lular PC12 induït per OGD/RP. El tractament de CDP suprimeix l'estrès oxidatiu, estabilitza la concentració de Ca2 més i MMP, millora l'expressió de DJ-1 i la localització als mitocondris. Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678d'estrès oxidatiu durant la isquèmia-reperfusió. En aquest estudi, el grup OGD/RP va mostrar un augment significatiu de ROS i una disminució de CAT, GSH-Px i T-AOC en comparació amb el grup tractat amb CDP de 5 ug/ml. Tanmateix, vam observar disminucions substancials de les taxes de generació de ROS i de consum d'antioxidants endògens (CAT, GSH-Px i T-AOC) als grups CDP. Els efectes beneficiosos en el grup CDP de 5 ug/ml eren propers als del grup Nimo. Els resultats van suggerir que el CDP inhibeix la generació de ROS i restaura la defensa antioxidant enzimàtica.

DJ-1 és un redox reactiu clauneuroprotectorproteïna implicada en la regulació de l'estrès oxidatiu en l'ictus. Els efectes beneficiosos de la sobreexpressió de DJ-1 inclouen la supervivència cel·lular de la isquèmia-reperfusió i la preservació de la funció i la morfologia mitocondrials, com ara la precipitació de l'obertura dels porus de transició de la permeabilitat dels mitocondris [39,43]. Estudis anteriors han indicat que l'efecte protector de DJ-1 a les cèl·lules exposades a OGD/RP està relacionat amb les seves propietats antioxidants i la translocació de mitocondris [43–45]. DJ-1 realitza una neuroprotecció endògena eficient per mitigar els defectes mitocondrials mitjançant la translocació [46]. Diversos estudis han indicat que la translocació de DJ-1 pot tenir un efecte sobre el moviment mitocondrial, millorar la interacció cèl·lula-cèl·lula i promoure altres processos de supervivència cel·lular.

DJ-1 afecta diversos processos, com ara la migració i l'adhesió cel·lular, la quimiotaxi, la proliferació i l'apoptosi, tant en models in vitro com in vivo [6,9,47,48]. Utilitzant el model d'ictus de cèl·lules PC12 lesionades OGD/RP, vam explorar una relació potencial entre CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)i DJ-1. La sobreexpressió de DJ- 1 es va identificar mitjançant ELISA i Western blotting. Juntament amb aquesta funció, una troballa important en els experiments va demostrar que la sobreexpressió significativa de DJ-1 es va produir quan CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)(5 ug/ml) es va administrar abans de la reperfusió. Això va suggerir un possibleneuroprotectorefecte en la relació de CDP i DJ-1. A més, hem observat que DJ-1 situat als mitocondris en condicions d'OGD/RP i una expressió abundant de DJ-1 va disminuir la sensibilitat cel·lular a ROS i va inhibir l'estrès oxidatiu [45]. Els resultats van implicar que el CDP regula i millora DJ-1, que actua com un enllaç molecular entre la disfunció dels mitocondris i l'estrès oxidatiu i proporciona una progressió de la mort cel·lular secundària inherent a l'ictus [5,47,49–51]. En conjunt amb l'estabilització de DJ-1 als mitocondris, CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)El tractament va augmentar la supervivència cel·lular, va estabilitzar Ca2 més l'homeòstasi, va millorar la dissipació de MMP i prevé l'apoptosi relacionada amb els mitocondris [43]. En general, els nostres resultats van indicar que CDP exerceix una novel·laneuroprotectormecanisme en el tractament de l'ictus isquèmic.

5. Conclusió

Els nostres resultats van indicar que CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)protegeix les cèl·lules PC12 contra lesions induïdes per OGD/RP mitjançant els seus efectes antioxidants, que s'atribueixen parcialment a la via mediada per DJ-1. Aquests efectes inclouen una disminució de la taxa de dany a la membrana cel·lular, la preservació de l'homeòstasi [Ca2 plus ] I, la millora de la dissipació de MMP, la inhibició de l'apoptosi cel·lular, l'atenuació de ROS intracel·lular i la modulació dels nivells de DJ-1. Els resultats també van indicar que les interaccions entre CDP i DJ-1 amplifiquen la neuroprotecció i mantenen la integritat mitocondrial. Per tant, les neurones vulnerables poden estar protegides per CDP(Cisttambédeserticolapolisacàrids)mitjançant la millora de l'expressió DJ-1 durant l'ictus d'isquèmia.

Agraïments

Aquest estudi va comptar amb el suport de la Fundació Nacional de Ciències Naturals de la Xina (subvenció 81360649), el Programa Clau Nacional de Ciència i Tecnologia (subvenció 2015BAK45B01) i el Programa de Suport Científic i Tecnològic de la Regió Autònoma de Ningxia Hui (subvenció 2016BZ07).

Polisacàrids de Cistanche deserticolatenir un Efecte neuroprotector

Referències

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans protegeix les neurones corticals contra la toxicitat induïda per la hipòxia regulant a la baixa HDAC1/6, Neuromol. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: un programa de resposta ràpida per a l'ictus a la Xina, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Noves terapèutiques de l'ictus: desglossament de la fisiopatologia de l'ictus i el seu impacte en els tractaments clínics, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, fisiopatologia relacionada amb la NADPH oxidasa en models experimentals d'ictus, Int. J. Mol. Ciència. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, The oxidation states of DJ{{ 1}} dicten el destí cel·lular en resposta a l'estrès oxidatiu provocat per 4-hpr: autofàgia o apoptosi? Signe antiòxid Redox. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 millora la mort de cèl·lules isquèmiques in vitro possiblement a través de la via mitocondrial, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira, et al., DJ{{ 1}} protegeix contra la neurodegeneració causada per la isquèmia cerebral focal i la reperfusió en rates, J. Cereb. El flux de sang. Met. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, les cèl·lules neuronals primàries de rata privades d'oxigen de glucosa presenten una translocació de DJ-1 a mitocondris saludables: un potent objectiu terapèutic d'ictus, CNS Neurosci. Allà. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, El tractament amb ciclosporina A anul·la la mort de cèl·lules neuronals induïda per la isquèmia preservant la integritat mitocondrial mitjançant la regulació positiva de la proteïna associada a la malaltia de Parkinson DJ-1, CNS Neurosci. Allà. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu, et al., Pretractament amb fenilbutirat de sodi Alleuja la isquèmia cerebral / lesió de reperfusió mitjançant la regulació positiva de la proteïna DJ-1, Front. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Una revisió de neurofarmacologia, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Un dels millors regals farmacèutics de la medicina tradicional xinesa, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Efectes i mecanismes de la medicina herbal xinesa en la millora de la lesió d'isquèmia-reperfusió del miocardi, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches estimula el cicle redox del glutatió cel·lular mitjançant espècies reactives d'oxigen generades a partir de la respiració mitocondrial en cardiomiòcits H9c2, Pharm. Biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert ginseng": una ressenya, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,CistanchedeserticolaLa decocció alleuja la toxicitat testicular induïda per la hidroxiurea en ratolins mascles, asiàtic J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Investigation of theneuroprotectorimpacte de la nimodipina a les cèl·lules Neuro2a mitjançant un model d'estrès semblant a la cirurgia, Int. J. Mol. Ciència. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neuroprotectorefecte de la noscapina sobre la lesió cerebral per privació d'oxigen i glucosa, Pharmacol. Rep 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A protegeix contra el deteriorament isquèmic en el cultiu primari de neurones corticals de rata després de la privació d'oxigen i glucosa. per reperfusió, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, cèl·lules PC12 protegides amb transcinnamaldehid contra la privació d'oxigen i glucosa /reperfusió (OGD/R) lesió induïda per anti-apoptosi i estrès antioxidant, Mol. Bioquímica cel·lular. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Efectes protectors de l'aloina sobre l'oxigen i lesió induïda per la privació de glucosa a les cèl·lules PC12, Brain Res. Bou. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol protegeix les cèl·lules PC12 isquèmiques inhibint els factors de transcripció associats a la hipòxia i augmentant els nivells d'enzims de defensa antioxidants, ACS Chem. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B protegeix les cèl·lules PC12 contra la mort neuronal induïda per la privació d'oxigen i glucosa mantenint l'homeòstasi mitocondrial mitjançant la inducció de la ubiquitina dependent. degradació de la proteïna p53, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu, et al., Protective effects of aloperine on neonatal rate primary neurones de l'hipocamp cultivades lesionades per la privació d'oxigen-glucosa i reperfusió, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib protegeix les neurones corticals del ratolí contra la neurotoxicitat induïda per OGD/R mitjançant la regulació positiva de Bcl-2, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 estabilitza l'expressió HER2 i manté la població de cèl·lules mare del càncer a les cèl·lules canceroses d'ovari, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Protegeix les cèl·lules RGC-5 de H(2)O( 2) insults d'estrès oxidatiu induïts mitjançant l'activació de la via de senyalització PI3K/Akt/eNOS, Int. J. Mol. Ciència. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, els extractes de diclorometà de pròpolis protegeixen la cèl·lula de l'estrès oxidatiu induït per la privació d'oxigen i glucosa Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679via reducció de l'apoptosi, Food Nutr. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Neuroprotectorefecte de la neuroserpina en astròcits de rates tractats amb privació d'oxigen-glucosa i reoxigenació in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Els ions de liti atenuen l'apoptosi induïda per la privació sèrica a les cèl·lules PC12 mitjançant la regulació de la senyalització Akt/FoxO1 pathways, Psychopharmacology (Berl) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al., Resum executiu de les estadístiques de cardiopatia i ictus 2016 actualització. Un informe de l'Associació Americana del Cor, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Regulació dels llocs d'unió de lligands muscarínics per factor de creixement nerviós en cèl·lules de feocromocitoma PC12, Nature 297 (1982) 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid allopregnanolone atenua l'apoptosi alta induïda per glucosa i prevé el dolor neuropàtic diabètic experimental: estudis in vitro i in vivo, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, el resveratrol protegeix les cèl·lules PC12 contra l'apoptosi induïda per OGD/R mitjançant la via de senyalització mediada per mitocondris, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oxidases com a font d'estrès oxidatiu i objectiu molecular en isquèmia/reperfusió. lesió, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Efectes protectors d'òrgans de l'extracte de vi negre, resveratrol, en la lesió de reperfusió mediada per l'estrès oxidatiu, Òxid. Med. Longev cel·lular. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Distinct mPTP activation mechanisms in ischemia-reperfusion: contributions of Ca2 plus , ROS, pH, and inorganic polyphosphate, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, El precondicionament d'etanol a dosis baixes protegeix contra la privació d'oxigen i glucosa / lesions neuronals induïdes per la reoxigenació mitjançant l'activació de gran conductància. , Ca2 plus plus -activat K plus plus Canals In Vitro, Neurosci. Bou. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Efecte de la inhibició de la fissió mitocondrial sobre el metabolisme energètic a les neurones de l'hipocamp de la rata durant la lesió per isquèmia/reperfusió, Neurol. Res. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun, et al., Protective effects of Polisacàrid de Lycium barbarum en neurones de l'hipocamp de cultiu primari de rata neonatal lesionades per privació i reperfusió d'oxigen-glucosa, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Mecanismes apoptòtics després de la isquèmia cerebral, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin protegeix els astròcits de la hipòxia in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, la proteïna quinasa dependent de calci/calmodulina regula la PINK1/Parkin i DJ{{3} } vies de mitofagia durant la sèpsia, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 és un important mediador de les respostes cel·lulars induïdes per la hipòxia, Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Calcium/calmodulin-dependent protein kinase regulates the PINK1/ Parkin i DJ-1 vies de la mitofagia durant la sèpsia, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3r, RC Liddington, SA Lipton, La transnitrosilació de DJ-1 a PTEN atenua la mort de les cèl·lules neuronals en models de malaltia de Parkinson, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 protegeix contra la mort cel·lular després d'una lesió cardíaca aguda per isquèmia-reperfusió, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} és un biomarcador sèric fiable per discriminar el càncer endometrial d'alt risc, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan, et al., DJ-1 protegeix el nigroestriatal eix de la neurotoxina MPTP per modulació de la via AKT, Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, The Parkinson's disease protein DJ-1 isneuroprotectora causa de la localització mitocondrial impulsada per cisteïna-àcid sulfínic, Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, inhibició de DJ induïda per hiperglucèmia-1 L'expressió va comprometre l'eficàcia de la cardioprotecció postcondicionament isquèmica en rates, Oxid. Med. Longev cel·lular. (2013) (2013) 564902.