Gao-Zi-Yao millora la funció d'aprenentatge i memòria en rates hipertensives espontànies antigues Part 2

Animals experimentals

Es van comprar rates hipertenses espontànies (SHR) masculines de dotze mesos i vuit setmanes al Nanjing Animal Model Center.

Hi ha una forta relació entre els homes de 8-setmanes i la memòria. Durant aquest període, el cervell de la criatura masculina es desenvolupa ràpidament i les connexions entre les seves neurones augmenten gradualment, la qual cosa al seu torn afecta el desenvolupament de la seva memòria.

Les investigacions mostren que la memòria de les criatures masculines continua millorant amb l'edat. Això no només té un impacte significatiu en la seva supervivència i reproducció, sinó que també els ajuda a adaptar-se millor al medi i a fer front als nous reptes.

Per tant, hauríem d'animar activament els homes joves a participar en una varietat d'activitats beneficioses, com ara resoldre trencaclosques, aprendre noves habilitats i explorar noves àrees. Aquestes activitats estimulen el seu cervell, permetent-los desenvolupar-se més ràpidament i millorar les seves capacitats de memòria.

Al mateix temps, també hauríem de proporcionar un ambient i una atmosfera adequats per als joves criatures masculines. Fer-los sentir segurs i propers pot promoure el seu desenvolupament cerebral i millorar la seva memòria.

En resum, hauríem de fer tot el possible per ajudar els homes joves a millorar la seva memòria perquè esdevinguin criatures més intel·ligents, més segures i capaces. Això no només afavoreix el seu desenvolupament personal, sinó també la prosperitat i la supervivència de tota l'espècie. Es pot veure que hem de millorar la memòria, i Cistanche deserticola pot millorar significativament la memòria, perquè Cistanche deserticola té efectes antioxidants, antiinflamatoris i antienvelliment, que poden ajudar a reduir les reaccions oxidatives i inflamatòries al cervell, protegint així el salut del sistema nerviós. A més, Cistanche deserticola també pot promoure el creixement i la reparació de les cèl·lules nervioses, millorant així la connectivitat i la funció de les xarxes neuronals. Aquests efectes poden ajudar a millorar la memòria, l'aprenentatge i la velocitat de pensament, i també poden prevenir el desenvolupament de disfuncions cognitives i malalties neurodegeneratives.

Feu clic a Coneix suplements per augmentar la memòria

En aquest model, la hipertensió comença a desenvolupar-se als 4 mesos d'edat amb l'aparició de canvis relacionats amb la hipertensió en la microvasculatura cerebral als 6 mesos d'edat [37].

Les rates es van allotjar en condicions òptimes amb una higiene estàndard, es van mantenir a una temperatura de 25 graus amb un cicle de llum/fosc 12/12 i es van alimentar amb menjar de rata estàndard i aigua ad libitum.

Tots els procediments van ser aprovats i realitzats d'acord amb les directrius per a la cura i l'ús d'animals establertes per SoochowUniversity, que és coherent amb el nostre informe anterior[35].

Els experiments es van realitzar segons les directrius de l'Institut Nacional de Salut per a l'ús d'animals de laboratori (NIH, número de publicació 85–23, revisat el 1996). El present estudi està informat per les directrius ARRIVE.

Es va aplicar SHR de vuit setmanes per al control de l'envelliment (SHR-Young, n=10). Les rates de dotze mesos van ser tractades amb o sense Gao-Zi-Yao per obtenir aigua destil·lada (Old SHR-C, n=10), dosi baixa (Old SHR-L, n{=10), dosi mitjana (SHR-M antic, n=10), dosi alta (SHR-H antic, n=10) per alimentació gàstrica.

Dosificacions de Gao-Zi-Yao baixes, mitjanes i altes iguals a 1/2-, 1-, dosis triples per a l'aplicació clínica del pacient, calculades segons la superfície corporal. Gao-Zi-Yao es va dissoldre en 5 ml d'aigua destil·lada abans de l'aplicació i es va administrar lactis una vegada durant 4 setmanes.

La pressió arterial i la freqüència cardíaca es van controlar cada setmana pel mètode de la cua, i el pes corporal també es va controlar cada setmana segons la nostra observació anterior [35].

Després de 4 setmanes, es va realitzar l'experiment del laberint d'aigua de Morris i es van sacrificar rates sota anestèsia amb pentobarbital sòdic (50 mg/kg ip), es va recollir teixit de l'hipocamp per a una anàlisi posterior. Tots els protocols experimentals van ser aprovats pel comitè de llicències d'ètica de la Universitat de Soochow.

Experiment del laberint d'aigua de Morris

L'experiment del laberint d'aigua de Morris (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Xangai, Xina) es va realitzar tal com es va descriure anteriorment amb algunes modificacions [38]. La prova es va planificar per a 6 dies, els dies 1 al 5 eren per al període d'entrenament i el dia 6 per als resultats de la prova.

Les rates van rebre entrenament durant 2 minuts de lactis, registrant el temps d'embarcament a la plataforma com el temps de latència. El dia 6 es va retirar la plataforma. Les rates es van posar al quadrant de distància més llunyà i es va registrar la trajectòria de natació durant 2 min.

El programari va calcular els paràmetres per a la funció d'aprenentatge i memòria.

Mesura dels nivells sèrics de NO i factors inflamatoris mitjançant ELISA

Nivells sèrics de NO (número de catàleg: S0023), IL-1 (número de catàleg: A301BH80153), IL-2 (número de catàleg: A31038348), IL-6 (número de catàleg: A30681042), i el TNF- (número de catàleg: A38280855) es van mesurar mitjançant kits ELISA disponibles comercialment (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai enzyme research. Xangai, Xina). Tots els passos es van realitzar segons les instruccions del fabricant.

Tinció de Nissl

El teixit de l'hipocamp de rata es va aïllar, es va fixar, es va incrustar en parafina i es va incubar en una solució de tinció de blau de toluidina a l'1% durant 5-10 min a temperatura ambient. Deu seccions es van esbandir amb aigua destil·lada, es van remullar en etanol al 95% durant 5-30 minuts i es van deshidratar en etanol al 100%.

Després de la deshidratació, la rodanxa es va col·locar en xilene i es va cobrir amb un medi de resina. El nombre de neurones a les regions CA1, CA2 i gir dentat (DG) de l'hipocamp es va observar i analitzar mitjançant el programa d'anàlisi ImageJ.

Western blot per a l'aprenentatge i proteïnes relacionades amb la memòria

El Western blot per a l'aprenentatge i les proteïnes relacionades amb la memòria es va dur a terme tal com es descriu al nostre informe anterior amb algunes modificacions [39].

Els problemes d'hipocampus es van homogeneïtzar amb tampó RIPA (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X{-100, pH 7, 0) que contenia fluorur de fenilmentansulfonil (R&D Systems Inc., Minneapolis, EUA). Els homogeneïts es van centrifugar a 12,000 × g durant 10 min a 4 graus.

Les proteïnes cel·lulars es van separar mitjançant SDS-PAGE i es van transferir a membranes de PVDF (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Les membranes es van bloquejar en llet sense greix al 5% en PBS i 0,1% Tween-20a temperatura ambient.

A continuació, les taques es van incubar amb anticossos primaris: receptor anti-glutamat 1 (1:1000, Abcam, Inc., número de catàleg: ab183797), anticòs AntiNMDAR2B (1:1000, Abcam, Inc., número de catàleg: ab28373), antifosfo -Anticossos CaMKII (1:1000, Abcam, Inc., número de catàleg: ab171095), anticòs antifosfo-CREB (1:1000, Abcam, Inc., número de catàleg: 32096) o anti-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Núm. de catàleg: sc-47724).

A continuació, es van incubar les membranes durant 1 h amb un anticòs secundari (HRPconjugated anti-conill Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Número de catàleg: ab205718). Les membranes es van rentar tres vegades durant 15 min amb TBS-T per eliminar els anticossos en excés abans d'incubar-les durant 1 min amb reactius quimioluminiscents (ECL, R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, EUA).

A més, es van detectar bandes immunoreactives mitjançant un sistema d'anàlisi de gel d'electroforesi (GL2200 Pro, Crestream Inc. EUA). La intensitat de les bandes es va analitzar mitjançant el programari Image J. La quantitat de proteïnes diana es va normalitzar mitjançant l'expressió GAPDH [39].

Anàlisi estadística

Es va utilitzar el programari SPSS 18.0 per a l'anàlisi estadística. Les dades es presenten com la mitjana ± SEM Les dades agrupades es van analitzar mitjançant una anàlisi de variància unidireccional seguida de la prova Student-Newman-Keuls. Un valor de p < 0,05 es va considerar estadísticament significatiu com el nostre informe anterior [35].

Resultats

Pressió arterial sistòlica (PAS), freqüència cardíaca i pes corporal entre SHR jove i SHR vell

Yong SHR va mostrar una SBP més baixa en les dues primeres setmanes en comparació amb l'antiga SHR, i després va augmentar sense diferència entre els dos grups en les tres setmanes posteriors (Fig. 2A).

Per contra, la freqüència cardíaca no va ser cap diferència entre els dos grups durant les dues primeres setmanes, després la SHR jove va augmentar notablement en comparació amb la SHR antiga en les tres setmanes posteriors (Fig. 2B). La SHR jove va mostrar un pes corporal inferior en comparació amb la SHR antiga durant tot el període d'observació (Fig. 2C).

Paràmetres del laberint d'aigua de Morris entre SHR jove i SHR vell

Per determinar l'aprenentatge i la memòria depenent de l'hipocamp, es va realitzar l'experiment del laberint d'aigua de Morris. El SHR antic va mostrar una latència d'escapament més llarga en els primers quatre dies en comparació amb el SHR jove (Fig. 3A).

Els temps de creuar el quadrant objectiu van ser menors en els antics SHR que en els joves (Fig. 3B).

El percentatge de temps al quadrant de la plataforma objectiu era més curt en SHR antic en comparació amb SHR jove (Fig. 3C). El percentatge de la longitud del camí al quadrant també era més curt en l'antiga SHR en comparació amb la antiga SHR (Fig. 3D). Aquests resultats suggereixen que la SHR antiga té un deteriorament de la funció cognitiva.

Nombre de neurones a l'hipocamp entre SHR jove i SHR antic

El nombre de neurones a diferents àrees de l'hipocamp es va comptar mitjançant la tinció de Nissl. Els resultats van mostrar que hi ha un nombre més reduït de neurones a les regions CA1, CA2 i DG de la SHR antiga en comparació amb la SHR jove (Fig. 4).

Expressions de proteïnes relacionades amb l'aprenentatge i la memòria a l'hipocamp entre SHR jove i SHR antic

Els resultats de Western blot van mostrar que l'expressió de proteïnes relacionades amb l'aprenentatge i la memòria (GluR1, NMDAR 2B, fosforilada-CaMK II i fosforilada-CREB) a l'hipocamp antic SHR era menor que a l'hipocamp SHR ​​jove (Fig. 5).

Efecte de Gao-Zi-Yao sobre la PAS, la freqüència cardíaca i el pes corporal en la SHR antiga

Es va analitzar l'efecte de Gao-Zi-Yao sobre la SBP. El tractament amb una dosi baixa de Gao-Zi-Yao va disminuir notablement la SBP en SHR antic des de la segona setmana fins a la quarta setmana en comparació amb el grup SHR ​​antic control, les dosis mitjanes i altes de Gao-Zi-Yao van disminuir notablement la SBP en SHR antic des de la primera setmana fins a la quarta setmana en comparació amb el control antic SHR (Fig. 6A). Aquests resultats indiquen que Gao-Zi-Yao exerceix un efecte antihipertensiu a la SHR antiga.

També vam comparar les dades sobre els efectes de la freqüència cardíaca de Gao-Zi-Yaoon i el pes corporal. Les nostres dades van demostrar que no hi havia cap diferència significativa en la freqüència cardíaca i el pes corporal entre tots els grups durant tot el període d'observació (Fig. 6B, C).

Efecte de Gao-Zi-Yao sobre els nivells sèrics de NO, IL-1, IL-2 i TNF- en SHR antic

El tractament amb dosis mitjanes i altes de GAO-ZIYAO va augmentar els nivells sèrics de NO en comparació amb els nivells del grup control SHR (Fig. 7A). El tractament amb totes les dosis provades de GAO-ZI-YAO va reduir els nivells sèrics d'IL-1, IL{-2 en comparació amb els nivells del grup control SHR (Fig. 7B, C); tanmateix, només l'alta dosi de GAO-ZI-YAO va suprimir els nivells sèrics de TNF- (Fig. 7D).

Aquests resultats demostren que GAO-ZI-YAO podria regular l'estrès oxidatiu i la inflamació.

For more information:1950477648nn@gmail.com