Anàlisi de composició de Cistanche Tubulosa: Separació i estructura de glicosil fenitontanioide i glicosíid de Neolignan

Contacte:joanna.jia@wecistanche.com

Els constituents de Cistanche Tubulosa (Schrenk) Hook. F. II.1) Aïllament i estructures d'un nou glicosi fenitohanoide i un nou glicosil de Neolignan

Fumio Yoshizawa,* un Takeshi Deyama/ Nobuo Takizawa/ Khan UsmanghaniJ i Mansoor Ahmad6

Laboratoris Centrals d'Investigació, Yomeishu Seizo Co, Ltd, un 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Japó i Departament de Farmacognòsia, Facultat de Farmàcia, Universitat de Karachi? Karachi-32, Pakistan. Rebut el 9 de novembre de 1989

Un nouglicòsid fenil·lanioidetubuloside E (I), i un nouneolignan glicosi, l'alcohol deshidrodiconiferil i-O-0-D-glucopiseranoside (II), van ser aïllats de totes les plantes deCistanche tubulosa(Schrenk) Ganxo. f. (Orobanchaceae), juntament amb l'alcohol deshidrodiconiferil 4-O-^-D-glucopyranoside (III), xeringalida A 3'-a-L- rhamnopyranoside (IV), isosyringalide S'-a-L-rhamnopyranoside (V), (+ )-syringaresinol O-^-D-glucopyranoside (VI), ( + )-pinoresinol O-^-D-glucopyranoside (VII), liriodendron (VIII), 6-deoxicatalpol (IX), àcid 8-epiigànic (X), 20-hidroxiecdysona (XI), 8-hidroxigeraniol l-j?-D-glucoprinoside (XII) i xeringina (XIII). L'estructura del tubuloside E (I) es va establir com 2-(3,4-dihidroxi fenil)etil O-a-L-rhamnopyranosyl-(l ->3)-2-O-acetil-4-O-p- coumaroyl-^-D-glucopyranoside sobre la base de l'evidència química i dades espectrals.

Paraules clau Cistanche tubulosa-, Orobanchaceae;glicòsid fenil·lanoides;iridoide; tubuloside E; dehidodiconiferil alcohol glicòsid d'alcohol; rhamnoside de xeringalida;neolignan glicosi; 13C-NMRMOE

glicòsid fenitohanoide al cistanche

En un document anterior, vam informar de l'aïllament i la determinació estructural de les novesglucàsids fenil·lanoides, tubulosides A一D de totes les plantes deCistanche tubulosa(Schrenk) Ganxo. f. (Orobanchaceae) al Pakistan.

Aquest document tracta sobre l'aïllament i l'elucidació estructural d'una novaglicòsid fenil·lanioide, anomenat tubuloside E (I), i un nouneolignan glicosi, alcohol deshidrodiconiferil ■/-Q-g-D-glucopiranòid (II), així com l'aïllament d'11 compostos coneguts, alcohol deshidrodiconiferil 4-O-g-D-glucopiròsid (III), xeringalida A 3'-a-L-rhamnopyranoside (IV), isosinringalida 3'-a-L-rhamnopyranoside (V), (+ )-syringaresinol O-g-D- glucopyranoside(VI), (+ )-pinoresinol O-g-D-glucopyrano- costat (VII), liriodendron (VIII), 6-desoxicatalpol (IX), 8- àcid epilogànic (X), 20-hidroxiecdysona (XI), 8-hidroxigeraniol 1-gD-glucopirranòsid (XII) i xeringina (XIII). Els compostos VI, VIII, XII i XIII van ser prèviament aïllats de la salsa Cistanche?

Tubuloside E (I) va ser aïllat com una pols amorfa, C31H38O15 -3/2H2O, [a】D -134.0° (MeOH). L'espectre infraroig (IR) va suggerir la presència de grups hidroxil (3430cm-1), èster conjugat (1734cm-x), un doble enllaç (1634cm-1) i anells aromàtics (1608 i 1518cm-1). L'espectre de ressonància magnètica nuclear de protons 0H-NMR de I va mostrar senyals a causa d'un grup metil de rhamnosa 0 1,07 (3H, d, J= 6 Hz)], un grup acetoxil 0 1,98 (3H, s)], protons de metilè benzílic 0 2,72 (2H, t, J-1 Hz)], un protó glucosaanomèric 0 4,54 (1H, d, J= 8 Hz)], un protó rhamnoseanomeric 0 5.00 (1H, br s)], dos protons olefímics [<5 6.34,="" 7.66="" (1h="" each,="" d,="" j="16" hz)]="" and="" aromatic="" protons="" 0="" 6.50—7.46="">

En acetilació, compost I va permetre l'octaacetat (la), l'espectre 】H-NMR va mostrar cinc grups acetoxils alifàtics 0 1,87, 1,95, 2,02 (3H cadascun, s), 2.10x2 (6H, s)] i tres grups acetoxil aromàtics [<5 2.27,="" 2.28,="" 2.31="" (3h="" each,="" s)].="" as="" shown="" in="" table="" i,="" the="" carbon="" nuclear="" magnetic="" resonance="" (13c-nmr)="" spectrum="" of="" i="" was="" almost="" identical="" with="" that="" of="" 2'-acetylacteoside="" (ib)「)except="" for="" the="" signals="" due="" to="" the="" ^-coumaric="" acid="">

En la metanolisi de I amb clorur d'acetil en metanol, metil p-coumarat, i 3,4-dihidroxifenetil alcohol es van detectar en cromatografia de capa prima (TLC) i cromatografia líquida d'alt rendiment (HPLC).

Hidròlisi àcida de I amb un 10% d'àcid sulfúric que proporciona glucosa i rhamnosa en una proporció de l'1 a l'1.

A partir dels resultats anteriors, l'estructura del tubuloside E (I) es va establir com 2-(3,4-dihidroxi fenil)ethy 1 O-a-L- rhamnopyranosyl-( 1 -^3)-2-(?-acetil-4-O-/>-coumaroyl-^- D-glucopyranoside.

El compost III va ser aïllat com una pols amorfa, [a]D — 56.4° (MeOH). La hidròlisi enzimàtica de III va permetre un aglycone (Illb) com a pols amorfa, [0]270 —11300, [a]D —31,6° (MeOH), i glucosa. Els compostos Illb i III van ser identificats com alcohol deshidrodiconiferil3,4) i els seus espectres 4-O-#-D-glucopyranoside,3,4)respectivament, en comparació amb mostres autèntiques (TR,】H- i 13C-RMN).

El compost II va ser aïllat com una pols amorfa, [a]D 一 7,4° (MeOH), l'espectre IR del qual va suggerir la presència d'un grup hidroxil (3430 cm-1) i un anell aromàtic (1614.1522,1502 cm T). L'H-MICR de II va mostrar senyals a causa de dos grups metoxils aromàtics 0 3,74, 3.80 (3H cadascun, s)], un protó benzílic 0 5,45 (1H, d, J =6Hz)], dos protons olefímics trans 0 6,17 (1H, dt, J= 16, 7 Hz), d 6,58 (1H, d, J= 16 Hz)] i cinc protons aromàtics 0 6,7一7.1 (5H, m)]. En acetilació, el compost II va permetre l'hexaacetat (Ila), l'espectre H-NMR del qual mostrava cinc senyals d'acetil alifàtic 0 2.01, 2.03, 2.09, 2.06 (3H, 3H, 3H, 6H)]. La hidròlisi enzimàtica de II va permetre l'aglycone (lib) i la glucosa. La lib composta va ser aïllada com una pols amorfa, [a]D + 34.8° (MeOH), els espectres IR, iH- i 13C-NMR eren gairebé idèntics als d'Illb, excepte els valors [a]D i l'espectre de dicroisme circular (CD).

La configuració absoluta de la lib es va dilucidar en comparació del seu espectre de CD amb el d'Illb i III, l'estereoquímica del qual es va confirmar en dades publicades.4) L'espectre de CD de lib va mostrar A&14100 (270) i +15200 (283) com a màxims positius, d'altra banda, el d'Illb va mostrar A&-11300 (270) i -10990 (283) com a màxims negatius. Aquests fets suggereixen que lib i Illb són enantiòmers l'un de l'altre. L'estereoquímica de la lib ha de ser la que es mostra a la carta 1.

Així, es va establir que el compost II era monoglucosil d'alcohol deshidrodiconiferil. La posició de la glucosa

respectivament. Els canvis dels carbonis corresponents en anar a II des de lib van ser de —4,4 i +7,3 ppm, la qual cosa indicava que un moiety de glucosil en II estava vinculat al grup hidroxil a L'àtom C-y'.5)

A partir dels resultats anteriors, el compost II es va establir com alcohol deshidrodiconiferil i'-O-^-D-glucopiseranoside.

Els compostos IV i V es van aïllar com una pols amorfa (IV, C29H36O14 • 5/2H2O; V, C29H36O14- 1/2H2O). Els espectres de l'IR suggereixen la presència de grups hidroxil (3400cm7), un doble enllaç (1634cm-1) i anells aromàtics (1606 i 1518cm-1). En acetilació, els compostos IV i V van permetre els octaacetats (IVa, Va), els espectres 1H-NMR mostraven cinc acetoxil alifàtics i tres senyals aromàtics d'acetoxil, respectivament. Els compostos IVa i Va van ser identificats com a xeringalida A 3'-a-L-rhamnopyranoside octacetat i isosyringalide 3'-a-L-rhamnopyranoside octacetat, respectivament per comparació de (以 IR i 】H-NMR) amb mostres autèntiques.6) L'espectre 'H- i 13C-2N de IV i V suportaven aquestes estructures (vegeu Experimental). Els compostos VI-XIII van ser identificats com (+ xeringues- esinol O-少-D-glucopyranoside (VI),2c) (+ )-pinoresinol O- jS-D-glucopyranoside (VII),7) liriodendrina (VIII),2Z,) 6-de- Oxycatalpol (IX),2c) àcid 8-epilogànic (X),2fl) 20-hidro- xiecdysona (XI),8) 8-hidroxigeraniol 1-0-D-glucopirrano- costat (XII)i xeringina (XIII),2d) respectivament, en comparació amb mostres autèntiques

Experimental

Els punts de fusió es van determinar en un aparell de micro-punt de fusió de Mitamura i no es van corregir. Les rotacions òptiques es van mesurar amb un polarímetre digital JASCO DIP-140. Els espectres de l'IR es van registrar amb un espectrofotòmetre Hitachi 279-30 i espectres ultraviolats (UV) amb un espectrofotòmetre Hitachi 200-20. Els espectres de CD van ser gravats amb un espectrofotòmetre de CD JASCO J-20A i espectres de masses (MS) amb un JEOL JMS-100. Els espectres H-NMR i 13C-NMR es van registrar amb una màquina JEOL FX-90Q (89,55 i 22,5 MHz, respectivament).

Els canvis químics es donen en l'escala d (ppm) amb tetrametilsilà (TMS) com a estàndard intern. Les abreviatures utilitzades per a les dades de ressonància magnètica nuclear (MNM) són les següents; s, singlet; d, doblet; t, triplet; q, quartet; br, ample. La cromatografia de gasos (GC) es va executar en un aparell Shimadzu GC-4CM amb un detector d'ionització de flama. HPLC es va realitzar en una màquina Hitachi 655A-11. El gel de sílice (gel wako C-300) es va utilitzar per a la cromatografia de columnes. Es van utilitzar plaques precoses de gel de sílice 60 F254 (Merck) per a TLC i la detecció es va dur a terme ruixant un 10% H2SO4 seguit de calefacció.

Aïllament

Plantes senceres decistanche tubulosa(7 kg), recollits al desembre de 1986, a Karachi, Pakistan, van ser extrets amb MeOH (20 1 x 2) sota reflux. L'extracte es concentrava sota pressió reduïda i el residu es suspenia en aigua. Aquesta suspensió es va extreure amb EtOAc saturat d'aigua. La capa d'aigua va ser sotmesa a una columna Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.) i es va rentar amb H2O, i després es va elutar amb MeOH. L'eluat MeOH (140 g) va ser cromatògraf en una columna de poliamida C-200 (Wako Pure Chemical) utilitzant H2O i després MeOH per donar dues fraccions (fracció 1, eluat H2O; fracció 2, eluat MeOH). La fracció 1 es va concentrar per donar un residu. El residu va ser cromatògraf en una columna de gel de sílice utilitzant CHCl3-MeOH-H2O repetidament. Després de cromatografia repetida d'HPLC (columna, Develosil ODS-10, 20 x 250 mm; dissolvent; H2O-CH3CN o H2O-MeOH), 10 compostos van ser aïllats [II (45mg), III (40mg), VI (35mg), VII (43mg), VIII (12mg), IX (8mg), X (10mg), XI (20mg), XII (10mg) i XIII (3.6mg)]. La fracció 2 es va tractar de la mateixa manera que la fracció 1 i va donar compostos I (150 mg), IV (10 mg) i V (lOmg).

Tubuloside E (I)

Pols amorfa, [a]p3 —134,0° (c= 1,5, MeOH). Anal. Calcd per C31H38O15 -3/2H2O: C, 54.98; H, 6.10. Trobat: C, 55.01; H, 5.98. IR cm-1: 3430,1732, 1634, 1608,1518. ]H・NMR (MeOH-4) 3: 1.07 (3H, d, J =6Hz, CH3 de rhamnose), 1.98 (3H, s, OAc), 2.72 (2H, t, J = 7Hz, Ar-CH2), ~4.54 (1H, d, J =8Hz, H-l de glucosa), 5,00 (1H, brs, H-l de rhamnosa), 6,34 (1H, d, J= 16Hz, Ar-CH = CH-), 6,5一6.8 (3H, aromàtic H), 6.80 (2H, d, J-9Hz, H-3; H-5'), 7.46 (2H, d, J = 9Hz, H-2; H-6Z), 7.66 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH = CH-). 13C-2M: Taula L

Dehidrodiconiferil Alcohol y^-O-^-D-GIucopyranoside (II)

Pols amorfa, [a]^5 —7,4° (c= 1,6, MeOH). IR cm"1: 3430, 1614, 1522, 1502. UV h nm: 227 (sh), 280. H・NMR (DMSO-rf6) J: 3.74, 3.80 (3H cadascun, s, OCH3), 5.45 (1H, d,丿=6Hz, H-a), 6.17 (1H, dt,丿=16, 7Hz, H-#), 6.58 (1H, d〃= 16Hz; H-az), 6.7-7.1 (5H, m, aromàtic H). 13C-1R: Taula I.

Alcohol deshidrodiconiferil 4-O-j8-D-Glucopiseranoside (III)

Pols amorfa, [a]^5 -56,4。 (c= 1.1, MeOH). IR cm-1: 3400, 1604, 1566, 1502. UV 11 nm; 222, 277. XH-NMR (DMSO-(76) 6: 3.76, 3.82 (3H cadascun, s, OCH3), 5.52 (1H, d, J-7 Hz, H-a), 6.18 (1H, dt, J =16, 7 Hz, H-^), 6.49 (1H, d,<7=16 hz,="" h-"),="" 6.7—7.2="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="">

Xeringalida A 3'-(x-L-Rhamnopyranoside (IV)

Pols amorfa, Anal. Calcd per C29H36O14 • 5/2H2O: C, 56.11; H, 5.94. Trobat: C, 56.40; H, 6.04. IR cm—% 3400, 1606, 1518. 】H・NMR (MeOH-J4) d: 1.15 (3H, d, J-6 Hz, CH3 de rhamnose), 2.90 (2H, t, J-7 Hz, Ar-CH2-), 4.46 (1H, d, J =8Hz, H-l de glucosa), 5.27 (1H, brs, H-l de rhamnose), 6.35 (1H, d, J-16Hz, Ar-CH = CH-), 6.6-7.3 (3H, aromàtic H), 7.68 (1H, d, J = 16Hz, Ar-CH = CH-). 13C-NIM (CD3OD) 8: 130,6 (C-l), 116,1 (C-2), 130,8 (C-3, 156,6 (C-4), 116,1 (C-6), 72,1 (C-a, rham-2, 3), 36,2 (C-8), 127,6 (C-r), 114,6 (C2), 149,6 (C・3'),146,6 (C-4'),116,4 (C-5'), 123,61 (C-6'),168,2 (C・a'),115,2 (C书),147,0 104,0 (glu-1), 76,0

(glu-2), 81,5(glu-3), 70,3 (glu-4), 75,9 (glu-5), 62,3 (glu-6), 102,8 (rham-1), 73,7 (rham-4), 70,5 (rham-5), 18,3 (rham-6).

Isosyringalide S^a-L-Rhamnopyranoside (V)

Pols amorfa, Anal. Calcd per C29H36O14-1/2H2O: C, 56.31; H, 5.96. Trobat; C, 56.40; H, 6.04. IR 唸cm-1: 3420, 1608, 1518. XH-NMR (MeOH-J4) d: 1.09 (3H, d,丿=6Hz, CH3 de rhamnose), 2.80 (2H, t, J-6 Hz, Ar-CH2-), 4.40 (1H, d, J=8Hz, H-l de glucosa), 5.23 (1H, br s, H-l de rhamnose), 6.37 (1H, d, J-18Hz, AsCH = C旦'一),6.6—7.2 (3H, aromàtic H), 7.71 (1H, d, 丿=18Hz, Ar-CH = CH-y 13C-NMR (CD3OD) S: 131.4 (C-l), 116.3 (C-2), 144,5 (C-3X 146,0 (C-4), 117,0 (C-5), 121,2 (C-6), 72,2 (C-a), 36,5 (C/), 127,1 (C-r), 116,8 (C-2\ 69, 131,2 (C-3\ 5'),161,2 (C-4'), 168,2 (CH), 114,7 (C-^), 147,5 (C-y), 104,1 (glu-1), 76,1 (glu-2), 81,5 (glu-3),

70.2 (glu-4), 75.9 (glu-5), 62.3 (glu-6), 102.8 (rham-1), 72.1 (rham-2, 3), 73.7 (rham-4), 70.6 (rham-5), 18.4 (rham-6).

(+ )-Syringaresinol O-j?-D-Glucopyranoside (VI)

Pols amorfa, [a]g5 —14.4。 (c = 0,1, MeOH). Anal. Calcd per C28H36O13: C, 57.93; H, 6.25. Trobat: C, 58.01; H, 6.26. IRv^cm-1: 3430, 1600, 1518. 】H・MN (DMSO"6)。 : 3.78 (12H, s? OCH3 x 4), 6,60,6,66 (2H cadascuna, s, aromàtica H).

(+ )-Pinoresinol O-^-D-Glucopyranoside (VII)

Pols amorfa, [a]^5 +38,9° (c = 0,6, MeOH). Anal. Calcd per C26H32O11 T/2H2O: C, 58.97; H, 6.28. Trobat: 58.94; H, 6.29. IR cm-1: 3425, 1606, 1516. 】H-NMR (C5D5N) W 3.77, 3.80 (3H cadascun, s, OCH3), 6.9-7.7 (6H, m, aromàtic H).

Liriodendron (VIII)

Agulles incolores (MeOH), mp 255一257 °C, [a]p5 -9.2° (c = L3, piridina). IR cm-1: 3400, 1598, 1510. XH-NMR (DMSO/6)<5: 3.78="" (12h,="" s,="" och3x4),="" 6.67="" (4h,="" s,="" aromatic="">

6-Desoxicatalpol (IX)

Agulles incolores (MeOH), mp 204-206 °C, [a]p5 -50.1° (c = 0.7, MeOH). Anal, Calcd per C15H22O9: C, 52.02; H, 6.40. Trobat: C, 52.12; H, 6.41. IR 唸cm-1: 3400, 1658. 】H・MN (D2O) 3:

l. 3-1.9 (1H, m, H-6), 2.1-2.7 (3H, m, H-5, H-6, H-9), 3.65 (1H, s-like, H-7), 3.90, 4.35 (2H, ABsystem, J = 13Hz, H-10), 4.92 (1H, d, J = 7 Hz, Aromèric H), 5.10 (1H, dd, J = 6, 4Hz, H-4), 5.12 (1H, d, J-10Hz, H-l), 6.38 (1H, dd, 1Hz, H-3).

8-Àcid epilogànic (X) Agulles incolores (MeOH), mp 147一149 °C, [a]p5 — 135.0° (c = 1.0, piridina). Anal. Calcd per C16H24O10 H2O: C, 48.73; H, 6.65. Trobat: C, 48.60; H, 6.70. IR v;cm-1: 3400, 1680, 1640, 1430. 】H・MR (C5D5N)<5: 1.18="" (3h,="" d,="" j="7Hz," ch3),="" 2.2—2.5="">

m, H-6), 2.60 (1H, m, H-8), 3.08 (1H, dt, J =3, 8.5Hz, H-9), 3.58 (1H, m, H-5), 5.40 (1H, d, J = 7.5Hz, amerèric H), 5.91 (1H, d〃=3Hz, H-l), 7.92 (1H, s, H-3).

20-Hidroxiecdysona (XI)

Sòlid cristal·lí, mp 241一242 °C, [a]p5 + 70.0° (c= LI, MeOH). Anal. Calcd per C27H44O7: C, 67.47; H, 9.23. Trobat: C, 67.28; H, 9.18. IR cm-1: 3440, 1646. XH-NMR (C5D5N) 1.06 (3H, s, H-19), 1.20 (3H, s, H-18), 1.36 (6H, s, H-26, H-27)? 1.58 (3H, s, H-21), 6.24 (lH,d, J = 2Hz, H-7). 13C-1R (C5D5N): 38.0 (C-l),

68.2 (C-2, C-3), 32,5 (C・4), 51,5 (C-5), 203,7 (C-6), 121,8 (C-7), 166,3 (C-8), 34,6 (C-9), 38,8 (C-10), 21,3 (C-ll), 31,9 (C-12), 48,2 (C-13), 84,4 (C-1 4), 32,1 (C-15), 21,6 (C-16), 50,2 (C-17), 18,0 (C-18), 24,6 (C-19), 77,0 (C-20), 21,8 (C-21), 77,7 (C-22), 27,6 (C-23), 42,7 (C-24), 69,8 (C-25), 30,1 (C-26, 27).

8-Hidroxygeraniol 1-^-D-GIucopyranoside (XII)

Agulles incolores (MeOH), mp 58—60°C, [a]^5 —40.1。 (c = L2, MeOH). Anal. Calcd per C16H28O71/2H2O: C, 56.29; H, 8.56. Trobat: C, 56.40; H, 8.50. IR cm"1: 3350, 1670, 1446. XH-NMR (C5D5N)<5: 1.72,="" 1.59="" (3h="" each,="" s,="" ch3),="" 2.04="" (4h,="" brm,="" h-4,="" h-5),="" 4.80="" (1h,="" d,="" j="7.5Hz," anomeric="" h),="" 5.56="" (2h,="" brt,="" j="7Hz,">

Xeringina (XIII)

Agulles incolores (MeOH), mp 188一189 °C, [a]^5 — 15.3° (c = 0.4, MeOH). Anal. Calcd per C17H24O9: C, 55.13; H, 6.53. Trobat: C, 54.83; H, 6.50. IR cm-1: 3400, 1592, 1514. 'H-NMR (DMSO/6)W 3.78 (6H, s, OCH3 x 2), 6.3—6.5 (2H, m, —CH = CH),6.72 (2H, s, aromàtic H).

L'acetilació del compost I (50 mg) es va dissoldre en piridina (l ml) i anhídrid acètic (1 ml) i es va deixar a temperatura ambient durant la nit. La barreja de reacció es va abocar a l'aigua gelada i després es va extreure amb EtOAc. L'extracte d'EtOAc es va concentrar en vacuo i el residu es va cromatitzar en una columna de gel de sílice utilitzant benzè-acetona (5:1) per donar l'octacetat (la) (35mg). IR cm"1: 1760, 1638, 1604, 1508. iH-NMR(CDC13)(5: 1.02 (3H, d, J = 6Hz, CH3 de rhamnose), 1.87, 1.95, 2.02 (3H cadascun, s, OAc), 2.10 (6H, s, OAc x 2), 2.27, 2.28, 2.31 (3H cadascun, s, Ar-OAc), 2.90 (2.90 (2H, t, J = 7Hz, Ar-CH2-), 6.38 (1H, d, J = 16Hz, AR ~ CH = CH-), 6.80-7.15 (3H, m, aromàtic H), 7.24 (2H, d, J-9 Hz, H-3\ H・5'), 7.55 (2H, d,丿=9Hz, H-2, H-6), 7.72 (1H, d, J =16Hz, Ar-CH = CH-).

Acetilació de II i III

Els compostos II i III (20 mg cadascun) van ser acetilats de la mateixa manera que es descriu per al compost I i van donar els hexaacetats [Ila (12mg), Illa (15mg)]. Ila: IR 唸顋 cm-1: 1754, 1608, 1506. 】H・MR (CDC13) 5: 2.01, 2.03, 2.09 (3H cadascun, s, OAc), 2.06 (6H, s, OAc x 2), 2.30 (3H, s, OAc), 3.84 (3.95 (3H cadascun, s, OCH3), 5.54 (1H, d,丿=6Hz, H-a), 6.05 (1H5 dt, J = 16, 7Hz, H-^), 6.53 (1H, d, «/= 16Hz, H-a'), 6.8一7.1 (5H, m, aromàtic H). Illa: IR v^cm 1: 1760, 1604, 1516. 】H-NMR (CDC13)<5: 2.05="" (9h,="" s,="" oac="" x="" 3),="" 2.08="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.11="" (3h,="" s,="" oac),="" 3.80,="" 3.92="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 5.51="" (1h,="" d,="" j="7Hz," h-a),="" 6.14="" (1h,="" dt,="" j="16," 7hz,="" h-#),="" 6.62="" (1h,="" d,丿="16Hz,">

(5H, m, aromàtic H).

Acetilació de IV i V

Els compostos IV i V van ser acetilats de la mateixa manera que es descriu per al compost I i van donar els octaacetats [IVa, Va]. IVa: IR 唸児 cmT: 1754, 1636, 1514. 】H・MR (CDC,) W 1.03 (3H? d, J = 6Hz, CH3 de rhamnose), 1.87, 1.94, 1.99 (3H cadascun, s, OAc), 2.09 (6H, s, OAcx2), 2.28 (6H, s, OAcx2), 2.30 (3H, s, OAc), 2.86 (2H, t, J = 6.6Hz, Ar ■ -CH?—), 3.67 (2H, t, J = 7.2Hz Ar-CH2 ~ CH2-), 6.35 (1H, d, J = 16Hz, AsCH = CU-), 6.87-7.35 (3H, m, Ar-7.09 (4H, q, J = 8.6Hz, A2 / B2 / tipus), 7.65 (1H, d, J = 16Hz, Ar CH = CH ). Va: IR cm-1: 1750, 1636, 1608, 1514. ^-NMR (CDC13) 1.03 (3H, d,<7= 6="" hz,="" ch3="" for="" rhamnose),="" 1.87,="" 1.94,="" 2.02="" (3h="" each,="" s,="" oac),="" 2.09="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.28="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.31="" (3h,="" s,="" oac),="" 2.86="" (2h,="" t,="" j="6.6" hz,="" ar-ch2-),="" 3.73="" (2h,="" t,=""><7=6.6 hz,="" ar="" ch2-ch2-),="" 6.34="" (lh,d,="" j="16" hz,="" ar—ch="" —="" ch—),="" 6.78—7.20="" (3h,="" m,="" ar—h),="" 7.31="" (4h,="" q,=""><7=8.5>

A2zB/tipus), 7.71 (1H, d, «/=16Hz, Ar-CH = CH ).

Metanoli de I

Compost I (ca. 1 mg) es va refluxar amb metanol 5% CH3COC1 (2 ml) durant 30 min, i després el reactiu es va evaporar en vacuo. La presència de metil p-coumarat i 3,4-alcohol dihidroxifene en el residu va ser detectat per TLC [CHCl3-MeOH (10:1)] i HPLC [columna, Develosil ODS-7 (4.6 x 250 mm); solvent, 55% MeOH; detector (UV), 220 nm; cabal, 1.0ml/min]. Metil p-coumarat; Rf 0.82, ; R (min) 8.8, 3,4-alcohol dihidroxifenetil;母0.31, tR (min) 3.2.

Hidròlisi àcida de I A

solució del compost I (2 mg) en 10% H2SO4 (1 ml) es va escalfar en un bany d'aigua bullint durant 30 min. La solució es va passar a través d'una columna d'Amberlite IR-45 i es va concentrar per donar un residu, que es va reduir amb borohidrur de sodi (ca. 3 mg) durant 1 h. La barreja de reacció es va passar a través d'una columna amberita IR-120 i es va concentrar a la sequedat. L'àcid bòric es va eliminar per destil·lació amb MeOH i el residu va ser acetilat amb anhídrid acètic (1 gota) i piridina (1 gota) a 100 °C durant 1 h. Els reactius es van evaporar en vacuo. L'acetat de glucitol i l'acetat de rhamnitol es van detectar en una proporció d'1 a 1 del compost I per GC. Estat: columna, 1,5% OV-17, 3 mm x 1,5 m; columna temp., 180 °C; gas portador, N2 (30ml/min). tR (min): 2.0 (acetat de rhamnitol), 5.5 (acetat de glucitol).

Hidròlisi enzimàtica de II i III Compound II

(13 mg) o III (40 mg) es va hidrolitzar amb cel·lulosa (40 mg) en aigua (1 ml) durant 2h a 37 °C. La barreja de reacció es va extreure amb EtOAc. L'extracte EtOAc es va concentrar en vacuo per donar el residu, que va ser cromatògraf a l'HPLC [columna, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm); solvent. II: H2O-CH3CN (77.5:22.5); III: H2O-CH3CN (80:20); detector (UV), 205 nm; cabal, 6,0 ml/min] per donar lib (3,3 mg), Illb (5,7 mg). lib: [a]^5 + 34,8° (c = 0,3, MeOH). CD (c = 3.3mg / 10ml, MeOH) [0]25 (nm): 1740 (330), 15200 (283), 14100 (270), 0 (247), - 16700 (232). IR 唸E; cm"1: 3380, 1606, 1520, 1500. UV nm: 276. MS m/z (%): 358 (M + , 53), 340 (M+ -H2O, 100), 338 (58), 325 (47), 310 (23), 162 (41), 151 (36), 137 (59). XH-NMR (acetona-J6)<5: 3.55="" (1h,="" brt,=""><7=6hz, h-g),="" 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 4.19="" (2h,="" brd,="" j-5hz,="" h-yz),="" 5.56="" (1h,="" d,="" j="6," 5="" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,=""><7=16, 5="" hz,="" h-#),="" 6.56="" (1h,="" brd,="" j="16Hz," hh),="" 6.7—7.1="" (5h,="" m,="" aromatich).="" 13c-nmr:="" tablel.iiib:="" [a]-31.6°="" (c="0.6," meoh).="" cd="" (c="2.28mg/lOml," meoh)="" [0]25="" (nm):="" 2200="" (330),="" 0="" (310),="" -10990="" (283),="" -11300="" (270),="" 0="" (242),="" 5650="" (232).="" 0-nmr="" (acetone-j6)=""><5: 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3="" x="" 2),="" 4.19="" (2h;="" brd,="" j="5Hz," h”')，5.56="" (1h,="" d,丿="6.5" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,丿="16," 5="" hz,="" h・#),="" 6.52="" (1h,="" d,="" j="16" hz,="" h-az),="" 6.7一7.1="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="" i.="" the="" ir="" and="" uv="" spectra="" were="" similar="" with="" that="" of="">

ReconeixementEstem agraïts al professor A. Ueno i al Dr. T. Miyase, De la Universitat de Shizuoka, per les mesures dels espectres de RMN i CD, i pels seus valuosos suggeriments, i al Dr. M. Kikuchi, Tohoku College of Pharmacy, per proporcionar mostres autèntiques.

Referències i notes

1) H. Kobayashi, H. Oguchi, N. Takizawa, T. Miyase, A. Ueno, K. Usmanghani, andM. Ahmad, Chem. Pharm. Bull., 35.3309 (1987).

2) H. Kobayashi i J. Komatsu, Yakugaku Zasshi, 103, 508 (1983); b) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase, i S. Fukushima, Chem. Pharm, Bull., 33, 1452 (1985); c) Idem, ibid., 33, 3645 (1985); d) H. Karasawa, H. Kobayashi, N. Takizawa, T. Miyase, i S. Fukushima, Yakugaku Zasshi. 106, 721 (1986).

3) H. D. Ludemann i H. Nimz, Die Makromolekulare Chemie., 175, 2393 (1974).

4) A) H. Achenbach, J. Grob, X. A. Domínguez, G. Cano, J. V. Star, L. C. Brussolo, G. Muñoz, F. Salgado, i L. López, Fitoquímica. 26, 1159 (1987); b) A. N. Binns, R. N. Chen, H. N. Wood, i D. G. Lynn, Proc. Natl. Acad. Sci. The U.S.A., 84, 980 (1987); c) D. G. Lynn, R. H. Chen, K. S. Manning, i H. N. Wood, ibid., 84, 615 (1987).

5) T. Deyama, T. Ikawa, S. Kitagawa, i S. Nishibe, Chem. Pharm. Bull., 35, 1803 (1987).

6) M. Kikuchi, Y. Yamauchi, i F. Tanabe, Yakugaku Zasshi, 107, 350 (1987).

7) M. Chiba, S. Hisada, S. Nishibe, i H. Thieme, Fitoquímica, 19, 335 (1980).

8) H. Hikino, Y. Hikino, Fortschritted. Chem. Org. Naturst., 28, 256 (1970); b) R. W. Miller, J. Clardy, J. Kozlowski, K. L. Mikolajczak, R. D. Plattner, R. G. Powell, C. R. Smith, D. Weisleder i Q.-T. Zheng, Planta Medica, 1985, 40.