Epigalocatequina-3-Liposomes carregats de gallat afavoreixen la antiinflamació de les cèl·lules de la microglia i afavoreixen la neuroprotecció

joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Resum

Es reconeix que la neuroinflamació mediada per la microglia contribueix principalment a la progressió de les malalties neurodegeneratives. L'epigalocatequina-3-gallat (EGCG), conegut com a antioxidant natural del te verd, pot inhibir la inflamació mediada per la microglia i protegir les neurones, però té desavantatges com una alta inestabilitat i una baixa biodisponibilitat. Hem desenvolupat una formulació liposomal EGCG per millorar la seva biodisponibilitat i hem avaluat l'activitat neuroprotectora en models de neuroinflamació in vitro i in vivo. Els liposomes carregats amb EGCG s'han preparat a partir de fosfatidilcolina (PC) o fosfatidilserina (PS) recoberts amb o sense vitamina E (VE) mitjançant el mètode d'hidratació i extrusió de membrana. Elantiinflamatoris'ha avaluat l'efecte contra l'activació de cèl·lules microglials BV-2 induïda per lipopolisacàrids (LPS) i la inflamació a la substància negra de rates Sprague Dawley. En el model d'inflamació cel·lular, les cèl·lules microglials murines BV-2 van canviar la seva morfologia de l'esferoide normal a la forma del cargol activat després de 24 h d'inducció de LPS. En l'assaig in vitro del radical lliure 2, 2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH), EGCG va eliminar el 80 per cent de DPPH en 3 minuts. Els liposomes carregats amb EGCG podrien ser fagocitats per cèl·lules BV-2 després d'1 h de cultiu cel·lular a partir d'experiments d'absorció de cèl·lules. Els liposomes carregats amb EGCG van millorar la producció d'òxid nítric derivat de la microglia BV-2 i LPS després del TNF. En el model de rata de síndrome de Parkinson in vivo, la injecció intranigral simultània de liposomes carregats amb EGCG va atenuar les citocines proinflamatòries induïdes per LPS i va restaurar el deteriorament motor. Hem demostrat que els liposomes carregats amb EGCG exerceixen un efecte neuroprotector modulant l'activació de la microglia. L'EGCG extret del te verd i els liposomes carregats podria ser un candidat valuós per a una teràpia modificadora de malaltiesmalaltia de Parkinson (PD).

Paraules clau:neuroprotecció; neuroinflamació; malaltia de Parkinson; catequina; L- -fosfatidilcolina;fosfatidilserina

prevenirParkinsonmalaltiaefectes de Cistanche ambcistanche

Chun-Yuan Cheng 1,2, Lassina Barro 2, Shang-Ting Tsai 2,3, Tai-Wei Feng 2,3, Xiao-Yu Wu 2, Che-Wei Chao 4, Ruei-Siang Yu 2, Ting-Yu Chin 4,* i Ming Fa Hsieh 2,3,*

1a divisió de neurocirurgia, departament de cirurgia, hospital cristià de Changhua, 135 Nanxiao St., ciutat de Changhua, comtat de Changhua 500, Taiwan; 83998@cch.org.tw

2 Departament d'Enginyeria Biomèdica, Chung Yuan Christian University, núm. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan;

3 Centre per a dispositius i tecnologies mèdiques mínimament invasives, Chung Yuan Christian University, núm. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan

4 Departament de Tecnologia de la Biociència, Chung Yuan Christian University, núm. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan.

1. Introducció

Quan el sistema nerviós està danyat o infectat, les cèl·lules de la microglia s'activen i es transformen per ramificar-se, donant lloc a una expressió excessiva d'una gran quantitat de citocines proinflamatòries com el factor de necrosi tumoral (TNF-), la interleucina-1 ( IL-1), la interleucina 6 (IL{-6) i mediadors inflamatoris com l'òxid nítric (NO) i les espècies reactives d'oxigen (ROS). Finalment, les cèl·lules nervioses es fan malbé, degeneren o moren per aquests mediadors inflamatoris. Recentment s'ha trobat que al cervell de pacients amb malalties neurodegeneratives com la malaltia de Parkinson0 (MP), la malaltia d'Alzheimer0, la malaltia de Huntington0 i la malaltia de Creutzfeldt-Jakob , grans quantitats de cèl·lules microglials s'activen i s'expressen en excés [1–3]. Epidemiològicament, la causa de la MP està relacionada principalment amb la reacció neuroinflamatòria. Els mediadors inflamatoris resultants, com ara TNF-, IL-1, IL{-6, NO i ROS, es troben a l'estriat del cervell [1,4–7]. La degradació de les neurones dopaminèrgiques pot ser regulada per cèl·lules de la microglia [8].

El procés de neuroinflamació que causa la MP està precedit pel dany primari de les neurones causat per toxines ambientals, inclosa la rotenona [9], els lipopolisacàrids (LPS) [5,7] i els efectes de l'acumulació anormal de proteïnes [10]. El dany provocarà lesions i fins i tot apoptosi de les neurones dopaminèrgiques. Aleshores, les cèl·lules de la microglia s'activen per alliberar citocines, donant lloc a la inflamació i la mort de les neurones i, finalment, a la MP.

Quan les cèl·lules microglials són estimulades per LPS, el LPS s'uneix al lloc d'unió del receptor de superfície CD14 de les cèl·lules de la microglia. El complex LPS-CD14 s'enllaça amb l'enllaç MD2 a través de proteïnes transmembrana del receptor toll-like -4 (TLR4) i després implicat en vies de transmissió de missatges múltiples generades per proteïnes quinases activades per mitògens (MAPK) i factors de transcripció activadors (factor nuclear). -kappa B, NF-κB). Després de la transcripció gènica [5,11,12], les cèl·lules microglials alliberen citocines com TNF- i IL-1, o expressen gens d'òxid nítric sintasa inducible (iNOS) i ciclo-oxigenasa-2 (COX-2). {17}}), donant lloc a l'alliberament de prostaglandines o NO. A més, els radicals lliures destructius ONOO es generen combinant anions superòxid produïts a partir de la nicotinamida adenina dinucleòtid fosfat (NADPH) oxidasa amb NO produït a partir de iNOS, donant lloc a la mort de les neurones dopaminèrgiques [13]. Per tant, en aquest estudi, es va utilitzar LPS per induir la neuroinflamació de les cèl·lules de la microglia com a model in vitro de PD.

Les catequines són antioxidants naturals que poden prevenir el dany cel·lular i proporcionen molts beneficis farmacològics com ara antitumoral, anticancerígen, antienvelliment, radiació antifarmacològica i eliminació de radicals lliures [14]. El te verd conté al voltant d'un 10 per cent de polifenols en pes, incloent grans quantitats d'una catequina anomenada epigalocatequina galat (EGCG). L'EGCG té la major activitat antioxidant i capacitat d'eliminació de radicals lliures en totes les catequines del te verd i pot capturar ROS per protegir les cèl·lules del dany de l'estrès oxidatiu [15]. L'EGCG també té una alta eficàcia antiinflamatòria, que pot inhibir eficaçment la secreció de citocines (TNF-, IL-2 i IL{-8) pels macròfags [16], la fosforilació de proteïnes de senyalització Akt i proteïnes IκB en vies inflamatòries per reduir l'expressió de NF-κB o la transcripció AP-1 mitjançant la inhibició de la fosforilació de proteïnes MAPK aigües amunt per equilibrar l'expressió COX-2 i reduir la producció de citocines proinflamatòries [17].

Recentment, es va informar que l'EGCG era potencialment terapèutic o profilàctic per a la MP a causa de la supressió dels oligòmers actius de -sinucleïna (S) [18]. L'EGCG també prevé l'agregació de S in vitro [19-21], i l'agregació citoplasmàtica de S a les neurones dopaminèrgiques és una possible patogènesi de la MP que provoca danys a les neurones dopaminèrgiques a la substància negra [22]. A més, l'EGCG pot recuperar el dany neuroquímic o funcional induït per 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP) i regular la ferroportina a la substància negra i reduir estrès oxidatiu [23]. L'EGCG també té efectes neuroprotectors i immunoprotectors en ratolins tractats amb MPTP i pot modular la neuroinflamació i protegir la pèrdua de neurones dopaminèrgiques en PD induïda per MPTP [24].

Es van investigar els efectes antiinflamatoris de l'EGCG. El LPS suprimit per EGCG va induir la producció i l'expressió de NO iNOS a les cèl·lules microglials BV-2. L'EGCG pot inhibir eficaçment les expressions de citocines proinflamatòries com TNF- i IL-1 a les cèl·lules BV-2 [25]. El pretractament amb EGCG dels macròfags humans va inhibir significativament l'expressió induïda per LPS de citocines proinflamatòries com ara TNF-, IL-1 i IL{-6 [26]. A més, el posttractament d'EGCG en ratolins ferits per LPS va disminuir la producció d'una citocina proinflamatòria mitjançant la modulació de la via TLR4-NF-κB [27]. A més, les microesferes de poli(lactide-co-glicòlid) (PLGA) carregades amb EGCG i optimitzades mitjançant l'addició de -ciclodextrina (-CD) podrien suprimir eficaçment la producció de NO a partir de cèl·lules BV-2 en el model in vitro de BV murina -2 cèl·lules microglials estimulades per LPS, cosa que indica que les microesferes poden suprimir la inflamació de les cèl·lules microglials activades [28].

Tot i que el te verd és una beguda diària, l'eficàcia de les catequines és ineficaç a causa de la baixa biodisponibilitat oral; per tant, es requereixen formes de dosificació farmacèutiques efectives. El portador de fàrmacs nano té els avantatges d'evitar el metabolisme prematur, allargar el temps d'acció del fàrmac i orientar el lliurament de fàrmacs. Per tant, aquest estudi pretén desenvolupar liposomes que continguin fosfatidilcolina (PC) i fosfatidilserina (PS), components similars a la membrana cel·lular, com a formes de dosificació antiinflamatòries. L'EGCG extret de les fulles de te verd es va carregar en liposomes per frenar les reaccions inflamatòries a les cèl·lules de la microglia induïdes per LPS. També es va avaluar l'efecte terapèutic dels liposomes carregats amb EGCG en el model in vivo de PD per a la neuroprotecció.

2. Resultats

2.1. Extracció d'EGCG

2.1.1. Extracte d'EGCG

Les dades de caracterització de l'epigalocatequina {{0}}gallat es poden trobar al fitxer suplementari (figures S1 i S2). 2.1.2. Diverses formulacions d'EGCG A la taula 1, els diàmetres de partícules mitjans dels liposomes PS-, PS-EGCE- i PS-EGCG-VE del placebo eren més petits que els del placebo PC-, PC-EGCE- i PC-EGCG-VE- liposomes, respectivament. Com que el PC és neutre i el PS està carregat negativament [29], això indica que el potencial de superfície additiu va afectar la mida de la partícula. L'índex de polidispersitat (PDI) de tots els liposomes era inferior a 0,22, cosa que indica que l'estructura dels liposomes en solució és estable. Les càrregues negatives de PS van provocar una força repulsiva sobre el potencial superficial entre els liposomes PS, evitant l'agregació i reduint la mida dels liposomes PS.

L'eficiència/mida d'encapsulació dels liposomes que contenen PS descrites a la taula 1 era més gran/menys que la dels liposomes que contenen PC corresponents [30]. L'eficiència d'encapsulació de PC-EGCG-VE-liposomes i PS-EGCG-VE-liposomes era més àmplia que la de PC-EGCG-liposomes i PS-EGCG-liposomes, respectivament. Això es deu al fet que la vitamina E és soluble en greixos, incrustada en una membrana de bicapa fosfolípid i proporciona un protector antioxidant per a l'EGCG.

2.2. Anàlisi cel·lular in vitro

2.2.1. Viabilitat cel·lular

La viabilitat cel·lular de les cèl·lules tractades amb EGCG de 50 a 400 µM es va reduir significativament en comparació amb el grup control (figura 1A). En canvi, la viabilitat de les cèl·lules que reben de 5 a 25 µM és similar a la viabilitat de les cèl·lules del grup control. Es va determinar que la concentració d'EGCG utilitzada en aquest estudi era de 25 µM. De la mateixa manera, es va determinar que la concentració de LPS utilitzada per a la inducció de la inflamació cel·lular era de 50 ng/mL segons la figura 1B. A la figura 1C, la viabilitat cel·lular de cèl·lules cocultivades amb liposomes placebo de totes les concentracions no va ser estadísticament significativa en comparació amb el grup control. Per tant, els liposomes placebo no són citotòxics per a les cèl·lules de la microglia.

2.2.2. Morfologia cel·lular

La morfologia cel·lular del grup control (figura 2A) i la morfologia de les cèl·lules tractades amb 25 μM EGCG (figura 2B) eren esfèriques, mentre que la morfologia de les cèl·lules tractades amb 50 ng/mL LPS (figura 2C) tenia forma de fus. Tanmateix, la morfologia de les cèl·lules tractades amb EGCG 25 uM i activades per LPS (figura 2D) era esfèrica. Això va indicar que l'EGCG pot inhibir l'activació induïda per LPS. Per tant, el pretractament de l'EGCG té un efecte inhibidor sobre la neuroinflamació, protegint les cèl·lules microglials de l'activació.

2.2.3. NO Alliberament

A la figura 3A, l'alliberament de NO de les cèl·lules BV-2 induït amb 5-1000 ng/mL de LPS durant 24 h d'incubació va ser estadísticament significatiu en comparació amb l'alliberament de NO del grup control. Es va determinar que la concentració de LPS utilitzada per activar la inflamació cel·lular per treballar era de 50 ng/mL.

L'alliberament de NO de cèl·lules BV-2 tractades amb EGCG 25 µM no va ser estadísticament significatiu en comparació amb el grup control, tal com es mostra a la figura 3B. Tanmateix, la inflamació cel·lular induïda amb LPS durant 24 h va mostrar un augment significatiu en comparació amb el grup control. Les cèl·lules tractades amb 25-200 µM EGCG durant 1 h i després activades amb LPS van mostrar una disminució estadísticament significativa en comparació amb el grup de cèl·lules activades només amb LPS. L'alliberament de NO no va disminuir quan l'EGCG va augmentar de 50 a 200 µM, ja que la viabilitat cel·lular va disminuir quan l'EGCG havia augmentat de 50 a 200 µM, segons la figura 1A.

La producció de NO de les cèl·lules tractades amb 25 µM EGCG seguida de la inflamació induïda amb 50 ng/mL de LPS no va ser estadísticament significativa en comparació amb el grup control (figura 3C). Tanmateix, el NO alliberat al grup de cèl·lules tractades amb PC-EGCG-liposomes o PC-EGCG-VE-liposomes seguit de l'activació de LPS amb 50 ng/mL va mostrar una disminució significativa en comparació amb el grup de cèl·lules tractades només amb LPS. L'alliberament de NO de les cèl·lules pretractades amb PC-EGCG-liposomes o PC-EGCG-VE-liposomes va ser superior a l'alliberament de NO del grup de cèl·lules pretractades per EGCG, cosa que s'ha d'explicar per l'alliberament lent d'EGCG dels liposomes.

2.2.4. Anàlisi de citocines

A la figura 4A, la concentració de TNF- de cèl·lules tractades amb LPS després de 24 h va mostrar un augment estadísticament significatiu en comparació amb la del grup control o el medi de cultiu cel·lular (DMEM). Els liposomes PC placebo eren propers als de les cèl·lules tractades amb LPS. Tanmateix, la concentració de TNF al grup de cèl·lules pretractades amb liposomes PS-EGCG o liposomes PS-EGCG-VE seguida de l'activació de LPS va mostrar una disminució estadísticament significativa en comparació amb la de les cèl·lules tractades amb LPS. Aquesta concentració decreixent de TNF- indica que els liposomes carregats amb EGCG poden reduir l'activació de les cèl·lules microglials induïdes per LPS. L'efecte inhibidor dels liposomes PS-EGCG-VE va ser millor que el dels liposomes PS-EGCG.

Els fosfolípids de la membrana cel·lular es poden hidrolitzar per la fosfolipasa citosòlica A2 (cPLA2) per produir àcid araquidònic. La ciclooxigenasa (COX) és un enzim clau que converteix l'àcid araquidònic en prostaglandina. COX-2 i cPLA2 sovint es generen per inflamació o malaltia maligna [31–34]. A la figura 4B, la inflamació va ser induïda per LPS de 5-50 ng/mL durant 24 hores, i l'expressió de cPLA2 va augmentar quan augmentava la concentració de LPS. La figura 4C va mostrar l'augment de les activitats de COX-2, induïdes per LPS (5-50 ng/mL) durant 24 h. L'expressió de COX-2 va augmentar de 5 a 25 ng/mL LPS, mentre que va disminuir a 50 ng/mL. A la figura 4D, l'expressió de cPLA2 es va reduir quan les cèl·lules BV-2 van ser pretractades amb EGCG i induïdes per LPS. L'expressió de COX-2 quan les cèl·lules BV-2 van activar LPS es va incrementar en comparació amb el grup control (figura 4E). Hi va haver una disminució significativa de COX-2 al grup de cèl·lules pretractades amb EGCG, placebo PS-liposomes, PS-EGCG-liposomes i PS-EGCG-VE-liposomes, seguit d'inducció inflamatòria LPS. Especialment, l'expressió de COX-2 de cèl·lules pretractades amb PS-liposomes placebo va tenir una diferència estadísticament significativa amb la de les cèl·lules induïdes per LPS.

2.3. Test d'animals in vivo

2.3.1. Comportament animal

Prova El nombre de cercles completats per les rates Parkinsonianes després de l'administració d'amfetamina (que es mostra a la figura 5A) va augmentar significativament en comparació amb el nombre de cercles completats per les rates del grup control. El comportament de les rates parkinsonianes0 tractades amb les diferents formulacions d'EGCG va ser similar al de les rates del grup control. Aquestes dades van indicar que l'EGCG va atenuar les lesions unilaterals del sistema nigrostriatal induïdes per LPS. 2.3.2. Anàlisi de marcadors inflamatoris La proporció de TNF-/GAPDH en el grup tractat va ser significativament menor en comparació amb la proporció trobada en rates sindròmiques. La tendència IL-1 era similar a la tendència TNF. Els resultats in vivo són coherents amb els resultats dels estudis in vitro. L'expressió del factor neurotròfic derivat del cervell (BDNF) al grup tractat va ser similar al grup induït per LPS (figura 5D). Tanmateix, aquest resultat podria indicar que la millora de la coordinació de les extremitats en rates amb síndrome de Parkinson mitjançant liposomes carregats de PC-EGCG es produeix per la reducció de la resposta a la neuroinflamació, però no per l'augment de l'expressió de BDNF.

També s'ajusta als informes anteriors que la reducció de la producció de TNF i NO mitjançant el pretractament de rates amb EGCG (10 mg/kg) durant 24 hores i la inducció amb LPS després de 7 dies va disminuir en comparació amb la de rates tractades amb LPS, i va concloure que EGCG ha un efecte terapèutic potencial per a la neurotoxicitat induïda per LPS a causa de la reducció de l'alliberament de TNF i NO.

3. Discussió

En aquest estudi, es va detectar que la puresa de l'EGCG extreta del te verd era del 90,5 per cent i l'activitat d'eliminació de radicals lliures de l'EGCG era més extensa que el 80 per cent en 3 minuts. Va augmentar amb una concentració més alta d'EGCG o un temps de reacció més llarg. La mida de partícules dels liposomes PC-EGCG-VE i PS-EGCG-VE va ser de 161,5 i 142,9 nm, que eren més petites que la de l'EGCG carregat a les microesferes PLGA [28] amb ciclodextrina addicional (entre 1 i 14 µm) . L'eficiència d'encapsulació dels liposomes PC-EGCG-VE i PS-EGCG-VE va ser del 60,2% i del 76,8%, respectivament. Aquests resultats van mostrar que els liposomes que contenien PS eren més petits, més estables i tenien una major eficiència d'encapsulació a causa de la càrrega de PS i van donar lloc a una força repulsiva entre liposomes per evitar l'agregació.

L'expressió de TNF- en cèl·lules pretractades amb PS-EGCG- i PS-EGCG-VE-liposomes i després induïda per LPS tenia diferències estadísticament significatives en comparació amb la de cèl·lules induïdes amb LPS, i es van observar resultats similars en el pretractament d'EGCG a LPS. expressió de TNF induïda a cèl·lules BV-2 [25] i macròfags humans [26]. En resum, la morfologia cel·lular i l'expressió de TNF- del grup tractat amb EGCG van mostrar un efecte inhibidor de la inflamació induïda per LPS.

En el present estudi, el pretractament amb EGCG pot reduir l'alliberament de NO. En el nostre estudi anterior també es va investigar la supressió de la producció de NO a partir de cèl·lules BV-2 induïdes per LPS mitjançant el pretractament de microesferes PLGA carregades amb EGCG [28].

En el present estudi, la síndrome de Parkinson a les rates es crea pel dany a la regió unilateral de substància negra induïda per LPS. Una altra troballa important és que, mitjançant l'anàlisi quantitativa estadística, els liposomes carregats d'EGCG poden alleujar la síndrome a causa del dany a la regió nigrosina unilateral del cervell de rata induïda per LPS en la prova de rotació i la producció de factors neuroinflamatoris TNF- en la substància. l'àrea nigra del cervell de rata també es pot reduir amb liposomes carregats amb EGCG. Aquest estudi indica que la millora de la coordinació de les extremitats i la reducció de la inflamació neuronal en la síndrome de Parkinson induïda per LPS és causada per l'administració local de liposomes carregats d'EGCG, però no per l'augment de l'expressió de BDNF. Tanmateix, els resultats antineuroinflamatoris són necessaris per a un efecte neuroprotector [35]. L'activació de la BV-2 allibera factors proinflamatoris, que són neurotòxics i provoquen danys cel·lulars. En evitar l'activació de la BV-2, l'EGCG proporciona un efecte neuroprotector. Alguns posttractaments d'EGCG per millorar la proliferació, la taxa de supervivència i la diferenciació neuronal de les cèl·lules mare neuronals adultes en el gir dentat induït per LPS indica que l'EGCG pot ser un agent terapèutic potencial per a malalties neuroinflamatòries [27].

Estudis farmacocinètics anteriors van demostrar que el PS exògen pot travessar la barrera hematoencefàlica (BBB), en la qual sembla tenir una afinitat per l'hipotàlem [6], i l'administració oral dóna lloc a nivells màxims en 1-4 hores. A més, es va trobar que els liposomes que contenen PS imiten les cèl·lules apoptòtiques per promoure la secreció de mediadors antiinflamatoris, com ara el factor de creixement transformant- 1 (TGF{- 1) (per regular a la baixa el NO produït pels macròfags) [36] i prostaglandina E2 (PGE2) per macròfags i cèl·lules de la microglia in vitro [6,37], i també promouen l'alleujament de la inflamació in vivo [38]. En conseqüència, els liposomes carregats d'EGCG que contenen PS demostrats en aquest estudi tenen l'avantatge d'una mida de partícula més petita, una major eficiència d'encapsulació i inhibir l'activació de la síndrome de Parkinson tant a les cèl·lules de la microglia com al model de rata Vivo, mostrant una millora de la funció antiinflamatòria i neuroprotecció.

La limitació és que el nostre estudi es va dur a terme amb algunes anàlisis que falten, com en el cas de l'efecte neuroprotector, i no es va investigar la tinció de NeuN. També vam analitzar només el BDNF com a factor neurotròfic. FGF2 i IGF2 també són factors neurotròfics que s'han de tenir en compte [39].

5. Conclusions

Per millorar la baixa biodisponibilitat oral de les catequines, EGCG es va carregar en liposomes en aquest estudi. Es troba que els liposomes que contenen PS eren més petits i més estables. Té una eficiència d'encapsulació més alta i l'addició de vitamina E pot protegir l'EGCG de l'oxidació i millorar l'eficiència d'encapsulació. En l'estudi in vitro, les expressions de producció de TNF i NO a partir de cèl·lules BV-2 es van reduir després del pretractament de liposomes carregats amb EGCG a cèl·lules BV-2 induïdes per LPS. Per tant, els liposomes carregats amb EGCG han jugat un paper essencial en la resposta neuroinflamatòria com a inhibidor. Els efectes beneficiosos han estat prevenir l'apoptosi de les cèl·lules en les reaccions neuroinflamatòries.

En l'estudi in vivo, s'ha millorat la síndrome de Parkinson en rates induïda per LPS a la regió unilateral de substància negra del mesencefalo. El mecanisme de neuroinflamació, inclosa la secreció de TNF, s'ha inhibit pel posttractament dels liposomes carregats d'EGCG. Hem demostrat que l'EGCG seria un candidat més valuós per al tractament de malalties neurodegeneratives alleujant la inflamació del cervell. La investigació posterior s'hauria de centrar en les vies inflamatòries mitjançant l'ús d'un rastrejador de lisosomes per rastrejar l'entrada del liposome a la cèl·lula i l'alliberament d'EGCG del liposoma.

Referències

1 Llull, ME; Bloc, activació microglial ML i neurodegeneració crònica. Neurotherapeutics 2010, 7, 354–365. [Ref creuat]

2. Ekdahl, C.; Kokaia, Z.; Lindvall, O. Inflamació cerebral i neurogènesi adulta: el doble paper de la microglia. Neurociència 2009, 158, 1021–1029. [CrossRef] [PubMed]

3. Weissleder, R.; Nahrendorf, M.; Pittet, MJ Imatge de macròfags amb nanopartícules. Nat. Mater. 2014, 13, 125–138. [Ref creuat]

4. Papageorgiou, IE; Fetani, AF; Lewen, A.; Heinemann, EUA; Kann, O. L'activació generalitzada de cèl·lules microglials a l'hipocamp de rates epilèptiques cròniques només es correlaciona parcialment amb la neurodegeneració. Estructura cerebral. Funct. 2015, 220, 2423–2439. [CrossRef] [PubMed]

5. Dutta, G.; Zhang, P.; Liu, B. El model animal de la malaltia de Parkinson de lipopolisacàrids: estudis mecànics i descobriment de fàrmacs. Fonamental. Clin. Pharmacol. 2008, 22, 453–464. [CrossRef] [PubMed]

6. Otsuka, M.; Tsuchiya, S.; Aramaki, Y. Implicació d'ERK, una MAP quinasa, en la producció de TGF- per macròfags tractats amb liposomes compostos per fosfatidilserina. Bioquímica. Biofísica. Res. Commun. 2004, 324, 1400–1405. [Ref creuat]

7. Li, R.; Huang, Y.-G.; Fang, D.; Le, W.-D. (-)-Epigallocatequina galat inhibeix l'activació microglial induïda per lipopolisacàrids i protegeix contra lesions neuronals dopaminèrgiques mediades per la inflamació. J. Neurosci. Res. 2004, 78, 723–731. [Ref creuat]

8. Liu, J.; Hong, Z.; Ding, J.; Liu, J.; Zhang, J.; Chen, S. Alliberament predominant d'enzims lisosomals per microglia de rata nounat després del tractament amb LPS revelat per estudis proteòmics. J. Proteoma Res. 2008, 7, 2033–2049. [Ref creuat]

9. Cho, H.-S.; Kim, S.; Lee, S.-Y.; Park, JA; Kim, S.-J.; Chun, HS Efecte protector del component de te verd, L-teanina sobre la mort de cèl·lules neuronals induïda per toxines ambientals. Neurotoxicologia 2008, 29, 656–662. [Ref creuat]

10. Mariani, MM; Kielian, T. Microglia en malalties infeccioses del sistema nerviós central. J. Neuroimmune Pharmacol. 2009, 4, 448–461. [Ref creuat]

11. Santiago, RM; Barbieiro, J.; Lima, MM; Dombrowski, PA; Andreatini, R.; Les alteracions vitals de comportaments depressius MA induïdes pels models intraneurals de MPTP, 6-OHDA, LPS i rotenona de la malaltia de Parkinson s'associen principalment amb la serotonina i la dopamina. Prog. Neuro-Psicofarmacol. Biol. Psiquiatria 2010, 34, 1104–1114. [CrossRef] [PubMed]

12. Liu, M.; Bing, G. Models animals de lipopolisacàrids per a la malaltia de Parkinson. Mal de Parkinson. 2011, 2011, 327089. [CrossRef] [PubMed]

13. Wu, D.-C.; Teismann, P.; Tieu, K.; Vila, M.; Jackson-Lewis, V.; Ischiropoulos, H.; Przedborski, S. La NADPH oxidasa media l'estrès oxidatiu en el model de 1-metil-4-fenil{-1, 2, 3, 6-tetrahidropiridina de la malaltia de Parkinson. Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 2003, 100, 6145–6150. [Ref creuat]

14. Rahman, I.; Biswas, SK; Kirkham, PA Regulació de la inflamació i la senyalització redox per polifenols dietètics. Bioquímica. Pharmacol. 2006, 72, 1439–1452. [CrossRef] [PubMed]

15. Valko, M.; Rodes, C.; Moncol, J.; Izakovic, M.; Mazur, M. Radicals lliures, metalls i antioxidants en el càncer induït per l'estrès oxidatiu. Chem. Biol. Interactuar. 2006, 160, 1–40. [Ref creuat]

16. Segur, Y.-J.; Chun, K.-S.; Cha, H.-H.; Han, SS; Keum, Y.-S.; Park, K.-K.; Lee, SS Mecanismes moleculars subjacents a les activitats quimiopreventives dels fitoquímics antiinflamatoris: regulació a la baixa de COX-2 i iNOS mitjançant la supressió de l'activació de NF-κB. Mutat. Res. Fonamental. Mol. Mech. Mutagènesi 2001, 480, 243–268. [Ref creuat]

17. Renaud, J.; Nabavi, SF; Daglia, M.; Nabavi, SM; Martinoli, M.-G. L'epigalocatequina-3-gallat, una molècula prometedora per a la malaltia de Parkinson? Rejoveniment Res. 2015, 18, 257–269. [Ref creuat]

18. Yang, JE; Rho, KY; Lee, S.; Lee, JT; Park, JH; Bhak, G.; Paik, SR Protecció mediada per EGCG de la interrupció de la membrana i la citotoxicitat causades per l'"oligòmer actiu" de -sinucleïna. Ciència. Rep. 2017, 7, 1–10. [Ref creuat]

19. Bieschke, J.; Russ, J.; Friedrich, RP; Ehrnhoefer, DE; Wobst, H.; Neugebauer, K.; Wanker, EE EGCG remodela les fibrilles madures -sinucleïna i amiloide- i redueix la toxicitat cel·lular. Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 2010, 107, 7710–7715. [Ref creuat]

20. Yoshida, W.; Kobayashi, N.; Sasaki, Y.; Ikebukuro, K.; Sode, K. El pèptid parcial de -sinucleïna modificat amb inhibidors de molècules petites inhibeix específicament la fibril·lació amiloide de -sinucleïna. Int. J. Mol. Ciència. 2013, 14, 2590–2600. [CrossRef] [PubMed]

21. Xu, Y.; Zhang, Y.; Quan, Z.; Wong, W.; Guo, J.; Zhang, R.; Yang, Q.; Dai, R.; McGeer, PL; Qing, H. Epigallocatequina galat (EGCG) inhibeix l'agregació d'alfa-sinucleïna: un agent potencial per a la malaltia de Parkinson. Neuroquimia. Res. 2016, 41, 2788–2796. [CrossRef] [PubMed]

22. Li, Y.; Chen, Z.; Lu, Z.; Yang, Q.; Liu, L.; Jiang, Z.; Zhang, L.; Zhang, X.; Qing, H. Nanomedicament traçable de doble objectiu "addictiu a les cèl·lules" per al tractament de la malaltia de Parkinson mitjançant la via de les flotil·lines. Theranostics 2018, 8, 5469. [CrossRef]

23. Xu, Q.; Langley, M.; Kanthasamy, AG; Reddy, MB L'epigalocatequina galat té un efecte neurorescat en un model de ratolí de la malaltia de Parkinson. J. Nutr. 2017, 147, 1926–1931. [CrossRef] [PubMed]

24. Zhou, T.; Zhu, M.; Liang, Z. (-)-Epigallocatequina-3-gallat modula la immunitat perifèrica en el model de ratolí induït per MPTP de la malaltia de Parkinson. Mol. Med. Rep. 2018, 17, 4883–4888. [Ref creuat]

25. Parc, E.; Chun, HS Polifenol de te verd Epigalocatequina galat (EGCG) va impedir l'activació de cèl·lules microglials BV-2 induïda per LPS. J. Life Sci. 2016, 26, 640–645. [Ref creuat]

26. Liu, J.-B.; Zhou, L.; Wang, Y.-Z.; Wang, X.; Zhou, Y.; Ho, W.-Z.; Li, J.-L. Activitat neuroprotectora del gallat ()-epigalocatequina contra la citotoxicitat mediada per lipopolisacàrids. J. Immunol. Res. 2016, 2016, 4962351. [CrossRef] [PubMed]

27. Seong, K.-J.; Lee, H.-G.; Kook, MS; Ko, H.-M.; Jung, J.-Y.; Kim, W.-J. L'epigalocatequina-3-gallat rescata la neurogènesi de l'hipocamp d'adults alterada per LPS suprimint la via de senyalització TLR{4-NF-κB en ratolins. coreà J. Physiol. Pharmacol. 2016, 20, 41. [CrossRef] [PubMed]

28. Cheng, C.-Y.; Pho, Q.-H.; Wu, X.-Y.; Chin, T.-Y.; Chen, C.-M.; Fang, P.-H.; Lin, Y.-C.; Hsieh, M.-F. Microesferes de PLGA carregades amb complexos -ciclodextrina d'epigalocatequina-3-gallat per a les propietats antiinflamatòries de les cèl·lules microglials activades. Polímers 2018, 10, 519. [CrossRef]

29. Buszello, K.; Harnisch, S.; Müller, R.; Müller, B. La influència dels àcids grassos alcalins sobre les propietats i l'estabilitat de les emulsions O/W parenterals modificades amb Solutol HS 15®. Eur. J. Pharm. Biopharm. 2000, 49, 143–149. [Ref creuat]

30. Shashi, K.; Satinder, K.; Bharat, P. Una revisió completa sobre: ​​Liposomes. Int. Res. J. Pharm. 2012, 3, 10–16.

31. Wang, W.-Y.; Tan, M.-S.; Yu, J.-T.; Tan, L. Paper de les citocines proinflamatòries alliberades de la microglia en la malaltia d'Alzheimer. Ann. Trad. Med. 2015, 3. [CrossRef]

32. Smith, JA; Das, A.; Ray, SK; Banik, NL Paper de les citocines proinflamatòries alliberades de la microglia en malalties neurodegeneratives. Cervell Res. Bou. 2012, 87, 10–20. [CrossRef] [PubMed]

33. Hu, H.; Li, Z.; Zhu, X.; Lin, R.; Chen, L. Salidroside redueix la mobilitat cel·lular mitjançant la senyalització NF-κB i MAPK en cèl·lules microglials BV2 induïdes per LPS. Evid. Altern Complementari Basat. Med. 2014, 2014, 383821. [CrossRef]

34. Tambuyzer, BR; Ponsaerts, P.; Nouwen, EJ Microglia: guardians de la immunologia del sistema nerviós central. J. Leukoc. Biol. 2009, 85, 352–370. [CrossRef] [PubMed]

35. Lee, D.-S.; Jeong, G.-S. La buteïna proporciona efectes neuroprotectors i antineuroinflamatoris mitjançant l'expressió hemoxigenasa 1 dependent de Nrf2/ARE mitjançant l'activació de la via PI3K/Akt. Br. J. Pharmacol. 2016, 173, 2894–2909. [Ref creuat]

36. Matsuno, R.; Aramaki, Y.; Tsuchiya, S. Implicació del TGF- en els efectes inhibidors de liposomes carregats negativament sobre la producció d'òxid nítric per macròfags estimulats amb LPS. Bioquímica. Biofísica. Res. Commun. 2001, 281, 614–620. [CrossRef] [PubMed]

37. Zhang, J.; Fujii, S.; Wu, Z.; Hashioka, S.; Tanaka, Y.; Shiratsuchi, A.; Nakanishi, Y.; Nakanishi, H. Implicació de la COX-1 i les prostaglandines E sintases regulades a l'alça en la producció de prostaglandina E2 induïda per liposomes de fosfatidilserina per microglia. J. Neuroimmunol. 2006, 172, 112–120. [Ref creuat]

38. Ramos, GC; Fernandes, D.; Charro, CT; Souza, DG; Teixeira, MM; Assreuy, J. Mimetisme apoptòtic: els liposomes de fosfatidilserina redueixen la inflamació mitjançant l'activació dels receptors activats per proliferadors de peroxisomes (PPAR) in vivo. Br. J. Pharmacol. 2007, 151, 844–850. [Ref creuat]

39. Abe, N.; Nishihara, T.; Yorozuya, T.; Tanaka, J. Micròglia i macròfags en el sistema nerviós central i perifèric patològic. Cells 2020, 9, 2132. [CrossRef] [PubMed]

40. Chen, C.-H.; Hsieh, M.-F.; Ho, Y.-N.; Huang, C.-M.; Lee, J.-S.; Yang, C.-Y.; Chang, Y. Millora de la penetració de la pell de catequina mitjançant una membrana d'hidroxicel·lulosa MPEG-PCL-empelt-2-de nova fabricació. J. Membre. Ciència. 2011, 371, 134–140. [Ref creuat]

41. Parthasarathy, S.; Bin Azizi, J.; Ramanathan, S.; Ismail, S.; Sasidharan, S.; Va dir, MIM; Mansor, SM Avaluació de les activitats antioxidants i antibacterianes d'extractes aquosos, metanòlics i alcaloides de fulles de Mitragyna speciosa (família Rubiaceae). Molècules 2009, 14, 3964–3974. [CrossRef] [PubMed]

42. Herrera, D.; Molina, A.; Buhlin, K.; Klinge, B. Malalties periodontals i associació amb malaltia ateroscleròtica. Periodontologia 2000 2020, 83, 66–89. [CrossRef] [PubMed]

43. Batista, CRA; Gomes, GF; Candelario-Jalil, E.; Fiebich, BL; de Oliveira, ACP La neuroinflamació induïda per lipopolisacàrids com a pont per entendre la neurodegeneració. Int. J. Mol. Ciència. 2019, 20, 2293. [CrossRef]

44. Creese, I.; Burt, DR; Snyder, SH La millora de la unió del receptor de dopamina acompanya la supersensibilitat conductual induïda per lesions. Ciència 1977, 197, 596–598. [CrossRef] [PubMed]