Efectes del tractament amb 2-aminoindan-2-àcid fosfònic sobre l'acumulació de salidròsid i quatre glicòsids feniletanoides en el cultiu cel·lular en suspensió de Cistanche Deserticola

per a més informació:ali.ma@wecistanche.com

Gao Sheng Hu, et al

Resum

L'àcid 2-aminoindan-2-fosfònic (AIP), un inhibidor competitiu específic de la fenilalanina amonía-liasa (PAL) es va aplicar a un cultiu de cèl·lules en suspensió deCistanche deserticola. Els efectes del tractament amb AIP sobre el creixement cel·lular, l'activitat de PAL, el contingut i els rendiments de compost fenòlic total, salidroside i quatreGlicòsids feniletanoides(PheGs) són investigats. Els resultats van demostrar que els tractaments AIP de {{0}},5 i 2,0 lM tenien efectes similars en les mesures investigades en aquest estudi. El tractament amb AIP va donar lloc a una disminució significativa de l'activitat de PAL, el contingut de compostos fenòlics totals i(glicòsids feniletanoides)Contingut de PheG. L'anàlisi de regressió lineal va mostrar que l'activitat de PAL tenia un coeficient de correlació alt amb el contingut total de compostos fenòlics i els quatre(glicòsids feniletanoides)Continguts de PheG. L'àrea total de temps d'activitat PAL sota la corba (AUC) tenia un coeficient de correlació elevat amb el rendiment total de compostos fenòlics i els rendiments de cinc compostos provats en mostres de cèl·lules no tractades. El rendiment total dels compostos fenòlics dóna els rendiments de tres compostos provats, equinacòsid, actòsid i tubulòsid A, però no salidroside i cistanoside A. La diferència podria ser causada pels diferents orígens biosintètics de cadascun dels compostos provats. Aquests resultats demostren el paper important de PAL en la biosíntesi de(glicòsids feniletanoides)PheG en el cultiu de cèl·lules en suspensió deCistanche deserticola.

Paraules clau

Cistanche deserticola, Cultiu cel·lular de suspensió,Glicòsids feniletanoides, 2-Aminoindan-2-àcid fosfònic (AIP), activitat PAL, biosíntesi, salidrosid

Feu clic a Cistanche extracte beneficis i productes Cistanche

Introducció

Cistanche deserticolaYC Ma, una herba medicinal tradicional xinesa, s'ha utilitzat durant segles a la Xina pels seus efectes nutritius. És un propòsit perenne i una herba medicinal parasitària que pertany al gènere Cistanche de la família Orobanchaceae. La planta creix a les zones desèrtiques de l'oest de la Xina i és un paràsit a les arrels de Haloxylosammodendrun.

Estudis d'aïllament de components químics i d'elucidació estructuralCistanche deserticolava començar a la dècada de 1980 (Kobayashi et al. 1984a, b, 1985, 1986; Karasawa et al.1986; Xiong et al. 1996). La demostració deglicòsids feniletanoides(PheGs) com a compostos efectius que protegeixen les cèl·lules neuronals dels danys (Sheng et al. 2002; Puet al. 2003; Geng et al. 2004; Tian i Pu. 2005) causats pels productes químics i l'envelliment, van impulsar l'augment de la demanda del mercat sobre aliments saludables disponibles comercialment. i drogues. A causa de la sobreexplotació, la corrupció de l'hàbitat i el parasitisme complex, els recursos naturals deCistanche deserticolaestan al límit de l'extinció i, l'any 2003, va ser inclòs a la Convenció sobre el comerç internacional d'espècies en perill d'extinció de fauna i flora silvestres (CITES).

Per resoldre els problemes relacionats amb els recursos limitats, es van dur a terme cultius de teixit cel·lular d'aquesta planta medicinal a la Xina. Aquests estudis van investigar els efectes de diversos factors com l'estrès osmòtic (Liu i Cheng 2008), l'alimentació de precursors (Ouyang et al. 2005; Liu et al. 2007), la llum de longitud d'ona variable (Ouyang et al. 2003a), fungalelicitors (Lu i Mei 2003; Cheng et al. 2005, 2006), elicitors andabiòtics (Ouyang et al. 2003b) sobre el creixement cel·lular i l'acumulació de(glicòsids feniletanoides)PheGs. Aquests estudis van proporcionar informació valuosa per a la cultura a gran escala deCistanche deserticola.Com es biosintetitzen aquests compostos a les cèl·lules Cistanche no està clar i s'ha informat de poca informació genètica.

S'ha demostrat en experiments d'alimentació de precursors marcats amb isòtops (Ellis 1983; Saimaru i Orihara 2010) que el grup cafeoil de l'acteòsid es derivava de la L-fenilalanina, mentre que el 3, 4-dihidroxil fenil etanol es derivava de la L-tirosina. Una via biosintètica hipotètica de(glicòsids feniletanoides)PheGs aCistanche deserticolaes va proposar (figura suplementària 1) a partir del coneixement actual de les vies biosintètiques relacionades. L'enzim PAL va catalitzar el primer pas de la fenilalanina al grup cafeoil. Es va demostrar indirectament que PAL era un enzim important en la biosíntesi(glicòsids feniletanoides)PheG per la investigació del tractament d'elicitors aCistanche deserticola(Lu i Mei 2003; Cheng et al. 2005, 2006; Ouyang et al. 2003b), en què el total(glicòsids feniletanoides)L'acumulació de PheGs es va millorar juntament amb l'augment de l'activitat de PAL. El tractament amb elicitor no només millorarà el nivell d'expressió de PAL sinó que també millorarà els nivells d'altres enzims implicats en la via de biosíntesi dels metabòlits secundaris. A causa de les dificultats en l'establiment del sistema de transformació deCistanche deserticola, evidència directa de sobreexpressió PAL activada(glicòsids feniletanoides)No s'ha informat de l'acumulació de PheG. En altres plantes productores(glicòsids feniletanoides)PheG, com les plantes del gènere Echinacea, l'experiment tampoc s'ha dut a terme. Aquí informem dels efectes del tractament amb l'àcid fosfònic 2-aminoindan-2-inhibidor específic de PAL sobre el creixement cel·lular, els compostos fenòlics totals, l'activitat de PAL i l'acumulació de(glicòsids feniletanoides)PheG en cultiu cel·lular en suspensió deCistanche deserticola, en un esforç per avaluar el paper funcional de PAL en la biosíntesi de PheG. Per estudiar la via biosintètica de(glicòsids feniletanoides)PheGs a nivell molecular, hem clonat i caracteritzat el gen CdPAL1 del call deCistanche deserticola(Hu et al. 2010). Estem intentant establir el sistema de transformació de plantes d'equinàcia mediat per Agrobacterium rhizogenes i introduir el gen a l'arrel peluda d'equinàcia per estudiar els efectes directes de la sobreexpressió d'aquest gen sobre l'acumulació de PheG. A més, també hem clonat diversos gens implicats en la via biosintètica de PheGs deCistanche deserticolacallositat mitjançant cribratge de biblioteques d'ADNc i RACE PCR, com ara tirosinasa, cinamil alcoholdeshidrogenasa, tirosina descarboxilasa, cinamat-3-hidroxilasa, cumarat-4-hidroxilasa; UDP-glucosiltransferasa i hidroxilcinamil transferasa. Farem més experiments que inclouen caracterització molecular, anàlisi d'expressió, línies de sobreexpressió de l'arrel de pèl d'equinàcea per dilucidar la via biosintètica de PheGson a nivell molecular.

Materials i mètodes

Cultiu de cèl·lules en suspensió de C. deserticola

Un cultiu de cèl·lules en suspensió deCistanche deserticolaes va mantenir en un medi líquid B5 (Gamborg et al. 1968) complementat amb 30 g de sacarosa-l-1, 0,5 mg 6-BA-l-1 , i 2,0 mgNAA l-1 a 25 ± 1 grau amb agitació (180 rpm). El període de llum va ser de 16 (L)/8 (D) i el cultiu de cèl·lules en suspensió es va subcultivar cada 28 dies. Durant el subcultiu, el cultiu de cèl·lules en suspensió es va filtrar primer en un banc net amb un drap Mira autoclau i després es va pesar el pellet de cèl·lules fresques i es va inocular en un medi nou a una concentració de 2 g FW-50 ml-1.

Investigació del creixement

El creixement cel·lular es va mesurar principalment pel pes fresc cel·lular (FW) i el pes sec (DW). Els cultius cel·lulars es van mostrejar el 2n, 4t, 8è, 12è, 17è, 22è i 28è dia i es van filtrar amb filtració al buit amb drap Mira fins que no caigués més líquid de l'embut. El pellet cel·lular es va pesar i es va registrar com a FW. La meitat de les cèl·lules fresques recollides es van emmagatzemar a -78 C per a un assaig d'activitat i l'altra meitat es va assecar a 60 C durant 24 h fins que es va observar un pes constant. Les cèl·lules seques es van refredar en un dessecador a temperatura ambient i després es van pesar. Aquest pes es va multiplicar per dos i es va registrar com a DW. Les mostres de cèl·lules seques es van triturar en una pols fina (tamís de 80 malles al 100 per cent), col·locades en tubs marrons, segellades i emmagatzemades a -20 graus per a futurs experiments.

Extracció i determinació del contingut de compostos fenòlics totals

Es van extreure trenta mil·ligrams de pols de cèl·lules seques de cada mostra amb 400 ll de metanol al 80% a 37 °C durant 1 h amb una velocitat de sacsejada de 200 rpm seguida de centrifugació. El sobrenedant es va transferir a un nou tub i els residus es van extreure dues vegades més mitjançant el mateix procediment. El sobrenedant es va combinar, es va filtrar i es va utilitzar per a la determinació del contingut total de compostos fenòlics i l'anàlisi HPLC (Hu 2007).

Els continguts de compostos fenòlics totals es van analitzar mitjançant un mètode Folin-Ciocalteu modificat (Singletonet al. 1999). El reactiu Folin-Ciocalteu es va diluir amb 1 volum d'aigua destil·lada. L'extracte obtingut es va diluir deu vegades i es van utilitzar 10 ll d'extracte en cada assaig de contingut. Es van afegir deu microlitres de cada extracte diluït a una solució de 200 ll de carbonat sòdic al 2% acabada de preparar. La mescla es va barrejar vigorosament i després es va centrifugar breument. La mescla es va incubar a RT durant 5 minuts i posteriorment es va barrejar amb 10 ll de reactiu Folin diluït. La mescla final es va barrejar vigorosament i es va incubar a RT durant 30 min. OD750 es va mesurar en un espectrofotòmetre UV/Vis i es va registrar per al càlcul dels compostos fenòlics totals. La solució en sèrie d'àcid clorogènic es va utilitzar com a compost estàndard i es va preparar una corba estàndard entre la quantitat d'àcid clorogènic i OD750 per calcular el contingut representatiu dels compostos fenòlics totals com a àcid clorogènic. Utilitzant el contingut del compost fenòlic total i les dades de creixement de les mostres, vam calcular el rendiment del compost fenòlic total de cada mostra i vam expressar quants mil·ligrams del compost fenòlic total es produeixen en una camada (mg L-1).

Tractament AIP

La solució d'AIP es va preparar amb aigua destil·lada per aconseguir una concentració final de 4 mM. Es va afegir un volum adequat de solució de material a 50 ml del medi per obtenir concentracions finals de 0,5 i 2,0 lM. Els mitjans es van autoclau i es van inocular amb cèl·lules recentment recollides. Es van inocular matràs triplicats amb cèl·lules recollides de la mateixa ampolla i es van utilitzar en tots els grups per minimitzar l'error sistemàtic.

Anàlisi HPLC

Els extractes obtinguts a "Extracció i determinació del contingut de compostos fenòlics totals" es van filtrar a través d'un filtre de 0,5 lm abans de l'anàlisi HPLC. L'anàlisi HPLC es va dur a terme mitjançant una HPLC Hitachi (bomba L-2130, detector L{-2420UV/Vis i mostreig automàtic L{-2200) amb una columna C18 (150 9 4,6 mm, 5 lm, Waters), fase mòbil (elució del gradient MeOH/H2O) i una longitud d'ona de detecció de 330 i 220 nm per a la detecció de(glicòsids feniletanoides)PheG i salidroside, respectivament. Es van injectar deu microlitres de cada compost estàndard, dilucions i extracte de mostra a la columna. Les determinacions del contingut d'echinacòsid, acteòsid, cistanòsid A, tubulòsid A i salidroside es van realitzar mitjançant la corba estàndard per a cada compost de referència. el Control de Productes Farmacèutics i Biològics (Beijing, Xina) i el Dr. Nobuhisa Ezaki de la Yomeishu Seizo Company van proporcionar els altres compostos de referència. La puresa de tots els compostos estàndard és superior al 95 per cent. La informació estructural dels cinc compostos provats es mostra a la taula 1.

Assaig d'activitat PAL

La proteïna bruta es va extreure de les mostres emmagatzemades a {{0}} graus. Es va triturar una mostra de 0,1 g en una pols fina amb nitrogen líquid i es van afegir 600 ll de tampó d'extracció de proteïnes al tub que contenia la pols cel·lular seguit d'un vortex vigorós per 5 min a les 4grau. La mescla es va centrifugar a 13, 000 rpm a 4 graus durant 10 min. El sobrenedant es va definir com un extracte de proteïna bruta. Es van afegir deu microlitres d'extracte de proteïna bruta a un tampó Tris-HCl (pH 8, 5) que contenia 10 ll de fenilalanina 5 mM sobre gel. La mescla es va incubar a 55ºCgraudurant 20 min i apagat mitjançant l'addició de 50 ll de HCl 2 M. Els canvis OD270 es van registrar per calcular la producció d'àcid cinàmic basant-se en la corba estàndard de l'àcid trans-cinàmic. L'àrea total d'activitat PAL sota la corba (AUC) es va calcular a partir de les dades de creixement cel·lular i de les dades d'assaig d'activitat PAL.

Anàlisi estadística

Totes les anàlisis estadístiques es van dur a terme mitjançant el programari Microsoft Excel inclòs l'anàlisi d'error estàndard i regressió lineal

Resultats i discussió

Efectes del tractament amb AIP sobre el creixement cel·lularCistanche deserticolacultiu de cèl·lules en suspensió

Com es mostra a la figura 1, el tractament amb AIP a ambdues concentracions no va tenir efectes inhibidors sobre el creixement cel·lular, tal com ho indiquen FW i DW.

Efectes del tractament AIP sobre l'activitat PAL

Com es mostra a la figura 2, el tractament de l'AIP en ambdues concentracions no va provocar una disminució de l'activitat de PAL el segon dia, però l'activitat de PAL va disminuir significativament els dies 4 fins al 28è. En aquells dies, l'activitat PAL de les cèl·lules tractades amb 0.5 lMAIP era del 80,3, 73,2, 82,7, 68,5, 62,3 i 42,4 per cent de les cèl·lules no tractades i menys de 2 lM d'AIP.

Efectes del tractament amb AIP sobre l'acumulació total de compostos fenòlics

La figura 3a va mostrar que el tractament amb AIP a ambdues concentracions va afectar notablement la biosíntesi dels compostos fenòlics totals. De manera similar a l'activitat PAL, el contingut total de compostos fenòlics no va disminuir el segon dia, sinó que va començar a disminuir el quart dia. Els efectes inhibidors de l'AIP a 0,5 i 2 lM sobre el contingut total de compostos fenòlics eren molt similars. La taxa d'inhibició del contingut va oscil·lar entre el 91,1 i el 50,1% i el 89,9 i el 41,5% de les cèl·lules tractades amb AIP 0,5 i 2 lM no tractades, respectivament. A partir de la determinació del contingut dels compostos fenòlics totals i de les dades de creixement cel·lular, els rendiments dels compostos fenòlics totals es van calcular tal com es mostra a la figura 3b. Els canvis significatius en el rendiment total de compostos fenòlics en diferents etapes de creixement van ser evidents a 0, 5 i 2,0 lM de cèl·lules tractades amb AIP en comparació amb cèl·lules no tractades. Com es mostra a les Figs. 2 i 3, la inhibició de l'activitat de PAL i la disminució dels compostos fenòlics totals i els rendiments van tenir tendències similars.

Es va realitzar una anàlisi de regressió lineal entre l'activitat de PAL i els compostos fenòlics totals i els resultats van suggerir que a les cèl·lules tractades amb AIP, l'activitat de PAL estava estretament relacionada amb el contingut total de compostos fenòlics (Fig. 4a). El rendiment de compostos fenòlics totals a la mostra en cada pas de temps és el resultat de l'acumulació; per tant, es va realitzar una anàlisi de regressió lineal entre l'AUC total de l'activitat PAL-temps i el rendiment total del compost fenòlic. La figura 2 mostra que l'activitat PAL era diferent en cada moment; per tant, per calcular l'AUC total d'activitat PAL-temps, aquí assumim que l'activitat PAL entre dos punts de temps ha canviat linealment. Com es mostra a la figura 4b, l'AUC es va correlacionar bé amb el rendiment del compost fenòlic total i va mostrar coeficients de correlació (R2) de 0.9788, {{10}}.8157 i 0 .6981 per a les cèl·lules no tractades, 0.5 lM AIP i 2,0 lM AIP tractades, respectivament. A partir d'aquests resultats, vam concloure que la inhibició de l'activitat PAL causada pel tractament amb AIP va donar lloc a la disminució de la biosíntesi i l'acumulació de compostos fenòlics totals.Cistanche deserticolacultiu de cèl·lules en suspensió.

Efectes del tractament AIP sobre l'acumulació de salidroside i quatre(glicòsids feniletanoides)PheGs

Estudiar els efectes detallats de l'AIP sobre la biosíntesi i l'acumulació de(glicòsids feniletanoides)PheG, extractes de diferents mostres es van aplicar a HPLC i el cromatograma representatiu de cada mostra es mostra a la figura 5. La fórmula estàndard dels compostos provats i els seus temps de retenció es mostren a la taula 2. Com mostra la figura 5a, salidroside i els altres quatre PheG són línies de base separades sota la nostra condició analítica. Podem veure a la figura 5b-d, que el contingut de salidroside no va canviar significativament i, a la figura 5f, g, que l'àrea de pics detectada a 330 nm va disminuir de manera significativa i contínua en 0, 5 i 2 lM tractats amb AIP. cellextracts en comparació amb cèl·lules no tractades (Fig. 5e).

Els canvis de contingut i rendiment de cada compost provat es mostren a la figura 6 i la taula 3. Segons els nostres resultats, l'equinacòsid i el cistanòsid A són els dos compostos principals i el seu contingut és unes deu vegades més gran que els altres tres compostos. Tanmateix, hi va haver diferències significatives en el contingut de cada compost en resposta al tractament AIP. En el cas de l'echinacòsid, el contingut de les cèl·lules no tractades va començar a augmentar de manera contínua des del 8è dia fins al 28è dia (Fig. 5a), cosa que va ser força diferent del patró de cistanòsid A, que va assolir el contingut més alt el 8è dia i va disminuir lleugerament de manera continuada fins al 8è dia. 28è dia. A les cèl·lules tractades amb AIP, el contingut dels dos compostos va disminuir significativament en el mateix patró. El contingut d'acteòsid i tubulósid A va ser molt inferior a l'echinacòsid, mentre que la tendència canviant era similar a l'echinacòsid. També hi ha una disminució espectacular del rendiment de cada compost provat per a les cèl·lules tractades amb AIP 0,5 i 2 lM en comparació amb les cèl·lules no tractades. D'acord amb la figura 6 i la taula 3, el rendiment d'equinacòsid, cistàsid, acteòsid, tubulòsid A i salidroside va baixar a aproximadament el 10, 10, 34, 36 i 25 per cent de les cèl·lules no tractades, respectivament, el 28è dia de cèl·lules tractades amb AIP en ambdós concentracions.

Anàlisi de regressió lineal entre l'activitat PAL i(glicòsids feniletanoides)Acumulació de PheG

Per determinar com es correlacionaven l'activitat PAL i el contingut de cada compost provat en cada grup, es va realitzar una anàlisi de regressió lineal (Fig. 7). El contingut de salidrosid en tots els grups tenia el coeficient de correlació més baix (R2), que va des de 0.1651 a la cèl·lula no tractada a 0.4753 a les 2.0 cèl·lules tractades amb AIP lM . Excepte el salidroside, els altres compostos provats tenien coeficients de correlació molt més alts i el seu R2 es mostra a la figura 7. Els nostres resultats van demostrar que l'activitat de PAL està altament correlacionada amb el contingut d'echinacòsid, acteòside, cistàsid A i tubulòsid A en tots els grups.

També vam realitzar una anàlisi de regressió lineal entre l'activitat total de PAL-temps AUC i cada rendiment compost provat a les mostres recollides (Fig. 8). L'anàlisi de regressió va indicar que el rendiment de cada compost es correlacionava amb l'AUC de manera diferent. A les cèl·lules no tractades, els cinc compostos tenen alts coeficients de correlació amb l'AUC total d'activitat-temps de PAL. No obstant això, a les cèl·lules tractades amb AIP, només l'echinacòsid, l'acteòsid i el tubulósida A conservaven alts coeficients de correlació i els altres dos compostos, el cistanòsid A i el salidroside tenien coeficients de correlació molt baixos amb l'AUC total del temps d'activitat PAL. Aquests resultats van suggerir que l'activitat de PAL va tenir efectes molt diferents sobre l'acumulació d'aquests compostos. Segons la Taula 1, els compostos equinacòsid, acteòsid i tubulòsid A tenen un grup cafeoil i un grup 3, 4-dihidroxil fenil etanol; El cistanòsid A té un grup feruloil i un grup 3-metoxi, 4-hidroxil fenil etanol; i salidroside té un grup hidroxil fenil etanol. La raó per la qual aquests compostos tenen diferents coeficients de correlació amb l'AUC total del temps d'activitat PAL a les cèl·lules tractades amb AIP podria estar relacionada amb els seus diferents orígens biosintètics.

Com es mostra a la figura 5, després del tractament amb AIP, la majoria dels pics van disminuir contínuament i significativament i en aquest estudi se'n van identificar cinc. Entre aquests compostos provats, només el salidroside no tenia cap grup cafeoil. Abans d'aquest estudi, es pensava que el contingut d'intermedis importants abans de la integració del grup cafeoil, com l'assalidroside, augmentaria a causa de la inhibició de l'activitat PAL, però no vam trobar pics augmentats significativament a les cèl·lules tractades amb AIP. Aquest resultat es pot produir perquè(glicòsids feniletanoides)Els PheG són metabòlits secundaris de C. deseriticola i la producció d'aquests(glicòsids feniletanoides)El PheG està regulat per l'estrès ambiental de les cèl·lules. En els nostres experiments, les cèl·lules tractades amb AIP no es tracten amb elicitors o altres tensions, de manera que la producció de PheG i els seus intermedis no es biosintetitzen activament a les cèl·lules tractades amb AIP. També s'ha informat que (Chapple et al. 1986) l'activitat de la tirosinadecarboxilasa (TYRDC) de les plantes es pot inhibir fortament per La-aminooxi-b-fenilpropionat, un altre inhibidor competitiu específic de PAL. TYRDC és un enzim clau en la producció de salidroside a partir de tirosina. Tanmateix, segons els nostres resultats, el contingut de salidroside no es va veure afectat significativament pel tractament amb AIP, la qual cosa va suggerir que l'activitat TYRDC no es va veure fortament afectada. Es requereix un assaig d'activitat específica amb una proteïna purificada TYRDC o una proteïna recombinant per determinar els efectes de l'AIP sobre la seva activitat.

Conclusions

Els nostres resultats van demostrar que el tractament amb AIP a {{0}},5 i 2,0 lM no va tenir efectes notables sobre el creixement cel·lular, però va provocar una inhibició significativa de l'activitat de PAL, la biosíntesi i l'acumulació de compost fenòlic total i es va provar.(glicòsids feniletanoides)Cultiu de cèl·lules en suspensió de PheGsinCistanche deserticola. L'anàlisi de regressió lineal va indicar que l'activitat de PAL tenia coeficients de correlació elevats amb el contingut total de compostos fenòlics i(glicòsids feniletanoides)Contingut de PheG, excepte salidroside en tots els grups cel·lulars. Els rendiments dels compostos fenòlics totals i els cinc compostos provats tenien alts coeficients de correlació amb l'AUC total d'activitat PAL-temps a les cèl·lules no tractades. Pel que fa a les cèl·lules tractades amb AIP, només l'echinacòsid, l'acteòsid i el tubulósida A van mantenir alts coeficients de correlació amb l'AUC total d'activitat-temps de PAL. Diferents orígens biosintètics poden ser responsables d'aquesta diferència. En conclusió, els nostres resultats van suggerir que l'enzim PAL va tenir un paper important en el control de la biosíntesi i l'acumulació de(glicòsids feniletanoides)PheG en el cultiu de cèl·lules en suspensió deCistanche deserticola.

Agraïments

Aquest treball va comptar amb el suport del fons de recerca de la Universitat Dong-A. Volem agrair al professor Jerry Zon, que treballa a l'Institut de Bioquímica i Biotecnologia de Química Orgànica, la Universitat de Tecnologia de Wrocław a Polònia, per proporcionar-nos AIP. També ens agradaria mostrar el nostre agraïment al Dr. Nobuhisa Ezaki de la Yomeishu Seizo Company al Japó per haver donat compostos estàndards cistanòsid A, acteòsid i tubulósida A per als nostres experiments.

De: "Efectes del tractament amb 2-aminoindan-2-àcid fosfònic sobre l'acumulació de salidroside i quatre glicòsids feniletanoides en cultiu de cèl·lules en suspensió de Cistanche deserticola" deGao Sheng Hu, et al

---Plant Cell Rep (2011) 30:665–674 DOI 10.1007/s00299-010-0997-3

Referències

Chapple CCS, Walker MA, Ellis BE (1986) La tirosina descarboxilasa vegetal pot ser fortament inhibida per La-aminooxi-b-fenilpropionat. Planta 167:101–105

Cheng XY, Guo B, Zhou HY et al (2005) Millora l'elicitació repetidaglicòsids feniletanoidesacumulació en cultius de cèl·lules en suspensió deCistanche deserticola. J Biochem Eng 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, et al (2006) Improvement ofglicòsids feniletanoidesbiosíntesi enCistanche deserticolaCultius de cèl·lules en suspensió per elicitor de quitosà. J Biotechnol 121(2):253–260
Ellis BE (1983) Producció de glucòsids d'hidroxifeniletanol en cultius en suspensió de Syringa vulgaris. Phytochemistry 22(9):1941–1943
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Requisits de nutrients dels cultius en suspensió de cèl·lules d'arrel de soja. Exp Cell Res 50:151–158
Geng XC, Song LW, Pu XP et al (2004) Neuroprotective Effects ofGlicòsids feniletanoidesdes deCistancssalsa contra la toxicitat dopaminèrgica induïda per 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP) en ratolins C57. Biol Pharm Bull 27(6):797–801
Hu GS (2007) Estudis sobre el cultiu de cèl·lules en suspensió i biologia molecular deCistanche deserticola. Tesi de màster, Shenyang Pharmaceutical University Hu GS, Jia JM, Hur YJ, et al (2010) Caracterització molecular de la fenilalanina amonia-liasa deCistanche deserticola.Mol Bio Rep. doi:10.1007/s11033-010-0489-0
Karasawa H, Kobayashi H, Takizawa N et al (1986) Estudis sobre els constituents de Cistanchis Herba. VIII. Yakugaku Zasshi 106(8):721–724
Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T et al (1984a) Estudis sobre els constituents de Cistanchis Herba. IV. Chem Pharm Bull 32(10):3880–3885
Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T et al (1984b) Estudis sobre els constituents de Cistanchis Herba. III. Chem Pharm Bull 32(8):3009–3014
Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T et al (1985) Estudis sobre els constituents de Cistanchis Herba. V. Chem Pharm Bull 33(4):1452–1457
Kobayashi H, Karasawa H, Takizawa N et al (1986) Estudis sobre els constituents de Cistanchis Herba. VII. Yakugaku Zasshi 106(7):562–566
Liu CZ, Cheng XY (2008) Millora deglicòsids feniletanoidesbiosíntesi en cultius cel·lulars deCistanche deserticolaper estrès osmòtic. Plant Cell Rep 27:357–362
Liu JY, Guo ZG, Zeng ZL (2007) Acumulació millorada deglucòsid feniletanoides per alimentació precursora del cultiu en suspensió de salsa Cistanche. Biochem Eng J 33:88–93
Lu CT, Mei XG (2003) Millora deglicòsids feniletanoidesproducció per un elicitor fúngic en cultiu de cèl·lules en suspensió deCistanche deserticola.Biotechnol Lett 25:1437–1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, et al (2003a) La intensitat de la llum i la qualitat espectral que influeixen en el creixement del callCistanche deserticolai biosíntesi deglicòsids feniletanoides. Plant Sci 165:657–661
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, et al (2003b) Efectes dels elements de terres rares en el creixement deCistanche deserticolacèl·lules i la producció deglicòsids feniletanoides. J Biotechnol 102:129–134
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, et al (2005) Enhanced production ofglicòsids feniletanoidesper alimentació de precursors al cultiu cel·lular deCistanche deserticola. Process Biochem 40:3480–3484
Pu XP, Song ZH, Li YY et al (2003) L'acteòsid de la salsa Cistanche inhibeix l'apoptosi per 1, 2-ió metilfenilpiridini a les neurones granulars cerebel·loses. Planta Med 69:652–666
Saimaru H, Orihara Y (2010) Biosíntesi d'acteòsid en cèl·lules cultivades d'Olea europaea. J Nat Med 64:139–145
Sheng GQ, Pu XP, Lei L, et al (2002) Tubuloside B de la salsa Cistanche rescaten les cèl·lules neuronals PC12 de l'apoptosi i l'estrès oxidatiu induïts per ions metilfenilpiridini. Planta Med 68:966–970
Singleton VL, Orthofer R, Lamuela-Ravento's RM (1999) Anàlisi de fenols totals i altres substrats d'oxidació i antioxidants mitjançant reactiu Folin-Ciocalteu. Mètode Enzymol 299:152–178
Tian XF, Pu XP (2005)Glicòsid feniletanoides de Cistanches salsa inhibeixen l'apoptosi induïda per l'ió 1-metil-4-fenilpiridini a les neurones. J Etnofarmacol 97:59–63
Xiong Q, Kadota S, Tani T, et al (1996) Efectes antioxidants dels feniletanoides deCistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19(12):1580–1585