2 Mètodes de prova

2.1 Anàlisi farmacològica de la xarxa

2.1.1 Ingredients actius de Cistanche deserticola

Sobre la base dels estudis existents [7, 22], "Echinacoside", "Verbascòsid", "Cistanòsid A", "Tubulòsid A", "Isoacteòsid", "2-Acetillacteòsid" i "Tubulòsid B" es van seleccionar com a components bioactius per a l'anàlisi. Trobeu les dades d'estructura química tridimensional dels set ingredients anteriors a través de Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) i deseu-los en format sdf.

2.1.2 Predicció i cribratge d'objectius potencials

Importa els fitxers d'estructura tridimensional del fitxeringredients actius a la base de dades PharmMapper(http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/index.html). Seleccioneu "Només objectius de proteïna humana" com a espècie objectiu i manteniu les altres opcions per defecte per obtenir les dades corresponents dels diferents ingredients. Objectiu objectiu corresponent.

La base de dades UniProt (https://www.uniprot.org/) es va utilitzar per obtenir el nom de la proteïna i la informació del nom del gen corresponent a cada objectiu. Combina els punts objectiu corresponents als 7 components.

A la base de dades GeneCards (https://www.genecards.org/), utilitzeu "malaltia inflamatòria intestinal" com a paraula clau per cercar gens relacionats amb la malaltia inflamatòria intestinal i organitzar els resultats de la cerca.

Suplement de Cistanche Suplement de suport antiinflamatori PhGs75% Ech 30% Act 12%

2.1.3 Interacció proteïna-proteïna (PPI)

Construcció de xarxes Utilitzeu jvenn (https:/jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html) per dibuixar un diagrama de Venn en línia per obtenir la intersecció dels objectius d'ingredient actiu de Cistanche deserticola i els objectius d'IBD. Carregueu els objectius d'intersecció obtinguts a la base de dades String per a l'anàlisi de detecció de PPI. Baixeu el fitxer TSV de la xarxa PPI, importeu-lo a Cytoscape 3.8.0, calculeu el valor del grau de la xarxa d'interacció de proteïnes i, a continuació, embelliu el diagrama de xarxa PPI en funció del valor del grau.

2.1.4 Ontologia gènica (GO)

L'enriquiment funcional i l'anàlisi d'enriquiment de la via de l'Enciclopèdia de Kyoto de gens i genomes (KEGG) es van realitzar mitjançant la base de dades DAVID (https://david.ncifcrf.gov/) per identificar els objectius dels efectes protectors dels ingredients actius de Cistanche deserticola sobre l'IBD. Es va realitzar una anàlisi GO als punts i, a continuació, es va utilitzar la base de dades DAVID per dur a terme anàlisis d'enriquiment de la via KEGG sobre els objectius on els ingredients actius de Cistanche deserticola tenen un paper protector en la MII.

2.1.5 Construcció de la xarxa "ingredient actiu-objectiu-via" de Cistanche deserticola

Els ingredients actius de Cistanche deserticola, els objectius d'intersecció dels ingredients actius de Cistanche deserticola i l'IBD i les vies enriquides per KEGG es van utilitzar per construir una xarxa d'ingredients actius-objectiu-via.

2.2 Validació del model animal

2.2.1 Establiment del model animal

Es van utilitzar ratolins mascles BALB/c de grau SPF (5 ~ 8 setmanes, 18 ~ 21 g), proporcionats pel Centre de proves d'aliments saludables de l'Escola d'Arts i Ciències Aplicades de la Universitat de la Unió de Beijing [Número de llicència d'ús d'animals experimentals: SYXK (Beijing). ) 2017-0038], es van mantenir en una habitació d'animals de grau SPF amb una temperatura de (23±2) graus, una humitat relativa del 50% al 70% i 12 h d'exposició a llum fluorescent alternant dia i nit. . Tots els protocols d'experimentació amb animals van ser aprovats pel Laboratori d'Animals del Centre de Proves d'Aliments Sanitaris, Escola d'Arts i Ciències Aplicades de la Universitat de la Unió de Pequín. Després de l'alimentació adaptativa durant 3 dies, 20 ratolins es van dividir aleatòriament en 4 grups segons el pes corporal, amb 5 ratolins a cada grup. ①Grup de control (CZ): beu aigua estèril lliurement i doneu aigua estèril durant 7 dies consecutius; ②Grup de control DSS

(DZ): solució gratuïta per beure 3% DSS preparada diàriament durant 7 dies consecutius; ③ Grup de dosis baixes de glucòsids totals de Cistanche deserticola (LZ) (concentració líquida: 0,1 g/mL): solució gratuïta de beure al 3% de DSS preparada diàriament durant 7 dies; , donar líquid durant 7 dies consecutius; ④ Cistanche deserticola grup de dosis altes de glucòsids totals (HZ) (concentració líquida 0,4 g/

mL): Beu la solució de DSS al 3% acabada de preparar cada dia lliurement i doneu la solució per sonda durant 7 dies consecutius. Després de 7 dies de modelatge continu, es van dejunar durant 12 hores i després es van sacrificar per luxació cervical. Els glòbuls vermells de pollastre es van injectar per via intraperitoneal 4 hores abans de l'execució. Immediatament després de l'execució, es van treure els globus oculars per recollir sang. Es va extreure el líquid peritoneal i es va obrir la cavitat abdominal. Es va mesurar la longitud del còlon i es van extreure la melsa del ratolí, el nus de Peyer i altres òrgans.

Suplement de Cistanche Suplement de suport antiinflamatori

2.2.2 Índex d'activitat de la malaltia (DAI)

Els ratolins es van pesar abans de l'administració intragàstrica a una hora fixa cada dia, i es va observar l'estat mental i les propietats fecals dels ratolins. La sang oculta fecal es va mesurar i es va puntuar en conseqüència. Els estàndards de puntuació es mostren a la taula 1. Puntuació DAI=(puntuació de pes corporal + puntuació de caràcters fecals + puntuació de sang oculta fecal)/3 (1)

Taula 1 Criteris de puntuació del DAI

2.2.3 Detecció quantitativa per PCR de fluorescència en temps real Detecció de la via de senyal immune (qRT-PCR)

Es van recollir mels de ratolí, es van tallar en blocs de teixit de 0,5 cm i es van remullar amb una solució estabilitzadora d'ARN de teixit per a l'emmagatzematge. Traieu el teixit i talleu-lo a trossos, afegiu la solució d'extracció d'ARN i tritureu-lo a trossos per extreure l'ARN total. Després de la transcripció inversa i l'amplificació per PCR, es va detectar l'activació de dues vies clau de senyalització immune, mTOR i TGF-, a la melsa del ratolí. Les seqüències d'imprimació utilitzades a la qRT-PCR es mostren a la taula 2.

Taula 2 Taula de seqüències d'inici