L'elastina constitueix la proteïna elàstica dels teixits connectius epidèrmics amb col·lagen

Siusplau contactaoscar.xiao@wecistanche.comper a més informació

Resum:Es va aïllar un nou glucòsid de xantona, 135,6-tetrahidroxixantona-C-4-D-glucopiranòsid de l'extracte de metanol de fulles de Mangifera Indica (Anacardiaceae) que creixen a Egipte. L'estructura es va aclarir mitjançant dades espectroscòpiques de RMN 1D i 2D. Les propietats fisicoquímiques del compost, com ara la lipofilia, la solubilitat i les consideracions de formulació, es van predir mitjançant la tècnica ADMET in silico mitjançant el servidor SwissADME. Aquesta tècnica va proporcionar la regla de cinc de Lipinski, com ara l'absorció, la distribució, el metabolisme i la permeació de la pell del GIT. Es van avaluar les activitats inhibidores in vitro contra enzims mediats per l'envelliment com ara col·lagenasa, elastasa, hialuronidasa i tirosinasa. El compost va mostrar efectes notables contra col·lagenasa, antielastasa, antihialuronidasa i antitirosinasa amb valors IC50 d'1,06,419,10,1,65 i 0,48 ug/ml, respectivament, en comparació amb el control positiu. El compost va mostrar una solubilitat aquosa prevista prometedora i una penetració raonable a la pell, cosa que suggereix la idoneïtat del compost per a la formulació tòpica com a agent antienvelliment per a preparacions cosmètiques.

Paraules clau:xantona; Mangifera indica; envelliment; cel·lagenasa; elastasa; tirosinasa; hialuronidasa; in silico ADMET

1. Introducció

El procés d'envelliment és un procés bioquímic complex associat a l'estrès oxidatiu impulsat pels radicals lliures endògens d'oxigen i nitrogen generats durant l'esperança de vida, que pot contribuir a la progressió de les manifestacions associades a l'edat [1]. Les patologies de l'envelliment de la pell com les arrugues, la hiperpigmentació, les taques d'envelliment, les arrugues, el melasma, les pigues, el lentigo, els efèlides, els nevus, l'enfosquiment i el melanoma es produeixen mitjançant l'activació d'espècies reactives d'oxigen (ROS) [2]. Els radicals lliures o ROS podrien induir un canvi en la composició estructural de les cèl·lules de la pell i danyar les membranes cel·lulars estimulant l'oxidació de lípids i proteïnes, provocant danys a l'ADN i mort cel·lular [3,4]. A més, les ROS tenen un paper important en el procés d'envelliment de la pell en danyar les principals proteïnes de la pell com el col·lagen i l'elastina mitjançant l'activació dels enzims de col·lagenasa i elastasa. A més, els radicals lliures provoquen la degradació de l'àcid hialurònic mitjançant l'activació de les hialuronidases, la qual cosa condueix a una hidratació inadequada de la pell [5,6]. L'anticipació d'aquests processos dinàmics es considera un tema clau per a l'àrea dermo-cosmètica i s'està gastant una gran feina de recerca per descobrir noves formulacions protectores[7]. Els antioxidants són els enzims de defensa naturals presents a la pell i contraresten els radicals lliures excessius produïts al cos. No obstant això, l'equilibri oxidatiu es pot veure alterat per diversos factors, com ara la dieta i la contaminació de l'aire, que condueixen a l'estrès oxidatiu. En aquest estrès oxidatiu, la càrrega de radicals lliures al cos és significativament superior a la dels antioxidants naturals. Per tant, és molt important utilitzar antioxidants externs de fonts com la dieta, els cosmètics o els productes farmacèutics per neutralitzar els radicals lliures i contrarestar el procés d'envelliment de la pell [5,8]. Els estudis moderns han revelat que diversos metabòlits secundaris naturals, principalment flavonoides i polifenòlics, contribueixen significativament a l'activitat antioxidant total de moltes plantes [9]. Això ha portat a l'interès en la investigació de l'activitat antioxidant de moltes plantes [10]. S'ha informat de les fruites per la seva riquesa en aquests fenòlics i flavonoides, així com en vitamines [11].

Feu clic aquí per saber-ne més

L'elastina constitueix la proteïna elàstica dels teixits connectius epidèrmics amb col·lagen i representa un paper important en la prevenció de les arrugues i la fermesa de la pell[12]. Durant l'envelliment cel·lular, les metaloproteinases de la matriu com la col·lagenasa, l'elastasa i la hialuronidasa estan regulades [13]. La supressió d'aquests enzims és una de les estratègies terapèutiques més efectives per gestionar el deteriorament de les condicions de la pell durant l'envelliment [14]. Els compostos fenòlics derivats de les plantes s'han descrit com a potents mediadors de blanqueig a causa de les seves propietats inhibidores de la tirosinasa [15] i alguns (d'ells podrien tenir un paper en la remodelació de la matriu mitjançant un efecte inhibidor de l'elastasa [16].

Mangifera indica L. és una de les plantes comestibles més importants que pertany a la família Anacardiaceae distribuïda per molts països, especialment regions tropicals [17]. Les fruites de mango han exhibit un paper imprescindible en els camps agrícola, alimentari, farmacèutic i nutracèutic durant més de 4000 anys [18]. A més, la fruita del mango ocupa la segona posició entre els cultius industrials, després de la balana, pel que fa a producció i cobertura [19]. Les diferents parts de Mangifera indica representen una font rica de diferents fitoconstituents, inclosos flavonoides, xantoides, àcids fenòlics i triterpenoides amb un valor potencial com a molècules funcionals [18]. A més, les fruites subministren al cos humà components vitals com hidrats de carboni, proteïnes, greixos, minerals, vitamines, aminoàcids essencials, carotenoides, fibres dietètiques i fenòlics [20]. Tradicionalment, diferents cultius van informar que la infusió de fulles s'ha utilitzat per a diverses malalties com ara diarrea, disenteria sagnant, anèmia, asma, bronquitis, hipertensió, insomni, reumatisme, indigestió, hepatitis, tètanus, avortament involuntari i hemorràgies [21]. A més, els fums de les fulles ardents es van inhalar per singlots i afeccions a la gola [18]. L'escorça s'utilitzava com a diürètic i en apòsits antireumàtics. Les llavors són ben conegudes per al tractament dels refredats, l'asma, la diarrea i les hemorràgies. S'ha informat d'activitat antioxidant, alt contingut fenòlic total (TPC), contingut total de flavonoides (TFC), 2, activitat d'eliminació de 2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) i capacitat d'inhibició linoleica de parts de la planta de Mangifera indica. 22].

Cistanche pot anti-envelliment

Aquest estudi va ser dissenyat per investigar les propietats inhibidores in vitro d'un nou compost de xantona obtingut a partir de l'extracte metanòlic del 70% de fulles de Mangifera indica L. contra col·lagenasa, elastasa, tirosinasa i hialuronidasa. A més, es van dur a terme propietats farmacocinètiques com l'absorció, la distribució, el metabolisme i la toxicitat (predicció in silico ADMET) mitjançant SwissADME i la regla de cinc de Lipinski per avaluar la solubilitat, la permeabilitat i les necessitats de formulació del fàrmac.

2.Resultats i discussió

2.1. Elucidació de l'estructura del compost aïllat

El compost es va obtenir en forma de cristalls grocs (18,29 mg). L'anàlisi cromatogràfica va revelar una taca de color groc taronja pàl·lid a TLC sota llum UV llarga (365 nm) en sistemes de dissolvents DCM: MeOH (7:3) i BAW. Quan la taca es va tractar amb una solució de clorur fèrric metanòlic a l'1 per cent, es va tornar verd fosc i va donar un groc amb una solució d'amoníac. Les dades espectrals de lH-RMN, APT i HMBC del compost es recullen a la taula 1. L'anàlisi espectral de lH-RMN (DMSO-dg, temperatura ambient) (figures Sl i S2) va revelar la presència de dos senyals de doblet aromàtic de camp inferior a oH 7,57 i 6,79 amb una constant d'acoblament de 8,24 Hz que indica la presència de dos protons ortoacoblats. A més, la regió aromàtica de l'espectre H-RMN va mostrar la presència d'un senyal singlet a Su 5,96, que indica la presència d'un sol protó a l'anell aromàtic. El protó anomèric de la unitat C-glucosyl es va detectar a Su 4,60 ppm amb un valor constant d'acoblament de 7 Hz assignat per a -anòmer. Aquest patró de protons aromàtics en l'espectre H-RMN del compost aïllat s'assembla a l'estructura de la xantona. A més, la presència d'un protó -anomèric a ou 4,60 amb canvis químics característics de la glucosa entre 3,21 i 4,60 de lH-RMN (regió del sucre) va indicar que hi ha un enllaç C-glicosídic entre el sucre i la xantona. Com es mostra a la figura S3, l'espectre APT del compost va revelar la presència de dinou senyals de carboni, que representen la xantona i l'estructura C-glucòsid.ressenyes de cistanche tubulosaL'experiment APT va identificar tres grups CH (C-8, 131,95; C-7, 115,10; C-2, 95,35 ppm) en el fragment xantona i el C-1 anomèric. de la C-glucosa a SH75,13 ppm. Hem realitzat experiments de RMN bidimensionals (HMBC; Figura S4) per confirmar l'enllaç glicosídic de la C-glucosa a C-4de la xantona. Abundants senyals de correlació de rang logarítmic de 2,3JCH van corroborar la columna vertebral de la xantona amb pics creuats observats des de H-1'(6) 4,60) a C-4(6c 104,13 ppm) i C-3 (6c 158,95).bioflavonoides cítricsPer a la fracció xantona, també es va detectar una correlació de llarg abast de 2,3JCH des de H-2(8) a C{-4(6c 104,13 ppm), C-3 (8c 158,95), i C-4b(6c 107,45). A més, es va detectar una 2-37-correlació a llarg abast des de H-8(8)7,57)al grup carbonil C-9( 6c 195.14), C-8a(6c 131.22) i C-6 （6c161.87）. Per al mateix anell, aJcH senyala des de H-7（6μ 6.79) fins a C{ {39}}a（6c 131,22） es va observar. Aquestes correlacions s'il·lustren a l'estructura del compost de la figura 1. HSQC del compost mostrava correlacions d'1JcH entre cada protó i el seu carboni localitzat, tal com es mostra a la figura S5. L'experiment H,H COSY (figura S6) va revelar una forta correlació entre pics creuats entre H-7 （δu 6,79) i H{-8 (8H7,57). A més, el compost va revelar un pic d'ions pseudomoleculars [MH]- a m/z 421, que indica una fórmula molecular de CgHngOrin en el mode negatiu de l'anàlisi ESI-MS (figura S7). Les dades de 1H-NMR, APT, IH, H COSY, HMBC i HSQC ens van portar a postular que el compost podria ser 1,3,5,6-tetrahidroxixantona-C-4- -D-glucopiranòsid. Això es va confirmar en comparació amb les dades de RMN informades d'isomangiferina a la literatura [23, 24].

2.2.In Silico Farmacocinètica Predicció del compost aïllat

El servidor en línia SwissADME es va utilitzar per avaluar la capacitat del fàrmac del compost aïllat estimant la regla de cinc de Lipinski (RO5) per a la semblança del fàrmac[25]. Lipinski va informar que el 90 per cent dels fàrmacs actius per via oral que van assolir l'estat clínic de la fase II tenen MWT Menor o igual a 500,logp Menys o igual a 5, Donants d'enllaç H Menys o igual a 5 i acceptors d'enllaç H Menys de o igual a 10[26].SwissADME prediu sis paràmetres fisicoquímics addicionals associats amb la semblança de fàrmacs com la lipofilia [27], la mida, la polaritat [28], la solubilitat [29,30], la flexibilitat i la saturació [31,32] tal com es mostra a la figura 2 i la taula 2.cistanche Regne UnitEl gràfic SWISSADME de semblança de fàrmacs del compost aïllat va mostrar que la majoria de les propietats fisicoquímiques del compost es troben dins de l'interval desitjable [33] excepte pel nombre d'acceptadors d'enllaços H, donants d'enllaços H i la polaritat del compost ja que el valor de PSA és de 201,28 A2 (rang desitjable (entre 20 i 130 A2)[28]. Aquesta alta polaritat es pot atribuir a la presència d'un fragment de sucre. El compost aïllat mostrava un log S(Ali) de solubilitat aquosa topològica esperada prometedor[29 ] i Log S (ESOL)[30]. Això facilitarà la futura formulació d'aquest compost. La farmacocinètica prevista va demostrar que el compost té una baixa absorció prevista de GIT sense penetració a BBB segons el model d'ou bullit de Dania [34] adoptat per el servidor en línia de SwissADME[33].cistanche wirkungA més, el compost no va mostrar efectes inhibidors en cinc isoformes del citocrom P450 (1A2, 2C19, 2C9, 2D6 i 3A4) [35], cosa que indica una baixa possibilitat d'interaccions fàrmacs. La permeació de la pell prevista es calcula mitjançant un model de regressió lineal múltiple que correlaciona la mida molecular i la lipofilia amb la permeabilitat de la pell [36]. Com més negatiu és el log Kp (amb Kp en cm/s), menys permeable a la pell és la molècula [33,36].extracte de cistanche tubulosaEl registre de permeació de la pell previst Kp en cm/s és de -9,14 cm/s.

2.3.Avaluació de les propietats anti-envelliment de la pell

2.3.1.Determinació de les activitats anti-col·lagenasa i antielastasa

El col·lagen i l'elastina són proteïnes estructurals vitals de l'epidermis que mantenen l'elasticitat, el to capil·lar i la força de la shkin juntament amb l'àcid hialurònic [39]. Durant el procés d'envelliment, l'estrès oxidatiu i l'exposició excessiva a la llum UV provoquen l'activació d'enzims hidrolitzants com l'elastasa, la col·lagenasa i la hialuronidasa, amb la qual cosa es perden la força i la flexibilitat de la pell i apareixen arrugues[40] . La inhibició de les activitats de col·lagenasa i elastasa és una de les estratègies efectives per protegir la pell de les manifestacions d'envelliment de la pell [41]. Tal com s'aclareix a la figura 3A, el compost mostrava una propietat anti-collagenasa moderada amb un valor ICso de 419,10 ug/mL, en comparació amb la fenantrolina （IC50=182.80ug/mL） com a estàndard. Pel que fa a l'efecte inhibidor de l'elastasa (figura 3B), va mostrar un efecte notable amb un valor ICso d'1,06 ug/ml, mentre que el control positiu, N-metoxisuccinil-Ala-Pro-Val-clorometil cetona, va exercir un valor ICso de 0,63 ug. /mL. D'acord amb aquests resultats, un estudi anterior va informar que l'extracte de fulla de metanol de mango era un 10-inhibidor de l'elastasa més potent que el tocoferol estàndard atribuït a la propietat d'inhibició no competitiva de la mangiferina[42]. A més, informes anteriors van demostrar l'activitat anti-elastasa de compostos polifenòlics a causa de la presència de grups hidròfils com hidroxil o carboxil que podrien influir positivament en la inhibició competitiva dels enzims [43].

2.3.2.Determinació de les activitats antihialuronidasa i antitirosinasa

L'àcid hialurònic és el glicosaminoglicà predominant de la pell que conserva el seu contingut d'humitat[44]. És hidrolitzat enzimàticament per la hialuronidasa, donant lloc a una ruptura de la integritat de l'estructura de la pell i la interrupció de la permeabilitat dels teixits [45]. La supressió de la hialuronidasa manté la integritat de la pell, retarda la progressió de l'envelliment de la pell i manté la hidratació de la pell [13]. Estudis anteriors van informar que els inhibidors naturals de la hialuronidasa podrien servir com a agents anti-envelliment per al desenvolupament de productes relacionats amb la salut de la pell[46]. Tal com s'il·lustra a la figura 4A, el compost aïllat podria atenuar notablement l'activitat de la hialuronidasa amb un valor ICso d'1,65 ug/mL, en comparació amb l'àcid 6-O-palmitoil L-ascòrbic com a control positiu (2,55 ug/mL).

Entre les manifestacions clíniques de senescència de la pell, la hiperpigmentació de la pell pot ser accelerada per l'enzim tirosinasa en presència d'espècies reactives d'oxigen (ROS) [46]. La tirosinasa, una glicoproteïna que conté coure, té una funció crucial en la síntesi de melanina mitjançant la hidroxilació de L-tirosina a 3,4-dihidroxifenilalanina (DOPA), seguida de l'oxidació de DOPA a DOPAquinona [47]. Per tant, la supressió de l'activitat de la tirosinasa pot disminuir la hiperpigmentació de la pell [48]. Des d'aquest punt de vista, el compost va inhibir potencialment la tirosinasa amb un valor ICso de 0,48 ug/mL, en comparació amb l'àcid cògic com a control positiu (0,82 ug/mL) com es mostra a Figura 4B. Un estudi anterior sobre l'extracte de llavors de Mangifera indica va mostrar resultats excepcionals anti-tirosinasa i anti-hialuronidasa correlacionats amb el contingut polifenòlic [47]. A nivell molecular, tant la tirosina com la DOPA contenen grups hidroxil que s'expressen com a donants de protons essencials per a l'activació de la tirosinasa [49]. De la mateixa manera, el compost conté quatre fragments hidroxil en el seu esquelet que poden comportar-se com a inhibidors competitius reaccionant com a substrats a la tirosinasa.

3.Material i Mètodes

3.1.Material Vegetal

Les fulles fresques de Mangifera indica L.fulles es van obtenir en l'etapa de fructificació d'un jardí privat a la zona d'Abo-Zabal (N 30 grau 1743.5336"E 3128.254), govern de Qualiobya, Egipte, el 20 de juliol de 2021. Van ser amablement autenticades per La senyora Treize Labib, especialista en taxonomia del Jardí Botànic El-Orman, Gizeh, Egipte. Es van col·locar exemplars de val amb el codi PHG-P-MI-362 a la galeria del Departament de Farmacognosia de la Facultat de Farmàcia de la Universitat Ain Shams.

3.2.Extracció i aïllament cromatogràfic

Les fulles assecades a l'aire de Mangifera indica L. (1,56 kg) es van filtrar en metanol al 70 per cent (27L) durant 5 dies i després es van filtrar. El filtrat es va evaporar totalment al buit a 47 graus fins a la sequedat per produir un residu sec (90,36 g; 5,79 per cent p/p); el rendiment d'extracció es va calcular amb l'equació següent: [pes total de l'extracte sec/pes total de la planta de refresc] × 100. A continuació, l'extracte obtingut es va aplicar al fraccionament Diaion HP-20. Es va utilitzar el gradient d'elució (aigua/metanol). Es van obtenir cinc fraccions principals: 100 per cent d'aigua, 25 per cent de metanol, 50 per cent de metanol, 75 per cent de metanol i 100 per cent de metanol. La fracció soluble en metanol al 50 per cent (26,38 g) es va exposar a poliamida i es va eluir inicialment amb aigua al 100 per cent, després es va eluir en gradient amb aigua/metanol (de 100:0 a 0:100, p/o) per obtenir sis subfraccions: 100 per cent d'aigua, 20 per cent, 40 per cent, 60 per cent, 80 per cent i 100 per cent de metanol. La subfracció soluble en metanol al 40 per cent (2,36 g) es va aplicar a Sephadex LH-20 mitjançant MeOH (elució isocràtica). Es van combinar fraccions similars i es van evaporar per obtenir quatre subfraccions principals (A1-A4), la subfracció A3(0.86 g) es va aplicar a plaques preparatives de cromatografia en capa fina (TLC) utilitzant àcid butanolacètic:aigua (BAW;4:1:5) com a revelador de fase mòbil per aïllar el compost com a llum lleugera. pols amorf groc.

3.3.Espectròmetre de ressonància magnètica nuclear (RMN).

Es va utilitzar un espectròmetre Bruker Ascend 400/R (Burker Avance Ⅲ, Fallanden, Suïssa) al Centre de Descobriment, Recerca i Desenvolupament de Medicaments de la Facultat de Farmàcia de la Universitat Ain Shams. 3.4.Espectrometria de masses

Es va utilitzar un espectròmetre de masses Finnigan LCQ-DECA (San Jose, CA, EUA) connectat a un detector PDA per a l'anàlisi espectromètrica de masses. Les mostres es van dissoldre en HzO:MeOH com una barreja i es van injectar directament al sistema HPLC/ESI-MS. Tant els modes d'ions d'ionització ESI negatius com positius es van aplicar en les condicions següents: gas d'assecat i nebulització, N2; temperatura capil·lar, 250 graus; tensió de polvorització, 4,48 kV; tensió capil·lar, 39,6 V; tensió de la lent del tub, 10.00 V; i el mode d'escaneig complet en el rang de massa m/z 100-2000. L'anàlisi ESI-MS del compost aïllat es va dur a terme en un espectròmetre de masses Waters Xevo TQD amb mode UPLC Acquity (Milford, CT, EUA) al Center for Drug Discovery, Research and Development, Facultat de Farmàcia, Universitat Ain Shams.

3.5.Predicció de farmacocinètica in-silico

La regla de cinc de Lipinski, els paràmetres fisicoquímics com la lipofilia, la solubilitat i les propietats farmacocinètiques com l'absorció, la distribució, el metabolisme i la penetració de la pell del compost aïllat es van dur a terme mitjançant el servidor en línia SwissADME [36]. 3.6. Avaluació de les propietats anti-envelliment de la pell

3.6.1.Determinació de l'activitat anti-col·lagenasa

La capacitat inhibidora del compost aïllat contra l'activitat de la col·lagenasa es va avaluar mitjançant un kit de cribratge d'inhibidors de col·lagenasa fluoromètric (BioVision, núm. de catàleg # K833-100) segons el mètode descrit anteriorment [50]. El control de referència va ser (1,10)-fenantrolina. El compost provat i el control de referència es van preparar en concentracions d'1,10,100 i 1000 ug/mL per a l'anàlisi. El compost provat es va preparar en una placa de 96-pou amb un fons pla. Primer, el substrat de col·lagenasa es va dissoldre en un tampó d'assaig de col·lagenasa (CAB). La mostra per a l'anàlisi es va preparar barrejant el compost amb col·lagenasa i CAB. La preparació de mostres de control d'inhibidors es va realitzar barrejant l'inhibidor ((1,10)-fenantrolina (80 mM)) amb l'enzim col·lagenasa diluït i el tampó CAB. El control enzimàtic es va preparar barrejant la col·lagenasa diluïda amb CAB. Es va utilitzar el tampó CAB com a control de fons. Totes les mostres es van incubar a temperatura ambient durant 15 min. Durant aquest temps, la barreja de reacció es va preparar barrejant la col·lagenasa amb CAB. En el següent pas, la barreja de reacció es va barrejar a fons amb les mostres preparades. La fluorescència es va mesurar immediatament a una longitud d'ona d'excitació de 490 nm i una longitud d'ona d'emissió de 520 nm mitjançant un lector de microplaques (FilterMax F5, Thermo Fisher). La mesura es va realitzar en mode cinètic a 37 graus durant 60 min. Les mostres es van preparar per duplicat i es va calcular l'efecte inhibidor de la col·lagenasa del compost provat aplicant l'equació següent:

3.6.2.Determinació de l'activitat antielastasa

L'activitat anti-elastasa del compost es va investigar mitjançant el kit d'assaig EnzChek§Elastase (E-12056) segons el mètode informat anteriorment [51]. El compost provat i el control de referència es van preparar en concentracions de 0.1,10 i 100 ug/mL per a l'anàlisi. El compost es va preparar en 96-plaques de pous amb fons clars per a l'assaig fluoromètric. Breument, es van preparar solucions d'enzims d'elastasa, substrat d'elastasa i control d'inhibidors tal com es recomana. A continuació, es va afegir una solució d'elastasa diluïda als pous. El compost provat, el control d'inhibidors i el control d'enzims es van afegir als pous posteriors. Les mostres es van barrejar en un agitador i després es van incubar durant 5 minuts a 37 graus. Es va barrejar el tampó d'assaig amb el substrat per preparar la barreja de reacció fluoromètrica, que després es va afegir i es va barrejar a fons amb cada mostra. La fluorescència es va mesurar immediatament a una longitud d'ona d'excitació de 400 nm i una longitud d'ona d'emissió de 505 nm mitjançant un lector de microplaques (FilterMax F5, Thermo Fisher, Waltham, MA, EUA). La mesura es va fer en mode cinètic a 37 graus durant 30 minuts protegit de la llum. Totes les mostres provades es van preparar i analitzar per duplicat i es va calcular l'efecte inhibidor de l'elastasa del compost provat aplicant l'equació següent:

on:

△RFU=un canvi en les unitats de fluorescència relativa EC=control enzimàtic

3.6.3.Determinació de l'activitat antitirosinasa

Les activitats inhibidores dels olis es van provar contra la col·lagenasa mitjançant el kit d'assaig colorimètric de cribratge d'inhibidors de la tirosinasa Abcam@Tyrosinase (núm. de catàleg ab204715). L'assaig es va dur a terme segons el manual proporcionat. L'inhibidor estàndard de la tirosinasa era l'àcid cògic. El compost provat es va preparar en concentracions que oscil·laven entre 0,1 i 10 ug/mL per a l'anàlisi. Es van barrejar uns 2 uL de tirosinasa proporcionada amb 48 uL de tampó d'assaig de tirosinasa. Les mostres d'olis essencials o suport (20 µL) es van barrejar amb la barreja d'enzims (50 µL) i es van incubar a 25 graus durant 10 min. A continuació, es van afegir 30 μL de solució de substrat de tirosinasa als pous d'olis essencials i estàndard. Després, la placa es va mesurar espectrofotomètricament a una longitud d'ona de 510 nm durant 30-60 min a 25 graus.

3.6.4.Determinació de l'activitat antihialuronidasa

L'activitat de la hialuronidasa es va avaluar espectrofotomètricament mesurant la quantitat de N-acetilglucosamina formada a partir del hialuronat de sodi [52]. El compost provat i el control de referència es van preparar en concentracions que oscil·laven entre 0,1 i 10 ug/mL per a l'anàlisi. Es van barrejar 50 microlitres d'hialuronidasa bovina (7900 unitats mL-1, (Sigma, St. Louis, MO, EUA) dissolts en tampó d'acetat 0,1 M (pH=3,5) amb 100 μL d'un producte designat). concentració del compost dissolt en un 5 per cent de DMSO i després es va incubar en un bany d'aigua a 37 graus durant 20 minuts. El grup control es va tractar amb 100 μL de 5 per cent de DMSO en lloc de la mostra. La densitat òptica de la barreja de reacció es va mesurar a 585 nm. per espectrofotometria.

3.7.Anàlisi estadística

Tots els experiments es van realitzar per triplicat. Les dades de l'ICso de l'activitat inhibidora de l'enzim es van examinar estadísticament mitjançant una anàlisi de variància unidireccional (ANOVA). Les anàlisis estadístiques es van realitzar mitjançant GraphPad Prism 5.0. 4. Conclusions i perspectives de futur

Els productes naturals derivats de les plantes tenen una gran demanda al mercat mundial per al desenvolupament de nous agents per a dissenys cosmecèutics[4]. En aquest estudi, es va aïllar un nou compost de xantona, 1.3.5, 6-tetrahidroxixantona-C-4- -D-glucopiranòsid, de l'extracte de fulla de M. indica. Basat en assaigs d'inhibició enzimàtica, aquest compost podria presentar bones propietats anti-collagenasa, anti-elastasa, anti-hialuronidasa i anti-tirosinasa, conferint així un efecte atenuant complet contra els enzims relacionats amb l'envelliment de la pell. A més, un paràmetre fisicoquímic in silico i un estudi ADME donen suport a la seva incorporació a les formes de dosificació tòpica, ja que mostra una solubilitat aquosa prometedora i una penetració a la pell prevista raonable. Per tant, aquest compost es podria aplicar com a agent bioactiu multifuncional auspici per a formulacions nutracèutiques i cosmecèutiques. No obstant això, les avaluacions toxicològiques i clíniques són potencialment prometedores.

Aquest article està extret de Molecules 2022, 27, 2609. https://doi.org/10.3390/molecules27092609 https://www.mdpi.com/journal/molecules