Saps que l'estrès oxidatiu pot causar danys renals?

Per a més informació:ali.ma@wecistanche.com

Part Ⅰ: l'estrès oxidatiu després d'una lesió renal aguda provoca la interrupció dels cilis de les cèl·lules pulmonars i el seu alliberament al líquid de rentat broncoalveolar i lesions pulmonars, que s'accentuen per la supressió d'Idh2.

Yong Kwon Hana, Ji Su Kim, Gwan Beom Leea, Jae Hang Lim, Kwon Moo Park

1. Introducció

Lesió renal aguda(AKI) es produeix en diversos entorns clínics, com ara xoc, sèpsia, trasplantament d'òrgans i cirurgia vascular [1-3]. AKI (Lesió renal aguda) provoca danys a òrgans llunyans, inclosos els pulmons, el fetge, el cor i el cervell [4-9]. Aquesta lesió d'òrgans distants després d'AKI (Lesió renal aguda)es reconeix com un factor de risc important per als resultats pobres [5,9]; per tant, el tractament adequat de la lesió d'òrgans distants és important per millorar el resultat dels pacients amb AKI (Lesió renal aguda). No obstant això, els mecanismes precisos implicats en AKI (Lesió renal aguda)- Les lesions d'òrgans distants relacionades queden per definir.

Feu clic a Cistanche per a la malaltia renal aguda i els efectes secundaris del cistanche

Els cilis són projeccions derivades de centríols de la superfície cel·lular que contenen un citoesquelet (axonema) basat en microtúbuls, envoltat per una membrana ciliar. Els cilis es caracteritzen per la seva estructura i motilitat i es defineixen com a cilis immòtils (cilis primaris) o cilis mòbils. Els cilis primaris són orgànuls solitaris, immòbils, basats en microtúbuls 9 més 0 com a antenes axonèmiques que sobresurten de la membrana cel·lular i transdueixen senyals extracel·lulars a la cèl·lula mitjançant la coordinació de diverses vies de senyalització [10-12 ]. Els cilis mòbils, amb una estructura axonèmica múltiple de 9 més 2, es troben principalment a les vies respiratòries i l'oviducte i funcionen per transportar materials [10,13]. L'evidència creixent ha demostrat que els defectes en la formació i la funció dels cilis s'associen amb diverses malalties humanes, com arapoliquístic malalties renalsi discinesia ciliar primària [14-20]. A més, estudis recents han demostrat que la interrupció dels cilis es produeix sota la influència de condicions patològiques i que aquesta interrupció està implicada en la mediació de la lesió i la disfunció cel·lular [15-20].

L'acumulació de proves ho ha demostratronyóisquèmia-reperfusió (IR), una causa d'IRA (Lesió renal aguda), indueix lesions d'òrgans distants [6-8,21]. La lesió d'òrgans a distància s'associa amb respostes inflamatòries, canvis en les vies de senyalització associades amb la mort i la supervivència cel·lulars, iestrès oxidatiu [8,22-24]. Estrès oxidatiuestà directament relacionat amb la disfunció dels components cel·lulars, que pot provocar trastorns orgànics, i es reconeix com una de les principals causes deronyóLesió d'òrgans distants induïda per IR [21,25,26]. Ho hem demostrat anteriormentronyóAKI induïda per IR i cisplatí (Lesió renal aguda)altera la longitud dels cilis primarisronyócèl·lules epitelials mitjançant el muntatge, el desmuntatge i la interrupció (deciliació, despreniment o fragmentació) dels cilis [17-19]. Aquests processos estan associats amb espècies reactives d'oxigen (ROS) iestrès oxidatiu. depenent de la concentració de peròxid d'hidrogen i el grau deoxidatiuestrès; La concentració baixa d'H2O2 indueix l'allargament de la longitud dels cilis primaris, mentre que la concentració alta de H, O indueix la interrupció [17-20]. A més, vam trobar que els cilis primaris alterats dels feritsronyóles cèl·lules epitelials tubulars s'excreten a l'orina i que aquesta interrupció i excreció es poden prevenir mitjançant un tractament antioxidant [17-20]. Rodríguez-Ribera et al. també va informar que compostos carbonílics reactius com el malondialdehid, un producte deestrès oxidatiu, indueixen la pèrdua de cilis primaris en humansronyócèl·lules del túbul proximal [27]. Per tant, vam plantejar la hipòtesi que AKI (Lesió renal aguda)-La lesió pulmonar aguda induïda (ALD) i la lesió cel·lular s'associen amb cilis i cèl·lules pulmonarsoxidatiuestrèsi que la prevenció deoxidatiuestrèsredueix AKI (Lesió renal aguda)- lesió pulmonar induïda. En el present estudi, hem investigat sironyóAKI induïda per IR (Lesió renal aguda)provoca la interrupció dels cilis i les cèl·lules dels pulmons i, si és així, si aquestes interrupcions estan associades amboxidatiuB. Amb aquesta finalitat, hem utilitzat enfocaments farmacològics i genètics, inclòs l'ús de ratolins suprimits amb la isocitrat deshidrogenasa 2(Idh2). IDH2 és un enzim localitzat als mitocondris [28]. En els mitocondris, l'IDH2 catalitza la descarboxilació oxidativa d'isocitrat a -cetoglutarat, acompanyada de la reducció de NADP a NADPH, que és un factor crític en el sistema antioxidant de tioredoxina i glutatió [29-32]. A més, vam investigar si la presència de proteïnes i fragments ciliars al líquid de rentat broncoalveolar (BALF) és indicativa de lesió pulmonar. Informem aquí, per primera vegada, d'aquest AKI (Lesió renal aguda)provoca la interrupció dels cilis de les cèl·lules pulmonars i el seu alliberament al BALF, així com lesions pulmonars, que s'agreugen per la supressió d'IDH2.

L'estrès oxidatiu provoca lesions renals

2. Materials i mètodes

Preparació d'animals.

Tots els experiments es van realitzar amb 8-10-ratolins mascles C57BL/6 d'una setmana d'edat (Koatech, Pyeongtaek, Gyeonggi-do, Corea), ratolins femelles suprimits amb el gen Idh2 (Idh2~/) i de tipus salvatge (dh2 plus / )ratolins [28]. Als ratolins se'ls va permetre l'accés lliure a l'aigua i al menjar estàndard del ratolí. L'estudi animal va ser aprovat pel Comitè Institucional de Cura i Ús d'Animals de la Universitat Nacional de Kyungpook, República de Corea. Per induir isquèmia renal bilateral, laronyonses van exposar a través d'incisions de flanc sota anestesia amb pentobarbital sòdic (60 mg/kg de peso corporal) i després, els pedicles delronyonses van subjectar completament durant 35 min mitjançant pinces de microaneurisme. El mateix procediment, amb exclusió deronyóEl tancament del pedicle, es va realitzar a l'operació simulada. La temperatura corporal es va mantenir a 36,5 graus -37 graus C durant els procediments quirúrgics mitjançant un dispositiu de calefacció controlada per temperatura (FHC, Bowdoin, ME, EUA). Alguns ratolins es van administrar {{4 }}(2,2,6,6-Tetrametilpiperidin-1-ox-il-4-arilamino)-2-clorur d'oxoetil trifenilfosfoni (Mito{--TEMPO,{{14} }},7 mg/kg de peso corporal; Sigma, St. Louis, MO, EUA) 17 i 1 h abans de l'operació (pretractament) o 6 h després de l'operació (posttractament).

Al final dels experiments, el pulmó ironyóEls teixits es van congelar instantàniament en nitrogen líquid o per perfusió fixada amb solució PLP (4 per cent de paraformaldehid, 75 mM L-lisina, 10 mM de periodat de sodi: Sigma) per a estudis bioquímics i histològics, respectivament. Els teixits congelats es van emmagatzemar a -70 graus fins que es va requerir.

Col·lecció de BALF.

El BALF es va recollir després d'eutanasiar els ratolins mitjançant una injecció de sobredosi de pentobarbital sòdic. Les fuites pulmonars es van avaluar determinant la concentració de proteïnes i el nombre de cèl·lules al BALF. Per recollir BALF, el bronqui del pulmó esquerre es va subjectar completament mitjançant pinces de microaneurisma. Es va inserir una agulla a la tràquea i es va injectar lentament 0,8 ml de solució salina tamponada amb fosfat (PBS) als lòbuls del pulmó dret. El BALF es va recollir retraint el pistó de la xeringa una vegada. El nombre total de cèl·lules i la concentració de proteïnes a BALF es van analitzar immediatament mitjançant un hematocitòmetre i un kit d'assaig de BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, EUA), respectivament. BALF es va mantenir a -70 grau fins que es va requerir per a l'anàlisi de Western Blotting.

Ronyófunció. Es va recollir sang dels ratolins mitjançant una xeringa heparinitzada. La concentració de nitrogen ureic en sang (BUN) al plasma es va determinar mitjançant un analitzador químic Vitros 250 (Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ, EUA).

Tinció periòdica d'àcid Schiff (PAS) i hematoxilina i eosina (H&E).

Fixat per PLPronyói els teixits pulmonars es van incrustar en parafina, es van tallar en seccions de 3- μm de gruix mitjançant un micròtom (Leica, Bensheim, Alemanya) i es van muntar sobre portaobjectes de vidre.Ronyói les seccions pulmonars es van tacar amb PAS i H&E. ElronyódanyLa puntuació va ser avaluada cegament pels investigadors, tal com es va descriure anteriorment [3, 19].

Anàlisi Western blot.

El Western blotting es va realitzar tal com es va descriure anteriorment [3]. Els anticossos utilitzats per al western blot van ser els següents: anti-4-hidroxi nominal (4-HNE; Abcam, Cambridge, MA, EUA), anti- -tubulina (Santa Cruz, CA, EUA) , tubulina antiacetilada (tubulina ac- -, Sigma), superòxid dismutasa dependent del manganès (MnSOD; Calbiochem, San Diego, CA, EUA), anticatalasa (Fitzgerald, Concord, MA, EUA) , proteïna 13B semblant al factor anti-ADP-ribosilació (Arl13B, Proteintech, Chicago, IL, EUA), anti-isocitrat deshidrogenasa 2 (IDH2; Santa Cruz), atròfia antiòptica 1 (Opal; BD Bioscience, San Diego, CA). ), anti-fissió 1 (Fis1; Sigma), proteïna 1 relacionada amb anti-dinamina (Drpl; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, EUA) i antigliceraldehid 3-fosfat deshidrogenasa (GAPDH; NOVUS, Littleton, CO, EUA).

Tinció immunofluorescent.

Després de la desparafinització, les seccions es van incubar en PBS que contenia {{0}},2 per cent de Tritó X{-100 (Sigma) durant 1 min i després es van rentar en PBS durant 10 min. Per exposar l'epítop de l'antigen, les seccions es van bullir en tampó de citrat sòdic de 10 mm (pH 6, 0) durant 10 minuts, es van refredar durant 20 minuts i després es van rentar tres vegades amb PBS durant 5 minuts a cada rentat. Les seccions es van bloquejar amb albúmina sèrica bovina al 3% en PBS (tampó de bloqueig) durant 30 min i després es van incubar amb anticossos anti-Arll3b a 4 graus durant la nit. Després del rentat, les seccions es van incubar amb IgG anti-conill de cabra conjugada amb FITC (Vector Laboratories, Burlingame, CA, EUA) durant 60 minuts i després es van rentar 3 vegades amb PBS durant 5 minuts cadascuna. Els nuclis cel·lulars es van tenyir mitjançant 4'-6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; Sigma).

Mesura de superòxid en teixit pulmonar.

Els nivells de superòxid es van mesurar mitjançant dihidroetidi (DHE; Sigma) tal com es va descriure anteriorment 【33,34】. Breument, es va afegir 10 μM de DHE en 1 ml de PBS preescalfat (37 graus) a una placa de pou 96- que contenia 20 ul de lisat de teixit pulmonar. La placa es va llegir cada 10 min durant un total de 30 min a filtres d'excitació/emissió de 530 nm/620 nm.

Mesura de IL-6.

Els nivells d'IL-6 al plasma i BALF es van determinar mitjançant un assaig ELISA mitjançant un kit d'assaig ELISA segons les instruccions del fabricant (BD Bioscience).

Estadístiques.

Totes les dades es van analitzar mitjançant el programari GraphPad Prism 7 (San Diego, CA, EUA). Els resultats s'expressen com a mitjana ± error estàndard de la mitjana (SEM). L'anàlisi estadística es va realitzar mitjançant la prova t de Student i l'anàlisi unidireccional de la variància amb el procediment post hoc de Tukey. Les diferències es van considerar estadísticament significatives quan eren els valors p<>

3. Resultats

1. La IR renal provoca lesions pulmonars.

Com era d'esperar, danys morfològics importants a laronyons(Fig.1A i B) i augments del BUN plasmàtic (Fig.1C) es van observar 4 i 24 h després de 35 min de bilateral.ronyóisquèmia. Al pulmó, es va observar un augment dels neutròfils i l'engrossiment de la paret alveolar 4 i 24 h després.ronyóisquèmia (Fig. 1D). A més, es va observar l'augment de l'expressió del locus complex G6D de l'antigen 6 dels limfòcits (Ly6G, un marcador de monòcits, granulòcits i neutròfils) al teixit pulmonar de manera dependent del temps de reperfusió (Fig. 1E i F). La concentració d'interleucina-6 (IL{-6) al plasma va augmentar desprésronyóIR, màxim a les 4 h després de la isquèmia (Fig. 1G). Les concentracions d'I-6 i de proteïnes, així com el nombre total de cèl·lules a BALF, van augmentar gradualment a les 4 i 24 hores després de la isquèmia renal (Fig. 1H-J). La taxa de supervivència a les 24 h després de 35 minronyóLa IR va ser aproximadament del 92 per cent (dades no mostrades).

QuanronyóEl temps isquèmic es va estendre a 45 min, els augments post-isquèmics de la concentració de BUN al plasma i la concentració total de proteïnes i el nombre de cèl·lules en BALF van ser més grans que els després de 35 min d'isquèmia (Fig. 1K-M). Aquestes dades indiquen que la lesió pulmonar induïda perronyóLa lesió IR depèn del grau deronyólesió.

Fig. 1. Dany histològic i funcional del pulmó després de la IR renal. Els ratolins mascles C57BL/6 van ser sotmesos a 35 (A–M) i 45 (K–M) min d'isquèmia renal bilateral o operació simulada. Ronyó, pulmó, sang i BALF es van recollir 4 i 24 hores després de l'operació. El BALF es va recollir tal com es descriu als Materials i mètodes. (A-J) Els ratolins es van sacrificar 4 o 24 h després de 35 min d'isquèmia. (A, B)Ronyóles seccions (3 μm) es van tacar amb PAS ironyóEs va puntuar dany tubular. (C, K) Les concentracions de BUN es van mesurar al plasma. (D) Les seccions pulmonars (3 μm) es van tacar amb H&E. (E, F) L'expressió de Ly6G al teixit pulmonar es va analitzar mitjançant western blotting. Es va utilitzar GAPDH com a control de càrrega. Les densitats de les bandes es van mesurar mitjançant el programari ImageJ. (G, H) La concentració d'IL-6 es va mesurar en plasma i BALF. (I, J, L, M) La concentració de proteïnes i el nombre total de cèl·lules es van mesurar a BALF. (K-M) Els ratolins es van sacrificar 4 h després de 35 o 45 min d'isquèmia. Els resultats s'expressen com a mitjanes ± SEM (n=3–6). *p < 0.05="" vs.="" farsa.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" h="" després="" d'isquèmia="" o="" isquèmia="" durant="" 35="">

2. Ronyó IRprovoca la interrupció dels cilis de les cèl·lules epitelials pulmonars i aquests fragments s'alliberen al BALF.

Les seccions de teixit pulmonar i les diapositives carregades amb BALF es van immunocolorir amb l'anticòs 13B (Arl13B, un marcador de cilis) semblant al factor de ribosilació anti-ADP. Es van observar senyals positius Arll3B a la part luminal dels alvèols i als bronquíols terminals del pulmó (Fig.2A). Es va observar la pèrdua del senyal positiu Arl13B al pulmó deronyóRatolins sotmesos a IR (Fig.2A). Aquesta pèrdua de senyal positiu Arll13B va augmentar gradualment desprésronyóisquèmia al llarg del temps (Fig. 2A). A BALF, es van observar diverses longituds de partícules positives per Arl13B després de la isquèmia renal i el nombre de partícules positives per Arl13B a ​​BALF va augmentar gradualment amb el temps després de la isquèmia (Fig. 2B i C). L'expressió d'Arl13B, tubulina acetilada (tubulina ac- -, granulòcits i neutròfils) al teixit pulmonar es va observar de manera dependent del temps de reperfusió (Fig. 1E i F). La concentració d'interleucina-6 (IL{-6) al plasma va augmentar desprésronyóIR, màxim a les 4 h després de la isquèmia (Fig. 1G). Les concentracions d'I-6 i de proteïnes, així com el nombre total de cèl·lules a BALF, van augmentar gradualment a les 4 i 24 hores després de la isquèmia renal (Fig. 1H-J). La taxa de supervivència a les 24 h després de 35 min d'IR renal va ser d'aproximadament el 92 per cent (dades no mostrades).

QuanronyóEl temps isquèmic es va estendre a 45 min, els augments post-isquèmics de la concentració de BUN al plasma i la concentració total de proteïnes i el nombre de cèl·lules en BALF van ser més grans que els després de 35 min d'isquèmia (Fig. 1K-M). Aquestes dades indiquen que la lesió pulmonar induïda perronyóLa lesió IR depèn del grau deronyólesió.

Fig. 2. Disrupció dels cilis de cèl·lules pulmonars i els seus fragments i proteïnes alliberades a BALF després de la IR renal.Els ratolins mascles C57BL/6 van ser sotmesos a 35 min d'isquèmia renal bilateral o a una operació simulada. Es van recollir teixits pulmonars i BALF 4 i 24 hores després de l'operació, tal com es descriu a Materials i mètodes. (A) Les seccions de pulmó (5 μm) es van sotmetre a una tinció immunofluorescent mitjançant un anticòs anti-Arl13B; verd indica Arl13B-positiu. La tinció DAPI (4′,6-diamidino-2-fenilindol; blau) es va utilitzar per visualitzar els nuclis de les cèl·lules. Les puntes de fletxa indiquen cilis. (B) BALF (10 ul) es va posar en un portaobjectes de vidre que es va tacar amb immunofluorescent mitjançant un anticòs anti-Arl13B; verd indica Arl13B-positiu (n=3). (C) El nombre de partícules positives per Arl13B es va comptar amb un microscopi de fluorescència (n=3). (D-G) Les expressions d'Arl13B, - -tubulina acetilada (ac- -tub) i -tubulina (-tub) a BALF es van analitzar mitjançant western blotting. Les densitats de les bandes es van mesurar mitjançant el programari ImageJ. Els resultats s'expressen com a mitjanes ± SEM (n=3). *p <0,05 contra="" farsa.="" †p=""><0,05 vs.="" 4="" h="" després="" de="" la="" isquèmia.="" a:="" alvèols,="" tb:="">

3. La IR renal augmenta els nivells de superòxid i estrès oxidatiu tant al teixit pulmonar com al BALF.

RonyóIR va augmentar el nivell de superòxid al teixit pulmonar (Fig.3A), mentre que va reduir l'expressió d'IDH2 (Fig.3B i C), però no MnSOD i catalasa (Fig, 3B.DE). Aquestes troballes indiquen que la lesió pulmonar induïda per IR renal s'associa amb augments dels nivells de ROS iestrès oxidatiuals pulmons. En suport d'això, el nivell d'{0}}hidroxi nominal (4-HNE), un producte de la peroxidació lipídica, al teixit pulmonar va augmentar significativament 4 i 24 h després.ronyóisquèmia(Fig.3F-D). 4-HNE es va observar a gairebé totes les àrees del teixit pulmonar, inclosos els alvèols i els bronquíols (Fig. 3H i D. A més, l'expressió de 8-hidroxi-2'-desoxiguanosina ({{ 7}}OhdG), un conegut marcador d'oxidació de l'ADN com a derivat oxidat de la desoxi-guanosina, va augmentar tant al citosol com als nuclis de les cèl·lules epitelials pulmonars després deronyóisquèmia (Fig. 3J i K. A BALF, l'expressió 4-HNE també va augmentar desprésronyóisquèmiade manera dependent del temps de reperfusió (Fig. 3L, M). A més, quan el temps d'isquèmia renal es va estendre a 45 min, l'augment post-isquèmic de l'expressió 4-HNE als pulmons va ser més gran que després de 35 min deronyóisquèmia (Fig.3N, O). Aquests resultats indiquen que tant l'ADN mitocondrial com l'ADN nuclear estan lesionats oxidativament per l'augment de la formació de ROS i deficiències en els sistemes d'eliminació, cosa que suggereix que el dany als cilis de les cèl·lules epitelials pulmonars està associat ambestrès oxidatiu.

Fig. 3. Estrès oxidatiu en teixit pulmonar després d'IR renal. Els ratolins mascles C57BL/6 van ser sotmesos a 35 (A–O) i 45 (N, O) min d'isquèmia renal bilateral o operació simulada.Pulmó ironyóes van collir 4 i 24 h després de 35 min o 45 min d'isquèmia. (A-M) Els ratolins es van sacrificar 4 o 24 h després de 35 min d'isquèmia. (A) El nivell de superòxid al teixit pulmonar es va mesurar tal com es descriu als Materials i mètodes (n=3-5). (B-E) L'expressió IDH2, catalasa i MnSOD al teixit pulmonar es va analitzar mitjançant western blotting (n {{10}}). Es va utilitzar GAPDH com a control de càrrega. (C–E) Les densitats de les bandes es van mesurar mitjançant el programari ImageJ. (F, G) 4-L'expressió de HNE al pulmó es va analitzar mitjançant western blotting i la densitat de la banda es va mesurar mitjançant ImageJ (n=4). (H–K) Les seccions pulmonars (3 μm) es van tenyir immunohistoquímicament mitjançant anticossos anti{-4-HNE i 8-OHdG i es van tacar amb hematoxilina; marró indica 4-HNE- i 8-OHdG-positiu (n {{2{0}}). (I, K) Es van mesurar les intensitats dels senyals positius 4-HNE i 8-OHdG mitjançant el programa i-Solution (n=3). (L, M) 4- L'expressió HNE a BALF es va analitzar mitjançant western blotting i la densitat de la banda es va mesurar mitjançant ImageJ (n=3). (N, O) Els ratolins es van sacrificar 4 h després de 35 min o 45 min d'isquèmia. 4-L'expressió de HNE al pulmó es va analitzar mitjançant western blotting i la densitat de la banda es va mesurar mitjançant ImageJ (n=3). Els resultats s'expressen com a mitjanes ± SEM (n =3–5). *p < 0,05="" vs.="" simulació.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" h="" després="" de="" la="" isquèmia="" o="" 35="" min="" d'isquèmia.="" (per="" a="" la="" interpretació="" de="" les="" referències="" al="" color="" en="" aquesta="" llegenda="" de="" la="" figura,="" es="" remet="" al="" lector="" a="" la="" versió="" web="" d'aquest="">

A les cèl·lules, mitocondris. un orgànul intracel·lular important productor de ROS normalment pateix fusió i fissió per adaptar-se a condicions fisiològiques i patològiques. El deteriorament d'aquests processos de fusió i fissió pot induir disfunció cel·lular i dany[36]. Estudis anteriors ho han demostratoxidatiuestrèsdeteriora la dinàmica normal de la fusió i la fissió mitocondrials, donant lloc a una disfunció mitocondrial i una lesió cel·lular [32,36-38]. Hem intentat avaluar la dinàmica mitocondrial determinant les expressions de proteïnes que regulen la fissió i la fusió mitocondrials. Les expressions de Fis1 i Drp1, que regulen la fissió mitocondrial, van augmentar significativament als pulmons dels ratolins ambronyóisquèmia(Fig.4A-C). Tanmateix, l'expressió d'OPA1, que regula la fusió mitocondrial, no es va veure alterada significativament per IR renal (Fig. 4A, D). Aquestes dades indiquen que l'equilibri de la fusió i la fissió mitocondrial a les cèl·lules pulmonars es veu alterat com a resultat de l'AKI. (Lesió renal aguda).

Fig. 4. Canvi en la dinàmica mitocondrial del pulmó després de la IR renal. Els ratolins mascles C57BL/6 van ser sotmesos a 35 minuts d'isquèmia renal bilateral o a una operació simulada.Els pulmons es van collir 4 i 24 hores després de la isquèmia. (A-D) Les expressions Drp1, Fis1 i OPA1 als teixits pulmonars es van analitzar mitjançant western blotting. Es va utilitzar GAPDH com a control de càrrega. Les densitats de les bandes es van mesurar mitjançant el programari ImageJ. Els resultats s'expressen com a mitjanes ± SEM (n=4). *p < 0.05="" contra="" farsa.="" †p=""><0,05 vs.="" 4="" h="" després="" de="" la="">

4. El tractament antioxidant específic dels mitocondris redueix la lesió pulmonar induïda per IR renal i la interrupció dels cilis pulmonars.

Per confirmar el paper dels mitocondrialsoxidatiuestrèsactivatronyóLes lesions pulmonars induïdes per IR i la interrupció dels cilis de les cèl·lules epitelials pulmonars, vam provar si el pretractament (Fig. 5A-D o posttractament (Fig. 5J-L) amb Mito-TEMPO, un antioxidant específic de la mitocondria, inhibeix la IR induïda pel ronyó).oxidatiuestrès, producció de I-6 i deciliació als pulmons de ratolins mascles C57BL/6. El pretractament (Fig. 5A-D), però no el posttractament (Fig. 5J-L), amb Mito-TEMPO, va inhibir significativament els augments de les concentracions de BUN i IL-6 al plasma (Fig. 5A i B), ja que així com la concentració d'IL-6, la concentració total de proteïnes i el nombre total de cèl·lules a BALF (Fig, 5C-E). Les expressions d'Arl13B, ac- -tubulina i -tubulina al BALF de ratolins pretractats amb Mito-TEMPO eren inferiors a les dels ratolins tractats amb vehicle (Fig. 5F-I). En aquest estudi, un 6-h després del tractament no va protegir els pulmons contraronyóIR (Fig.5J-L). Aquests resultats indiquen que la producció primerenca de ROS, la seva acumulació ioxidatiuestrèspot contribuir de manera important a l'AKI (Lesió renal aguda)- lesió pulmonar induïda. Els nivells de superòxid i l'expressió de 4-HNE al teixit pulmonar (Fig. 6A-C) i a BALF (Fig. 6D i E) eren menys en ratolins pretractats amb Mito-TEMPO que en ratolins tractats amb vehicles. Aquests resultats ho indiquenronyóLa lesió pulmonar induïda per IR i la deciliació de cèl·lules epitelials pulmonars s'associen amb el mitocondrialoxidatiuestrès.

Fig. 5. Prevenció de la lesió pulmonar induïda per IR renal i la interrupció dels cilis mitjançant Mito-TEMPO, un antioxidant dirigit a mitocondris. Els ratolins mascles C57BL/6 van ser sotmesos a 35 min d'isquèmia renal bilateral.Alguns ratolins es van administrar amb Mito-TEMPO (Mito-T, 0,7 mg/kg de peso corporal, ip) 17 i 1 h abans de la isquèmia, dues vegades, (A–I) o 6 h després de la isquèmia (J– L). El pulmó, el BALF i la sang es van recollir 24 hores després de la isquèmia. (A, J) Es va mesurar la concentració de BUN al plasma. (B, C) Les concentracions d'IL-6 al plasma i BALF es van mesurar mitjançant el kit d'assaig ELISA. (D, E, K, L) Es va mesurar la concentració de proteïnes i el nombre de cèl·lules a BALF. (F–I) Arl13B, {{10}}tubulina acetilada (ac- -tub) i -tubulina (-tub) a BALF es van analitzar mitjançant western blotting. Les densitats de les bandes es van mesurar mitjançant el programari ImageJ. Els resultats s'expressen com a mitjanes ± SEM (n=4). *p < 0,05="" vs.="">

FEU CLIC AQUÍ PER A LA PART Ⅱ