ABSTＲACT

Objectiu: aclarir si és generalcistanòsids(GC) milloradisfunció cognitivaratolins que envelleixen ràpidament (SAMP8) mitjançant la mediació de receptors d'andrògens específics (AＲ) a laRegulació de l'expressió de la proteïna sinàptica． 

Mètodes: es van dividir aleatòriament un total de ratolins SAMP8 mascles de 76 7-mes d'edat en el grup model, el grup GC, el grup GC + flutamida (F), el grup GC + fulvestrant (ICI), el grup F i el grup ICI. Les funcions d'aprenentatge i memòria dels ratolins de cada grup es van provar amb el laberint d'aigua de Morris. Es van utilitzar Western Blotting i RT-PCR per provarnivell d'expressió de la sinaptofisina(SYN), densitat postsinàptica - 95 (PSD - 95) i el factor neurotròfic derivat del cervell (BDNF) de ratolins de cada grup.

Resultats: els GC van millorar significativament l'aprenentatge i la funció cognitiva dels ratolins SAMP8.

En comparació amb el grup GC, la funció d'aprenentatge i memòria dels ratolins del grup GC + F i del grup GC + ICI es va reduir significativament. Els resultats de Western blotting i RT-PCR van mostrar que el nivell d'expressió de BDNF, SYN i PSD - 95 va augmentar significativament a nivell de proteïnes i nivell de gens al grup GCs en comparació amb el grup Model (P < 0) {{ 11}}5) ． El nivell d'expressió SYN va augmentar al grup GCs + F i GCs + ICI, i els nivells d'expressió de BDNF i PSD － 95 es van reduir significativament al grup GCs + F i GCs + ICI en comparació amb el grup GCs (P < 0, 05) ．

Conclusió: els GC poden mediar específicament AＲ per millorar la plasticitat sinàptica en ratolins SAMP8, que al seu torn millora l'aprenentatge i la funció cognitiva.

PARAULES CLAU:cistanòsids generals; receptor d'andrògens; plasticitat sinàptica; Ratolins SAMP8

Suplement de Cistanche Millora de la funció cognitiva Suplement dietètic PhGs75% Ech 30% Act 12%

Malaltia d'Alzheimer(AD) és comúmalaltia neurològica degenerativa, clínicament caracteritzat per una progressiva disminució de la funció cognitiva i canvis en l'estat mental i psicològic [1]. Els estudis han trobat que els nivells de testosterona en pacients amb AD masculins són significativament més baixos que en homes normals.

Elfunció cognitiva dels pacientss'ha millorat en diferents graus desprésteràpia de substitució de cetona[2], que indica que les disminucions relacionades amb l'edat dels nivells d'andrògens poden ser un factor de risc per a la MA en homes grans.

Glucòsids totals de Cistanche deserticola (cistanòsids generals, GCs) són un dels extractes principals de Cistanche deserticola, que pot millorar l'aprenentatge relacionat amb la MA idisfunció cognitiva[3]. A més, l'administració de GC per sonda va augmentar significativament els nivells de testosterona en animals [4]. Els GC també tenen la funció de promoure el yang i poden exercir

Efectes farmacodinàmics semblants als andrògens. Estudis anteriors han informat que la testosterona pot millorar l'aprenentatge i les funcions cognitives dels animals model d'AD, i aquest procés es basa en un receptor d'andrògens específic (receptor d'andrògens, AR) mediat [5].

És ben sabut que la disfunció cognitiva en pacients amb AD està estretament relacionada amb la plasticitat sinàptica. Tanmateix, encara no està clar el mecanisme específic mitjançant el qual els GC regulen la plasticitat sinàptica i milloren, per tant, les funcions cognitives i d'aprenentatge. Aquest estudi tenia com a objectiu explorar si els GC medien AR específiques per afectar la plasticitat sinàptica i, per tant, millorar l'aprenentatge i les funcions cognitives en l'AD.

1 Materials i mètodes

1. 1 Animals i equips d'experimentació

Els ratolins SAMP8 mascles d'{0}}mes d'edat es van comprar a la Facultat de Medicina de la Universitat de Pequín (SCXK [Beijing] 2016-0010) i es van criar fins als 7 mesos. Els animals es van mantenir en un ambient net a (24 ± 1) grau i

Es va proporcionar als animals il·luminació natural i accés gratuït a menjar i aigua, i es va donar atenció humanitària d'acord amb els principis 3R per a l'ús d'animals d'experimentació. Aquest estudi experimental ha estat aprovat pel Comitè d'Ètica dels Animals Experimentals del Baotou Medical College (Baotou Medical College No. 20201102).

Els principals reactius de l'experiment són:Glucòsids totals de Cistanche deserticola(GC, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); antagonista del receptor d'andrògens-flutamida (Sigma Company, EUA); antagonista-fulvestrant del receptor d'estrògens (ICI 182780, EUA) Med Chem Express); Anticòs BDNF anti-ratolí de conill,

Anticòs PSD-95, anticòs SYN, anticòs -actina (Companyia Proteintech dels Estats Units); solució d'electroforesi de proteïnes, solució de transferència de proteïnes, TEMED, tampó d'acrilamida, persulfat d'amoni, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); Kit de síntesi d'ADNc, detecció quantitativa de fluorescència Talent

Kit de reactius (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.), etc. L'equip experimental principal inclou un dipòsit d'electroforesi de placa vertical, aparell d'electroforesi, dipòsit de transferència, agitador decolorant (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), sistema d'anàlisi d'imatges en gel de proteïnes (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), instrument de PCR quantitatiu de fluorescència en temps real (USA Roche), etc.

1. 2 Agrupació i administració

Dos ratolins van morir de manera natural durant el procés d'alimentació, i els 78 ratolins restants es van dividir aleatòriament en grup model, grup GC, grup GC + flutamida (F), grup GC + fulvestrant (ICI), grup F, ICI

Grups de 13 animals cadascun. Excepte el grup model, el grup F i el grup ICI, als altres grups se'ls va administrar contínuament GC a una dosi de 50 mg/(kg·d) durant 30 dies.

A partir del 24è dia després de l'administració de GC, el grup GC + flutamida (F) i el grup GC + fulvestrant (ICI) van rebre una injecció intraperitoneal de F (5 mg/kg/d) 30 minuts després que s'administraven els GC. per gavage. ), ICI (1 mg/kg/d), injecció contínua durant 7 dies. Ajusteu la concentració de dosificació per assegurar-vos que el volum gàstric màxim dels ratolins és de 0,5 ml, 1 cop/d.

1. 3 Prova del laberint d'aigua de Morris

Els ratolins es van adaptar al medi aquàtic un dia abans. El laberint d'aigua de Morris va durar 6 dies. Els primers 5 dies van ser la prova de posicionament i navegació. Els ratolins es van entrenar una vegada al dia en cadascun dels quatre quadrants durant 1 minut cada vegada. Cada interval d'entrenament era de 15 minuts i es van registrar registres al mateix temps. Latència d'escapament de la prova de posicionament i navegació dels animals; el sisè dia, traieu la plataforma de l'aigua i feu una prova d'exploració espacial. Anoteu el nombre de creuaments de plataforma i el percentatge de temps passat al quadrant objectiu del ratolí. el quadrant objectiu) i la trajectòria de natació d'exploració espacial (Swimming trajectory of spatialprobe test) i altres indicadors.

1. 4 Detecció de Western blot

Expressió de proteïnes relacionades amb la sinapsi SYN, PSD-95 i BDNF. Després de la prova del laberint d'aigua de Morris, tots els ratolins van ser anestesiats rutinàriament, els seus caps van ser decapitats, els seus cervells van ser eliminats i els seus hipocamps van ser despullats. El teixit de l'hipocamp es va lisar de proteïnes, es va interrompre per ultrasons a 4 graus, es va deixar en gel durant 30 min i es va centrifugar a 12, 000 r/min durant 15 min a 4 graus. Es va prendre el sobrenedant i es va mesurar la concentració de proteïnes mitjançant el mètode BCA. Després de carregar la proteïna, realitzeu l'electroforesi en gel d'apilament a una tensió constant de 80 V, l'electroforesi en gel de separació a una tensió constant de 120 V i la transferència humida a un flux constant de 300 mA; traieu la membrana de PVDF, bloquegeu-la amb llet desnatada al 5% durant 80 minuts a temperatura ambient i renteu la membrana tres vegades amb TBST. 15 min/temps, l'anticossos primari es va incubar durant la nit en una taula agitadora a 4 graus; l'endemà, la membrana es va rentar 3 vegades amb TBST.

15 min/temps, l'anticossos secundari es va incubar a temperatura ambient durant 2 h, després es va realitzar el desenvolupament del color ECL i es va realitzar la imatge amb un sistema d'imatge de quimioluminescència. Es va utilitzar -actina com a referència interna i es va analitzar el valor de densitat òptica de la banda mitjançant el programari Image J.

1. 5ＲRT－PCRＲDetecció

L'expressió d'ARNm de SYN, PSD-95 i BDNF es va extreure de l'ARN total del teixit de l'hipocamp segons el mètode d'extracció de Trizol, i l'ADNc es va generar després de la transcripció inversa. El kit de detecció quantitativa de fluorescència Talent es va utilitzar per a la detecció quantitativa de fluorescència relativa. L'experiment es va repetir tres vegades i els resultats es van convertir a 2 - ΔΔCT es van analitzar. Els primers d'actina de ratolí, SYN, PSD-95 i BDNF van ser dissenyats per Shanghai Sangon Company, i les seqüències d'imprimació es mostren a la taula 1.

1. 6 Anàlisi estadística

Mitjançant SPSS 25. 0 Programari estadístic per processar, es va utilitzar el programari Graphpad Prism 8 per dibuixar gràfics estadístics i es va utilitzar ANOVA unidireccional per comparar mitjanes per parelles de diverses mostres. P <0. 05 significa que la diferència és estadísticament significativa.