Efectes de l'extracte aquós de Cistanche Tubulosa sobre la microbiota intestinal de ratolins amb trastorns intestinals

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

Els trastorns de la microbiota intestinal estan associats a moltes malalties. te aquosaextractedes deCistanche tubulosaS'ha informat que (CT), una fórmula herbal xinesa tradicional, té un paper important en la protecció de l'intestí humà. No obstant això, es coneix poc sobre els seus efectes sobre la microbiota intestinal. * El present estudi es va dur a terme per determinar si la TC és aquosaextractepot modular el microbioma intestinal en ratolins amb trastorns intestinals. Vam trobar que la morfologia intestinal danyada resultant del tractament amb cefixima es podia rescatar amb elCTextracte aquós. * Comparació de la diversitat microbiana entre ratolins tractats amb elCTEls ratolins d'extracte i control també van indicar que el trastorn de la comunitat de microbioma dels grups models es podria restaurar mitjançant el tractament amb concentracions altes i mitjanes deCTextracte aquós. El tractament amb cefixima va provocar una disminució significativa dels bacteris làctics; tanmateix, la suplementació delCTextracte aquós va recuperar el creixement d'aquests bacteris làctics. A més, la TC aquosaextracteva ser capaç de moderar els canvis dramàtics en les vies metabòliques del microbioma intestinal induïts per la cefixima. Aquestes troballes van proporcionar una visió dels efectes beneficiosos de l'extracte aquós CT sobre la microbiota intestinal i també van proporcionar una referència important per al desenvolupament de fàrmacs relacionats en el futur.

funció anti-envelliment del cistanche

1. Introducció

Els microorganismes intestinals colonitzen principalment el lumen intestinal i la capa mucosa i es mutualitzen amb l'hoste a través del material i l'intercanvi d'energia, la transformació i altres processos [1].Elsón centres de senyalització que integren missatges ambientals, com ara la dieta, amb senyals genètics i immunològics, afectant en conseqüència el metabolisme, la immunitat, el sistema nerviós i la resposta a les infeccions de l'hoste [2]. Normalment, hi ha un equilibri dinàmic entre la flora intestinal i els hostes; tanmateix, la disbiosi intestinal pot provocar canvis en l'equilibri salut/malaltia, trastorns immunològics i una multitud de malalties [3]. Els canvis moderats en la microbiota intestinal són acceptables per a l'hoste; no obstant això, això encara pot oferir oportunitats per amplificar els canvis en altres factors agreujants, com ara bacteriòfags, bacteriocines i estrès oxidatiu [4]. Estudis anteriors han demostrat que l'extracte d'etanol deCistanche tubulosa(CT), una fórmula herbal tradicional xinesa, pot regular la composició microbiana intestinal de les rates [5], i els glucòsids totals de la CT van ajustar la microbiota intestinal desordenada [6]. Les espècies de Cistanche, que parasiten principalment a les arrels de les espècies de Tamarix, també s'anomenen "ginseng del desert", i un tònic format per les tiges de Cistanchedeserticola (CD) iCistanche tubulosa(TC) s'utilitza com a remei herbal [7].ElEs va trobar que els components químics principals dels glucòsids de CTfeniletanol (PHG), que són substàncies antioxidants [8, 9], milloren la disfunció reproductiva [10], suprimeixen l'activació de cèl·lules estelades hepàtiques, bloquegen la conducció de les vies de senyalització en TGF{3}/SMAD. 11], i prevenir la fibrosi hepàtica induïda per l'albúmina sèrica bovina en rates [12]. Entre els més de 100 components de la TC, el polisacàrid també és una de les substàncies importants amb un contingut abundant [13, 14]. Estudis anteriors han demostrat que els polisacàrids de C. deserticola indueixen la melanogènesi als melanòcits, redueixen l'estrès oxidatiu[15], alleugen la disfunció cognitiva mitjançant la regulació dels processos antioxidants i antiinflamatoris a les rates [16], protegeixen les cèl·lules PC12 contra lesions induïdes per OGD/RP [17] Els probiòtics són microorganismes vius no patògens que tenen beneficis per a la salut i confereixen un equilibri microbià al tracte gastrointestinal quan s'administren en quantitats adequades [19].Eli pot millorar les respostes immunes cel·lulars inespecífiques caracteritzades per l'activació de macròfags, cèl·lules assassines naturals (NK) i limfòcits T citotòxics per a antigen i l'alliberament de diverses citocineses d'una manera específica de la soca i depenent de la dosi [20]. Les soques probiòtiques milloren les propietats de l'epiteli intestinal mitjançant la modulació de TJ, i s'ha demostrat que les soques probiòtiques específiques regulen l'expressió de mucina, influint així en les propietats de la capa de moc i regulant indirectament el sistema immunitari intestinal [21]. Les soques de bacteris de l'àcid làctic (LAB) i Bifidobacterium són probiòtics principals que s'han utilitzat en molts camps [22-26].ThEls beneficis per a la salut són nombrosos, i la seva capacitat antioxidant és un factor important en les seves funcions relacionades amb la salut[27]. Els probiòtics poden quelar els ions metàl·lics per evitar que catalitzin l'oxidació [28, 29]; també poden augmentar l'expressió d'enzims antioxidants [30, 31], produir diversos metabòlits amb activitat antioxidant [32, 33], mediar les vies de senyalització antioxidant [34-36] i regular els enzims que produeixen espècies reactives d'oxigen (ROS) i la resposta de l'intestí. microorganismes a l'estrès oxidatiu[37].Un estudi recent va demostrar que els polisacàrids de la CD podrien estimular el creixement d'alguns bacteris àcids làctics, que podrien beneficiar la salut humana [38]. Tanmateix, el contingut de polisacàrids a la CD és diferent del de la TC [7, 39], i aquesta diferència pot provocar diferents efectes sobre els microorganismes intestinals. A més, tot i que els polisacàrids CD poden reduir l'estrès oxidatiu activant la via NRF2/HO-1 [15], els efectes d'un polisacàrid únic poden diferir de l'efecte global de diverses composicions en TC.Thnosaltres, cal definir amb precisió els efectes dels extractes aquosos de TC sobre els microorganismes intestinals. A més, els PHG també poden resistir l'estrès oxidatiu [40] i suprimir les respostes inflamatòries mediades per lipopolisacàrids activant la via Keap1/Nrf2/HO-1 [41].ElPer tant, determinar l'efecte de l'extracte aquós CT és de gran valor. A més, els efectes de certs components de l'extracte aquós de CD sobre l'estrès oxidatiu i la flora intestinal suggereixen que la resistència a l'estrès oxidatiu podria estar correlacionada amb els canvis de la flora intestinal. Extracte aquós sobre la microbiota intestinal de ratolins amb trastorns de la flora intestinal. Aquests resultats proporcionaran informació valuosa sobre els possibles mecanismes mitjançant els quals la TC canvia la flora intestinal i confereix resistència intestinal a l'estrès oxidatiu.

2. Materials i Mètodes

2.1. Animals d'experimentació.

Es van comprar un total de 18 ratolins mascles C57BL/6J de classe SPF, amb un pes de 18 a 22 g, al Centre d'Animals Experimentals de la Universitat Mèdica de Xinjiang amb el número de llicència SCXK (nou) 2018-0003.Eli estaven allotjats en gàbies en condicions estandarditzades: fotoperíode clar/fosc de 12 h, temperatura de 23 ± 2 graus i humitat del 55 ± 5 per cent.ElEls animals van ser alimentats amb una dieta comercial (51% d'extracte sense nitrogen, 25% de proteïna bruta, 4,6% de greix brut, 6,5% de cendra bruta, 4,0% de fibra bruta i 8,9% d'humitat) i aigua de l'aixeta.ElEls animals van ser tractats segons les recomanacions descrites a la Guia per a la cura i l'ús d'animals de laboratori dels Instituts Nacionals de Salut.

2.2. Extracció de l'extracte aquós.

Llesques seques de C.tubulosa,proporcionats per Hotan Dichen PharmaceuticalBiotechnology Co., Ltd., es van triturar en pols i es van seleccionar grànuls amb mides de partícules entre 20 i 40 malles.ElLes condicions d'extracció eren les següents: relació sòlid-líquid d'1:19, temperatura de 80 graus, temps de microones de 6 min, temps d'ultrasons de 16 min, potència de microones de 400 W i potència d'ultrasons de 400 W.Elel contingut dels components principals de l'extracte aquós es va mesurar mitjançant HPLC (Agilent 1260 Infinity II, Califòrnia, EUA). En resum, les substàncies estàndard d'echinacòsid (0,2 mg/mL) i d'acteòsid (0,2 mg/mL) es van dissoldre en metanol al 50 per cent per servir com a solució de substància de referència.Eln, 1 g de l'extracte CTaqueous es va dissoldre en 100 ml de metanol al 50 per cent i es va deixar reposar durant 30 min.ElLa solució d'extracte es va tractar amb ultrasons a 250 W i 35 kHz durant 10 min i, posteriorment, es va centrifugar a 12, 000 rpm/min.Elel sobrenedant es va filtrar per una membrana filtrant microporosa de {{0}},45 μm. La solució de la substància de referència i el filtrat es van detectar per HPLC en les condicions següents: gel de sílice enllaçat amb octadecilsilà com a farciment, metanol com a fase mòbil A i àcid fòrmic al 0,1 per cent com a fase mòbil B.ElLa temperatura de la columna es va establir en 30 graus, la longitud d'ona de detecció es va establir en 330 nm i el volum d'injecció era de 10 μL.

2.3. Experiments.

Després d'una setmana d'adaptació, els 18 ratolins es van dividir aleatòriament en sis grups: A (normal amb extracte aquós CT de dosi mitjana afegit), B (normal sense extracte aquós CT), C (model sense extracte aquós), D (model amb extracte aquós elevat). extracte aquós de dosi CT afegit), E (model amb extracte aquós de CT de dosi mitjana afegit) i F (model amb extracte aquós de CT de dosi baixa afegit).Elels grups es van tractar de la següent manera: el grup normal es va impregnar amb una solució salina normal, el grup model es va impregnar de cefixima (30 mg/kg, Shiyao Group OuyiPharmaceutical Co., Ltd., Shijiazhuang, Xina) i una solució salina normal, el grup de dosis altes es va sucar. per cefixima i 221,14 mg/kg de l'extracte aquós CT, el grup de dosis mitjana es va impregnar de cefixima i 165,54 mg/kg d'extracte aquós, i el grup de dosis baixes es va impregnar de cefixima i 110,57 mg/kg d'extracte aquós.ElUn grup es va impregnar amb 165,54 mg/kg d'extracte aquós i no es va afegir cefixima. La cefixima es va administrar diàriament a les 12 :00 h, i s'administraven altres substàncies diàriament a les 15 :00 h. Durant els experiments, els grups C, D, E i F es van mantenir en l'estat model de trastorns intestinals.ElLes femtes es van recollir cada set dies a una taula operable asterile i es van emmagatzemar a -20 graus.

2.4. Observació histopatològica del còlon de ratolins.

Al final de l'experiment, els ratolins van ser assassinats per dislocació cervical, i el seu contingut de còlon es va recollir a una taula operable asteril i es va emmagatzemar a -80 graus; al mateix temps, es van fixar mostres de teixit colònic en formalina neutra al 10%.Eln, les mostres es van deshidratar amb gradient de concentració d'etanol, es van hialinitzar amb xilè, es van incrustar en parafina, es van seccionar i es van tenyir amb hematoxilina-eosina. Es van observar canvis morfològics a la mucosa del còlon i es van comparar amb un microscopi òptic. Es va mesurar la longitud de les vellositats i la profunditat de la cripta al còlon i es va calcular la relació entre la longitud de les vellositats i la profunditat de la cripta (valor V/C) (51).

2.5. Extracció d'ADN i construcció de biblioteques.

L'ADN es va extreure de les femtes mitjançant el kit d'ADN del sòl EZNA ® (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, EUA) segons el protocol del fabricant. La qualitat de l'ADN es va determinar mitjançant un fluoròmetre (QuantiFluor™–ST, Promega Corporation, EUA). Els cebadors aparellats a la regió V3-V4 de l'ADNr de 16s es van dissenyar per amplificar la regió i produir fragments d'ADN de 466 pb.ElEl cebador directe era 341F (-5-CCTACGGGNGGCWGCAG-3-) i el cebador invers era 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-). Cada volum de PCR era de 25 μl, que contenia 2, 5 μl de tampó de 10 × PCR, 2 μl de dNTP, 1 μl de cada cebador i 20-30 ng d'ADN plantilla. A continuació, els adaptadors indexats es van connectar a l'extrem dels amplicons per generar biblioteques de seqüenciació. Les biblioteques es van validar mitjançant un fluoròmetre QuantiFluor™ i es van quantificar a 10 nmol.

2.6. 16s Seqüenciació de gens d'ARNr i anàlisi de comunitats microbianes.

La plataforma Illumina (Illumina MiSeq) es va utilitzar per obtenir dades d'extrem aparellat de 2 × 250 pb. Les taxonomicunits operacionals (OTU) es van obtenir mitjançant el programari Uparse mitjançant un clustering estàndard amb un 97 per cent de similitud. L'algoritme d'assignació bayesiana ingenu del classificador RDP es va utilitzar per alinear les OTU amb la base de dades Greengene Release 13.5 i realitzar anotacions d'espècies. La diversitat alfa de la microbiota intestinal es va calcular mitjançant els índexs de Shannon i Simpson, i les diferències entre grups es van analitzar mitjançant l'anàlisi discriminant lineal Mida de l'efecte (LEfSe). La diversitat beta es va analitzar mitjançant l'anàlisi de coordenades principals (PCoA) de les diferències de Bray-Curtis. PICRUSt2 es va utilitzar per estimar la capacitat metabòlica microbiana del microbioma intestinal [42].

2.7. Anàlisi de dades estadístiques.

Es va utilitzar SPSS 20 per a ANOVA unidireccional i les dades experimentals es van expressar com X ± S; X indica el valor mitjà i S indica la desviació estàndard.

3. Resultats

3.1. L'efecte de l'extracte aquós CT sobre la morfologia del còlon.

Els compostos representatius (echinacòsid i acteòsid) i les seves concentracions de l'extracte CT van ser validats per HPLC (Figura S1). Per determinar l'efecte de l'extracte aquós sobre l'intestí, es va investigar la longitud de les viles del còlon i la profunditat dels recessos després del tractament amb l'extracte CTaqueous.ElLes vellositats del còlon dels grups de dosis normals i altes (A, B i D) eren més llargues i semblants als dits, mentre que les vellositats del còlon del model i dels grups de dosis baixes (C i F) eren curtes i les puntes de les vellositats del còlon estaven trencades ( Figura 1). En conseqüència, l'extracte aquós de TC a dosis altes va augmentar significativament la longitud de les vellositats del còlon i va reduir la profunditat del recés en ratolins amb trastorns intestinals en comparació amb els del grup model (P <0.01). en="" canvi,="" la="" profunditat="" dels="" recessos="" no="" va="" ser="" significativament="" diferent="" entre="" el="" grup="" de="" dosis="" altes="" i="" el="" grup="" normal="" (p=""> 0, 05) (taula S1). Aquests resultats van indicar que l'alta dosi de l'extracte aquós CT pot millorar la morfologia dins del còlon dels ratolins amb trastorns intestinals.

3.2. L'efecte de l'extracte aquós CT sobre la diversitat de la microbiota intestinal.

Vam realitzar una seqüenciació del gen rRNA 16s per investigar la causa potencial dels canvis morfològics dins del còlon i investigar els canvis en la microbiota intestinal després del tractament amb l'extracte aquós CT. A partir de les dades brutes es va obtenir una mitjana de 100.553 etiquetes efectives, que van des de 77.734 fins a 125.144. (Taula S2).Elels setags es van agrupar en 4932 OTU (taula S3). Després vam analitzar la diversitat de la microbiota intestinal a partir d'aquestes OTU. Els índexs de Shannon i Simpson no van mostrar cap diferència entre el grup A (normal amb l'extracte aquós CT) i el grup B (normal sense l'extracte aquós CT) (figura 2 (a)). Això va indicar que, en els ratolins sense tractament amb cefixima, l'extracte aquós CT podria no haver tingut efectes beneficiosos o nocius addicionals sobre la diversitat de la microbiota intestinal. Tanmateix, la -diversitat en el grup model (C) va mostrar una tendència decreixent en comparació amb la dels grups normals. Els ratolins tractats amb extractes aquosos de CT a dosis altes i mitjanes van mostrar signes de recuperació de la diversitat, mentre que aquest fenomen no es va observar en els ratolins tractats amb extracte aquós CT de dosis baixes (figura 2 (a)). Mentrestant, el PCoA va revelar que els grups normals (A i B) i els grups de trastorns intestinals als extractes aquosos de dosis altes (D) i mitjanes (E) administrats tendien a tenir distàncies entre mostres més curtes que els del grup model i els de dosis baixes. Grup de suplements d'extracte aquós (F) (Figura 2 (b)). Aquests resultats van indicar que l'extracte aquós CT podria ajudar a millorar la diversitat de la microbiota intestinal en ratolins amb trastorns intestinals.

3.3. Canvis en la composició de la microbiota intestinal tractada amb l'extracte aquós CT.

*Es van comparar els perfils de composició de la microbiota entre diferents grups. A nivell del fílum, l'abundància relativa de Proteobacteris en el grup model era superior a la dels altres grups (figura 3 (a)). * L'augment de Proteobacteris va suggerir que el microbioma dels ratolins model va ser canviat per la cefixima i que l'extracte aquós CT podria beneficiar la microbiota intestinal, ja que l'augment de la prevalença de Proteobacteris és un marcador principal de la flora intestinal desordenada [43–45]. A més, a nivell de gènere, l'abundància relativa de Lactobacillus en el grup model va disminuir en comparació amb la dels grups normals i amb dosis altes; tanmateix, va augmentar en comparació amb el grup de dosis mitjanes i baixes (figura 3 (b)). Aquests resultats van indicar que l'extracte CTaqueous en dosis altes podria promoure el creixement d'alguns bacteris del gènere Lactobacillus. La microbiota diferencial entre els grups estudiats es va determinar més segons l'anàlisi LEfSe. *L'anàlisi va demostrar que, després del tractament amb cefixima, les abundàncies relatives de Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteriales i Chloroflexi van augmentar significativament, mentre que les abundàncies relatives del grup Lactobacillus, Eubacterium_nodatum_, Pseudonocardinals i Pseudonocardinals. El grup Christensenellaceae_R-7_ va disminuir significativament en comparació amb els del grup normal (figura 4 (a)). Sorprenentment, quan el grup model es va complementar amb l'extracte aquós CT d'alta dosi, les abundàncies relatives de Muribaculaceae, Lactobacillus, Kineosporiaceae, Eubacterium nodatum i Pedobacter van augmentar significativament en comparació amb les del grup model. Mentrestant, les abundàncies relatives de Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostri dium_9 i Candidatus Stoquefichus van disminuir significativament en comparació amb les del grup model (figura 4 (b)).

3.4. Funcions de la microbiota intestinal relacionades amb el tractament amb l'extracte aquós CT.

Hem utilitzat el programari PICRUSt2 per predir les vies metabòliques de la microbiota intestinal i el grup normal es va utilitzar com a referència per analitzar els canvis en altres grups. Sota el tractament amb cefixima, va augmentar l'abundància relativa de la degradació de l'etilbenzè, la biosíntesi de pèptids no ribosòmics del grup sideròfor i el metabolisme dels xenobiòtics per les vies del citocrom P450; després del tractament amb extractes aquosos de dosis altes i mitjanes CT, la seva abundància relativa va tornar als nivells normals. Mentrestant, l'abundància relativa de la via del metabolisme dels cianoaminoàcids va disminuir amb el tractament amb cefixima; tanmateix, va augmentar després del tractament amb l'extracte aquós de CT a dosis altes. A més, en general, els canvis en les diferents vies dels metabòlits després del tractament amb cefixima van ser significatius en comparació amb els del grup normal; tanmateix, l'addició de l'extracte CTaqueous va ser capaç d'evitar canvis excessius (figura 5).

4. Discussió

La morfologia del còlon es pot alterar pel creixement, la digestió i l'absorció, la regulació immune i la reparació de lesions intestinals [46–50]. * La relació V/C pot reflectir de manera exhaustiva l'estat digestiu del tracte intestinal i és directament proporcional a la capacitat digestiva i d'absorció del tracte intestinal [51, 52]. En el present estudi, la biòpsia i les dades estadístiques de les vellositats i els recessos van mostrar que la dosi aquosaextractepodria millorar en part la morfologia defectuosa dins del còlon.Investigar com l'aquosaextractecanvia la morfologia intestinal i afecta la microbiota intestinal, vam treballar al revés dels canvis en la flora intestinal. Vam trobar que l'abundància relativa de Proteobacteria, un marcador central de la flora intestinal desordenada, va augmentar amb el tractament amb cefixima en comparació amb la sense tractament amb cefixima.* L'abundància relativa d'altres marcadors centrals, Bacteroidetes i Firmicutes, no va tenir canvis significatius, tot i que aquests grups són predominants en l'intestí humà; Es va trobar que la proporció de Bacteroidetes/Firmicutes disminuïa en persones obeses en comparació amb la de persones primes, i es va trobar que aquesta proporció augmentava amb la pèrdua de pes en persones amb dos tipus de dieta baixa en calories [38, 41, 43–45, 48, 53, 54]. Mentrestant, Turicibacter, que s'associa amb l'obesitat [55], va ser significativament elevat en el grup model en comparació amb els altres grups. En particular, la diversitat de microbiota intestinal als ratolins model es va millorar mitjançant l'addició de l'extracte CTaqueous. Hem observat alguns ratolins bacteriïnes intestinals específics sota diferents tractaments; per exemple, Lactobacillus i Muribaculaceae van ser els dos gèneres bacterians principals que van augmentar en el grup tractat amb l'extracte aquós d'alta dosi CT en comparació amb els del grup model (Figura 4). Estudis recents han indicat que els polisacàrids dels extractes aquosos de CT posseeixen importants activitats antioxidants in vitro [56] i poden promoure el creixement d'alguns bacteris làctics, que podrien beneficiar la salut [43]. Paral·lelament, les Muribaculaceae són organismes probiòtics vinculats a la longevitat [57]. Aquests van suggerir que el mecanisme pel qual l'extracte aquós CT millora la microbiota intestinal pot ser la promoció o la protecció del creixement d'organismes probiòtics. Un altre bacteri digne de destacar va ser el bacteri YE57. Tot i que l'extracte CTaqueous d'alta dosi va promoure l'abundància relativa del bacteri YE57 en el present estudi (figura 4), estudis anteriors han trobat que la seva abundància era més alta a l'intestí normal que a l'intestí tractat amb residus d'herbes d'alta concentració [58] i que la seva abundància es va reduir després de la intervenció amb Bacillus licheniformis combinat amb XOS (xilooligosacàrids) [59]. * nosaltres, el paper d'aquesta bacteriumina la microbiota intestinal mereix més estudi. A més, un nombre de mostres relativament petit en aquest estudi podria provocar una mesura de fals positius i falsos negatius, i es suggereix un estudi futur sobre mostres més grans per validar els marcadors bacterians identificats.

TC aquósextracteLa composició podria ser important pels seus efectes sobre la composició i els canvis funcionals a la microbiota intestinal de ratolins amb trastorns intestinals. Els PHG són components actius comuns que es troben a la CD i la TC, i l'echinacòsid es va identificar com el principal PHG en CT [60]. En les últimes dècades, s'ha demostrat que l'echinacòsid posseeix moltes activitats farmacològiques, com ara efectes antienvelliment i neuroprotectors, millora de la funció cardíaca, reducció de la hiperlipèmia i la hiperglucèmia i la prevenció de la diabetis induïda per l'obesitat i la síndrome metabòlica [53, 61-65]. De fet, vam detectar canvis en les vies metabòliques de la microbiota intestinal.* El tractament de la cefixima va conduir a l'enriquiment de bacteris relacionats amb la degradació de l'etilbenzè i la biosíntesi dels pèptids no ribosòmics del grup sideròfor, mentre que els tractaments amb dosis altes i mitjanes de TC aquosos.extractepodria alleujar aquests canvis, cosa que indica que aquest extracte va moderar la comunitat bacteriana relacionada amb aquestes funcions. A més, l'augment de l'enriquiment bacterian relacionat amb la via del metabolisme dels cianoaminoàcids sota el tractament amb l'extracte aquós en dosis altes i el seu enriquiment disminuït en ratolins models van indicar que l'extracte aquós CT pot promoure el metabolisme del cianoaminoàcid. *Els canvis en els metabòlits rellevants poden proporcionar aquest extracte aquós amb activitats farmacològiques.

Referències

[1] A. Heintz-Butchart i P. Wilmes, "Human gut microbiome: function matters", Trends in Microbiology, vol. 26, núm. 7, pp. 563–574, 2018.

[2] CA Thaiss, N. Zmora, M. Levy i E. Elinav, "*emicrobiome and innate immunity", Nature, vol. 535, núm. 7610, pàgs. 65–74, 2016.

[3] G. Quaranta, M. Sanguinetti i L. Masucci, "Fecal microbiota transplantation: a potential tool for the treatment of humanfemale reproductive tract diseases", Frontiers in Immunology, vol. 10, pàg. 2653, 2019.

[4] GA Weiss i T. Hennet, "Mecanismes i conseqüències de la disbiosi intestinal", Cellular and Molecular Life Sciences, vol. 74, núm. 16, pàgines 2959–2977, 2017.

[5] Y. Li, Y. Peng, P. Ma et al., "Efectes semblants als antidepressius de l'extracte de Cistanche tubulosa sobre rates d'estrès impredictible cròniques a través de la restauració de l'homeòstasi de la microbiota intestinal", Frontiersin Pharmacology, vol. 9, pàg. 967, 2018.

[6] L. Fan, Y. Peng, J. Wang, P. Ma, L. Zhao i X. Li, "Totalglycosides from tiges of Cistanche tubulosa alleviate depression-like behaviors: bidireccional interaction of thephytochemicals and gut microbiota," Fitomedicina, vol. 83, ID de l'article 153471, 2021.

[7] Y. Li, Y. Peng, M. Wang, P. Tu i X. Li, "Metabolisme gastrointestinal humà de l'extracte d'aigua d'herba de cistanches in vitro: dilucidació del perfil metabòlic basat en la identificació completa de metabòlits en suc gàstric, suc intestinal, bacteris intestinals humans i microsomes intestinals", Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 65, núm. 34, pàgs. 7447–7456, 2017.

[8] H. Wang, Y. Sun, W.-C. Ye et al., "Feniletanoides antioxidants i glucòsids fenòlics de Picrorhiza scrophulariiflora", Butlletí químic i farmacèutic, vol. 52, núm. 5, pàgines 615–617, 2004.

[9] S.-L. Ji, K.-K. Cao, X.-X. Zhao et al., "Activitat antioxidant dels glucòsids feniletanoides sobre la neurotoxicitat induïda pel glutamat", Biociència, Biotecnologia i Bioquímica, vol. 83, núm. 11, pàgines 2016–2026, 2019.

[10] Q. Wang, J. Dong, W. Lu et al., "Els glucòsids de feniletanol de Cistanche tubulosa van millorar la disfunció reproductiva mitjançant la regulació dels esteroides testiculars mitjançant CYP450-3 -HSDpathway", Journal of Ethnopharmacology, vol. 251, article ID112500, 2020.

[11] S.-P. Tu, L. Ma, J. Zhao, S.-L. Zhang i T. Liu, "Glucòsids de feniletanol de Cistanche tubulosa suprimeixen l'activació de cèl·lules estelades hepàtiques i bloquegen la conducció de vies de senyalització en TGF- 1/smad com a possibles agents anti-fibrosi hepàtica", Molecules, vol. 21, núm. 1, pàg. 102, 2016.

[12] S.-P. Tu, J. Zhao, L. Ma, M. Tudimat, S.-L. Zhang i T. Liu, "Efectes preventius dels glucòsids feniletanoides de Cistanche tubulosa sobre la fibrosi hepàtica induïda per l'albúmina sèrica bovina en rates", DARU Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 23, núm. 1, pàg. 52, 2015.

[13] T. Morikawa, H. Xie, Y. Pan et al., "A review of biologicallyactive natural products from a desert plant Cistanche tubulosa", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 67, núm. 7, pp. 675–689, 2019.

[14] J. Li, J. Li, A. Aipire et al., "Els glucòsids feniletanoides de Cistanche tubulosa inhibeixen el creixement de cèl·lules B16-F10 tant in vitro com in vivo mitjançant la inducció de l'apoptosi a través de la via dependent dels mitocondris, "Diari de càncer, vol. 7, no. 13, pàgines 1877–1887, 2016.

[15] Y. Hu, J. Huang, Y. Li et al., "El polisacàrid de Cistanche deserticola indueix la melanogènesi en els melanòcits i redueix l'estrès oxidatiu mitjançant l'activació de la via NRF2/HO-1", Journalof Cellular and Molecular Medicine, vol. 24, núm. 7, pp. 4023–4035, 2020.

[16] S. Peng, P. Li, P. Liu et al., "Cistanches allevia la disfunció cognitiva induïda per sevoflurane mitjançant la regulació de l'antioxidant i antiinflamatori dependent de PPAR-c en rates", Journalof Cellular and Molecular Medicine, vol. 24, núm. 2, pàgines 1345–1359, 2020.

[17] Y. Liu, H. Wang, M. Yang et al., "Cistanche deserticolapolysacharides protegeixen les cèl·lules PC12 contra lesions induïdes per OGD/RP", Biomedicine & Pharmacotherapy, vol. 99, pàgines 671–680,2018.

[18] Z. Fu, L. Han, P. Zhang et al., "Cistanche polysaccharidesenhance echinacoside absorption in vivo and affect the gutmicrobiota", International Journal of Biological Macromolecules, vol. 149, pàgines 732–740, 2020.

[19] NT Williams, "Probiòtics", American Journal of Health-System Pharmacy, vol. 67, núm. 6, pàgs. 449–458, 2010.[20] R. Ashraf i NP Shah, "Estimulació del sistema immunitari per microorganismes probiòtics", Critical Reviews in Food Scienceand Nutrition, vol. 54, núm. 7, pàgines 938–956, 2014.

[21] G. La Fata, P. Weber i MH Mohajeri, "Probiòtics and thegut immune system: indirect regulation", Probiòtics andAntimicrobial Proteins, vol. 10, no. 1, pàgines 11–21, 2018.

[22] MA Zocco, LZ dal Verme, F. Cremonini et al., "Eficàcia de lactobacillus GG en el manteniment de la remissió de la colitis ulcerosa", Farmacologia alimentària i 8erapeutics, vol. 23, núm. 11, pàgines 1567–1574, 2006.

[23] MJ Saez-Lara, C. Gomez-Llorente, J. Plaza-Diaz i A. Gil,"* el paper dels bacteris probiòtics de l'àcid làctic i bifidobacteris en la prevenció i tractament de la malaltia inflamatòria intestinal i altres malalties relacionades: una sistemàtica revisió dels assaigs clínics humans aleatoris", BioMed Research International, vol. 2015, ID d'article 505878, 15 pàgines, 2015.

[24] MAO Dawood, S. Koshio, M. Ishikawa, et al., "Efectes de la suplementació dietètica de Lactobacillus rhamnosus o / i Lactococcus lactis sobre el creixement, la microbiota intestinal i les respostes immunes de la daurada, Pagrus major", Fish & ShellfishImmunology, vol. 49, pàgines 275–285, 2016.

[25] A. Sivan, L. Corrales, N. Hubert et al., "Commensal bifidobacterium promou la immunitat antitumoral i facilita l'eficàcia anti-PD-L1", Science, vol. 350, núm. 6264, pàgines 1084–1089,2015.

[26] PJ Whorwell, L. Altringer, J. Morel et al., "Eficàcia del probiòtic anencapsulat Bifidobacterium infantis 35624 en dones amb síndrome d'intestí irritable", 8e American Journal of Gastroenterology, vol. 101, núm. 7, pàgines 1581–1590, 2006.

[27] Y. Wang, Y. Wu, Y. Wang et al., "Propietats antioxidants dels bacteris probiòtics", Nutrients, vol. 9, no. 5, pàg. 521, 2017.

[28] JMC Gutteridge, R. Richmond i B. Halliwell, "Inhibició de la formació catalitzada per ferro de radicals hidroxil de superòxid i de peroxidació de lípids per desferrioxamina", Biochemical Journal, vol. 184, núm. 2, pp. 469–472, 1979.

[29] E. Deriu, JZ Liu, M. Pezeshki, et al., "Els bacteris probiòtics redueixen la colonització intestinal de la salmonel·la Typhimurium competint pel ferro", Cell Host & Microbe, vol. 14, núm. 1, pp. 26-37, 2013.

[30] T. Kullisaar, M. Zilmer, M. Mikelsaar, et al., "Two antioxidative lactobacilli strains as promising probiòtics", International Journal of Food Microbiology, vol. 72, núm. 3, pp. 215–224, 2002.

[31] JG LeBlanc, S. del Carmen, A. Miyoshi, et al., "L'ús de superòxid dismutasa i catalasa que produeixen bacteris àcid làctics TNBS induced la malaltia de Crohn en ratolins", Journal of Biotechnology, vol. 151, núm. 3, pàgines 287–293, 2011.

[32] M. Rossi, A. Amaretti i S. Raimondi, "Folate productionby probitic bacteris", Nutrients, vol. 3, no. 1, pàgines 118–134,2011.

[33] A. Pompei, L. Cordisco, A. Amaretti, et al., "Administration offolate-producing bifidobacteria enhances folate status in Wistar rates", 8e Journal of Nutrition, vol. 137, núm. 12, pp. 2742–2746, 2007.

[34] L.-X. Wang, K. Liu, DW Gao i JK Hao, "Efectes protectors de dues soques de Lactobacillus Plantarum en ratolins hiperlipidèmics", World Journal of Gastroenterology, vol. 19, núm. 20, pàgines 3150–3156, 2013.

[35] EO Petrof, K. Kojima, MJ Ropeleski, et al., "Els probiòtics inhiben el factor nuclear-κB i indueixen les proteïnes de xoc tèrmic en cèl·lules epitelials incoloniques mitjançant la inhibició del proteasoma", Gastroenterology, vol. 127, núm. 5, pàgines 1474–1487, 2004.

[36] A. Seth, F. Yan, DB Polk i RK Rao, "Els probiòtics milloren la disrupció de la barrera epitelial induïda pel peròxid d'hidrogen per un mecanisme dependent de la quinasa PKC i MAP", American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology, vol. 294, núm. 4, pàgines G1060–G1069, 2008.

[37] M. Gomez-Guzman, M. Toral, M. Romero, et al., "Antihypertensive effects of probiotics lactobacillus strains in spontaneously hypertensive rates", Molecular Nutrition & FoodResearch, vol. 59, núm. 11, pàgines 2326–2336, 2015.

[38] H. Zeng, L. Huang, L. Zhou, P. Wang, X. Chen i K. Ding, "Un galactoglucan aïllat de Cistanchedeserticola YC Ma. i la seva bioactivitat sobre soques de bacteris intestinals", Carbohydrate Polymers, vol. 223, ID de l'article 115038, 2019.

[39] S. Zheng, X. Jiang, L. Wu, Z. Wang i L. Huang, "Chemicaland genetic discrimination of cistanches herba based onUPLC-QTOF/MS and DNA barreding", PLoS One, vol. 9, no. 5, ID d'article e98061, 2014.

[40] M. Li, T. Xu, F. Zhou et al., "Efectes neuroprotectors dels glicòsids de quatre feniletanoides sobre l'apoptosi induïda per H2O2-en cèl·lules PC12 a través de la via Nrf2/ARE", International Journal of Molecular Sciences, vol. 19, núm. 4, pàg. 1135, 2018.

[41] A. Wu, Z. Yang, Y. Huang et al., "Els feniletanoidglicòsids naturals aïllats de Callicarpa kwangtungensis suprimeixen la resposta inflamatòria mediada per lipopolisacàrids mitjançant l'activació de la via Keap1/Nrf2/HO-1 a la cèl·lula dels macròfags RAW 264.7, "Revista d'Etnofarmacologia, vol. 258, ID de l'article 112857, 2020.

[42] GM Douglas, VJ Maffei, JR Zaneveld et al., "PICRUSt2for prediction of metagenome functions", Nature Biotechnology, vol. 38, núm. 6, pàgines 685–688, 2020.

[43] H.-L. Li, L. Lu, X.-S. Wang et al., "Alteració de la microbiota intestinal i els perfils inflamatoris de citocines/quimiocines en 5-mucositis intestinal induïda per fluorouracil", Frontiers in Cellular andInfection Microbiology, vol. 7, pàg. 455, 2017.

[44] M. Pammi, J. Cope, PI Tarr, et al., "Intestinal dysbiosis in preterm infants preceding necrotiizing enterocolitis: a systematic review and meta-anàlisi", Microbiome, vol. 5, no. 1, pàg. 31, 2017.

[45] N.-R. Shin, TW Quan i J.-W. Bae, "Proteobacteris: signatura microbiana de la disbiosi a la microbiota intestinal", Trends inBiotechnology, vol. 33, núm. 9, pàgines 496–503, 2015.

[46] M. de Oliveira Belem, CP Cirilo, AP de Santi-Rampazzoet al., "L'ajustament de la morfologia intestinal causat per la restricció dietètica millora l'estat nutricional durant el procés d'envelliment de les rates", Experimental Gerontology, vol. 69, pàgines 85–93,2015.

[47] B. Potsic, N. Holliday, P. Lewis, D. Samuelson, V. DeMarco i J. Neu, "Suplementació i privació de glutamina: efecte sobre la morfologia intestinal petita de rata criada artificialment", Pediatric Research, vol. 52, núm. 3, pàgs. 430–436, 2002.

[48] ​​JL Daniels, RJ Bloomer, M. van der Merwe, SL Davis, KK Buddington i RK Buddington, "Adaptacions intestinals a una combinació de diferents dietes amb i sense exercici de resistència", Journal of the International Society ofSports Nutrition, vol. 13, núm. 1, pàg. 35, 2016.

[49] L. Muñoz, MJ Borrero, M. Ubeda et al., "Intestinal immune ´dysregulation driven by dysbiosis promotions barrier disruptionand bacterial translocation in rates with cirrhosis", Hepatology, vol. 70, no. 3, pàgines 925–938, 2019.

[50] X. Li, Y. Wu, Z. Xu et al., "Efectes de la decocció hetiao jianpi sobre lesions intestinals i reparació en rates amb diarrea associada a antibiòtics", Medical Science Monitor, vol. 26, article IDe921745, 2020.

[51] Y. Xie, F. Ding, W. Di et al., "Impacte d'una dieta rica en greixos sobre les cèl·lules mare intestinals i la funció de barrera epitelial en ratolins femenins de mitjana edat", Molecular Medicine Reports, vol. 21, núm. 3, pàgines 1133–1144, 2020.

[52] BL Bivolarski i EG Vachkova, "Esdeveniments morfològics i funcionals associats al deslletament en conills", Journal ofAnimal Physiology and Animal Nutrition, vol. 98, núm. 1, pp. 9-18, 2014.

[53] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan, i M.-H. Su, "* Efectes hipocolesterolèmics de l'extracte de Cistanchetubulosa, una medicina crua tradicional xinesa, inmice", 8e American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, no. 6, pàgs. 1125–1138, 2009.[54] RE Ley, PJ Turnbaugh, S. Klein i JI Gordon, "Els microbis humans associats a l'obesitat", Nature, vol. 444, núm. 7122, pàg. 1022-1023, 2006.

[55] J.-Y. Kim, YM Kwon, I.-S. Kim et al., "Efectes de la suplementació d'algues marrons laminaria japonica sobre les concentracions sèriques d'IgG, triglicèrids i colesterol i composició de la microbiota intestinal en rates", Frontiers in Nutrition, vol. 5, pàg. 23, 2018.

[56] W. Zhang, J. Huang, W. Wang et al., "Extraction, purification,characterization and antioxidant activity of polysacharidesfrom Cistanche tubulosa", International Journal of BiologicalMacromolecules, vol. 93, pàgines 448–458, 2016.

[57] M. Sibai, E. Altuntas¸, B. Yıldırım, G. Ozt¨urk, S. Yıldırım i ¨T. Demircan, "Microbioma i longevitat: una gran abundància de Muribaculaceae lligades a la longevitat a l'intestí del rosegador de llarga vida Spalax leucodon", OMICS: A Journal of IntegrativeBiology, vol. 24, núm. 10, pàgines 592–601, 2020.

[58] Y. Xie, Z. Chen, D. Wang et al., "Efectes dels residus d'herbes fermentades sobre les característiques de la microbiota intestinal de les vaques de Holstein sota estrès per calor", Frontiers in Microbiology, vol. 11, pàg. 1014, 2020.

[59] Y. Li, M. Liu, H. Liu et al., "Els suplements orals de Bacillus licheniformis zhengchangsheng i xilooligosacàrids combinats milloren l'obesitat induïda per la dieta alta en greixos i modulen la microbiota intestinal de les rates", BioMed Research International, vol. 2020, ID d'article 9067821, 17 pàgines, 2020.

[60] Y. Jiang i P.-F. Tu, "Anàlisi de components químics incistanche espècies", Journal of Chromatography A, vol. 1216, núm. 11, pàgines 1970–1979, 2009.

[61] F. Li, Y. Yang, P. Zhu et al., "Echinacoside promou la regeneració òssia augmentant la relació OPG/RANKL a les cèl·lules MC3T3-E1", Fitoterapia, vol. 83, núm. 8, pàgines 1443–1450, 2012.

[62] F. Tang, Y. Hao, X. Zhang i J. Qin, "Efecte de la fibrosi renal d'echinacosideon per inhibició de la via de senyalització de TGF- 1/Smads en el model de ratolins db/db de nefropatia diabètica", Disseny, desenvolupament i 8erapy de fàrmacs, vol. 11, pàgines 2813–2826, 2017.

[63] W.-T. Xiong, L. Gu, C. Wang, H.-X. Sun, i X. Liu, "Efectes antihiperglucèmics i hipolipidèmics de Cistanche tubulosa en ratolins db/db diabètics tipus 2", Journal of Ethnopharmacology, vol. 150, núm. 3, pàgines 935–945, 2013.

[64] X.-x. Bao, H.-h. Ma, H. Ding, W.-w. Li i M. Zhu, "Optimització preliminar d'una fórmula de medicina herbal xinesa basada en els efectes neuroprotectors en un model de rata de la malaltia de Parkinson induïda per rotenona", Journal of IntegrativeMedicine, vol. 16, núm. 4, pàgines 290–296, 2018.

[65] Y. Chen, Y.-Q. Li, J.-Y. Fang, P. Li i F. Li, "Establiment del model experimental concurrent d'osteoporosi combinat amb la malaltia d'Alzheimer a la rata i els efectes duals de l'echinacòsid i l'acteòsid de Cistanche tubulosa", Journalof Ethnopharmacology, vol. 257, ID d'article 112834, 2020.

[66] M. Hensel, AP Hinsley, T. Nikolaus, G. Sawers i B. C. Berks, "*e base genètica de la respiració de tetrathionate inSalmonella typhimurium", Molecular Microbiology, vol. 32, núm. 2, pàgines 275–287, 1999.

[67] SE Winter, P. Thiennimitr, MG Winter et al., "Gut inflammation provides a respiratory electron acceptor forSalmonella", Nature, vol. 467, núm. 7314, pàgines 426–429, 2010.

[68] SE Winter, MG Winter, MN Xavier et al., "Host-derivednitrate boosts growth of E. coli in the inflamated gut", Science, vol. 339, núm. 6120, pàgines 708–711, 2013.

[69] C. Lupp, ML Robertson, ME Wickham et al., "La inflamació mediada per l'hoste altera la microbiota intestinal i promou el creixement excessiu d'Enterobacteriaceae", Cell Host & Microbe, vol. 2, no. 2, pàgines 119–129, 2007.

[70] B. Stecher, R. Robbiani, AW Walker et al., "Salmonellaenterica serovar typhimurium explota la inflamació per competir amb la microbiota intestinal", PLoS Biology, vol. 5, no. 10, pàgines e244–2189, 2007.

[71] V. Mishra, C. Shah, N. Mokashe, R. Chavan, H. Yadav i J. Prajapati, "Probiòtics com a possibles antioxidants: una visió sistemàtica", Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 63, núm. 14, pàgines 3615–3626, 2015.

[72] JMP Mart´ın, PF Freire, L. Daimiel et al., "*e hidroxianisol butilat antioxidant potencia els efectes tòxics del propilparaben en cèl·lules de mamífers cultivades", Food and Chemical Toxicology, vol. 72, pàgines 195–203, 2014.

[73] RS Lanigan i TA Yamarik, "Final report on the safetyassessment of BHT", International Journal of Toxicology, vol. 21, núm. 2, pàgs. 19–94, 2002