Efectes del ShRNA del receptor d'angiotensina II tipus I sobre la pressió arterial i la remodelació del ventricular esquerre en rates espontàniament hipertenses

Resum:

Aquest estudi va ser dissenyat per investigar els efectes del shRNA del receptor d'angiotensina II tipus I (AT1R) sobre la pressió arterial i la remodelació del ventricular esquerre en rates espontàniament hipertenses. Es van utilitzar deu rates Wistar Kyoto (WKY) com a grup de control de la pressió arterial normal i 20 rates espontàniament hipertenses (SHR) es van dividir aleatòriament en els grups experimentals i de control d'hipertensió. Les rates del grup experimental es van injectar amb adenovirus recombinant shRNA AT1R (Ad5-AT1R-shRNA) a través d'una vena de la cua, i les rates dels altres dos grups van ser injectades amb adenovirus recombinant (Ad5-EGFP). ). La pressió arterial sistòlica (PAS) a l'artèria caudal de rata es va mesurar abans i després de la injecció, i el cor, el ronyó, l'aorta i els teixits suprarenals es van obtenir dos dies després de la injecció repetida per observar la distribució d'Ad5-AT1R- shRNA sota un microscopi de fluorescència. Abans de la injecció d'Ad5-AT1R-shRNA, la pressió arterial del grup experimental i del grup de control de la hipertensió era significativament més alta que la del grup normal de control de la pressió arterial (P<0.01). After two injections, the blood pressure in the experimental group decreased significantly, and the duration of blood pressure reduction reached 19 days. In the experimental group, the kidney, heart, aorta, and adrenal gland tissues showed vigorous fluorescence expression under the fluorescence microscope. Repeated administration of Ad5- AT1R-shRNA has a long-lasting hypotensive effect on SHR and can significantly improve ventricular remodeling.

En l'estudi experimental sobre rates, també vam trobar que Cistanche té un efecte protector sobre els ronyons, que pot prevenir el dany renal i millorar la funció renal. Entre ells, Cistanche pot reduir la resposta a l'estrès oxidatiu dels glomèruls i els túbuls renals, i reduir el nivell de radicals lliures al teixit renal. A més, Cistanche també pot reduir la resposta inflamatòria dels ronyons i afavorir la regeneració i reparació de les cèl·lules renals.

Feu clic al producte pur cistanche

Introducció

La remodelació ventricular (o miocàrdica) és un concepte proposat en l'estudi de la miocardiopatia isquèmica, la cardiopatia hipertensiva, la miocardiopatia dilatada i altres formes de dany cardíac, que es caracteritzen principalment pels canvis posteriors a la lesió miocàrdica, com la hipertròfia de cardiomiòcits, no miòcits. proliferació i fibrosi miocàrdica, i l'expansió de la cavitat cardíaca i el pes del cor augmenten sobre aquesta base [1]. La hipertròfia cardíaca és el canvi patològic més comú de la hipertensió, on sovint apareixen una sèrie de canvis en la morfologia i l'estructura subcel·lulars al miocardi hipertròfic.

Un estudi anterior ha confirmat que la sobreactivació del sistema RAS (sistema renina-angiotensina) té un paper crucial en el procés patològic de remodelació ventricular hipertensiva, a causa de la funció vasopressora, el creixement cel·lular i l'efecte promotor de la proliferació [2]. Ang II és la principal substància activa del RAS i pot exercir efectes biològics activant específicament AT1R, que té una gran afinitat a la superfície dels fibroblasts cardíacs [3]. A més, Ang II també té un cert efecte semblant al factor de creixement i pot promoure directament la síntesi d'ARN i proteïnes en cardiomiòcits per afavorir la proliferació de cèl·lules de fibra, provocant la remodelació ventricular [4].

A més, la tecnologia d'interferència d'ARN es refereix a utilitzar shRNA per produir ARN actiu d'interferència curta (siRNA) a les cèl·lules i específicament s'uneix i degrada l'ARNm de gens objectiu complementaris, per inhibir l'expressió del gen objectiu [5]. El vector d'adenovirus recombinant (Ad5-AT1R-shRNA), dissenyat basant-se en el principi d'interferència d'ARN, va bloquejar específicament l'expressió d'AT1R i ha exercit un efecte hipotensiu significatiu en estudis antihipertensius anteriors realitzats pels investigadors [6–8]. Tanmateix, com a forma relativament nova de teràpia gènica per a la hipertensió, es desconeix si afecta la remodelació ventricular causada per la hipertensió, i no s'han informat els efectes i efectes secundaris de la injecció intravenosa repetida.

En el present estudi, es van seleccionar rates espontàniament hipertenses (SHR) com a subjectes experimentals, es va observar la pressió arterial i la remodelació ventricular de SHR després d'injeccions repetides d'Ad5-AT1R-shRNA per investigar l'efecte del bloqueig gènic d'AT1R. induït per Ad5-AT1R-shRNA en la remodelació en hipertensió.

Materials i mètodes

Medicaments, reactius i instruments

Benyuan-Zhengyang Gene Technology Co., Ltd va construir i sintetitzar l'Ad5-AT1R-shRNA i el vector d'adenovirus recombinant de control (Ad5-EGFP) que porta el receptor d'angiotensina II tipus 1 (AT1R) . (Beijing, Xina). El kit de detecció d'hidroxiprolina (HYA) es va comprar a l'Institut d'Enginyeria Biològica de Nanjing Jiancheng. L'instrument de pressió arterial no invasiu per a l'artèria de la cua de rata (PowerLab, ADInstruments, Nova Gal·les del Sud, Austràlia) va ser proporcionat pel Laboratori de Cardiologia de la nostra universitat. Els 722 espectrofotòmetres de reixeta van ser fabricats per Shanghai Third Analytical Instrument Factory (Xangai, Xina). El microscopi electrònic de transmissió (microscòpia electrònica de transmissió de tipus Fei Tecnai G2 12, FEI Company, Hillsboro, OR, EUA) va ser proporcionat per la sala de microscopis electrònics de Tongji Medical College, Universitat de Ciència i Tecnologia de Huazhong. L'estudi actual ha estat aprovat pel Comitè d'Ètica de l'Hospital Tian Jin Chest.

Agrupació i administració d'animals

Els mascles adults SHR i Wistar Kyoto (WKY) tenien 12 setmanes d'edat i pesaven entre 280 i 320 g. Hi havia de 3 a 5 rates per gàbia, la temperatura ambient es va mantenir a 24 ± 2 graus i la humitat relativa es va mantenir al 60-65 per cent. Es va oferir un cicle artificial diürn i nocturn de 12-h en què de les 7:00 a les 7:00 de la tarda indicaven la part il·luminada del cicle i les 7:00 de la tarda –7:00 AM indicava la part fosca del cicle. Les rates podien menjar i beure lliurement. Els grups de rates incloïen un grup de control de la pressió arterial normal (grup WKY, n=10), un grup de control de la hipertensió (grup SHR, n{=10) i un grup experimental d'hipertensió (grup experimental, n{ {20}}).

Les rates del grup experimental es van injectar per via intravenosa amb 1 ml d'Ad5-AT1R-shRNA amb un títol de TCID50 1.7 × 109 mitjançant una vena de la cua, i les rates dels grups SHR i WKY es van injectar per via intravenosa 1 ml d'Ad5-EGFP amb un títol de TCID50 1,7 × 109 a través d'una vena de la cua. El temps d'injecció va tenir lloc al començament de l'experiment, i quan la pressió arterial havia tornat a l'estat inicial després de la primera injecció.

Per a totes les rates de cada grup, es van prendre uns 80-90 g de teixit miocàrdic i l'operació es va dur a terme estrictament segons les instruccions del kit de detecció d'hidroxico3ina.

Mesurament de la pressió arterial i de la freqüència cardíaca i observació d'animals d'experimentació

La pressió arterial sistòlica (PAS) de l'artèria de la cua i la freqüència cardíaca es van mesurar pel mètode del puny de la cua en un entorn tranquil a 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19 i 21 dies d'injecció. La cua d'aquesta rata es va preescalfar a uns 40 graus i es va fixar en una posició còmoda. El puny de compressió es va col·locar a l'arrel de la cua de la rata, es va inflar i es va pressionar. Quan la pressió va arribar als 270 mm Hg (1 mm Hg=0,133 kPa), la pressió es va reduir automàticament i lentament, i la pressió arterial i la freqüència cardíaca es van registrar pel sistema d'experimentació de funció biològica de Medlab connectat a un transductor de pressió. i un amplificador. Totes les rates es van mesurar cinc vegades contínuament i es van calcular les mitjanes i es van utilitzar com a PAS i freqüència cardíaca. La gana, l'activitat, la temperatura corporal, el pes corporal (BW) i altres reaccions dels animals es van observar diàriament fins al final de l'experiment.

Detecció de la distribució del vector adenovirus recombinant en els principals teixits

Els animals del grup experimental es van injectar amb Ad{{0}}AT1R-shRNA marcat amb una proteïna fluorescent. Dos dies després de la injecció repetida d'Ad5-AT1R-shRNA, es van obtenir el cor, el ronyó, l'aorta i els teixits suprarenals del grup experimental i es van preparar immediatament en seccions congelades. L'expressió de fluorescència es va observar amb un microscopi de fluorescència. Quan es va reduir la pressió arterial, alguns animals van ser sacrificats i pesats. Els animals es van injectar peritonealment amb 0, 4 ml/100 g de pentobarbital per a l'anestèsia i es van eliminar ràpidament els teixits del cor, els ronyons, l'aorta i les suprarenals. Amb una fulla afilada, aquests òrgans es van tallar en petits trossos de teixit d'1 × 1 × 1 cm i es van enviar al Departament de Patologia, on es van preparar en seccions congelades. El seu gruix es va mesurar entre 5 i 8 µm i es va observar l'expressió de la proteïna de fluorescència sota un microscopi de fluorescència per avaluar l'absorció d'Ad5-AT1R-shRNA pels òrgans principals.

Preparació de mostres de miocardi

Al final de l'experiment, es va mesurar el BW de rates. A les rates se'ls va injectar peritonealment {{0}},4 ml/100 g de pentobarbital per a l'anestèsia. Després d'obrir el pit, es va treure ràpidament el cor, es van tallar els vasos sanguinis circumdants, es va assecar la sang del cor amb paper de filtre, es va pesar tot el pes del cor humit (HW) i la relació entre el pes del cor i el BW (HW/ BW) es va calcular [9, 10]. Es van extreure algunes peces de teixit miocàrdic de 1-mm3 de la regió apical, es van esbandir amb 0,1 mol/l de solució salina tamponada amb fosfat (PBS) i després es van fixar inicialment amb un 2,5 per cent de glutaraldehid (pH 7,2). A continuació, es van fixar amb una solució de tetròxid d'osmi a l'1 per cent (pH 7, 2), es van deshidratar amb alcohol i acetones de gradient ascendent, es van remullar i es van incrustar amb resina epoxi i es van preparar en seccions ultrafines. Es van prendre altres 60-100 g de miocardi ventricular esquerre per a la mesura de HYA.

Índexs d'observació

La SBP de l'artèria de la cua en un estat de vigília tranquil es va registrar abans de la injecció i en tots els moments després de la injecció. Es van prendre uns 80-90 g de teixit miocàrdic i es va detectar el contingut d'HYA al teixit miocàrdic mitjançant un mètode biològic, segons les instruccions del kit de detecció d'HYA, i després es va convertir en contingut de col·lagen, segons la fórmula: col·lagen contingut=contingut HYA × 7,46 [11]. Es van registrar el BW i el HW de les rates i es va calcular la relació HW/BW. Les seccions ultrafines es van tacar tant amb acetat d'uranil com amb citrat de plom i es van observar i fotografiar sota microscòpia electrònica de transmissió.

Detecció de l'expressió d'ARNm AT1R mitjançant reacció en cadena de polimerasa quantitativa fluorescent en temps real (RT-qPCR)

Al final de l'experiment, es van extreure {{0}},5 g de teixit del ventricle esquerre de tots els grups per detectar l'expressió de l'ARNm AT1R. La seqüència del gen AT1R de rata es va seleccionar a GenBank (número de sèrie NM_030685), i els primers i les sondes es van dissenyar mitjançant Primer Premier 5.0 i sintetitzats per Sangon Biotech (Xangai, Xina). El cebador aigües amunt AT1R era 5'-ACG ATG CTG GTG GCC AAA GT -3', i el cebador aigües avall era 5'-ATG ATA AGG AAA GGG AAC AAG AAG C -3'. La seqüència de la sonda era 5'-ATT ATG AGT CTC GGAATT CGA CGC TCC CCA-3', i la modificació de la sonda era 5'-FAM, 3'-TAMRA, 3'-PO4. El cebador aigües amunt de -actina era 5'-AGG GAA ATC GTG CGT GAC AT -3', i el cebador aigües avall era 5'-CCA TAC CCA GGA AGG AAG GCT-3'. La seqüència de la sonda era 5'-CAC TGC CGC ATC CTC TTC CTC CCT GG-3', i la modificació de la sonda era 5'-FAM, 3'-TAMRA, 3'-PO4.

L'ARN total es va extreure dels teixits mitjançant el mètode d'un sol pas Trizol i es va transcriure inversament a ADNc mitjançant el sistema de transcripció inversa del virus de la leucèmia murina de Moloney (MMLV). La preparació de mostres de corba estàndard va consistir en el gen objectiu i el gen domèstic (-actina) de la mostra que calia amplificar mitjançant PCR (reacció en cadena de la polimerasa). El producte es va diluir amb un gradient per fer una corba estàndard. El sistema de reacció de PCR era de 2 µl d'10 × tampó, 2 µl de MgCl2 i 0,5 µl de dNTPs. Hi havia {{10}},5 µl del cebador aigües amunt, 0,5 µl del cebador aigües avall, 1 µl de la sonda, 0,4 µl de l'enzim Taq i 2 µl de plantilla de reacció i desionitzat estèril Es va afegir aigua fins que el volum va arribar als 20 µl. El sistema de PCR es va col·locar en un tub de PCR fluorescent, es va realitzar l'amplificació i es van recollir senyals de fluorescència al detector quantitatiu de PCR de fluorescència del gen Rotor. Les condicions de reacció van ser les següents: 95 graus, 5 min; 94 graus, 5 s; 60 graus, 30 s per a un total de 45 cicles realitzats. A continuació, es van recollir els senyals fluorescents i es van analitzar els resultats.

Per eliminar encara més els impactes de la quantificació de l'ARNm i l'eficiència de la reacció de la PCR en els resultats de l'experiment, es va realitzar simultàniament la detecció quantitativa del nombre de còpies absolutes del control intern -actina, la relació entre el nombre de còpies absoluts d'AT1R i -actina. es va utilitzar com a expressió relativa del gen AT1R.

Anàlisi estadística

L'anàlisi estadística de les dades es va realitzar mitjançant el programari estadístic SPSS 12.0. Les dades de mesura repetida entre els tres grups es van analitzar mitjançant l'anàlisi de la covariància. Tots els conjunts de dades compleixen els supòsits per dur a terme l'ANCOVA. La prova Student-Newman-Keuls (SNK)-q es va utilitzar per a múltiples comparacions entre mitjans de diversos grups. Les dades de tots els grups es van expressar com a mitjana ± SD. P<0.05 was considered statistically significant.

Resultats

Ad5-AT1R-shRNA va reduir significativament la SBP en SHR

Abans de la injecció, la SBP era significativament més alta en el grup experimental, i la del grup SHR ​​era més alta que en el grup WKY (P<0.05). Twenty-four hours after the first injection, SBP was significantly lower in the experimental group than in the SHR group (P<0.01), and="sbp=" did=" not=" decrease=" significantly=" in=" the=" shr=" group=" wky=" p=">0.05). Després de la primera injecció d'Ad5-AT1R-shRNA, l'efecte hipotensiu va durar cinc dies al grup experimental i la pressió arterial es va recuperar el setè dia. Després de la segona injecció, la pressió arterial va tornar a disminuir significativament, i la durada va ser més llarga que després de la primera injecció, amb una durada de 14 dies (Fig. 1). Les reaccions locals i sistèmiques dels animals es van observar cada dia i no es van trobar anomalies, com anorèxia, pèrdua de pes i augment de la temperatura. No hi va haver canvis significatius en la freqüència cardíaca en els tres grups, i les diferències entre els tres grups no van ser estadísticament significatives.

Ad5-AT1R-shRNA redueix significativament l'expressió d'ARNm AT1R al teixit cardíac

Per verificar si l'Ad5-AT1R-shRNA té l'efecte de la interferència d'ARN sobre l'expressió de l'ARNm AT1R als teixits, el 21è dia després de la injecció d'Ad5-AT1RshRNA, l'ARN total del teixit cardíac va ser extret en tots els grups. Després de la transcripció inversa a l'ADNc, es va detectar el nombre de còpies de gens mitjançant PCR quantitativa de fluorescència en temps real. Els resultats de la corba d'amplificació de la PCR van revelar que l'expressió de l'ARNm AT1R al grup experimental era significativament inferior a la del grup de control d'hipertensió. A més, la diferència va ser estadísticament significativa (P<0.05, Fig. 2).

Distribució de l'Ad5-AT1R-shRNA als teixits

L'adenovirus recombinant marcat amb fluorescència es va distribuir al cor, ronyó, aorta i teixits suprarenals després de 2 dies d'injecció repetida d'Ad5-AT1RshRNA (figura 3). Com que AT1R es va distribuir àmpliament al teixit, els resultats d'aquest estudi van ser coherents amb la distribució in vivo d'AT1R.

Ad5-AT1R-shRNA redueix significativament la hipertròfia del miocardi en SHR

La condició de la hipertròfia del miocardi a les rates es pot reflectir mesurant la relació HW i HW/BW. En mesurar el pes del cor i el pes corporal de les rates, aquest estudi va revelar que HW i HW/BW eren significativament més alts en el grup SHR ​​que els del grup WKY (P<0.01). The result suggests that there was obvious myocardial hypertrophy in untreated SHR. On the 21st day after Ad5-AT1R-shRNA injection, HW and HW/ BW were lower in the experimental group than in the SHR group (P<0.05) (Fig. 4).

Ad5-AT1R-shRNA pot reduir el grau de fibrosi miocàrdica en SHR

Els continguts de HYA i col·lagen van ser significativament més alts en el grup SHR ​​que en el grup WKY (P<0.01). These results suggest that obvious myocardial fibrosis has been found in the cardiac ventricle in the SHR group. The contents of HYA and collagen were significantly lower in the SHR group than in the SHR group (P<0.01) (Fig. 5).

Ad5-AT1R-shRNA millora significativament la ultraestructura miocàrdica de l'SHR

L'observació ultraestructural del miocardi mitjançant microscopi electrònic de transmissió va mostrar que al grup WKY, la membrana nuclear de les cèl·lules del miocardi estava intacta, les miofibril·les eren clares, la disposició era ordenada, les línies transversals eren clares, els mitocondris eren clars i el seu estat era clar. no hi ha proliferació de fibres de col·lagen a l'interstici del miocardi (Figs. 6A i B). En el grup SHR, la membrana nuclear de les cèl·lules del miocardi no estava intacta, les miofibril·les estaven borroses i la disposició era irregular, alguns dels miofilaments van desaparèixer. Es va poder veure que les línies transversals no eren clares i els mitocondris estaven inflats i acumulats. A més, s'hi van formar vacúols i es va observar un gran nombre d'hiperplàsia del reticle endoplasmàtic i proliferació de fibres de col·lagen a l'interstici del miocardi (Figs. 6C i D). En comparació amb els grups WKY i SHR, al grup experimental, la membrana nuclear de les cèl·lules del miocardi estava relativament intacta, les miofibril·les eren clares, la disposició era relativament ordenada, les línies transversals eren clares i els mitocondris no estaven inflats. No obstant això, el nombre de mitocondris va augmentar a les regions locals i no hi havia una proliferació evident de fibres de col·lagen a l'interstici del miocardi (Figs. 6E i F).

Discussió

En el present estudi, hem trobat que l'Ad5-AT1R-shRNA podria reduir significativament la pressió arterial de SHR i reduir l'expressió d'ARNm AT1R al teixit cardíac. El vector d'adenovirus recombinant té un cert efecte d'orientació, que pot ser absorbit pel teixit que conté AT1R després de la injecció de la vena de la cua. A més, l'Ad5-AT1R-shRNA podria reduir la hipertròfia del miocardi en SHR, millorar la fibrosi miocàrdica en SHR inhibint l'expressió AT1R i millorar els canvis ultraestructurals del miocardi en SHR.

En rates normals, la PAS és de 110 a 120 mmHg, i en la SHR, la PAS pot arribar a superar els 200 mmHg. La incidència d'hipertensió va ser del 100 per cent, i aquestes rates també van indicar una malaltia cardiovascular hipertensiva. Per tant, aquest tipus de rata és adequada per a l'estudi de la hipertensió humana. Les rates hipertenses espontàniament comencen a presentar hipertròfia ventricular esquerre a les 10 setmanes d'edat, que s'agreuja progressivament amb l'edat, el contingut de col·lagen al miocardi augmenta significativament i es produeix fibrosi miocàrdica i remodelació intersticial del miocardi [12, 13]. El present estudi va revelar que, en comparació amb les rates WKY de 16-setmanes, HW, HW/BW, el contingut d'HPA i de col·lagen del miocardi va augmentar significativament en la SHR de 16-setmanes. L'augment de HW i HW/BW reflecteix la proliferació i hipertròfia dels cardiomiòcits i l'augment del pes del cor.

A més, HYA és exclusiu de les fibres de col·lagen i el seu contingut pot reflectir el contingut de col·lagen i el grau de fibrosi. A més, els resultats de l'examen microscòpic electrònic van revelar que al grup SHR, la membrana nuclear de les cèl·lules del miocardi no estava intacta, les miofibril·les estaven borroses, la disposició era irregular, alguns dels miofilaments van desaparèixer, les línies transversals no estaven clares, els mitocondris estaven inflats. i es van acumular, i s'hi van formar vacúols. Es va observar un gran nombre d'hiperplàsia del reticle endoplasmàtic i proliferació de fibres de col·lagen a l'interstici del miocardi. Els resultats van revelar que la remodelació ventricular era evident en la SHR de 16-setmanes.

Els estudis de teràpia gènica per a la hipertensió van revelar que la inhibició antisentit de les expressions d'AT1R i altres membres del sistema RAS havien reduït la pressió arterial i millorat els canvis patològics del cor en SHR [14, 15]. Els resultats d'estudis anteriors van revelar que l'shRNA s'expressava molt en els teixits del ronyó, el cor, el fetge, l'aorta i les suprarenals. Això és similar als resultats d'aquest estudi. A més, l'Ad5-ACE-AT1R-shRNA pot millorar la ultraestructura dels cardiomiòcits i reduir la pressió arterial mitjançant la regulació a la baixa de les expressions d'ACE i AT1R.

De la mateixa manera, la tecnologia d'interferència d'ARN es va utilitzar en experiments anteriors realitzats per altres investigadors [16], on l'expressió gènica d'AT1R es va inhibir per la infusió de la vena de la cua d'Ad5-AT1RshRNA, que ha reduït la pressió arterial. Hem intentat revertir la hipertròfia ventricular esquerra i la fibrosi del miocardi mitjançant la teràpia gènica. El present estudi va revelar que després de la injecció repetida d'Ad5-AT1RshRNA, la pressió arterial en SHR no només va demostrar un efecte hipotensiu evident sinó que també va tenir l'efecte de la superposició, és a dir, l'amplitud i la durada de l'efecte hipotensiu després del segon estudi. la injecció va ser significativament més alta que les posteriors a la primera injecció. Els resultats suggereixen que l'efecte de la injecció repetida d'Ad5-AT1R-shRNA és millor. El HW, HW/BW i el contingut de HYA i col·lagen al cor eren significativament més baixos en el grup experimental que en el grup SHR. Els resultats de l'examen de microscòpia electrònica també van revelar que el dany del miocardi era significativament més lleuger en el grup experimental que en el grup SHR, i l'expressió de l'ARNm AT1R era significativament menor en el grup experimental que en el grup SHR.

Tots aquests resultats van revelar que l'Ad5-AT1RshRNA va produir l'efecte de la interferència de l'ARN, que va bloquejar una sèrie d'efectes biològics de la combinació d'Ang II i AT1R induïda per la hipertensió i la remodelació ventricular, cosa que suggereix que aquesta teràpia gènica pot reduir no només la pressió arterial però també millora la remodelació ventricular en SHR. El nivell plasmàtic d'angiotensina II augmentaria bloquejant el gen del receptor de l'angiotensina II tipus 1. Els efectes clàssics de l'angiotensina II sobre els seus òrgans diana estan mediats principalment per dos receptors de membrana, els receptors de tipus 1 (AT1Rs) i els receptors de tipus 2 (AT2Rs), que medien diferents funcions. S'ha demostrat que AT1R promou el creixement i la proliferació, com la vasoconstricció, l'augment de la PA i la contractilitat cardíaca, i media efectes perjudicials, com ara la disfunció endotelial, les malalties cardiovasculars i la inflamació.

Per contra, es considera que AT2R indueix efectes oposats, inhibeix el creixement, promou l'apoptosi, la vasodilatació i la hipotensió i prevé la remodelació cardiovascular [17]. Després d'una injecció repetida, el vector d'adenovirus no va produir reaccions adverses evidents i l'efecte hipotensor va ser més durador. Al final de l'experiment, en el grup experimental, la pressió arterial va tornar essencialment a l'estat inicial. Tanmateix, l'expressió d'AT1R al miocardi va ser inferior a la del grup SHR. Això no suggereix que el canvi en la pressió arterial estigui directament relacionat amb l'expressió d'AT1R al miocardi. S'especula que el sistema RAS del teixit local està implicat principalment en el paper de la fibrosi tisular.

Una limitació d'aquest estudi va ser que la pressió arterial s'hauria de mesurar de manera invasiva amb radiotelemetria, o almenys mitjançant un sistema lligat, però a causa de problemes tècnics, només podíem utilitzar mesures de la pressió arterial amb la cua, que no era molt fiable.

Conclusió

La teràpia gènica que utilitza tecnologia RNAi per inhibir l'expressió AT1R no només es pot utilitzar com a nou mètode per reduir la pressió arterial, sinó que també s'espera que sigui un nou mètode per millorar la remodelació del miocardi i la insuficiència cardíaca. No obstant això, actualment, aquesta nova tecnologia es limita a la investigació animal. S'ha d'estudiar més la seguretat i l'eficàcia de la seva aplicació en el tractament humà. Per exemple, la seguretat i l'eficiència del vector de transducció, i si aquesta estratègia de teràpia gènica es pot aplicar a altres tipus de canvis del miocardi, requereixen un estudi addicional.

Referències

1. Suthahar N, Meijers WC, Silljé HHW, de Boer RA. De la inflamació a la fibrosi-Mecanismes moleculars i cel·lulars de la remodelació del teixit miocàrdic i perspectives sobre les oportunitats de tractament diferencial. Curr Heart Fail Rep. 2017; 14: 235–250. [Medline] [CrossRef]

2. Hasan HF, Radwan RR, Galal SM. El factor potenciador de bradicinina aïllat del verí d'escorpí de Leiurus quinquestriatus alleuja la miocardiopatia en rates irradiades mitjançant la remodelació de la via RAAS. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2020; 47: 263–273. [Medline] [CrossRef]

3. Harvey A, Montezano AC, Lopes RA, Rios F, Touyz RM. Fibrosi vascular en l'envelliment i la hipertensió: mecanismes moleculars i implicacions clíniques. Can J Cardiol. 2016; 32: 659–668. [Medline] [CrossRef]

4. Wu J, Montaniel KR, Saleh MA, Xiao L, Chen W, Owens GK, et al. Origen de les cèl·lules productores de matrius que contribueixen a la fibrosi aòrtica en la hipertensió. Hipertensió. 2016; 67: 461–468. [Medline] [CrossRef]

5. Lu M, Xing H, Xun Z, Yang T, Ding P, Cai C, et al. Lliurament d'ARN petit basat en exosomes: progrés i perspectives. Asian J Pharm Sci. 2018; 13: 1–11. [Medline] [CrossRef]

6. Xiao C, Qiu L, Zen Q. Construcció de shRNA dirigit als receptors d'angiotensina II tipus 1 de rata i el seu ARNi al citoplasma. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2006; 26: 4–8. [Medline] [CrossRef]

7. Xiao CS, Zhang JL, Qiu L. [Els efectes de l'shRNA dirigit al receptor de l'angiotensina II tipus 1 sobre la pressió arterial i l'expressió d'ARNm AT1R en rates espontàniament hipertenses]. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2007; 35: 354–358 xinès. [Medline]

8. Zhang JQ, Sun HL, Ma YX, Wang DW. [Efectes de la interferència de l'ARN dirigida al receptor de l'angiotensina 1a sobre la pressió arterial i la hipertròfia cardíaca de rates amb hipertensió 2K1C]. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2006; 86: 1138–1143. [Medline]

9. Reaves PY, Wang HW, Katovich MJ, Gelband CH, Raizada MK. Atenuació de la hipertensió mitjançant el lliurament sistèmic de vector retroviral que conté ADNc antisentit del receptor d'angiotensina II tipus I. Mètodes. 2000; 22: 211–218. [Medline] [CrossRef]

10. Guo K, Lan CZ, Yu TT, Huang LL, Wang XH, Pan C, et al. Efectes de la fórmula Xin-Ji-Er-Kang sobre la hipertensió induïda per 2K1C i la remodelació cardiovascular en rates. J Etnofarmacol. 2014; 155: 1227–1235. [Medline] [CrossRef]

11. Paulis L, Matuskova J, Adamcova M, Pelouch V, Simko J, Krajcirovicova K, et al. Regressió de la hipertròfia ventricular esquerra i remodelació aòrtica en rates hipertenses amb deficiència de NO: efecte de L-arginina i espironolactona. Acta Physiol (Oxf). 2008; 194: 45–55. [Medline] [CrossRef]

12. Kang L, Ge CJ, Hu SJ. L'efecte beneficiós de l'atorvastatina sobre la remodelació del ventricular esquerre en rates espontàniament hipertenses. Farmacologia. 2007; 80: 120–126. [Medline] [CrossRef]

13. Bessa ASM, Jesus ÉF, Nunes ADC, Pontes CNR, Lacerda IS, Costa JM, et al. L'estimulació de l'eix ACE2/Ang-(1-7)/Mas en rates embarassades hipertenses atenua la disfunció cardiovascular en la descendència masculina adulta. Hipertensió Res. 2019; 42: 1883–1893. [Medline] [CrossRef]

14. Kimura B, Mohuczy D, Tang X, Phillips MI. Atenuació de la hipertensió i la hipertròfia cardíaca per virus adenoassociats que ofereixen antisentit d'angiotensinogen. Hipertensió. 2001; 37: 376–380. [Medline] [CrossRef]

15. Zhou H, Bian YF, Li ML, Gao F, Xiao CS. [Efectes de la interferència de l'ARN dirigida al receptor de l'angiotensina 1 i l'enzim convertidor de l'angiotensina sobre la pressió arterial i la remodelació del miocardi en rates espontàniament hipertenses]. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2010; 38: 60–66 (en xinès). [Medline]

16. Raja MAG, Katas H, Amjad MW. Disseny, mecanisme, lliurament i terapèutica de siRNA canònic i de substrat de Dicer. Asian J Pharm Sci. 2019; 14: 497–510. [Medline] [CrossRef]

17. Dasgupta C, Zhang L. Receptors d'angiotensina II i descobriment de fàrmacs en malalties cardiovasculars. Descobriment de drogues avui. 2011; 16: 22–34. [Medline] [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com