Extracte de fenogrec etanòlic: els seus mecanismes moleculars contra l'envelliment de la pell i les funcions millorades per nanoencapsulació 2

Siusplau contactaoscar.xiao@wecistanche.comper a més informació

2.5. Efecte de l'extracte de LNF i fenogrec sobre la viabilitat cel·lular i la producció de col·lagen en cèl·lules de fibroblasts dèrmics humans

Per investigar la citotoxicitat del LNF formulat, les cèl·lules es van tractar amb extractes en blanc, LNF i fenogrec a {{0}} ug/mL (dilució doble) durant 24 h. La viabilitat cel·lular es va mesurar mitjançant un assaig MTT. Com es mostra a la figura 6a, la viabilitat cel·lular va disminuir a les cèl·lules tractades amb extracte, mentre que no es va observar cap efecte a les cèl·lules en blanc i tractades amb LNF. Les dades van indicar que el LNF mostrava una toxicitat menor que l'extracte. Vam investigar més la capacitat del LNF en la inducció de la producció de col·lagen en cèl·lules de fibroblasts dèrmics humans. Les cèl·lules es van tractar amb 7 ug/mL d'extracte i 1{{20}}{0 ug/mL de LNF (7 ug/mL d'equivalència d'extracte), juntament amb partícules en blanc com a control, per7 i 14 dies. Com es mostra a la figura 6b, per al tractament amb LNF, la quantitat de col·lagen tacat es va augmentar un 30 per cent i un 50 per cent als 7 i 14 dies, respectivament, en comparació amb el tractament amb extracte. A més, a la figura 2a, el LNF formulat va millorar l'activitat anti-collagenasa, ja que l'IC5o es va reduir significativament a 0, 21 ± 0, 03 mg/mL en comparació amb l'extracte de fenogrec (0, 57 ± 0, 02 mg/mL). Aquests resultats van demostrar que la formulació de LNF podria potenciar una inducció de la producció de col·lagen a les cèl·lules de fibroblasts dèrmics humans i millorar l'activitat anti-collagenasa de l'extracte de fenogrec. És possible que la nanoformulació d'extracte de fenogrec millori significativament la seva potència com a ingredient actiu en productes anti-envelliment.

2.6. Paper del LNF formulat en la inhibició de MMP1, MMP9, IL-6 i IL-8 després de l'exposició als UV

A continuació, vam investigar alguns possibles mecanismes de LNF sobre l'activitat anti-envelliment. L'exposició UV és un dels principals reguladors de l'envelliment de la pell, ja que s'ha informat que indueix l'expressió de certs membres de la família de les metaloproteïnases de la matriu (MP), que provoca el col·lapse del col·lagen, incloent MMP1, MMP3 i MMP9 [34,35] . Vam observar que l'exposició UV era altament tòxica per a les cèl·lules de la pell cocultivades (Figura 7a) i va millorar la producció de citocines MMP1 i MMP9 (Figura 7b). A més, els tractaments d'extracte de fenogrec i LNF formulat van poder reduir significativament les secrecions. de MMP1 i MP9 en comparació amb les cèl·lules de control després de la irradiació UV. Aquests resultats van ser coherents amb el tractament de rutina i resveratrol com a control d'agents anti-envelliment. En particular, la reducció de les expressions MMP1 i MMP9 a les cèl·lules tractades amb LNF va ser significativament menor que en el tractament amb extracte. Per tant, LNF podria reduir les secrecions de MPI i MMP9 després de l'exposició als UV i, posteriorment, prevenir l'envelliment de la pell fotoinduït.

Feu clic aquí per saber-ne més

A més, l'exposició a la UV a la pell humana també pot mediar la inducció de la inflamació i l'activació de citocines proinflamatòries, com ara TNF i interleucines, incloses IL-1, IL-2, IL{{4} }, i IL-8 [36]. A continuació, vam examinar la funció de LNF en la inhibició de la producció de citocines inflamatòries estimulades per UV, incloent IL-6 i IL{-8. A la figura 7c, vam observar que la irradiació UV millorava significativament la producció d'IL{{ 11}} i citocines IL-8 en cèl·lules de la pell cocultivades. Es va observar una disminució significativa de les expressions IL-6 i IL-8 amb el tractament amb extracte de fenogrec en comparació amb el control. Curiosament, el tractament de l'extracte de fenogrec va mostrar inhibicions d'IL-6 i IL{-8 considerablement més altes en comparació amb la rutina, on aquestes activitats inhibidores eren similars a les dels grups tractats amb resveratrol. En particular, les expressions d'IL-6 i IL-8 a les cèl·lules tractades amb LNF eren significativament inferiors en comparació amb el grup d'extracte de fenogrec després de l'exposició als raigs UV. En conjunt, aquests resultats van indicar que el LNF podria inhibir la producció d'IL-6 i IL-8 mediada pels UV i, posteriorment, prevenir la inflamació de la pell fotoestimulada i l'envelliment de la pell.Com a conseqüència, aquests resultats suggereixen que l'extracte etanòlic de fenogrec i la seva nanoformulació es podrien utilitzar potencialment com a ingredients actius per a la prevenció de l'envelliment.

3. Discussió

S'ha demostrat que l'extracte de fenogrec posseeix activitats antioxidants, antiradicals i antiinflamatòries en diversos estudis [29,37], tot i que la seva propietat antiarrugues encara no s'ha explotat. Aquesta investigació va ser la primera a identificar una activitat anti-envelliment de l'extracte de fenogrec mitjançant un assaig inhibidor de la col·lagenasa in vitro. Estudis previs han suggerit l'ús d'extractes de plantes amb activitat anti-collagenasa com a ingredient actiu en productes cosmecèutics com l'extracte d'orujo de raïm [38], l'extracte de te verd [39] i l'extracte de bolets [40]. A més, mai s'ha informat de l'efecte de l'extracte de fenogrec sobre la producció de col·lagen a les cèl·lules de fibroblasts dèrmics humans. Tamara et al. (2006) ha demostrat l'efecte dels flavonoides en la síntesi de col·lagen en fibroblasts humans utilitzant rutina, com a compost actiu de l'extracte de fenogrec, que ajuda a augmentar el col·lagen [41]. Aquest estudi de fenogrec va mostrar la seva prometedora capacitat anti-envelliment i va representar la rutina com a marcador biològic.

La rutina (3),4',5.7-tetrahidroxi-flavona-3-rutinósida) es va utilitzar en aquest estudi, ja que és un glucòsid de flavonol que s'ha informat en diverses plantes, inclosa Fagopyrum esculentum Moench, Ruta. graveolens L, Sophora japonica L., Eucalyptus spp. [37l, i fenogrec[17]La rutina posseeix activitats antioxidants, citoprotectores, anticancerígenes, neuroprotectores i cardioprotectores, proposant la seva aplicació en la prevenció de l'envelliment i malalties relacionades amb l'envelliment. Els nostres resultats van mostrar que l'extracte preparat mostrava una gran quantitat de contingut de rutina, que gairebé no es va trobar ni es va detectar com a component de l'extracte de fenogrec en altres estudis. La majoria d'altres estudis han informat de la trigonelina com a constituent químic principal de l'extracte de fenogrec [18,37,38,42-47].

Fins i tot l'extracte de fenogrec té una activitat potencial com a agent antienvelliment. El seu color i estabilitat segueixen sent un repte per a aquesta aplicació. S'ha informat que la nanoencapsulació és una tecnologia específica que és capaç d'estabilitzar, emmascarar l'olor, millorar la solubilitat en aigua, controlar l'alliberament de compostos biològics [48,49] i millorar l'aspecte físic dels productes naturals. El liponiosoma s'ha aplicat en aquest estudi a causa de les seves propietats úniques, que es componen de fragments hidròfils i hidrofòbics, que poden encapsular una àmplia gamma de substàncies amb diferents solubilitats [50]. Hem formulat liposomes encapsulats amb extracte de fenogrec (LNF), que és un portador híbrid que inclou característiques de liposomes i niosomes. Els components híbrids del LNF desenvolupat es van confirmar per la temperatura de fusió mitjançant DSC, reflectint tant les característiques tèrmiques dels liposomes com dels niosomes.

cistanche pot anti-envelliment

L'estrat corni és una capa externa de la pell que funciona com una barrera eficaç contra les substàncies nocives restringint-ne el transport a través de la pell. Tanmateix, s'ha demostrat que l'ús de nanoportadors millora el lliurament transdèrmic millorant la penetració de fàrmacs o substàncies a través d'aquesta barrera[51]. Per investigar la potència del LNF en el lliurament transdèrmic, s'ha utilitzat la penetració de la pell porcina ex vivo, ja que les seves característiques anatòmiques són majoritàriament similars a les de la pell humana, pel que fa al gruix de la pell, estructura fol·licular i densitat del cabell [52]. Els nostres resultats mostren que la permeabilitat de LNF era més gran i més profunda que l'extracte de fenogrec i la rutina, i el perfil d'alliberament de LNF tenia un alliberament més lent que l'extracte de fenogrec, cosa que suggereix que el LNF formulat era notablement superior als de l'extracte a la penetració de la pell. A més, el LNF formulat va millorar l'activitat anti-collagenasa, ja que l'IC-A es va reduir significativament a 0,205±0.03 mg/ml en comparació amb el fenogrec. extracte (0,567±0,02 mg/mL). Aquests resultats van demostrar que la formulació de LNF podria potenciar una inducció de la producció de col·lagen a les cèl·lules de fibroblasts dèrmics humans i millorar l'activitat anti-collagenasa de l'extracte de fenogrec. La nanoformulació d'extracte de fenogrec pot ajudar a millorar la seva potència utilitzant-lo com a ingredient actiu per a la prevenció de l'envelliment.

L'exposició a la radiació UV és el principal factor de l'envelliment extrínsec de la pell, conegut com a envelliment prematur o fotoenvelliment [53.54]. La radiació provoca l'activació dels receptors de la superfície cel·lular dels queratinòcits i fibroblasts de la pell, donant lloc a una inducció d'expressions de la matriu extracel·lular dèrmica, especialment la família de les metaloproteinases de la matriu (MP). S'ha demostrat que l'exposició crònica a dosis baixes d'UVA provoca una regulació positiva dels nivells d'ARNm de col·lagenasa-1 (MMP1), estromelisina-1 (MMP3) i gelatinasa A (MMP2)[55]. Com a conseqüència, es produeix la degradació de les fibres elàstiques de col·lagen de la pell, així com l'aturada de la nova síntesi de col·lagen. Aquest fenomen afecta la integritat, l'elasticitat i les estructures de la pell, després de la desregulació de les funcions protectores de la pell, explicant la formació d'arrugues i els signes d'envelliment de la pell [54,56]. A més, l'exposició de la UV a la pell humana media una expressió de TNF-alfa, que és un regulador important de la cascada inflamatòria a la pell. La irradiació UV també inicia l'activació tant de la inflamació com de les secrecions de citocines proinflamatòries, com la interleucina-2 (IL{-2) i la interleucina-6 (1L-6) [36] . Com a resultat, aquesta resposta inflamatòria induïda per la UV té un paper important en la inducció de la pell cremada amb signes d'envermelliment, irritació i eritema [35.59].

Per tant, per prevenir la causa de l'envelliment prematur, seria ideal trobar alguns nous agents actius amb aquestes funcions preventives. Els nostres resultats van demostrar que la formulació de LNF podria potenciar la inducció de la producció de col·lagen a les cèl·lules de fibroblasts dèrmics humans, podria reduir les secrecions de MP1, MP9, IL-6 i IL-8 a l'exposició als UV i podria millora l'activitat anti-collagenasa de l'extracte de fenogrec. Per tant, un extracte de fenogrec etanòlic i la seva nanoformulació podrien ser d'ús potencial com a nou ingredient actiu en productes cosmecèutics i aquesta nanoencapsulació és capaç de millorar la funció i l'activitat de l'extracte de fenogrec com a agent antienvelliment. 4.Materials i Mètodes

4.1.Materials vegetals i reactius químics

Fenugreek seed powder was received from Herbal Acharn'sHome Co.,Ltd. (Bangkok, Thailand). Rutin trihydrate (>puresa del 98 per cent), tampó de tricina, col·lagenasa de Clostridium histolyticum i FALGPA (N-[3(2-furil)acril)-Leu-Gly-Pro-Ala), vermell directe 80, àcid pícric i sulfòxid de dimetil comprat a Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, EUA) Es van comprar acetonitril, acetat d'etil, etanol absolut, àcid fòrmic, fosfat deshidratat de sodi, hidrogen fosfat disòdic, àcid clorhídric i hidròxid de sodi a Carlo Erba (Emmendingen, Alemanya). L'etanol de qualitat comercial es va comprar a Italmar Co., Ltd. (Bangkok, Tailàndia). El colesterol es va comprar a Cosmeplus Co., Ltd. (Bangkok, Tailàndia). La barreja de propilenglicol i solubilitzant es va comprar a S.Tong Chemicals Co, Ltd. (Nonthaburi, Tailàndia). L'oleat de sorbitan es va comprar a Croda Co., Ltd. (Bangkok, Tailàndia). El fosfolípid (Phospholipon 90G) es va comprar a Cargill Siam Ltd. (Bangkok, Tailàndia). L'acetat de tocoferol es va comprar a Namsiang Co, Ltd. (Bangkok, Tailàndia). El conservant es va comprar a Forecus Co., Ltd. (Bangkok, Tailàndia). El paraformaldehid es va comprar als laboratoris Himadia (Mumbai, Índia) i el 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il){-2,5-bromur de difeniltetrazoli es va comprar a Calbiochem (Burlington, MA, EUA).

4.2.Extracció

La pols de llavors de fenogrec (500 g) es va macerar amb etanol al 95 per cent (1:5) durant 3 dies. L'extracció es va repetir tres vegades (3 × 2500 ml). Es va filtrar tota la solució d'extracte, amb etanol evaporat a 100 mbar a 40 graus mitjançant un evaporador rotatiu (Heidolph, Schwabach, Alemanya). L'extracte obtingut va ser la pasta oliosa de color marró groguenc amb un rendiment del 5 per cent (p/p) i es va mantenir a 4 graus fins al seu ús.

4.3. Validació i identificació UHPLC de rutina en extracte de fenogrec

El trihidrat de rutina, com a marcador estàndard, es va utilitzar per analitzar l'extracte de fenogrec. El mètode UHPLC va ser desenvolupat i validat en termes de linealitat, precisió, precisió i sensibilitat[31,32] per un sistema Shimadzu LC-30 AD UHPLC que inclou un detector de matriu de díodes SPD-M20A i un mostreig automàtic SIL-30AC. El mètode va utilitzar una columna SUPLECO Titan C18 (5 cm × 2,1 mm, 1,9 um, SUPLECO, Burlington, VT, EUA) a 30 graus i va detectar una longitud d'ona de 26{{ 19}} nm. La fase mòbil es va adaptar de Kenny et al. [45]. Breument, es va preparar 0.05 per cent v/v de solució d'àcid fòrmic en aigua ultrapura (A) i 0,05 per cent v/v d'àcid fòrmic en acetonitril (B) amb un flux de 0,25 ml/min en mode gradient: la condició inicial va ser del 10% de B durant 1,0 min, va augmentar al 75% de B durant 3,5 min, es va reduir al 10% de B durant 0,75 min i es va mantenir durant 0,25 min.

4.4. Assaig de col·lagenasa

Es va realitzar un assaig de col·lagenasa per determinar l'activitat anti-colagenasa [60]. La solució de barreja, que contenia 25 μL de solució tampó de tricina 50 mM (pH7,5), 25 μL de 2 unitats/ml de col·lagenasa (clostridium histolyticum tipus IA) i 25 μL de la mostra, es va preparar i incubar a temperatura ambient durant 15 min. Per iniciar la reacció, es van afegir 10 uL del substrat sintètic i 2 mM de N-[3-({2-Furyl)acriloil-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) a la solució de la barreja i es van incubar. durant 20 min. El canvi d'absorbància de cada sobrenedant es va mesurar a 340 nm (lector de microplaques Synergy H1) i es van calcular els valors ICso traçant una corba de regressió lineal que mostra les concentracions de mostra a l'eix x i el percentatge d'inhibició a l'eix y. El percentatge d'inhibició es va calcular mitjançant l'equació següent:

4.5.Cultura cel·lular

Les cèl·lules de fibroblasts dèrmics humans es van comprar a l'American Type Culture Collection: ATCC (PCS-201-010) i es van comprar queratinòcits humans immortalitzats (HaCaT) al Cell Lines Service, Alemanya (núm. cat. 300493). Les cèl·lules es van conrear al medi d'àguila modificat de Dulbecco (DMEM) (Gibco, Regne Unit) complementat amb un 10% de FBS (Gibco, Regne Unit), 1% de penicil·lina (100 unitats/mL) i estreptomicina (100 ug/mL) (Gibco, St. Louis). , MO, EUA). Les cèl·lules es van incubar a 37 graus sota un entorn de diòxid de carboni del 5 per cent.

4.6. Contingut de col·lagen i tinció vermella de Picrosirius

Les cèl·lules de fibroblasts dèrmics humans es van sembrar a 2,5 × 104 cèl·lules/pou en plaques de 48 pous i es van incubar durant 24 h. A continuació, es van tractar les cèl·lules amb diverses concentracions de liponio-some sense extractes (indicat com a blanc), extracte de fenogrec encapsulant liponiosomes (LNF) i extracte de fenogrec durant 7 i 14 dies, amb 005 per cent. DMSO utilitzat com a control de vehicles. Els mitjans es canvien cada 2 dies. A continuació, es van rentar les cèl·lules amb PBS i es van fixar amb 100 uL de PFA al 4% durant 10 min. Les cèl·lules es van rentar amb PBS (dues vegades) i es van tacar amb 100 uL de solucions 80 vermelles directes al 0, 1 per cent durant 10 min. Després de la tinció, es va afegir 0,01 NHCl en etanol al 70 per cent per rentar l'excés de colorant. El col·lagen tacat es va dissoldre amb 10 uL de NaOH 0, 5 N i es va mesurar l'absorbància a 540 nm mitjançant un lector de microplaques (lector de microplaques Synergy H1). El percentatge de contingut de col·lagen es va calcular mitjançant l'equació següent:

4.7.Assaig de viabilitat cel·lular

Les cèl·lules de fibroblasts dèrmics humans es van sembrar a 2 × 104 cèl·lules/pou en plaques de 96 pous i es van incubar durant 24 h. Després de la incubació, es van afegir diferents concentracions (0-100 ug/mL) dels liposomes sense extractes (en blanc), LNF i extracte de fenogrec i es van cultivar durant 24 h. A continuació, es van afegir 100 μL de MTT (1 mg/mL) a cada pou i es van incubar durant 4 h. Es va afegir DMSO per dissoldre el producte formazà. L'absorbància es va mesurar a 570 nm mitjançant un lector de microplaques (lector de microplaques Synergy Hl). El percentatge de viabilitat cel·lular es va calcular mitjançant l'equació següent:

4.8.Formulació de liponiosomes

Es va utilitzar la preemulsificació després de l'homogeneïtzació per a la formulació de liposomes. Es va utilitzar una barreja de fosfolípids i emulsionants per formar una bicapa lipídica esfèrica i es va utilitzar colesterol per millorar la rigidesa de les partícules [15]. Breument, la lecitina de soja, el colesterol i l'emulsionant es van dispersar en propilenglicol i es van escalfar a 70-80 graus (fase d'oli), tal com es mostra a la taula 2. L'extracte de fenogrec es va dissoldre en propilenglicol/aigua (fase aigua) i es va escalfar en el mateix bany maria. La solució aquosa de l'extracte es va afegir contínuament als components lipídics i es va homogenitzar a 8000-100 rpm durant 5-10 min amb agitació a alta velocitat (Heidolph Silent Crusher M, Kenilworth, N, EUA). La mescla es va refredar. a 50 graus i es va afegir acetat de tocoferol i es va homogeneïtzar durant 10 min més per obtenir LNF. La morfologia de LNF es va observar mitjançant microscòpia electrònica de transmissió (TEM, JEOL, Peabody, MA, EUA), amb la mida hidrodinàmica, l'índex de polidispersitat Pdl i el potencial zeta investigats mitjançant la dispersió de la llum dinàmica (DLS, Nanosizer ZS, Malvern Instruments, Worcestershire, UK). La confirmació del comportament de fusió de liposomes es va investigar mitjançant calorimetria d'exploració diferencial (DSC, Mettler Toledo DSC1). La viscositat de la mostra es va mesurar mitjançant un viscosímetre digital Brookfield (model HBDV-IIIU CP). Breument, es van utilitzar 0,5 g de mostres i es va examinar la viscositat mitjançant un cargol CP-40, amb la velocitat controlada a 0,5 rpm durant 20 min a temperatura ambient.

Per avaluar l'estabilitat de LNF, les partícules es van mantenir a 4 graus, 25 graus i 40 graus durant 3 mesos, i es van examinar els canvis en la mida i la morfologia de les partícules.

L'extracte de fenogrec d'encapsulació de liposomes i sorollosos (LF i NF) es va formular mitjançant un mètode similar al LNF. Es va preparar LF sense afegir oleat de sorbitan a la fase d'oli, mentre que el niosoma (NF) es va preparar sense afegir el component fosfolípid. Les seves caracteritzacions fisicoquímiques es van informar a la taula complementària S1.

4.9.Percentatges d'eficiència d'encapsulació i càrrega bioactiva

Es va calcular l'eficiència d'encapsulació (per cent EE) i la càrrega bioactiva (per cent BL) de LNF determinant la quantitat de fàrmac encapsulat mitjançant una tècnica d'ultrafiltració. La quantitat de rutina es va utilitzar com a marcador estàndard. Després de dissoldre 20 mg/ml de LNF en aigua DI, es va centrifugar a 80, 000 rpm durant 4 h. Es va recollir el sobrenedant i després es va avaluar la rutina no encapsulada mitjançant una tècnica de cromatografia líquida d'ultra-alt rendiment (UHPLC)[61]. El percentatge EE i el percentatge BL es van calcular mitjançant les equacions següents:

4.10.Cèl·lula de difusió de Franz

Es va investigar un estudi permeable in vitro de 7 mg/ml d'extracte de fenogrec i LNF en un sistema de cèl·lules de difusió Franz [62]. La membrana sintètica (disc d'ultrafiltració Biomax 500 kDa, Merck, MA, EUA) es va col·locar entre un compartiment donant i un receptor. La solució salina tampó fosfat (PBS) amb un pH de 5, 5 es va agitar a 50 rpm (37 graus) i es va utilitzar com a medi receptor. L'extracte de fenogrec i el LNF es van aplicar a la membrana de la tapa de la cèl·lula donant. Les mostres es van impregnar a través de la membrana i es van recollir del compartiment del receptor a les 0,2,4,6,8,12 i 24h. La rutina permeada acumulada es va avaluar i calcular mitjançant la tècnica UHPLC.

4.11.Permeabilització de la pell porcina

La penetració de LNF a través de la pell porcina es va visualitzar mitjançant un microscopi de massa d'imatge (IMS, SHIMADZU, model: iMScopoe TRIO, Kyoto, Japó). La pell porcina es va tallar en 1,5 × 1,5 cm2. La rutina, l'extracte de fenogrec i el LNF es van aplicar a la pell porcina tallada i es van emmagatzemar a 4 graus durant 24 hores. Les mostres es van tallar amb un criostat, es van col·locar sobre un portaobjectes de vidre recobert d'òxid d'estany i es van ruixar amb una 9-substància de matriu d'aminoacridina (9-AA). Les mostres es van emmagatzemar a-20 graus. abans de l'anàlisi. Es va analitzar una superposició de les imatges òptiques de la rutina a 609,15 m/z.

4.12.Caracterització dels calorimetres d'escaneig diferencial (DSC).

Es va realitzar una anàlisi de calorimetria d'exploració diferencial (DSC) per determinar el punt de fusió de LNF mitjançant un calorímetre d'exploració diferencial (DSC, Mettler Toledo DSC1)[63]. Després d'un pes precís, les mostres es van col·locar en cassoles d'alumini i es van tancar amb una tapa. En el procés d'escaneig, es va aplicar una velocitat d'escalfament de 10 graus en el rang de temperatures de 25 a 350 graus sota un gas nitrogen purgat a 40 ml/min. 4.13.Construcció de cèl·lules de la pell humanes co-cultivades

Les cèl·lules de fibroblasts dèrmics humans es van sembrar a 8, 5 × 104 cèl·lules/pou en insercions de cultiu de 12 pous (Corning, Corning, NY, EUA) i es van cultivar durant 24 h. La segona i la tercera capes de fibroblast dèrmic es van afegir repetidament a la primera capa durant dies consecutius. Després de 24 h d'afegir la tercera capa, HaCaT es va sembrar a 8, 5 × 10 graus de cèl·lules/pou a les capes de fibroblasts formades i es va cultivar durant 24 h més, abans de l'experiment.

4.14.Investigació de la viabilitat cel·lular i la secreció de MMP després de l'exposició UV en cèl·lules de la pell co-cultivades

Les cèl·lules de la pell cocultivades humanes es van tractar prèviament amb 7 ug/mL d'extracte i 100 ug/mL de LNF (7 ug/mL d'equivalència d'extracte), juntament amb 100 ug/mL de blanc i 10 ug/mL de resveratrol com a control positiu. , durant 24 h. Les cèl·lules de la pell cocultivades es van rentar dues vegades amb PBS i es van sotmetre a 5J/cm2 d'UVA i 30mJ/cm2 d'irradiació UVB (Solar Simulators, NY, EUA). Després de la irradiació UV, les cèl·lules de la pell cocultivades es van incubar més amb mostres provades durant 24 h. A continuació, es va recollir el sobrenedant per a les quantificacions de MMP1 i MP9. Els nivells de secrecions de MMP1 i MMP9 induïdes per UV a les cèl·lules de la pell humanes cocultivades es van mesurar mitjançant kits d'assaig immunoabsorbent lligat a enzims (MMP1: ab215083 i MMP9: ab100610, abcam, Cambridge, Regne Unit) segons els protocols de fabricació.

La viabilitat de les cèl·lules de la pell humanes cocultivades després de l'exposició UV es va avaluar mitjançant un kit d'assaig de viabilitat cel·lular luminescent CellTiter-Glo (Promega, Madison, WI, EUA). Després de 24 h d'exposició als UV, les cèl·lules de la pell cocultivades es van rentar dues vegades amb PBS i es van afegir 100 μL de Glo Lysis Buffer (Promega, Madison, WI, EUA) a cada pou. Després de la incubació durant 10 min, es van afegir 50 uL de reactiu CellTiter-Glo i es van incubar a temperatura ambient durant 10 min. A continuació, es va mesurar el senyal luminescent mitjançant un luminòmetre de microplaques (SpectraMax L, Molecular Devices).

4.15.Anàlisi estadística

Els resultats es van representar com a mitjana ± desviació estàndard (DE). Les diferències significatives es van analitzar mitjançant una prova de Student o una anàlisi de variància unidireccional o bidireccional (ANOVA) seguida de la prova post hoc de Tukey (GraphPad Prism 9), amb valors p<0.05 considered="" statistically="">

5. Conclusions

En conjunt, aquesta investigació va produir dos suggeriments alternatius. En primer lloc, la rutina no només es va observar en termes de protecció contra la radiació ultraviolada i substància antioxidant, sinó que també es va utilitzar com a marcador estàndard d'empremtes dactilars de cromatograma i una referència clau de l'activitat anti-envelliment de l'extracte de pols de llavors de fenogrec. En segon lloc, es van demostrar els mecanismes moleculars subjacents a l'extracte etanòlic contra l'envelliment. L'extracte va mostrar noves propietats biològiques, com ara l'activitat anti-collagenasa, la inducció de la producció de col·lagen i la inhibició de la degradació del col·lagen, que es refereix a un agent anti-envelliment natural alternatiu potencial per als productes anti-envelliment. Les tècniques d'encapsulació es poden utilitzar per protegir els compostos bioactius i els processos de degradació química i física, i perllongar la seva activitat biològica fins al seu ús. Aquesta tècnica també redueix la toxicitat dels extractes d'herbes. En aquest estudi, els liposomes formulats són altament estables i tenen un alliberament prolongat. La nanoformulació també pot millorar la potència de l'extracte de fenogrec en propietats anti-envelliment. Sobre la base d'aquest estudi, suggerim que el LNF es podria aplicar com a ingredient actiu prometedor en la prevenció de l'envelliment de la pell.

Aquest article està extret de Pharmaceuticals 2022, 15, 254. https://doi.org/10.3390/ph15020254 https://www.mdpi.com/journal/pharmaceuticals