Avaluació de les composicions d'àcids grassos, antioxidants i activitats farmacològiques de l'oli de llavors de carbassa (Cucurbita Moschata) a partir d'extracció enzimàtica aquosa Part 1

May 08, 2023

Resum:L'oli de llavors de carbassa és un subproducte, abundant en nutrients i components bioactius que promouen diversos beneficis per a la salut. Aquest estudi pretenia comparar les composicions químiques, antioxidants i activitats farmacològiques dels olis de llavors de carbassa extrets de Cucurbita moschata Duch. Ex Poir. (PSO1) i Cucurbita moschata (carbassa japonesa) (PSO2) per extracció enzimàtica aquosa. En el procés d'extracció enzimàtica es va utilitzar una barreja d'enzims formada per pectinasa, cel·lulasa i proteasa (1:1:1). La composició d'àcids grassos dels olis es va determinar mitjançant èster metílic d'àcids grassos/cromatogràfica de gasos-espectrometria de masses. Els assaigs de l'activitat antioxidant es van mesurar utilitzant difenilpicrilhidrazil de radical lliure estable, catió radical 2, 20 -azinobis-(3- etilbenzotiazolina{-6-sulfonat, poder reductor/antioxidant fèrric i assaig de tiocianat fèrric. Inhibició de Es van investigar els enzims que impliquen l'envelliment de la pell i el procés de blanquejament. L'àcid linoleic era un component principal de tots els olis de llavors de carbassa. A més, també es va detectar una quantitat significativa d'àcid oleic, àcid palmític i àcid esteàric. El PSO2 posseïa les activitats antioxidants més altes en comparació amb PSO1 i olis de llavors de carbassa comercials (COM1 i COM2). Tant PSO1 com PSO2 van mostrar efectes inhibidors més alts sobre la hialuronidasa, col·lagenasa i tirosinasa que els comercials. Per tant, l'extracció enzimàtica aquosa podria produir olis de llavors de carbassa amb un major antioxidant, anti-envelliment i activitats de blanquejament. Això és beneficiós per a estudis farmacològics posteriors i es pot utilitzar com a aliment funcional per als beneficis de la pell.

Segons estudis rellevants,cistancheés una herba comuna que es coneix com "l'herba miracle que allarga la vida". El seu component principal éscistanòsid, que té diversos efectes com araantioxidant, antiinflamatori, ipromoció de la funció immune. El mecanisme entre cistanche ipell blanqueigrau en l'efecte antioxidant del cistancheglucòsids. La melanina a la pell humana es produeix per l'oxidació de la tirosina catalitzada pertirosinasa, i la reacció d'oxidació requereix la participació d'oxigen, de manera que els radicals lliures d'oxigen del cos esdevenen un factor important que afecta la producció de melanina. Cistanche conté cistanòsid, que és un antioxidant i pot reduir la generació de radicals lliures al cos, per tantinhibint la producció de melanina.

cistanche para que serve

Feu clic a Suplement de Cistanche Tubulosa

Per a més informació:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Paraules clau:Cucurbita moschata; carbassa japonesa; oli de llavors de carbassa; extracció enzimàtica aquosa; àcids grassos; antioxidant; anti edat

1. Introducció

La carbassa forma part del gènere Cucurbita i de la família Cucurbitaceae, una planta comuna i famosa que es conreava al nord de Mèxic i s'ha estès per Europa, Amèrica occidental i Àsia [1]. La carbassa es considera un aliment funcional que conté nutrients abundants com proteïnes, hidrats de carboni, lípids, fibra, etc., juntament amb compostos fitoquímics com tocoferols, carotenoides i -sitosterol [2]. S'ha trobat que els fitonutrients de diverses parts de la carbassa tenen activitats farmacològiques [2]. L'extracte de pell de carbassa va mostrar efectes beneficiosos per cremades en models animals [3]. La polpa de carbassa va demostrar activitat antioxidant, antiinflamatòria i antiangiogènesi [2], així com activitat antifatiga en ratolins [4]. A més, les llavors de carbassa és una bona font natural d'àcids grassos essencials i fitoesterols que redueixen el risc de mortalitat cardiovascular [5,6]. L'oli de llavors de carbassa és un subproducte del processament de llavors de carbassa, que són riques en diversos àcids grassos i compostos bioactius com ara -carotens, -tocoferol, vitamina B, luteïna, fitoesterols i altres minerals [7,8]. L'oli exerceix efectes antioxidants, antiinflamatoris, antibacterians i de cicatrització de ferides [1,9]. A més, té diversos beneficis per a la salut contra malalties, com ara la hipertensió, la diabetis i el càncer [8,10].

S'han desenvolupat diferents mètodes per extreure l'oli de llavors, inclosos els mètodes mecànics com la premsada en fred [11] i l'extracció a alta pressió [12]. També s'ha documentat l'extracció d'oli de llavors amb dissolvents mitjançant dissolvents orgànics com hexà, acetat d'etil, acetona i metanol [13,14]. L'extracció assistida per enzims és un mètode alternatiu per a la indústria de l'oli vegetal perquè és una tecnologia respectuosa amb el medi ambient i segura. El principal mecanisme d'extracció enzimàtica aquosa és hidrolitzar i trencar les parets cel·lulars del material vegetal, donant lloc a més permeabilitat i alliberant components bioactius, inclosa la fase d'oli [15]. Diverses mescles d'enzims aplicades en aquesta extracció estan compostes per pectinases, cel·lulases, hemicel·lulases, arabinosa, -glucanasa i xilanasa [16, 17]. Les condicions optimitzades d'una barreja d'enzims, per exemple, temperatura, pH, temps de reacció, mida de partícules i concentració d'enzims, també van millorar l'activitat enzimàtica [16]. Avui en dia, aquest mètode s'ha utilitzat àmpliament per extreure oli de molts fruits i llavors de plantes [18,19]. Alguns estudis anteriors van demostrar la condició optimitzada de l'oli de llavors de carbassa per obtenir un alt rendiment i activitats farmacològiques efectives [20,21].

Actualment, la gent consumeix oli de llavors de carbassa en postres o amaniments d'amanides, i també és un ingredient popular en cosmètics. L'envelliment de la pell és un procés biològic complex que es caracteritza per arrugues, pèrdua d'elasticitat, pèrdua d'humitat i textura rugosa causada per l'estrès oxidatiu, danys a l'ADN i l'acumulació de productes finals de glicació avançada [22]. L'àcid hialurònic, el col·lagen i l'elastina, que són components importants de la pell, es poden degradar pels enzims hialuronidasa, col·lagenasa i elastasa, respectivament, donant lloc a l'envelliment de la pell. S'han utilitzat diversos olis vegetals, com l'oli d'oliva, l'oli de llavors de gira-sol, l'oli de llavors de raïm i l'oli de jojoba per a les propietats cosmètiques de la pell per retenir la humitat, millorar la funció de barrera de la pell i prevenir l'envelliment de la pell [23]. A més, la pigmentació de la pell és un fenotip variable i notable en humans que implica melanogènesi i està regulada per l'enzim tirosinasa [24]. Actualment, s'han provat diversos extractes de plantes per a cosmètics i productes farmacèutics per reduir la producció de melanina, actuant com a agents blanquejants [25,26].

cistanche tubulosa supplement

Recentment, C. moschata Duch. Ex Poir és un conreu de carbassa que es conrea habitualment i es popular a Tailàndia, però hi ha pocs estudis que incloguin els seus valors funcionals i propietats farmacològiques. A més, l'extracció enzimàtica aquosa és un mètode interessant per extreure oli de llavors de carbassa per obtenir un alt rendiment i eficiència. Per tant, aquest estudi es va centrar en la determinació dels principals constituents, antioxidants i activitats farmacològiques de l'oli de llavors de carbassa de C. moschata Duch. Ex Poir. (cultivar tailandès) i C. moschata (carbassa japonesa) mitjançant el mètode d'extracció enzimàtica aquosa.

2. Materials i Mètodes

2.1. Materials vegetals

Els fruits frescos de C. moschata Duch. Ex Poir i C. moschata (carbassa japonesa) es van comprar en un mercat local de Chiang Mai, Tailàndia el desembre de 2020. Es van recollir les llavors i es van eliminar tots els fils fibrosos. Després de l'eliminació de la capa de llavors, les llavors de carbassa pelades es van rentar i assecar a temperatura ambient. Les llavors es van guardar en una bossa de plàstic tancada fins a una nova experimentació. A més, es van comprar dues mostres comercials d'oli de llavors de carbassa (COM1 i COM2) a un supermercat de Chiang Mai, Tailàndia. Tots els experiments es van realitzar dins de la data d'idoneïtat per al consum dels olis comercials.

2.2. Productes químics i reactius 

Col·lagenasa de Clostridium histolyticum (ChC—EC.3.4.23.3), elastasa del pàncrees porcí (PE—EC 3.4.21.36), N-succinil-Ala-Ala-p-nitroanilida, sulfat fèrric (FeSO4), sal de sodi d'àcid hialurònic de Streptococcus equi, hialuronidasa procedent de proves bovines, pectinasa d'Aspergillus niger (EC 3.2.1.15, superior o igual a 5 unitats/mg de proteïna, pH òptim=4.{{20}}, temperatura òptima=61 ◦C), cel·lulasa d'Aspergillus niger (EC 3.2.1.4, superior o igual a 0,3 unitats/mg sòlid, pH òptim=6},5, temperatura òptima {{ 30}}–55 ◦C), proteasa d'Aspergillus Saito (EC 3.4.21.112, superior o igual a 0,6 unitats/mg sòlid, pH òptim=5,1, temperatura òptima=57},2 ◦ C), 2,20 -azinobis 3-etilbenzotiazolina-6-sulfonat (ABTS), 2,2-difenil-1-picrhidrazilhidrat (DPPH), 2,4,6 tripiridil-s-triazina (TPTZ), 6-hidroxi-2, 5,7,8-tetrametilcroman{-2-àcid carboxílic (Trolox), albúmina sèrica bovina, àcid cògic, L -tirosina, L-DOPA, àcid linoleic, fosfat de sodi monobàsic (NaH2PO4·2H2O), fosfat de sodi dibàsic i tirosinasa de bolets es van comprar a Sigma-Aldrrich (St. Louis, MO, EUA). A més, es van comprar un 37 per cent d'àcid clorhídric, un 95 per cent d'etanol, aigua destil·lada (DI), sulfòxid de dimetil (DMSO) i metanol a RCI Labscan Co., Ltd. (Bangkok, Tailàndia). El tiocianat d'amoni (NH4SCN) i el clorur fèrric (FeCl2) es van comprar a Loba Chemie Pvt. Ltd. (Mumbai, Índia). El tris (hidroximetil) aminometà es va comprar a Merck (Darmstadt, Alemanya).

2.3. Extracció enzimàtica aquosa

Olis de llavors de carbassa de C. moschata Duch. Ex Poir i C. moschata (carbassa japonesa) es van extreure mitjançant un mètode d'extracció enzimàtica aquosa utilitzant els paràmetres d'hidròlisi enzimàtica d'un estudi anterior de Kanopka et al. (2016), incloent la concentració d'enzims, la relació enzim-substrat, temperatura de reacció, pH i temps de reacció [21]. Es van combinar tres tipus diferents d'enzims, incloent pectinasa, cel·lulasa i proteasa, en una proporció de pes 1:1:1 per generar un còctel concentrat d'enzims. A continuació, el còctel de concentrat resultant es va diluir en aigua DI per generar una barreja enzimàtica aquosa del 2% p/p. A continuació, es van afegir les llavors de carbassa sense casc a la barreja enzimàtica aquosa resultant en una proporció de pes d'1:1. A continuació, la barreja es va triturar finament amb una batedora Moulinex DB81 a temperatura ambient fins a l'homogeneïtat. A continuació, es va ajustar el pH de la suspensió resultant a 4, 7 amb HCl 0, 1 M i es va incubar a 54 ◦ C durant 15 h. Després de refredar la suspensió a temperatura ambient, es va centrifugar a 11.500 × g durant 10 min. Es va recollir la capa superior de sobrenedant, que era la fase d'oli. La nata produïda durant el procés d'extracció no s'emulsionava sinó que s'eliminava per sifonament mitjançant una micropipeta. El residu de llavors de carbassa es va eliminar per filtració a través de paper de filtre Whatman No.1 al buit [21]. Oli de llavors de carbassa de C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) i C. moschata (carbassa japonesa) (PSO2) es van mantenir en recipients ben tancats i resistents a la llum a temperatura ambient fins a una nova experimentació.

2.4. Determinació de la composició química de l'oli de llavors de carbassa mitjançant el mètode d'èster metílic d'àcids grassos/cromatogràfic de gasos-espectromètric de masses (FAME/GC/MS)

L'oli de llavors de carbassa es va determinar per a la composició d'àcids grassos mitjançant el mètode èster metílic d'àcids grassos/cromatogràfica de masses de gasos (FAME/GC/MS). FAME és un tipus d'èster d'àcids grassos que es deriva per transesterificació catalitzada per àcids de greixos amb metanol. En aquest estudi, els olis de llavors de carbassa (PSO1, PSO2, COM1 i COM2) es van saponificar afegint una solució de NaOH 0,5 M en metanol a 100 ◦C durant 15 min. . Després de refredar-se, les mostres d'oli es van derivatitzar amb trifluorur de bor (BF3) en solució de metanol a 100 ◦C durant 1 min per formar productes FAME. Després del refredament i l'addició de NaCl saturat i hexà, els FAME es van dividir en fase hexà i es van recollir en vials per a la injecció. Els extractes de FAME es van analitzar mitjançant la tècnica GC/MS en les condicions següents: dimensió de la columna capil·lar (TR-FAME, mida 60 m × 0,25 mm, mida de partícula de 0,25-µm), programa de temperatura en funcionament de 50 ◦C ; Manteniu 2 min amb la velocitat de rampa 1 de 10 ◦C/min fins a 180 ◦C, manteniu 15 min; velocitat rampa 2 de 4 ◦C/min, temperatura final 230 ◦C, mantingueu 22,50 min. L'heli es va utilitzar com a gas portador a un cabal d'1,0 ml/min. Les mostres d'oli es van injectar en un mode splitless (proporció de divisió 1:20 i 20 ml/min) a 235 ◦C mitjançant un mostreig automàtic. Un detector MS equipat amb una font d'ionització per electrospray (ESI) funcionava a 70 eV amb les temperatures de la font d'ions i la línia de transferència establertes a 200 ◦ C i 220 ◦ C, respectivament, va registrar espectres de masses en el rang m/z de 38–600. Els compostos analitzats es van assignar comparant els seus espectres de masses amb les dades publicades (National Institute of Standards and Technology, 2008). La composició percentual es va calcular integrant pics en cromatogrames d'ions totals (TIC). Totes les mesures es van realitzar pel Laboratori de Recerca i Servei, el Centre de Ciència Halal, la Universitat de Chulalongkorn, Bangkok, Tailàndia, sota les normes Halal GMP/HACCP i Halal-QHS/ISO 22000.

cistanches herba

2.5. Determinació d'activitats antioxidants

2.5.1. 2,2-Difenil-1-Assaig d'eliminació de radicals de picrhidrazil (DPPH)

L'activitat d'eliminació del radical DPPH (DPPH• ) es va determinar mitjançant el mètode establert per Chaiyana et al. (2017) [27]. En resum, 20 µL de mostres d'oli (PSO1, PSO2, COM1, COM2) i àcid linoleic dissolts en DMSO es van barrejar amb 180 µL de solució etanòlica de DPPH 167 µM en una placa de pous 96- i després es van incubar durant 30 min a temperatura ambient a la foscor. L'àcid ascòrbic (1 mg/ml) es va utilitzar com a control positiu. La densitat òptica (DO) es va mesurar a 520 nm mitjançant un lector de microplaques (Lectors de microplaques EZ Read 2000, Biochrome, Anglaterra). Els experiments es van fer per triplicat i es van realitzar en tres independents. El percentatge d'inhibició de DPPH es va calcular mitjançant l'equació (1):

Inhibició de DPPH (per cent)={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (1)

on ODA és la DO d'una mescla que conté aigua DI i DPPH•solució; B és l'ODB d'una mescla que conté aigua DI i DMSO; C és l'ODC d'una mescla que conté mostres d'oli i DPPH•solució; i ODD és la DO d'una mescla que conté mostres d'oli i DMSO.

2.5.2. 2,20 -assaig d'azino-bis-3-etilbenztiazolina-6-àcid sulfònic (ABTS)

L'activitat d'eliminació del radical catiònic ABTS (ABTS• plus) es va mesurar pel mètode colorimètric segons Chaiyana et al. (2017) i Paradee et al. (2019) [27,28] amb una lleugera modificació. ABTS• plus es va generar afegint 2 mL d'ABTS 7 mM amb 3 mL de persulfat de potassi 2,45 mM i es va incubar durant 16-24 h a temperatura ambient a la foscor. L'ABTS• plus resultant es va diluir posteriorment amb etanol per obtenir una DO de 0,7 ± 0,1 a 750 nm. Breument, 20 µL de mostres d'oli (PSO1, PSO2, COM1, COM2) i àcid linoleic dissolts en DMSO es van barrejar amb 180 µL d'ABTS• més solució etanòlica en una placa 96-pou i es van incubar durant 5 min a temperatura ambient. . La DO es va mesurar a 750 nm mitjançant un lector de microplaques (Lectors de microplaques EZ Read 2000, Biochrome, Anglaterra). L'àcid ascòrbic (1 mg/ml) es va utilitzar com a control positiu. La corba estàndard es va produir dibuixant l'absorbància a 750 nm en comparació amb diferents concentracions de Trolox que oscil·laven entre 2,5 i 30 µg/mL. L'activitat d'eliminació ABTS• més es va calcular a partir de la corba estàndard de Trolox (R2=0,9922) i es va expressar com a capacitat antioxidant equivalent de Trolox (TEAC). Els experiments es van fer per triplicat i es van realitzar en tres independents.

2.5.3. Assaig de poder antioxidant reductor de fèrric (FRAP).

El poder antioxidant reductor de fèrric (FRAP) de cadascuna de les mostres es va determinar mitjançant l'assaig FRAP tal com es descriu en un estudi anterior de Chaiyana et al. (2017) que havia estat lleugerament modificat de Saeio et al. (2011) [27,29]. El reactiu FRAP es va generar recentment barrejant 300 mM de tampó d'acetat (pH 3,6), 10 mM de 2,4,6 tripyridyl-s-triazine (TPTZ) en 40 mM de HCl i 20 mM de FeCl3 en una proporció de 10:1:1. En aquest estudi, 20 µL de mostres d'oli (PSO1, PSO2, COM1, COM2) i àcid linoleic es van barrejar amb 180 µL de reactiu FRAP en una placa de pous 96- i es van incubar durant 5 min a temperatura ambient a la foscor. La DO es va mesurar a 595 nm mitjançant un lector de microplaques (Lectors de microplaques EZ Read 2000, Biochrome, Anglaterra). L'àcid ascòrbic (1 mg/ml) es va utilitzar com a control positiu. La corba estàndard es va produir dibuixant l'absorbància a 595 nm en comparació amb diferents concentracions de sulfat fèrric (FeSO4) que van des de 0, 003 a 0, 5 mM. El valor de FRAP es va calcular a partir de la corba estàndard de FeSO4 (R2=0.9965) i es va expressar com a capacitat equivalent (EC1). Els experiments es van fer per triplicat i es van realitzar en tres independents.

2.5.4. Assaig de tiocianat fèrric (FTC).

La inhibició de la peroxidació lipídica es va investigar mitjançant el mètode de tiocianat fèrric (FTC). Aquest mètode es va realitzar segons els passos descrits per Osawa et al. (1981) [30] amb una lleugera modificació. La barreja estava composta per 50 µL de mostres d'oli (PSO1, PSO2, COM1, COM2) i àcid linoleic, 50 µL d'àcid linoleic al 50% en DMSO, 50 µL de solució aquosa de tiocianat d'amoni al 10% (NH4SCN). , i 50 µL de clorur fèrric 2 mM (FeCl2). A continuació, la barreja es va incubar a 37 ± 2 ◦ C durant 1 h i es va mesurar la DO a 500 nm mitjançant un lector de microplaques (Lectors de microplaques EZ Read 2000, Biochrome, Anglaterra). -Es va utilitzar tocoferol (0,025–0,1 mg/ml) com a control positiu. Els experiments es van fer per triplicat i es van realitzar en tres independents. L'activitat d'inhibició de la peroxidació lipídica es va calcular mitjançant l'equació (2):
Inhibició de la peroxidació lipídica (percentatge)={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA−ODB)} × 100, (2)
on ODA és la DO de la mescla que conté àcid linoleic, NH4SCN i FeCl2; ODB és l'OD de DMSO; ODC és la DO de la mescla que conté mostres d'oli, àcid linoleic, NH4SCN i FeCl2; i ODD és la DO de la mescla que conté mostres d'oli i DMSO.

2.6. Determinació d'activitats anti-envelliment

2.6.1. Activitat antihialuronidasa

La mesura de l'activitat anti-hialuronidasa es va realitzar tal com es va descriure anteriorment per Chaiyana et al. (2020) [31]. Primer, es van barrejar 20 µL de mostres d'oli (PSO1, PSO2, COM1, COM2) amb 100 µL de solució de hialuronidasa de 15 U/mL i es van incubar a 37 ◦ C durant 10 min. Després de la incubació, es van afegir 100 µL d'àcid hialurònic al 0, 03 per cent p/v que es va dissoldre en tampó fosfat 20 mM (pH 5, 35) i després es va incubar a 37 ◦ C durant 45 min. Després d'això, es va afegir 1 ml d'albúmina sèrica bovina al 0,1 per cent i es va incubar a temperatura ambient durant 10 min. La DO es va determinar a 600 nm mitjançant un detector multimode (Beckman Coulter DTX880, Fullerton, CA, EUA). L'àcid oleanòlic (0, 25 per cent p/v) es va utilitzar com a control positiu. Els experiments es van fer per triplicat i es van realitzar en tres independents. El percentatge d'inhibició de la hialuronidasa es va calcular mitjançant l'equació (3):

Inhibició de la hialuronidasa (per cent)={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (3)
on ODA és la DO de la mescla que conté aigua DI, solució de hialuronidasa i àcid hialurònic; ODB és la DO de la mescla que conté aigua DI i tampó fosfat (pH 5,35); ODC és la DO de la mescla que conté mostres d'oli, solució de hialuronidasa i àcid hialurònic; i ODD és la DO de la mescla que conté mostres d'oli i tampó fosfat (pH 5,35).

2.6.2. Activitat anti-col·lagenasa

La mesura de l'activitat anti-collagenasa es va realitzar segons el procés establert per Chaiyana et al. (2019) i Thring et al. (2009) amb lleugeres modificacions [32,33]. Breument, es van barrejar 20 µL de mostres d'oli (PSO1, PSO2, COM1, COM2) amb 20 µL de solució de col·lagenasa 0, 1 U/mL de Clostridium histolyticum i es van incubar a 37 ◦ C durant 15 min. Després de la incubació, 80 µL de tampó tricina 50 mM (400 mM NaCl i 10 mM CaCl2, pH 7,5) i 40 µL de N-[3-(2-furil)acriloil]-Leu-Gly- Es va afegir una solució de substrat Pro-Ala (FALGPA). La DO es va detectar immediatament a 340 nm i després es va mesurar contínuament durant 20 min mitjançant un lector de microplaques (lectors de microplaques EZ Read 2000, Biochrome, Anglaterra). L'àcid oleanòlic (1 per cent p/v) es va utilitzar com a control positiu. Els experiments es van fer per triplicat i es van realitzar en tres independents. El percentatge d'inhibició de la col·lagenasa es va calcular mitjançant l'equació (4):

Inhibició de la col·lagenasa (per cent)=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (4)
on ODA és la DO de la mescla que conté mostres d'oli, solució de col·lagenasa, tampó de tricina i substrat FALGPA; i ODB és la DO de la mescla que conté DMSO, solució de col·lagenasa, tampó de tricina i substrat FALGPA.

2.6.3. Activitat anti-elastasa

La mesura de l'activitat anti-elastasa es va realitzar segons el procés establert per Chaiyana et al. (2019) i Thring et al. (2009) amb lleugeres modificacions [32,33]. Breument, es van barrejar 10 µL de mostres d'oli (PSO1, PSO2, COM1, COM2) amb 40 µL de solució d'elastasa de 0,03 U/mL de pàncrees porcí, després 50 µL de tampó Tris-HCL de 200 mM (pH 8,0) i 100 µL de Es va afegir una solució de substrat de N-succinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilida (AAAPVN) 0, 8 mM. La DO es va detectar immediatament a 410 nm i després es va mesurar contínuament durant 20 min mitjançant un lector de microplaques (Lectors de microplaques EZ Read 2000, Biochrome, Anglaterra). L'àcid oleanòlic (1 per cent p/v) es va utilitzar com a control positiu. Els experiments es van fer per triplicat i es van realitzar en tres independents. El percentatge d'inhibició de l'elastasa es va calcular mitjançant l'equació (5):

Inhibició de l'elastasa (per cent)=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (5)
on ODA és la DO de la mescla que conté mostres d'oli, solució d'elastasa, tampó Tris-HCl i substrat AAAPVN; i ODB és la DO de la mescla que conté DMSO, solució d'elastasa, tampó Tris-HCl i substrat AAAPVN.

2.7. Determinació de les activitats antitirosinases

L'efecte blanquejador d'un extracte natural es va establir mitjançant la mesura de l'activitat anti-tirosinasa que es va realitzar segons Saeio et al. (2011) i Laosirisathian et al. (2020) [29,34]. L-tirosina i L-DOPA van ser els substrats de l'enzim tirosinasa en aquest estudi. En resum, es van barrejar 10 µL de mostres d'oli (PSO1, PSO2, COM1, COM2) amb 30 µL de tirosinasa en una placa de pous 96-, i després es van incubar a temperatura ambient durant 10 min. Després de la incubació, es van afegir 100 µL del substrat, que són 2, 5 mM de L-tirosina o L-DOPA, i es van incubar durant 30 min. La DO es va determinar a 450 nm mitjançant un lector de microplaques (Lectors de microplaques EZ Read 2000, Biochrome, Anglaterra). L'àcid kòjic (20 µg/mL) es va utilitzar com a control positiu. Els experiments es van fer per triplicat i es van realitzar en tres independents. El percentatge d'inhibició de la tirosinasa es va calcular mitjançant l'equació (6):

Inhibició de la tirosinasa (per cent)={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (6)
on ODA és la DO de la mescla que conté DMSO, enzim tirosinasa i L-tirosina; ODB és la DO de la mescla que conté l'enzim tirosinasa i PBS amb un pH de 6,8; ODC és la DO de la mescla que conté mostres d'oli, enzim tirosinasa i L-tirosina; i ODD és la DO de la mescla que conté mostres d'oli, enzim tirosinasa i PBS amb un pH de 6,8.

2.8. Anàlisi estadística

Totes les dades es van demostrar com a mitjana ± desviació estàndard (DE). La significació estadística es va analitzar mitjançant l'anàlisi unidireccional de la variància (ANOVA) seguida de la prova post-hoc de Tukey mitjançant GraphPad Prism (versió 8.0, GraphPad Software), i es va considerar p <0.05. estadísticament significant.

cistanche herb

3. Resultats i discussió

3.1. Caràcter de l'oli de llavors de carbassa

En aquest estudi, hem utilitzat l'extracció enzimàtica aquosa en lloc de l'extracció amb dissolvent orgànic per extreure l'oli de llavors de carbassa de C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) i C. moschata (PSO2) perquè és un procés senzill, eficaç i productiu [15,21]. PSO1 era un líquid marró fosc amb baixa viscositat, mentre que PSO2 era un líquid marró verdós amb baixa viscositat. Tots dos olis de llavors de carbassa tenien la seva olor característica. Els rendiments de PSO1 i PSO2 van ser del 17,7% v/p i del 15,6% v/p, respectivament. A part de l'oli, s'ha informat que la llavors de carbassa conté una varietat de compostos nutritius. Les composicions proximes de C. moschata eren principalment hidrats de carboni (39,51 per cent), seguides de greixos (28,49 per cent), proteïnes (19,23 per cent), aigua (7,67 per cent) i cendres (5,18 per cent), respectivament [35]. No obstant això, en comparació amb els estudis anteriors amb dissolvent i premsat mecànic, el present estudi va revelar rendiments més baixos d'oli de C. moschata. Tot i que l'extracció amb dissolvents s'ha descrit com el mètode d'extracció d'oli més eficaç, extreure fins a un 98 per cent dels olis de les llavors, hi ha alguns problemes relacionats amb els residus de dissolvents i la puresa de l'oli produït [36]. A més, el dissolvent emprat en el procés d'extracció va afectar el rendiment de l'oli generat. L'extracció amb hexà, èter de petroli, benzè de petroli, ciclohexà, èter isopropílic, acetat d'etil, tetrahidrofurà, propà-2-ol i acetona va donar entre el 43,4 i el 64,4 per cent [37,38]. Per tant, la premsa en fred era preferible a l'extracció amb dissolvent. Tanmateix, una premsa en fred pot causar algunes complexitats en l'etapa inicial d'utilitzar una premsa de cargol [39]. Per tant, l'extracció enzimàtica aquosa podria ser un mètode d'extracció alternatiu, ja que va obtenir un contingut més elevat d'oli de llavors de carbassa (36,0 per cent) en comparació amb l'oli premsat en fred (33,5 per cent) [21]. Tot i que el procés d'extracció enzimàtica aquosa va ser més complicat que la premsa en fred, inclou un cost d'inversió relativament més barat, una disminució continuada del cost dels preparats enzimàtics comercials, un potencial per aïllar simultàniament components fitoquímics únics i valuosos, així com abordar el desig generalitzat per la implementació de tecnologies verdes [21]. Estudis preliminars van descriure que diversos enzims com les cel·lulases, les pectinases, l'hemicel·lulasa i la proteasa s'han utilitzat sovint per destruir l'estructura de la paret cel·lular de les plantes per millorar l'extracció bioactiva de les plantes [16,17]. Per tant, hem dissenyat aquest estudi per extreure l'oli de llavors mitjançant una barreja d'enzims que conté pectinasa, cel·lulasa i proteasa (1: 1: 1) tal com han descrit anteriorment Kanopka et al. (2016), que van optimitzar les condicions d'hidròlisi enzimàtica per obtenir el màxim rendiment d'oli de llavors de carbassa [21]. A més, aquest mètode mostra alternatives més segures i ambientalment sostenibles a l'extracció amb dissolvents, aquí anomenada "extracció verda".

3.2. Composició química de l'oli de llavors de carbassa

Per a l'anàlisi de la composició d'àcids grassos, es va comparar i analitzar l'oli de llavors de carbassa mitjançant extracció enzimàtica aquosa (PSO1 i PSO2) juntament amb l'oli de llavors de carbassa comercial (COM1 i COM2) produït per extracció de premsa en fred. Les composicions d'àcids grassos de PSO1, PSO2, COM1 i COM2 es mostren a la taula 1. Totes les mostres d'oli de llavors de carbassa constaven d'àcids grassos poliinsaturats (PUFA), monoinsaturats (MUFA) i saturats. L'àcid cis-linoleic (C18:2) va ser el component principal de totes les mostres d'oli. COM2 contenia el contingut més alt d'àcids grassos (51,74 per cent), seguit de COM1 (48,00 per cent), PSO1 (39,09 per cent) i PSO2 (37,63 per cent), respectivament. De la mateixa manera, l'àcid cis-oleic (C18:1) estava present en un alt percentatge, especialment en PSO2 (37,45 per cent), seguit de COM1 (33,39 per cent), PSO1 (31,22 per cent) i COM2 (28,64 per cent). Els àcids grassos saturats com l'àcid palmític (C16:0) i l'àcid esteàric (C18:0) es van trobar només en petites quantitats a cadascuna de les mostres d'oli. També es van observar i identificar traces d'altres PUFA, MUFA i àcids grassos saturats.

A la literatura, l'àcid linoleic també es coneix com omega-6, un àcid gras essencial que el cos humà no pot sintetitzar, només es rep amb el consum dietètic. L'àcid linoleic és un nutrient important per a les funcions de salut en humans, que inclou un precursor de les ceramides, que és un component important de les membranes cel·lulars, la vitamina D i una varietat d'hormones [40,41]. Els estudis en animals han demostrat que la deficiència d'àcid linoleic pot causar escates i picor a la pell [23]. A més, l'àcid linoleic de l'oli vegetal ha donat suport a la cicatrització de ferides a la pell, juntament amb la prevenció de la inflamació de la pell i l'acne [23]. A més, l'àcid oleic, o omega-9, ha estat beneficiós per prevenir el càncer, malalties autoimmunes i inflamatòries [42]. De fet, l'àcid oleic va reduir significativament la producció d'òxid nítric al lloc de la ferida, donant lloc a un tancament més ràpid de la ferida [43]. Aquestes dades confirmen que l'oli de llavors de carbassa, que enriqueix l'àcid linoleic (omega-6) ​​i l'àcid oleic (omega-9), presenta beneficis potencials per a la salut.

cistanche tubulosa

A partir de les nostres troballes, l'oli de llavors de carbassa (PSO1, PSO2, COM1 i COM2) constava de molts àcids grassos, inclosos l'àcid linoleic (C18:2), l'àcid oleic (C18:2), l'àcid palmític (C16:0) i l'àcid esteàric (C18:0), que són components comuns que es troben a l'oli de llavors de carbassa [44]. L'àcid linoleic (omega-6) i els àcids oleic (omega-9) eren dominants a totes les mostres d'oli. La quantitat més alta d'àcid linoleic va ser COM2, seguida de COM1, PSO1 i PSO2, respectivament. A més, la quantitat més alta d'àcid oleic va ser PSO2, seguit de COM1, PSO1 i COM2. Aquests resultats expliquen que l'extracció enzimàtica aquosa de l'oli de llavors de carbassa tenia un àcid linoleic lleugerament inferior, però no oleic que l'extracció de premsa en fred. La raó del menor contingut d'àcid linoleic a les llavors de carbassa procedent de l'extracció enzimàtica aquosa que a les mostres d'oli comercial es va deure a una diferència en el procés d'extracció. Estudis anteriors han trobat inconsistències en la quantitat d'àcids grassos insaturats, especialment àcid oleic i àcid linoleic, en olis de llavors de carbassa d'extraccions diferents [39]. El contingut d'àcid oleic oscil·lava entre el 28,19 per cent en l'oli de llavors de carbassa premsat en fred fins al 30,56 per cent en l'oli de llavors de carbassa extret per pentà, mentre que el contingut d'àcid linoleic oscil·lava entre el 43,86 per cent en l'oli de llavors de carbassa extret amb pentà. fins al 46,67 per cent en oli de llavors de carbassa premsat en fred [39]. A part dels diferents mètodes d'extracció, els dissolvents utilitzats en el procés d'extracció i la temperatura durant la maduració de les llavors també van afectar el contingut d'àcid linoleic de les llavors de les plantes. Un estudi anterior va destacar que l'èter de petroli va donar oli de llinosa amb un baix contingut linoleic (26,2 per cent), mentre que el n-hexà va donar resultats contradictoris amb un contingut d'àcid linoleic del 46,5 per cent [45]. A més, l'àcid linoleic és inversament proporcional a la temperatura durant la maduració de les llavors de gira-sol [46].

A més, un estudi relatiu va descobrir que la composició química en termes de composició d'àcids grassos va revelar que els àcids linoleic i oleic estaven presents en un 47,45 per cent i un 35 per cent, respectivament, en l'oli de llavors de carbassa (C. maxima) extret amb èter dietílic [47] . Segons Akin et al. (2018), el contingut d'àcid linoleic va oscil·lar entre el 53,19% i el 53,27%, seguit de l'àcid oleic, que també estava present en quantitats elevades que van del 27,52% al 27,59% en l'extracció d'oli de llavors de C. pepo L. premsada en fred [48]. ]. Per tant, l'extracció enzimàtica aquosa en aquest estudi també va obtenir menors rendiments d'àcids grassos que l'extracció amb dissolvents i l'extracció per premsa en fred esmentades en estudis anteriors. En comparació de conreus, vam trobar que PSO1 (C. moschata Duch. Ex Poir) mostrava una quantitat més elevada d'àcid linoleic que PSO2 (C. moschata, o carbassa japonesa). Diversament, el PSO2 presentava una quantitat més gran d'àcid oleic que el PSO1. És important destacar que les variacions en els perfils d'àcids grassos i les quantitats d'oli de llavors de carbassa depenien de l'origen de cultivars particulars, les condicions climàtiques i la gestió posterior a la collita [49]. A part de les diferències en els perfils d'àcids grassos dels olis de llavors de carbassa obtinguts amb diferents mètodes d'extracció, es va informar que els olis de la tecnologia enzimàtica aquosa eren rics en fitosterol i tocoferol [50]. Per tant, PSO1 i PSO2, que es van produir a partir del mètode d'extracció verda, es suggereixen com a olis alternatius de llavors de carbassa per a més aplicacions.


Per a més informació: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Potser també t'agrada