Efectes de Cistanche Deserticola Deserticola i Kaempferol en el desenvolupament de cèl·lules de granulosa en fol·licles pre-agregats de pollastre

Resum:Per explorar els efectes de Cistanche deserticola i Kaempferol en el desenvolupament fol·licular del pollastre, l'experiment va analitzar els efectes de diferents concentracions de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre l'activitat de cèl·lules de granulosa pre-graduades pel mètode MTT i va determinar la concentració òptima. La PCR quantitativa fluorescent en temps real es va utilitzar per detectar els efectes de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre l'antigen nuclear de la cèl·lula de proliferació (PCNA), el receptor de l'hormona estimulant del fol·licle (FSHR) i el receptor d'estrògens de cèl·lules de granulosa pre-graduades de pollastre (ER). impacte de l'expressió de l'ARNm; Els efectes de Cistanche deserticola i kaempferol sobre el desenvolupament fol·licular ovàric es van analitzar mitjançant cultiu in vitro de teixit ovàric. Els resultats van mostrar que tant Cistanche deserticola com Kaempferol a una concentració d'1 × At 10-4 mol/L , pot promoure significativament la proliferació de cèl·lules de la granulosa, alhora que promou PCNA, FSHR i ER en l'expressió d'ARNm de cèl·lules de la granulosa (P<0.01); Cistanche deserticola and Kaempferol significantly increased the number of follicles in ovarian tissue, and granulosa cells proliferated from monolayer to multilayer. Studies have shown that Cistanche deserticola and Kaempferol can promote the proliferation of aggregate granulosa cells, and promote FSHR and ER α MRNA expression promoting the development of pre-grade follicles towards grade follicles.

Paraules clau: Cistanche deserticola; Kaempferol; pollastre; Cèl·lules granulars abans del grau; Teixit ovàric

Cistanche d'herbes xineses

Per a les granges de gallines ponedores a gran escala, el nivell de producció d'ous afecta els seus beneficis econòmics i el desenvolupament dels fol·licles ovàrics afecta directament el rendiment de producció de les gallines ponedores. Els fol·licles es divideixen en tres estadis segons el seu estat funcional: fol·licles primaris, fol·licles secundaris i fol·licles madurs [1]. Cada dia, se selecciona un fol·licle per desenvolupar-se fins a la maduresa, i l'òvul s'expulsa a la trompa de Fal·lopi, passant per l'embut, l'ampliació, l'istme, l'úter i la vagina, formant una estructura semblant a l'ou [2-3]. L'inici dels fol·licles primitius està relacionat amb el desenvolupament de cèl·lules de la granulosa fol·licular. L'hormona fol·liculoestimulant (FSH) s'uneix al receptor de l'hormona fol·liculoestimulant (FSHR) a les cèl·lules de la granulosa, induint la formació del receptor de l'hormona luteïnitzant (LHR) i estimulant la síntesi d'hormones esteroides [4-6). La FSH i l'hormona luteïnitzant (LH) actuen de manera sinèrgica sobre les cèl·lules de la granulosa per afavorir el desenvolupament i la maduració fol·liculars, participant en la selecció dels fol·licles dominants. La investigació ha trobat que, tot i que s'han activat els fol·licles primordials que no tenen cèl·lules de la granulosa, finalment tots desenvolupen atresia [7]. Durant el desenvolupament fol·licular, els estrògens poden promoure la proliferació de cèl·lules de la granulosa ovàrica, alhora que cooperen amb FSH i LH per promoure la proliferació i diferenciació de les cèl·lules de la granulosa ovàrica. Quan augmenta el contingut d'estrògens al plasma, es retroalimentarà negativament a l'hipotàlem a través del sistema de circulació perifèrica, inhibint així la secreció de l'hormona alliberadora de gonadotropina (GnRH) de l'hipotàlem. La GnRH pot estimular l'adenohipòfisi per sintetitzar i segregar FSH i LH per promoure el desenvolupament del fol·licle ovàric. Quan la secreció de GnRH és baixa, pot inhibir la secreció de FSH i LH, i en última instància, condueix a la inhibició del desenvolupament fol·licular [8-9].

Estudis anteriors van trobar que Cistanche deserticola i Cuscuta chinensis tenien un bon efecte reparador sobre els oviductes atròfics i els oviductes danyats després de la recuperació, i podrien millorar la taxa de posta de les gallines baixes [10]. En la producció ramadera, l'aplicació de flavonoides pot millorar significativament el rendiment de la producció animal, millorar la resistència a les malalties dels animals i millorar la funció immune dels animals.

Medicaments xinesos com el ginseng, Cistanche deserticola i astragalus

Els flavonoides totals de Cistanche deserticola poden promoure significativament la proliferació de cèl·lules de granulosa fol·licular de grau i de grau de pollastre in vitro, el nivell de transcripció de la proteïna reguladora ràpida esteroidogènica (StAR), l'ARNm de l'enzim de divisió de la cadena lateral del colesterol (CYP11A1) i la secreció. de progesterona. El component representatiu dels flavonoides totals de Cistanche deserticola és Cistanche deserticola. El seu pes molecular és petit i té l'avantatge de passar per la barrera hematoencefàlica. Al mateix temps, té efectes antiinflamatoris, antitumorals i semblants als estrògens [11]. El component químic principal de Cuscuta chinensis són els flavonoides totals de Cuscuta chinensis. Actualment, s'han aïllat una varietat de flavonoides de Cuscuta chinensis, principalment quercetina i kaempferol, que tenen una alta activitat antioxidant.

L'aplicació d'extracte de flavonoides de llavors de cuscuta a rates femelles presenta activitat estrogènica, que té un cert efecte en la promoció de la millora de la funció del receptor hCG/LH ovàric; Té un efecte de gonadotropina en ratolins joves i pot promoure el desenvolupament del seu sistema reproductor [12-14].

En aquest experiment, vam seleccionar cèl·lules de granulosa fol·licular de pre-grau de pollastre i vam explorar l'efecte promotor de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre la proliferació de cèl·lules de granulosa fol·licular de pollastre de pre-grau i l'expressió del receptor relacionada mitjançant l'efecte de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre el desenvolupament fol·licular del pollastre, per proporcionar una referència teòrica per a la investigació i desenvolupament d'additius alimentaris segurs, eficaços i sense residus per millorar el rendiment de producció de ponedores.

Efectes del ronyó Cistanche-Tonificant

1 Material i mètodes

1.1 Materials d'assaig

Cistanche deserticola (puresa superior o igual al 98 per cent) es va comprar a Shanghai Jizhi Biochemical Technology Co., Ltd; Kaempferol (puresa superior o igual al 98 per cent) es va comprar a Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.

1.2 Principals reactius i instruments

Principals reactius: col·lagenasa tipus II i DMEM es van comprar a Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd; DMSO es va comprar a Beijing Solebao Technology Co., Ltd; El kit M5 Super qPCR RT amb el kit de transcripció inversa per eliminar gDNA es va comprar a Beijing Jumei Biotechnology Co., Ltd. Instrument principal: BCM-1300Un banc de treball de purificació comprat a Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd. Medical Equipment Factory; La centrífuga de congelació d'alta velocitat AXTGL20M es va comprar a Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd; La incubadora de temperatura constant Heracell 150i GP es va comprar a Bingshan Songyang Biotechnology (Dalian) Co., Ltd; LightCycle ® L'instrument de PCR quantitativa de fluorescència de tipus 96 i l'instrument d'etiquetatge d'enzims tipus DR-200BS es van comprar a Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd.

1.3 Aïllament i extracció de cèl·lules de la granulosa dels fol·licles abans de la classificació del pollastre

Es van seleccionar gallines ponedores sanes de 30 150-dies d'edat (proporcionades per Hebei Baoding Dingnong Company), assassinades per sang de l'artèria caròtida i els seus ovaris es van extreure de manera asèptica (les proves d'investigació en animals in vivo es van fer segons les directrius aprovades per el Comitè d'Ètica Animal de la Universitat Agrícola de Hebei). Els fol·licles anteriors al grau es poden dividir en petits fol·licles blancs (SWF,<2 mm), large white follicles (LWF, 3-5 mm), small yellow follicles (SYF, 6-8 mm), and large yellow follicles (LYF, 9-12 mm). Collect granulosa cells from pre-graded follicles with a diameter of 6-8 mm and prior stages. The grading of follicles (see Figure 1). 

Nota: SWF representa fol·licles blancs petits, LWF representa fol·licles blancs grans, SYF representa fol·licles grocs petits, LYF representa fol·licles grocs grans i F1, F2, F3, F4 i F5 representen cinc fol·licles madurs.

Els fol·licles recollits es van rentar tres vegades amb alcohol al 75 per cent i finalment es van rentar una vegada amb PBS. L'agulla estèril es va utilitzar per alliberar el líquid del rovell al PBS que contenia un 3% de penicil·lina i estreptomicina, eliminar la capa de cèl·lules de membrana i separar la capa de cèl·lules granulars. Es van agafar 15 ml de tub EP per afegir la capa de cèl·lules granulosas tallades dels fol·licles i es van afegir 4 ml de col·lagenasa tipus II 0,1 per cent. Es va agitar en una coctelera a 37 graus durant 3 minuts. Un cop completada l'oscil·lació, afegiu una quantitat igual de solució de cultiu que contingui 0,5 per cent de FBS per acabar la digestió. Filtreu amb un tamís de 200 malles i un tamís de 400 malles, respectivament. Centrifuga el filtrat a temperatura ambient a 1200 r/min durant 5 minuts i repeteix la centrifugació dues vegades. Descartar el sobrenedant, afegir el medi de cultiu, bufar i aspirar uniformement, i diluir la suspensió cel·lular a 5 × 106 peces/ml, i afegir uniformement a una placa de Petri amb un diàmetre de 100 mm i cultivar a 37 graus i 5 per cent de CO2. .

1.4 Efectes de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre l'activitat de les cèl·lules de la granulosa

Les cèl·lules granulars es van cultivar rutinàriament en un medi DMEM que contenia un 10 per cent de sèrum boví fetal. Les cèl·lules en la fase de creixement logarítmic es van prendre i es van digerir amb 2, 5 g/L de tripsina. Les cèl·lules es van repartir uniformement en plaques de 96 pous. Cada placa es va dividir en 10 grups amb 6 forats repetits a cada grup. Afegiu 200 als forats al voltant de la placa de cultiu μ L PBS serveix com a porus hidratant. La concentració de Cistanche deserticola s'estableix en 1 × 10-4 mol/L, 1 × 10-5 mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/L L, 5 × 10-8 mol/L, 1 × 10-8 mol/L, 5 × 10-9 mol/L, 1 × 10-9 mol/L, 1 × {{ 24}} mol/L. Estableix un grup de control en blanc. Després del cocultiu de cèl·lules amb Cistanche deserticola durant 24 hores, afegiu un 10 per cent a cada pou μ 5 mg/mL MTT de L. Després de conreu més durant 4 hores, afegiu 150 a cada pou μ L de DMSO i oscil·leu durant 3 minuts un agitador de temperatura constant a 37 graus. Mesura l'absorbància a 450 nm. L'experiment es va repetir tres vegades i el procés de cribratge de la dosi segura òptima de Kaempferol per a cèl·lules de la granulosa va ser el mateix que l'anterior.

Cistanche vivent del desert-Ronyó tonificant

1.5 Efectes de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre l'antigen nuclear de cèl·lules proliferants, el receptor de l'hormona estimulant del fol·licle i el receptor d'estrògens a les cèl·lules de la granulosa

L'efecte de l'expressió d'ARNm es va observar a les cèl·lules de la granulosa de la fase de creixement logarítmic, inoculades en tres plats de cultiu amb una densitat cel·lular de 5 × 106 peces/mL. Les plaques de Petri es van dividir en grup control en blanc; Grup Cistanche deserticola, és a dir, després de 24 hores de cultiu cel·lular, afegir 1 × 10-4 mol/L Cistanche deserticola; Al grup Kaempferol, afegiu 1 després de 24 h de cultiu cel·lular × 10-4 mol/L Kaempferol; Grup d'estrògens, afegir 5 després de 24 hores de cultiu cel·lular × Tractar amb 10 a 8 mol/L d'estrògens. Després de 24 hores de cultiu, descartar tot el medi de cultiu, esbandir amb PBS, afegir 1 ml d'enzim pancreàtic per a la digestió i, al cap d'uns minuts, afegir una quantitat igual de medi de cultiu per acabar la digestió. Centrifugueu la suspensió cel·lular a 1000 r/min durant 5 minuts, descarteu el sobrenedant i afegiu el reactiu Trizol en una caixa de gel. Posteriorment, es va afegir cloroform i es va sacsejar vigorosament, es va col·locar en una caixa de gel durant uns 3 minuts i es va centrifugar a 4 graus a 12000 r/min durant 10 minuts. Transferiu l'ARN a un tub EP nou, afegiu un volum igual d'isopropanol, barregeu-ho bé i deixeu reposar en una caixa de gel durant 10 minuts. Després de la centrifugació a 4 graus durant 10 minuts a 12 000 r/min, descartar el sobrenedant i rentar el precipitat amb etanol al 80 per cent. Centrifugar a 10 000 r/min i 4 graus durant 5 minuts, descartar l'etanol, assecar a l'aire durant 5-10 minuts i afegir aigua DEPC per bufar i aspirar per dissoldre el precipitat. Mesura la concentració d'ARN amb un espectrofotòmetre UV.

Utilitzeu el kit M5 Super plus qPCR RT amb el kit d'eliminació d'ADNg per a la transcripció inversa per obtenir l'ADNc. Detecció d'antigen nuclear de cèl·lules proliferants, receptor de l'hormona estimulant del fol·licle i receptor d'estrògens a les cèl·lules de la granulosa mitjançant el nivell de transcripció relativa de l'ARNm de PCR quantitativa fluorescent en temps real. La informació del primer es mostra a la Taula 1, i els primers van ser dissenyats i sintetitzats per Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. Grup de referència intern: actina, el nivell de transcripció relatiu de l'ARNm per a cada gen està determinat per 2- ΔΔ Calculat per Ct.

Taula 1 Informació inicial

1.6 Cultiu in vitro i observació morfològica del teixit ovàric

Agafeu el teixit ovàric de 30 40-gallines ponedores marrons Hailan d'un dia d'edat i esbandiu-lo tres vegades amb alcohol al 75%. Talleu el teixit ovàric en trossos petits de 1-2 mm3 en una taula ultra neta, amb una taxa de 500 per pou μ L afegit al medi DMEM i ITS (10 μ G/mL d'insulina, 5 μ G/mL de transferrina). , i 30 nmol/L de selenit de sodi). Després de 72 hores de cultiu a la incubadora, tractar segons la situació d'agrupació. El teixit ovàric es va dividir en un grup control en blanc, grup Cistanche deserticola, grup Kaempferol i grup estrògens. Després de 72 hores de cultiu, el teixit ovàric es va fixar amb un 4% de formaldehid i es van preparar seccions de teixit de manera rutinària per a l'observació amb un microscopi òptic.

1.7 Estadística i anàlisi

Les dades de qPCR es van analitzar mitjançant el programari Biorad CFX Manager 2.0 i el programari Microsoft Excel, i es va utilitzar el programari SPSS 21.0 per a l'ANOVA unidireccional. El mètode de Duncan es va utilitzar per a múltiples comparacions. Els resultats es representen com a "mitjana ± desviació estàndard" i es representen mitjançant el programari GraphPad Prism 5.0. P<0.05 indicates significant differences, while P<0.01 indicates extremely significant differences.

2 Resultats i anàlisi

2.1 Efectes de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre la proliferació de cèl·lules de la granulosa

A les figures 2 i 3 es pot veure que tant Cistanche deserticola com Kaempferol poden promoure la proliferació de cèl·lules de la granulosa. A 1 × 10-4~1 × Dins d'un gradient de concentració de 10-10 mol/L, en comparació amb el grup control en blanc, la concentració és 1 × 10-4 mol/L, 1 × {{ 9}} mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × A 10-7 mol/L, la diferència va ser extremadament significativa (P<0.01), with a concentration of 5 × The difference was significant at 10-8 mol/L (P<0.05).

Nota: "* *" indica una diferència significativa en comparació amb el grup de control en blanc (P<0.01), and "*" indicates a significant difference compared to the blank control group (P<0.05), the same below.

Fig. 2 Valors d'absorbància de cèl·lules de la granulosa exposades a Cistanche deserticola a diferents concentracions durant 24 hores

Fig. 3 Valors d'absorbància de cèl·lules de la granulosa exposades a Kaempferol a diferents concentracions durant 24 hores

2.2 Efectes de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre l'antigen nuclear de cèl·lules proliferants, el receptor de l'hormona estimulant del fol·licle i el receptor d'estrògens de les cèl·lules pregranulosas de pollastre L'impacte de l'ARNm en els nivells de transcripció relatius

Es pot veure a la taula 2 que els grups Cistanche deserticola i Kaempferol tenen efectes sobre l'antigen nuclear de les cèl·lules proliferants, el receptor de l'hormona estimulant del fol·licle i el receptor d'estrògens de cèl·lules de granulosa pre-graduades de pollastre. El nivell transcripcional relatiu de l'ARNm va ser significativament superior al del blanc. grup control i grup d'estrògens (P<0.05 or P<0.01), and the follicle-stimulating hormone receptor and estrogen receptor of chicken pre aggregate cells in the Kaempferol group α The transcription level of mRNA is the highest (P<0.01).

Taula 2 Efectes de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre l'antigen nuclear de cèl·lules proliferants, el receptor de l'hormona estimulant del fol·licle i el receptor d'estrògens de les cèl·lules pregranulosas de pollastre L'impacte de l'ARNm en els nivells de transcripció relatius

2.3 Observació histològica dels ovaris

Es pot veure a la figura 4 que, en comparació amb el grup control, el nombre de fol·licles al teixit ovàric tractat amb Cistanche deserticola i Kaempferol va augmentar significativament i les cèl·lules de la granulosa van proliferar de monocapa a multicapa. En comparació amb el grup d'estrògens, el grup Cistanche deserticola i el grup Kaempferol tenen una capacitat més evident per promoure la maduració i el desenvolupament del teixit ovàric, i el grup Cistanche deserticola i el grup Kaempferol tenen un efecte més evident que el grup Kaempferol.

3 Discussió

3.1 Efecte de Cistanche deserticola i Kaempferol

Tot el procés de desenvolupament fol·licular va acompanyat de la proliferació de cèl·lules de la granulosa, que són de gran importància per al desenvolupament fol·licular. Inicien el creixement de fol·licles primitius mitjançant la construcció de microambients moleculars favorables. Durant el desenvolupament fol·licular, l'apoptosi de les cèl·lules de la granulosa té un paper important en la regulació del creixement fol·licular, la maduració de l'òvul i la secreció d'estrògens [15-16]. Cistanche deserticola, una herba medicinal xinesa, té un efecte semblant a l'hormona sexual, que pot promoure el desenvolupament dels fol·licles animals i la producció d'esperma, promoure l'arribada normal de l'estro, millorar la funció i l'activitat dels ovaris i millorar la funció reproductiva. Cuscuta chinensis, com a medicina tradicional xinesa tonificant del ronyó, té efectes antioxidants, reproductius i anti-envelliment com els seus components efectius flavonoides. Els estudis han demostrat que una determinada dosi de flavonoides de Cuscuta chinensis té un efecte proliferatiu sobre les cèl·lules intersticials testiculars del ratolí [17-18]. En aquest experiment, es van seleccionar Cistanche deserticola i Kaempferol, com a components principals de les medicines tradicionals xineses, Cistanche deserticola i dodder, per estudiar els seus efectes sobre la capacitat d'expressió de les cèl·lules de la granulosa fol·licular de pollastre i els seus receptors relacionats, i el teixit ovàric, per confirmar els efectes. de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre el desenvolupament del sistema reproductor avícola.

Efectes del ronyó Cistanche-Tonificant

Feu clic aquí per veure els productes Cistanche per a malalties renals

【Demanar més】 Correu electrònic:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

3.2 Antigen nuclear de cèl·lules proliferants, receptor de l'hormona estimulant del fol·licle i receptor d'estrògens.

El PCNA és un antigen nuclear de cèl·lules proliferants, que juga un paper important en l'inici de la proliferació cel·lular i és un bon indicador de la proliferació cel·lular. Per tant, l'augment de PCNA en els resultats de la prova va confirmar que Cistanche deserticola i Kaempferol sí promouen la proliferació cel·lular quan actuen sobre les cèl·lules de la granulosa. La FSH és la principal hormona que promou el desenvolupament fol·licular [19], i el lloc d'expressió del receptor de l'hormona estimulant del fol·licle (FSHR) es concentra principalment a l'ovari i als fol·licles. La principal manera en què la FSH participa en les activitats reproductives de les gallines és regulant el desenvolupament dels fol·licles. Quan augmenta la secreció de FSH, pot afavorir l'augment de FSHR a les cèl·lules de la granulosa, i la combinació d'ambdues pot induir la síntesi de LHR activant l'aromatasa. El pollastre pot induir l'ovulació sota l'efecte sinèrgic de FSH i LH [20-22]. Abans de la selecció del fol·licle, les cèl·lules de la granulosa només expressen nivells basals de FSHR, que s'utilitzen per rebre senyals de FSH i produir nivells baixos d'adenosina fosfat cíclic per mantenir l'activitat cel·lular. Quan l'expressió de FSHR es regula significativament a les cèl·lules de la granulosa d'un fol·licle pre-grau, suggereix que el fol·licle serà seleccionat per convertir-se en un fol·licle de grau [23-24]. En aquest estudi, en comparació amb el grup control, l'expressió de l'ARNm de FSHR als grups Cistanche deserticola i Kaempferol es va incrementar significativament, cosa que indica que Cistanche deserticola i Kaempferol poden promoure la transcripció de l'ARNm de FSHR, augmentar la secreció de FSH i promoure la selecció. dels fol·licles com a fol·licles de grau. E2 és una espècie d'hormona esteroide secretada per les cèl·lules de la teca. La seva funció és promoure la maduresa sexual de les femelles i mostrar la segona característica sexual. Sota l'acció de la FSH, l'aromatasa produïda per les cèl·lules de la granulosa ovàrica converteix els andrògens en E2, que està regulat per dos receptors d'estrògens (ER i ER) Té efectes en diversos òrgans d'animals femelles i té un paper important en la reproducció animal, especialment en la fisiològica. activitats com el desenvolupament fol·licular Durant el creixement fol·licular, els estrògens són una molècula reguladora intracel·lular clau que accelera la proliferació de cèl·lules de la granulosa i millora els efectes de la FSH i la LH sobre la proliferació i diferenciació de les cèl·lules ovàriques ER El principal ajust és la retroalimentació negativa, ER El desenvolupament dels fol·licles es regula a través de vies internes i externes de l'ovari [26] ER S'expressa principalment en teixits i òrgans com la glàndula mamària, l'úter i la vagina dels animals, mentre que ER s'expressa principalment en els testicles. , ovaris, pròstata i hipotàlem [27].

En aquest estudi, ER Els nivells d'expressió de Cistanche deserticola i Kaempferol es van regular significativament en els grups Cistanche deserticola i Kaempferol, cosa que suggereix que el cistanche i el kaempferol tenen efectes positius en el desenvolupament, la maduració i l'ovulació dels ovaris de pollastre. Els resultats d'aquest estudi van trobar que es va mesurar l'ER El nivell d'expressió és relativament baix. Això és coherent amb les conclusions de la investigació de Guo Miao [28] que en el desenvolupament embrionari de les gallines, els ovaris dels primers pollastres tenen llocs d'unió específics per a l'ER. En els fol·licles blancs, els fol·licles grocs i les cèl·lules de la granulosa dels pollastres, ER L'expressió és significativament més alta que ER. Els flavonoides de soja, com a estrògens vegetals, poden augmentar la taxa de producció d'ous de les gallines ponedores quan s'afegeixen a la dieta [29], cosa que indica una relació directa entre els nivells d'hormones d'estrògens i la taxa de producció d'ous.

Figura 4 Teixit ovàric després de la tinció d'HE (10 ×)

3.3 Efectes de Cistanche deserticola i Kaempferol sobre el teixit ovàric

En aquest experiment, en co-cultivar Cistanche deserticola i Kaempferol amb teixit ovàric respectivament, es va trobar que el nombre de fol·licles del teixit ovàric afectats per Cistanche deserticola i Kaempferol augmentava significativament i les cèl·lules de la granulosa proliferaven de monocapa a multicapa. Això demostra a més que Cistanche deserticola i Kaempferol poden promoure el desenvolupament ovàric des d'una perspectiva histològica. L'antigen de cèl·lules proliferants, el receptor de l'hormona fol·licular i el receptor d'estrògens mesurats en els resultats d'aquest experiment Els canvis en els indicadors van confirmar que Cistanche deserticola i Kaempferol tenen efectes semblants als estrògens, la qual cosa proporciona una base experimental per explorar l'objectiu dels components principals. de Cistanche deserticola i dodder.

4 Conclusió

Aquest estudi va confirmar que Cistanche deserticola i Kaempferol poden promoure la proliferació de cèl·lules de granulosa pregradades amb pollastre i augmentar PCNA, FSHR i ER. El nivell de transcripció de l'ARNm pot promoure significativament el desenvolupament de fol·licles.

Referència:

［1］Yang Pengyun, Song Beibei, Ma Jinrui, et al The role of granulosa cells in egg formation [J] Poultry Science, 2021 (11): 50-54}

［2］ HUO SY,LI YR,GUO Y, et al. Millora dels efectes dels flavonoides Epimedi⁃ um sobre les característiques reproductives seleccionades en gallines ponedores després de la muda forçada［J］. Poultry science,2020,99（5）: 2757-2765.

［3］ HUO SY,LI YR,ZHANG S, et al. Funcions d'Epimedium sobre l'oviducte en regressió i els fol·licles de les gallines capa muda per força ［J］. Journal of World's Poultry Research, 2020,10（2）:326- 335.

［4］ RAJU GR,CHAVAN R,DEENADAYAL M, et al. Sinèrgia de l'hormona luteïnitzant i l'hormona estimulant del fol·licle: una revisió del paper en la hiperestimulació ovàrica controlada［J］. Journal of hu⁃ man reproductive ences,2013,6（4）:227-234.

［5］ SCHMIDT D. El factor de transcripció d'hèlix alat murí Foxl2 és necessari per a la diferenciació de cèl·lules de la granulosa i el manteniment de l'ovari［J］. Development,2004,131（4）:933-942.

［6］ SULLIVAN MW,STEWART-AKERS A,KRASNOW JS, et al. Respostes ovàriques en dones a l'hormona recombinant estimulant del fol·licle i l'hormona luteïnitzant (LH): un paper de la LH en les etapes finals de la maduració fol·licular (J). Journal of cllini⁃ cal endocrinology & metabolism, 1999, 84（1）:228-232.

［7］ GUO Y,LI YR,ZHANG S, et al. L'efecte dels flavonoides totals d'epimedium sobre el desenvolupament de cèl·lules de la granulosa en gallines ponedores ［J］. Poultry science,2020,99（9）:4598-4606.

［8］ ZHANG WD,LI N,DU ZR, et al. El receptor IGF-1 està implicat en els efectes reguladors de la icariina i la icaritina en astròcits en condicions basals i després d'un desafiament inflamatori［J］. Revista Europea de Farmacologia, 2021,906（5）:174269- 174278.

［9］ FREDERIQUE RZ,MIGUEL F,GE Y,et al. Arquitectura reguladora de la cèl·lula gonadotropa L T2 subjacent a la resposta a l'hormona alliberadora de gonadotropina［J］. Fronteres en endocrinol⁃ ogy,2018,9:34.

［10］ Huo Shuying, Kang Jingmin, Li Yurong, et al L'efecte de "Yimu Powder" sobre la reparació de trompes de Fal·lopi i el rendiment de la posta en gallines ponedores [J] Chinese Poultry, 2018, 40 (19): 4

［11］ WANG S, WANG Q, WANG H, et al. La inducció de la senescència depenent del dany de ROS i DNA per part de la icaritina contribueix a la seva activitat antitumoral a les cèl·lules de carcinoma hepatocel·lular［J］. Biologia farmacèutica,2019,57（1）:424-431.

［12］ Wang Jianhong, Wang Minzhang, Wu Qinghua, et al L'efecte dels flavonoides de Cuscuta chinensis sobre la funció endocrina de l'ovari en rates estressades [J] Medicina herbal xinesa, 2002 (12): 46-48

［13］Miao Jiangxia Avenços en la investigació sobre components actius i mecanisme d'acció de llavors de cuscuta en la regulació de la reproducció//Actes de la conferència acadèmica sobre fitoquímica farmacèutica i desenvolupament sostenible dels recursos de medicina tradicional xinesa (I), 2009: 323-325

［14］ TAO CC, WU Y, GAO X, et al. Els efectes antitumorals de l'Icari⁃ estan contra el càncer de mama estan relacionats amb els receptors d'estrògens［J］. Medicina molecular actual, 2020,21（1）:73-85.

［15］ MONNIAUX,DANIELLE. Impulsant la foliculogènesi pel diàleg cito-cèl·lules somàtiques oo⁃: lliçons de models genètics［J］. The⁃ riogenology,2016,86（1）:41-53.

［16］TAKASHI SHIMIZU A,NAOMICHI KOSAKA A,CHIAKIMU⁃ RAYAMA A, et al. Expressió del receptor d'apelina i APJ a les cèl·lules de la granulosa i la teca durant diferents etapes del desenvolupament fol·licular a l'ovari boví: implicació de l'apoptosi i la regulació hormonal - sciencedirect［J］. Animal reproduction science, 2009,116（1-2）:28-37.

［17］ Lin Siwen, Chen Shaobo, Yin Changchang, et al Efecte estrogènic dels flavonoides totals de Cistanche deserticola deserticola en la promoció de la diferenciació osteogènica ［ J ］ Research and Development of Natural product, 2020, 32 (3): 373-378

［18］ Tao Jinliang, Wang Xiao, Wei Yuanyuan, et al L'efecte protector dels flavonoides de Cuscuta chinensis sobre la secreció anormal d'hormones masculines induïda per BPA a les cèl·lules intersticials testiculars del ratolí [J] Progress in Animal Medicine 2019, 40 (5): { {4}}

［19］ Wang Peng, Hou Deyu, Shi Liguang, et al Danzhou Chicken FSH Study on Single-nucleotide polymorphism of gene ［ J ］ Heilongjiang Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2018, 10 (19): 19-22

［20］ ZHANG M,SHI H,SEGALOFF DL, et al. Expressió i localització del receptor de l'hormona luteïnitzant al tracte reproductor femení del ratolí［J］. Biologia de la reproducció, 2001,64（1）: 179-187.

［21］ Li Qin, Wang Qigui TGF- Progrés de la investigació i perspectives dels membres de la família que regulen el desenvolupament fol·licular a les aus de corral ［ J ］ Chinese Poultry, 2019, 41 (19): 1-5

［22］Guan Hongbin, Li Qingzhang Progrés de la investigació sobre l'hormona estimulant del fol·licle [J] Journal of Northeast Agricultural University, 2002, 8 (3): 306-311

［23］ Wu Xinpei, Wang Shuying Localització immunohistoquímica de FSHR i LHR als ovaris de la cabra negra de Laiwu ［ J ］ Life Science Research, 2006, 25 (4): 367-371

［24］ TISCHKAU SA, HOWELL RE, HICKOK JR, et al. L'augment de l'hormona lu⁃ teinitzant regula l'expressió del gen del rellotge circadià a l'ovari de pollastre［J］. Chronobiology International, 2011,28（1）:10-20.

［25］Tang Haifei, Wang Zhiwen, Zheng Xuesong, et al Progress in estrogen function research [J] Reproduction and Contraception, 2019, 39 (4): 334-340}

［26］ Efecte Liu Lingbin de la llum de radiació monocromàtica sobre el receptor d'estrògens (ER, ER), l'efecte de l'expressió del receptor de progesterona (PR-A, PR-B) al teixit ovàric Ya'an: Universitat Agrícola de Sichuan, 2013

［27］ COUSE JF, LINDZEY J, GRANDIEN K, et al. Distribució de teixits i anàlisi quantitativa del receptor d'estrògens-alfa (ERal⁃ pha) i receptor d'estrògens-beta (ERbeta) àcid ribonucle⁃ missatger de tipus salvatge i ratolí ERalpha-knockout［J］. En⁃ docrinologia,1997,138（11）:4613-4621.

［28］Guo Miao ER en teixit ovàric de gallines ponedores Regulació aparent dels canvis dinàmics i cribratge del gen regulador Tai'an: Shandong Agricultural University, 2017. [ Zhao Biqian Progrés de la investigació sobre l'aplicació de daidzeïna en la producció de gallines ponedores [J ] Guangdong Feed, 2017, 26 (8): 31-33