Estudi experimental sobre l'efecte protector dels glucòsids totals de Cistanche (CTG) sobre la lesió de reperfusió isquèmica renal
Mar 09, 2022
Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com
ZHU Jun, ZHAO Xi
Resum:Objectiu Establir el model de rata de xoc hemorràgic i reanimació per observar l'efecte protector deglucòsids totals de cistanche(CTG)al renallesió isquèmica-reperfusió. Mètodes Les rates SD es van classificar aleatòriament en un grup d'operacions simulades, un grup de xoc i reanimació (grup d'experimentació) i un grup CTG, amb 10 rates en cadascun. Després del modelatge, les rates del grup CTG van rebre la injecció intraperitoneal de CTG 400 mg/kg. Al grup experimental i al grup d'operacions simulades, es van injectar 3 ml de solució salina física. Es van determinar els nivells de Cr, BUN i Cys - C per detectar la funció renal a cada grup. La citometria de flux es va utilitzar per detectar la taxa d'apoptosi de cèl·lules renals. Es va utilitzar ELISA per detectar l'expressió de XIAP al teixit renal. Resultats En comparació amb el grup d'experiment, els nivells de Cr, BUN i Cys - C es van reduir aparentment en elCTGgrup (P < {{0}},="" 01)="" i="" es="" va="" reduir="" l'apoptosi="" de="" les="" cèl·lules="" renals="" (p="">< 0,="" 01).="" ctg="" va="" millorar="" significativament="" l'expressió="" xiap=""><0.05). conclusion="">CTGaporta l'efecte protectorreperfusió isquèmicalesió renal a les rates, que possiblement està relacionada amb la promoció de l'expressió XIAP.
【Paraules clau】 Ronyó; Lesió de reperfusió isquèmica; Glucòsids totals de Cistanche; XIAP; Apoptosi cel·lular
Lesió per isquèmia-reperfusió (I/R).és un fenomen fisiopatològic comú de dany renal en el procés de xoc hemorràgic, trauma greu, trasplantament de ronyó i cirurgia de tumor renal. Els estudis han demostrat que l'apoptosi és un enllaç important en el dany de la funció renal causat per lesions I/R [1]. L'inhibidor de la proteïna de l'apoptosi lligat al cromosoma X (XIAP) és un dels inhibidors endògens més forts de l'apoptosi trobats fins ara [2]. Hi ha pocs estudis sobre l'efecte antiapoptòtic de XIAP en el teixit renal després d'una lesió I/R.Glucòsids totals de Cistanche(CTG) són de la llista de compostos de glicòsids de feniletanol extretsCistanchetenen diferents funcions biològiques. Hi ha pocs estudis sobre la seva protecció renal després d'una lesió I/R. En aquest experiment, es va establir un model de rata de reanimació per xoc hemorràgic i es va establir un model sistèmic de lesió I/R per explorar l'efecte protector del pretractament CTG sobre el ronyó de la lesió I/R i explorar el seu possible mecanisme.
Efectes del cistanche: prevenirLesió per isquèmia-reperfusió (I/R).
1 Material i mètodes
1.1 Materials experimentals
1.1.1 Animals de laboratori 30 rates SD mascles sanes de grau net, proporcionades pel Centre Experimental de la Universitat de Medicina Tradicional Xinesa de Xangai, número de certificat animal: SYXK (Xangai) 2009-0069, pes corporal (320 ± 30) g.
1.1.2 Reactiu experimentalCTG(comprat a Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd., número de lot: 20081516); pentobarbital sòdic (número de lot: P3761), iodur de propidi (PI), Rhodamin123 (ambdós comprats (de Sigma, EUA); Kit de determinació de Rat XIAP ELISA Kit (comprat a Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd., número de lot CSB-ELO26172MO) .
1.1.3 Instrument de laboratori Lector de microplaques (American Thermo Company); Detector fisiològic multiparàmetre (comprat a NIHON KOHDEN Company, Japó); Citòmetre de flux (comprat a Becton-Dickinson Company, EUA); Trocar 24 G (Shandong Jierui Medical Equipment Company).
1.2 Mètodes experimentals
1.2.1 Preparació del model animal Les rates SD es van dejunar 12 hores abans de l'experiment i es van anestesiar mitjançant injecció intraperitoneal de pentobarbital sòdic (50 mg/kg). Les rates es van fixar en posició supina i es va fer una incisió de 3 cm a la part inferior de l'abdomen esquerre i es va separar. A l'artèria femoral, s'introdueix un trocar de 24 G, es connecta un tester fisiològic multiparàmetre, s'heparinitza una xeringa de 20 ml i la pressió arterial baixa a 40 mm Hg. La pressió arterial baixa a 40 mm Hg. Es considera que el xoc ha començat, i la pressió arterial es manté durant 90 minuts. És (13 ± 3) ml, i després la sang autòloga de la xeringa es torna lentament. Es triguen uns 30 minuts a restaurar la pressió arterial a més del 90 per cent del valor bàsic. Es considera que la reanimació té èxit [3]. Traieu l'agulla del trocar, lligueu l'artèria femoral i cosiu la incisió. Després que les rates es despertessin, van ser tornades a la gàbia per a l'observació i tenien accés lliure a menjar i aigua. 24 hores després de la reanimació, les rates van ser anestesiades amb pentobarbital sòdic (50 mg/kg) mitjançant injecció intraperitoneal, laparotomia i es van recollir 5 ml de sang de la vena cava inferior. Les rates es van matar immediatament i es van treure els ronyons esquerre i dret per utilitzar-los.
1.2.2 Agrupació i administració d'animals Es van dividir aleatòriament 30 rates en grup de cirurgia simulada, grup de reanimació de xoc (grup experimental) i grup CTG, amb 10 rates a cada grup.
El grup experimental es va injectar per via intraperitoneal amb 3 ml de solució salina normal 2 hores abans de la sang. En elCTGgrup, el CTG es va administrar 2 hores abans de la sang de les rates i la dosi es va injectar a la cavitat abdominal a una dosi de 400 mg/kg. El grup d'operacions simulades només es va sotmetre a anestèsia, laparotomia i separació de la col·locació de trocars de l'artèria femoral i incisions de sutura, etc., no es van realitzar dessag i reanimació, i la resta va ser el mateix que el grup experimental.
1.3 Indicadors i mètodes de prova
1.3.1 La determinació de la creatinina sanguínia (Cr), el nitrogen ureic (BUN), la cistatina C Cr, BUN i la cistatina C la determina el laboratori del nostre hospital. La cistatina C és un marcador endògen dels canvis en la taxa de filtració glomerular. Quan la funció renal està deteriorada, la taxa de filtració glomerular disminueix i la concentració de cistatina C a la sang pot augmentar més de 10 vegades. La precisió diagnòstica de la cistatina C és significativament millor que la de la creatinina sèrica.
1.3.2 Determinació de la taxa d'apoptosi cel·lular La citometria de flux es va utilitzar per detectar la taxa d'apoptosi de les cèl·lules renals. Agafeu el ronyó i piqueu-lo amb una fulla, afegiu-hi una mica de PBS i transferiu-lo a una proveta. Afegiu el 0,3 per cent de tripsina per a la digestió en un bany maria de 37 graus i s'incube durant 20 min. Quan la substància del tub d'assaig es torni tèrbol, afegiu dues vegades el PBS per aturar la digestió, filtreu amb una malla de niló de malla 300, descarteu les impureses i utilitzeu una centrífuga a baixa temperatura. Centrífuga a 1500 g/s per 5 min, descarteu el sobrenedant, ajusteu la concentració cel·lular a 1 × 106 ~ 1,5 × 106 / ml, preneu 0,4 ml de la suspensió cel·lular anterior i afegiu 10 ul / ml Rhodamin123 0 ．4 ml, s'incube en un Bany d'aigua de 37 graus protegit de la llum, tapeu el tub d'assaig, esbandiu amb PBS dues vegades després de 30 min, després centrifugueu a 1500 g/s durant 5 min, descarteu el sobrenedant i torneu a esbandir de la mateixa manera. Afegiu PI 0,4 ml, tingueu durant 15 min i comproveu el percentatge de cèl·lules normals, necròtiques i apoptòtiques al ronyó. Segons l'afinitat d'aquests dos colorants en diversos tipus de cèl·lules, se sap que només les cèl·lules de color PI són cèl·lules mortes, només les cèl·lules de color Rhodamin123 són cèl·lules vives i ambdues cèl·lules de colors són cèl·lules apoptòtiques.
1.3.3 Es va utilitzar un immunoassaig enzimàtic (ELISA) per detectar l'expressió de XI-AP en teixits renals de rata. Es van prendre ronyons de cada grup i es van tractar teixits renals frescos amb lisat de teixits. Centrifugar a 1500 g/s en una centrífuga a baixa temperatura durant 5 min. Agafeu el sobrenedant i opereu segons les instruccions del kit ELISA XI-AP. Shanghai Jiaoda Fenghe Technology Co., Ltd. és responsable de les proves.
1.4 Tractament estadístic
Totes les dades es van analitzar estadísticament mitjançant el programari SPSS17.0, i les dades es van expressar com a mitjana ± desviació estàndard (x ± s) i P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
glucòsids totals de cistanche
2 resultats
2.1 Els índexs de funció renal Cr, BUN, Cistatina C La comparació de Cr, BUN, Cistatina C al grup experimental va ser significativament més alt que els del grup d'operacions simulades (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">
En comparació amb el grup experimental, els valors de Cr, BUN i Cistatina C en elCTGgrup es va reduir significativament i la diferència va ser estadísticament significativa (P<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Taula 1 Comparació dels índexs de funció renal Cr, BUN i Cistatina C de rates de cada grup (x ± s)
Nota: en comparació amb el grup d'operacions simulades, un P＜{{0}}},01; en comparació amb el grup experimental, bP<>
2.2 La taxa d'apoptosi de cèl·lules renals i l'expressió de XIAP al teixit renal. Només algunes cèl·lules del teixit renal del grup d'operacions simulades pateixen apoptosi.
El nombre d'apoptosi en el grup experimental va augmentar significativament i la diferència va ser estadísticament significativa en comparació amb el grup d'operacions simulades (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>
El grup d'operacions simulades només tenia una expressió XIAP feble, mentre que el grup experimental va tenir un augment significatiu de l'expressió XIAP (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Taula 2 Comparació de la taxa d'apoptosi i l'expressió XIAP de cèl·lules renals de rata a cada grup (x± s)
Nota: en comparació amb el grup d'operacions simulades, aP＜{{0}}. 01; En comparació amb el grup experimental, b P<0. 05,=""><0.>
3 Discussió
El mecanisme de lesió renal I/R és molt complicat. Es tracta d'un procés patològic que es produeix per moltes vies sota l'acció de diversos factors, com ara la sobrecàrrega d'ions calci, dany per oxidació lipídica, apoptosi i necrosi, entre les quals les caspases endògenes L'apoptosi dependent de la caspasa és una de les principals formes d'epiteli tubular renal. dany cel·lular induït per lesió renal I/R [4]. La família dels inhibidors de la proteïna de l'apoptosi (IAP) és l'únic inhibidor de la caspasa trobat fins ara a les cèl·lules de mamífers, que pot prevenir eficaçment l'aparició d'apoptosi. XIAP és el membre inhibidor de la caspasa més fort de la família IAP, que pot inhibir l'apoptosi cel·lular causada per una varietat d'estímuls patològics i tenir un efecte protector sobre els òrgans danyats [5].
Actualment, el mètode per establir models animals de lesió renal I/R consisteix principalment en eliminar un costat del ronyó i fixar l'altre costat del pedicle renal o l'artèria renal [6] per simular l'estat del trasplantament renal. L'autor va utilitzar el model de xoc hemorràgic/reanimació en aquest estudi, que s'acosta més al procés fisiopatològic d'isquèmia-reperfusió sistèmica que es produeix en el xoc traumàtic clínic. En aquest experiment, la sang BUN, Cr i cistatina de rates SD La quantitat de C augmenta significativament i la funció renal està greument deteriorada. És un model animal ideal per estudiar la lesió renal I/R.
La CTG és un component medicinal important de la medicina tradicional xinesaCistanche. Cistanche, que és de naturalesa càlida, dolça i salada, pertany al meridià del ronyó i de l'intestí gros i originalment estava continguda a la Materia Medica de Shennong. "Ben Jing", diu: "Manté cinc treballs i set lesions, nodreix el mig, nodreix els cinc òrgans interns, enforteix el yin i nodreix l'essència i el qi". També."Cistanches'ha utilitzat al meu país durant dos mil anys. En el passat ocupa el primer lloc en fórmules per augmentar la força, i només per darrere del ginseng en fórmules nutritives.Cistanchellaunamillorar la funció sexual, regular el neuroendocrí i millorar la funció immune del cos. Antioxidants, promouen el metabolisme material, protegeixen el miocardi isquèmic i altres funcions. Com a principal ingredient medicinal deCistanche, CTG té moltes funcions. Recerca sobre el cervellisquèmia-reperfusiómodel
Els estudis ho han trobatCTGpot reduir els aminoàcids excitadors del teixit cerebral després de la isquèmia-reperfusió i protegir el teixit cerebral de les rates SD [7]. El CTG té un efecte antioxidant sobre els teixits del ratolí i té un cert efecte protector sobre la hipòxia cerebral aguda en ratolins i el dany del múscul cardíac en els ratolins [8]. La CTG pot millorar significativament el comportament neurològic dels ratolins model de Parkinson i inhibir la disminució del nombre de neurones de dopamina a la substància negra [9]. Mitjançant la millora de l'activitat dels enzims eliminadors de radicals lliures, la prevenció de la peroxidació lipídica, la inhibició de la deposició de pèptid amiloide al cervell i la inhibició de l'apoptosi de les cèl·lules cerebrals, la CTG va augmentar significativament la capacitat de memòria i aprenentatge dels ratolins amb malaltia d'Alzheimer induïda pel pèptid amiloide [10]. Aquest estudi va demostrar que després de l'aplicació del pretractament CTG, el contingut en sang de BUN, Cr i cistatina C de rates SD va disminuir significativament i es va reduir el dany de la funció renal. CTG va augmentar la proteïna inhibidora de l'apoptosi XIAP als teixits renals de lesió I/R i va bloquejar les cèl·lules. L'aparició de l'apoptosi té un paper protector en danyar el ronyó.
referències
[1] Cassis P, Azzollini N, Solini S, et al. Tant la darbepoetina alfa com l'eritropoietina carbamilada eviten la disfunció de l'empelt renal a causa de la isquèmia/reperfusió en rates (J). Trasplantament, 2011, 92 (3): 271-279.
[2] West T, Stump M, Lodygensky G, et al. La manca d'inhibidor lligat a X de la proteïna de l'apoptosi condueix a un augment de l'apoptosi i la pèrdua de teixit després d'una lesió cerebral neonatal［J］． ASN Neuro, 2009, 1 (1). PII: e00004. doi:10. 10421AN20090005.
[3] Fu X, Tian H, Wang D, et al. Múltiples lesions d'òrgans i fallades causades per xoc i reperfusió després de ferides per arma de foc［J］． J Trauma, 1996, 40 (3 Suppl): S135-139.
[4] Padanilam BJ. Mort cel·lular induïda per lesió renal aguda: una perspectiva sobre les contribucions de l'apoptosi i la necrosi［J］． Am J Physiol Renal Physiol, 2003, 284 (4): F608-F627.
[5] Galbán S, Hwang C, Rumble JM, et al. Efectes citoprotectors dels IAP revelats per un antagonista de molècules petites［J］． Biochem J, 2009, 417 (3): 765-771.
[6] Wu Jianguo, Zhang Dan, Wu Xinsheng, etc., Establiment i experiència del model de lesió renal d'isquèmia-reperfusió aguda en ratolins [J]. Informació mèdica: Handbook of Surgery, 2007, 20 (12): 1103-1105.
[7] Zhu Zheng. Efectes dels glucòsids de Cistanche sobre els aminoàcids excitadors en el teixit cerebral de rates després d'isquèmia i reperfusió cerebrals [J]. Anhui Medicine, 2010, 14 (12): 1393 -1394.
[8] Julia Y, Wang XW, Wubuli AS, et al. Efecte protector dels glucòsids totals de cistanche deserticola sobre la manca d'oxigen ［J］． Rep Chin Pharm, 2003, 20 (1): 73-76.
[9] Li Wenwei, Yang Ru, Cai Dongfang, et al. L'efecte protector dels glucòsids totals de cistanche sobre les neurones dopaminèrgiques a la substància negra dels ratolins model de la malaltia de Parkinson MPTP
[10] Liu Fengxia, Wang Xiaowen, Luo Lan, etc. L'efecte i el mecanisme dels glucòsids totals de cistanche sobre l'aprenentatge i la memòria del model de ratolí de la malaltia d'Alzheimer induït pel pèptid -amiloide [J]. Chinese Pharmacology Bulletin, 2006, 22 (5): 595-599.
