Resum

Antecedents:Hi ha una escassetat de tècniques d'imatge i processament d'imatges per a la discriminació i quantificació precisa de la matriu extracel·lular dèrmica (ECM), principalment col·lagen. Aquest estudi tenia com a objectiu desenvolupar i demostrar un enfocament holístic d'imatge i processament d'imatges per visualitzar i quantificar la remodelació del col·lagen a escala macro, micro i nano mitjançant imatges histoquímiques, microscòpia confocal de reflectància (RCM) i microscòpia de força atòmica (AFM) , respectivament.

El glicòsid de cistanche també pot augmentar l'activitat de la SOD en els teixits del cor i del fetge, i reduir significativament el contingut de lipofuscina i MDA a cada teixit, eliminant eficaçment diversos radicals reactius d'oxigen (OH-, H₂O₂, etc.) i protegint contra els danys de l'ADN causats. per radicals OH. Els glucòsids feniletanoides de Cistanche tenen una forta capacitat d'eliminació dels radicals lliures, una capacitat reductora superior a la de la vitamina C, milloren l'activitat de SOD en la suspensió d'esperma, redueixen el contingut de MDA i tenen un cert efecte protector sobre la funció de la membrana espermàtica. Els polisacàrids de Cistanche poden millorar l'activitat de SOD i GSH-Px en eritròcits i teixits pulmonars de ratolins senescents experimentalment causats per D-galactosa, així com reduir el contingut de MDA i col·lagen al pulmó i el plasma, i augmentar el contingut d'elastina. un bon efecte d'eliminació de DPPH, allarga el temps d'hipòxia en ratolins senescents, millora l'activitat de SOD al sèrum i retarda la degeneració fisiològica del pulmó en ratolins senescents experimentalment Amb la degeneració morfològica cel·lular, els experiments han demostrat que Cistanche té la bona capacitat antioxidant. i té el potencial de ser un fàrmac per prevenir i tractar malalties de l'envelliment de la pell. Al mateix temps, l'echinacòsid a Cistanche té una capacitat significativa per eliminar els radicals lliures de DPPH i té la capacitat d'eliminar espècies reactives d'oxigen i prevenir la degradació del col·lagen induïda pels radicals lliures, i també té un bon efecte reparador sobre el dany anònic dels radicals lliures de timina.

Feu clic a Com utilitzar l'antioxidant Cistanche

【Per a més informació:george.deng@wecistanche.com/WhatApp:86 13632399501】

Material i mètodes:Com a prova de concepte, es va provar ex vivo un producte antienvelliment comercial conegut per induir la neosíntesi i la reorganització del col·lagen en biòpsies de pell humana de dues dones envellides.

Resultats:En relació amb la pell no tractada, les fibres de col·lagen (RCM) i les fibrils (AFM) eren més llargues i alineades després del tractament. El contingut de col·lagen i elastina (imatge histoquímica i ELISA) va millorar estadísticament després del tractament.

Conclusió:A partir de les nostres troballes, podem concloure: (1) AFM, RCM i imatges histoquímiques poden discriminar amb precisió el col·lagen d'altres components de l'ECM a la pell i (2) els mètodes de processament d'imatges poden permetre la quantificació i, per tant, capturar petites millores en la remodelació del col·lagen després tractament (producte cosmètic comercial amb tecnologia organitzadora de col·lagen com a prova de concepte). L'enfocament d'imatge holístic informat té implicacions clíniques directes perquè els científics i dermatòlegs prenguin decisions ràpides, en temps real i precises en la investigació i el diagnòstic de la pell.

PARAULES CLAU

anti-envelliment, microscòpia de força atòmica, reorganització del col·lagen, remodelació dèrmica, matriu extracel·lular, microscòpia confocal de reflectància (Vivascope)

1. INTRODUCCIÓ

La remodelació controlada de la matriu extracel·lular dèrmica (ECM) és essencial per al desenvolupament normal i l'homeòstasi de la pell i altres òrgans. La remodelació de l'ECM és el segell distintiu de la fisiopatologia de l'envelliment de la pell1, la cicatrització de ferides i algunes malalties mortals, que inclouen, entre d'altres, els càncers i la fibrosi.2 Hi ha nombroses opcions mèdiques i estètiques per tractar aquestes afeccions de la pell, però, els mètodes d'imatge són escassos per a visualització en temps real de la remodelació de l'ECM, principalment col·lagen, que és el component estructural més abundant de l'ECM dèrmica. Tot i que en desenvolupament, algunes de les noves tècniques d'imatge clínica en temps real no invasives per visualitzar el col·lagen i la seva organització són la microscòpia multifotònica amb segona generació harmònica (MPM-SHG),3 la microscòpia confocal de reflectància (RCM),4 la tomografia de coherència òptica. (OCT),5,6 Tomografia de coherència òptica confocal Lindfield (LC-OCT) basada en la combinació de modalitats de RCM i OCT7, ressonància magnètica (MRI)8 i ecografia.9 D'aquestes, RCM, MPM i Els LC-OCT són instruments d'imatge de la pell amb certificat CE. Tanmateix, entre tots, la tècnica RCM (Vivascope® 1500 i 3000 de Lucid, Inc. EUA) és l'única tècnica de diagnòstic de dermatologia clínica aprovada per la FDA (510(k)# K080788), que també està coberta per la majoria d'assegurances del EUA per diagnosticar lesions cutànies.10 És una alternativa no invasiva i rendible a les tècniques clàssiques de biòpsia i histopatologia per diagnosticar i controlar els càncers de pell i el seu tractament.10 Entre els mètodes d'imatge preclínica per visualitzar l'organització del col·lagen, la microscòpia de força atòmica ( AFM), 11 microscòpia electrònica, 11,12 imatges histoquímiques mitjançant microscòpia de fluorescència, 13 microscòpia de llum polaritzada, 14 microscòpia d'escaneig làser confocal (CLSM), 15,16 reflectància confocal multimodal i microscòpia de fluorescència, 17 i la dispersió de raigs X d'angle petit18. ben conegut.

Una de les principals advertències que restringeixen l'ús de les tècniques d'imatge clíniques esmentades anteriorment és que requereix una tediosa avaluació manual perquè l'experiència i l'experiència en la matèria per analitzar amb precisió les imatges en blanc i negre de les estructures de la pell és un requisit previ.19,20 Per tant, es fan més esforços. necessaris en l'àmbit del processament d'imatges per desenvolupar i validar algorismes i programari per automatitzar l'anàlisi,5 produir imatges tacades digitalment fàcils d'interpretar,16,17 i extreure informació quantitativa per controlar la progressió de la malaltia i la teràpia, inclosa l'organització del col·lagen en el context del nostre investigació.3,6,12–14 Permetrà als no dermatòlegs i dermatòlegs prendre decisions més ràpidament i amb més confiança, ja que les decisions es prendran a partir d'una mida de mostra més gran de les imatges aleatòries. S'han fet alguns estudis fonamentals per mostrar l'ús de RCM i MPM per entendre els canvis de la pell relacionats amb l'edat (inclosa l'organització del col·lagen) en subjectes joves versus vells o fotoenvellits.21,22 No obstant això, hi ha un esforç limitat per ampliar el poder. d'aquestes tècniques d'imatge per captar la millora del tractament, que requereix un processament d'imatges sofisticat per obtenir informació quantitativa.3,13,16.

Aquest estudi tenia com a objectiu desenvolupar i demostrar una imatge holística i un enfocament de processament d'imatges per visualitzar i quantificar millores en la remodelació dèrmica (principalment col·lagen). Per a la prova de concepte, es va utilitzar un producte cosmètic antienvelliment comercial clínicament provat amb tecnologia organitzadora de col·lagen per avaluar la viabilitat d'utilitzar el processament d'imatges per quantificar canvis menors en el col·lagen abans i després del tractament.

2 MATERIALS I MÈTODES

2.1 Biòpsies de pell i el seu tractament

Les biòpsies de pell utilitzades en aquesta investigació van ser el material sobrant de la cirurgia plàstica abdominal obtingut de dos donants després del seu consentiment (consentiment retingut per les clíniques). El donant número 1 (62 anys) i el donant número 2 (52 anys) eren dones i el tipus de pell de Fitzpatrick II. Les biòpsies es van mantenir en condicions de cultiu estàndard i es van tractar diàriament amb producte de prova o control (sense tractar o placebo) durant 6 dies, i es van recollir el dia 7 per a imatges i ELISA. Les biòpsies del donant # 1 es van utilitzar per a ELISA, RCM i AFM, mentre que les biòpsies del donant # 2 es van utilitzar per a imatges histoquímiques.

2.2 Imatge RCM i AFM

Les biòpsies de pell del donant número 1 es van recollir el dia 7 i es van fer imatges directament sense cap secció ni tinció. AFM (Bruker, Multimode 8 AFM) i RCM (Vivascope® 1500) es van utilitzar per obtenir imatges d'alta resolució a nano i microescala de col·lagen a la pell tractada amb el producte de prova i no tractada com a control. Per a tots els experiments, l'AFM estava equipat amb un petit voladís (PPP-FMR- 20, Nanosensors): constant de molla, k=0,5–9,5 N/m, freqüència de ressonància, f {{13} }–115 kHz a l'aire i es va operar en mode de toc a temperatura ambient. Les mostres de pell es van muntar lateralment en un disc magnètic (1 mm × 1 mm) i es van col·locar a l'escenari. Les imatges AFM es van adquirir mitjançant una vista lateral/lateral de les biòpsies de la pell per evitar el seccionament. Per a la imatge RCM, es van adquirir set imatges aleatòries a partir de biòpsies tractades i no tractades de la part superior (costat de l'estrat corni) i inferior (costat de la dermis) per adquirir imatges de col·lagen d'alta qualitat. Les imatges RCM es van processar i analitzar mitjançant ConfoScan® per a la textura del col·lagen per informar de l'índex de fragmentació mitjà. L'índex de fragmentació es defineix per l'àrea d'objectes dividida pel nombre d'objectes obtinguts després de processar les imatges en brut per a la textura del col·lagen. La figura S1 mostra el processament d'imatges mitjançant ConfoScan® per obtenir valors quantitatius de l'índex de fragmentació del col·lagen (CFI).

2.3 Imatge histoquímica

Per provar l'efecte del producte anti-envelliment en el tractament de la pell fotoenvellida (recuperació de col·lagen i elastina fotodanyats), les biòpsies del donant núm. 2 es van exposar a una dosi simulada d'UV (6 J/cm2 amb un 96% d'UVA). ). Les mostres i les condicions provades en els experiments van ser: (A) control negatiu (no tractat, sense UV i sense producte de prova), (B) control positiu (pell exposada a UV, però sense producte de prova) i (C) tractat ( pell exposada als UV, seguit d'un tractament diari amb producte de prova). Les biòpsies de la pell es van recollir el dia 7, es van seccionar, es van tacar per col·lagen (tinció Picosirius) i elastina (immunotinció) i es van fer imatges. Les imatges es van processar i analitzar mitjançant un algorisme propietari d'anàlisi d'imatges per obtenir informació quantitativa sobre el contingut de col·lagen i elastina a la dermis papil·lar. Breument, el procés analític per obtenir informació quantitativa sobre el contingut de col·lagen i elastina inclou la conversió d'imatges RGB a l'espai de color LAB, filtrar el fons per obtenir imatges clares de col·lagen i elastina i, a continuació, normalitzar el contingut de col·lagen i elastina a la dermis papil·lar per la mateixa àrea o diversos píxels. Hi va haver sis biòpsies o mostres de pell per a cada condició i dues seccions o imatges de cada mostra, donant lloc a N=12 imatges i punts de dades per a proves estadístiques. La figura S2 mostra l'esquema de l'enfocament de processament d'imatges per obtenir valors quantitatius sobre el contingut de col·lagen.

2.4 ELISA

Després de la recol·lecció de teixits el dia 7, es va utilitzar un punxó de 4 mm de diàmetre per obtenir biòpsies més petites i es van seleccionar dues biòpsies amb aproximadament 25 mg/biòpsia. Les biòpsies perforades (50 mg de pes total) es van barrejar en un tampó de lisi que contenia un còctel d'inhibidors de la proteasa i un 0,1 per cent de Tritó, seguit de l'homogeneïtzació del teixit mitjançant un homogeneïtzador de processament dual automatitzat amb característiques mecàniques i ultrasòniques per lisar completament el teixit. El teixit lisat es va centrifugar, es va recollir el sobrenedant, es va dividir en alíquotes en dos i es va emmagatzemar a -80 ◦ C fins que s'utilitza. A més de la normalització pel que fa al pes (50 mg), les mostres també es van normalitzar al contingut total de proteïnes del sobrenedant. El sobrenedant es va analitzar per a Pro-Collagen 1, Elastin, Alpha-Smooth Muscle actina (A-SMA), Tenascin-X i àcid hialurònic mitjançant kits ELISA comercials. Les estadístiques es van realitzar en N=6 punts de dades (3 biòpsies × 2 alíquotes).

3 RESULTATS

La imatge histoquímica (figura 1) va proporcionar informació macroscòpica sobre la distribució i la quantitat de col·lagen i elastina. Es va observar una clara disminució del color vermell dels feixos de fibres de col·lagen i elastina després del tractament de les biòpsies de pell amb UV.

La taula 1 mostra els valors quantitatius del contingut de col·lagen i elastina en tres condicions de tractament. Aquests valors ens van permetre mesurar millores en el contingut de col·lagen i elastina i fer comparacions estadístiques. La disminució del contingut de col·lagen (-23 per cent enfront del no tractat) i elastina (-30 per cent enfront del contingut no tractat) després de l'exposició als UV va ser significativa (figura 2). Després del tractament amb el producte de prova durant 6 dies, les biòpsies de la pell exposades a UV van poder recuperar col·lagen (més un 18 per cent enfront del tractament UV) i elastina (més un 46 per cent enfront del tractament UV). Tot i que l'organització del col·lagen no està clara a les imatges histoquímiques (perquè el col·lagen és més abundant i densament empaquetat a la pell), s'observa l'alineació perpendicular característica de les fibres d'elastina que van cap a l'epidermis a la pell nativa (figura 1A) i danyada pels UV després tractament amb producte de prova (figura 1C).

ELISA (Figura 3) compara els nivells de biomarcadors expressats per biòpsies de pell tractades amb el producte de prova o placebo (que no té un còctel d'ingredients actius coneguts per a la remodelació dèrmica). En comparació amb el placebo, hi va haver un augment de 2 a 3 vegades dels nivells d'elastina i col·lagen, en particular el pro-col·lagen de tipus 1 (producte de prova vs. placebo). Encara que no és significatiu, també es va observar un augment notable (P <{5}}.1) de l'àcid hialurònic i la tenascina-X.

El RCM va poder revelar amb èxit l'organització de les fibres de col·lagen (paquet de fibrils de col·lagen) a la pell (figura 4). A causa de les seves característiques òptiques de placa confocal i quart d'ona, la tècnica va poder discriminar amb èxit el col·lagen (agent de contrast endogen fort amb birrefringència) d'altres matrius sense seccionar i tacar la pell. El col·lagen fragmentat curt i la seva disposició agrupada (característic del col·lagen danyat i mal organitzat a la pell envellida/foto-envellida) s'observa en la biòpsia de la pell no tractada. Després del tractament amb el producte de prova durant 6 dies, la disposició de les fibres de col·lagen en aquesta biòpsia de pell femenina de 62-anys (donant núm. 1) sembla relativament més organitzada que les fibres de col·lagen no tractades amb longituds de més de 100 µm. paral·leles entre si. Tot i que el contrast és pobre, podem observar la forma i la mida dels fibroblasts (ressaltats per fletxes a la figura 4), fibroblasts grans i estesos amb formes regulars a la pell tractada enfront de la pell no tractada. Les cèl·lules rodones brillants de la figura 4C tenen un interès particular. Poden ser mastòcits o cèl·lules inflamatòries. No està clar si aquestes cèl·lules inflamatòries són representatives de les condicions normals de salut de la pell o si es van expressar en resposta a una força significativa aplicada al capçal làser per intentar aconseguir un millor contacte entre el cap del làser i la pell per obtenir imatges d'alta qualitat del col·lagen. fibres.

La taula 2 mostra l'índex de fragmentació mitjà determinat per l'anàlisi ConfoScan® de set imatges aleatòries de pell tractada versus no tractada. El col·lagen significa que l'índex de fragmentació del grup tractat versus el grup no tractat va ser de 0.032 i 0,064, respectivament. Una disminució de l'índex de fragmentació indica una millora en l'organització del col·lagen.

Per aprofundir en la disposició del col·lagen, es van adquirir imatges AFM per visualitzar la disposició del col·lagen a nanoescala (figura 5). Podem veure fibril·les de col·lagen individuals (que s'agrupen per formar una fibra de col·lagen) d'un gruix nanomètric. A més, també podem veure el patró característic de bandes transversals de les fibril·les de col·lagen (D ∼ 68 nm), que està alineat amb la literatura,11 i valida que l'AFM va ser capaç de discriminar el col·lagen d'altres fibres ECM. En consens amb RCM, també es va observar una organització relativament paral·lela de fibrils de col·lagen sota AFM per a pell tractada versus no tractada.

4 DISCUSSIÓ

En aquesta investigació, vam explorar el potencial d'utilitzar tres tècniques d'imatge per visualitzar els canvis en el col·lagen en biòpsies de pell humana tractades amb un producte comercial antienvelliment que conté alguns pèptids sintètics de referència coneguts per induir la remodelació del col·lagen. Les tècniques d'imatge histoquímica i d'imatge RCM es van combinar amb el processament d'imatges per obtenir informació semicuantitativa sobre el contingut i la fragmentació de col·lagen com a índex per puntuar la millora del col·lagen després del tractament amb el producte antienvelliment.

Curiosament, el nostre estudi va mostrar una correlació molt forta entre la imatge histoquímica i ELISA per informar d'un augment significatiu dels nivells de col·lagen i elastina després del tractament amb el producte de prova. El pro-col·lagen tipus 1 és el marcador del col·lagen recentment sintetitzat, i la seva sobreexpressió per fibroblasts en resposta a Matrixyl® (Sederma/Croda) és un mecanisme ben caracteritzat per a l'efecte anti-envelliment.23,24 També hi va haver un augment significatiu. en l'expressió d'A-SMA, un marcador exclusiu dels miofibroblasts, que són cèl·lules fibroblasts especialment diferenciades. El paper de l'A-SMA en la contracció i remodelació de l'ECM mediada per fibroblasts s'entén bé,25 i s'informa d'una correlació directa entre l'expressió d'A-SMA i l'activitat de contracció dels fibroblasts.26 Un augment de l'àcid hialurònic, encara que no significatiu, podria ser principalment atribuït a la presència d'àcid hialurònic com a ingredient hidratant en el producte antienvelliment. El TNSX és una nova proteïna ECM que es localitza entre o a la superfície de les fibrils de col·lagen a la dermis de la pell27 i s'informa que el TNSX indueix la fibril·logènesi de col·lagen depenent de la dosi,28,29, tot i que hi ha controvèrsia si el TNSX s'uneix específicament al tipus pro-collagen. 1 o altres biomolècules de col·lagen i ECM.28,29 S'informa d'un augment de TNSX depenent de la dosi en resposta a SKINectura™ (Lucas Meyer Cosmetics), un ingredient actiu del producte de prova anti-envelliment (Solicitud de patent internacional # PCT). /IB2017/056370). Per tant, es pot plantejar la hipòtesi que Matrixyl® (Sederma/Croda) i SKINectura™ (Lucas Meyer Cosmetics) en el producte de prova treballen conjuntament per facilitar la síntesi i l'alineació del col·lagen recentment sintetitzat, procol·lagen tipus 1. Una disminució significativa del col·lagen i l'elastina. després del tractament UV (model de pell fotodanyada), seguit de la seva reparació després del tractament amb un producte anti-envelliment (nivells de retorn a la pell nativa no exposada als UV) indica la capacitat de la imatge histoquímica (microscòpia polaritzada) i la tècnica de processament d'imatges per mesurar petits canvis en el contingut dels components de l'ECM (figures 1 i 2). Es van fer esforços diligents per intentar fer imatges de l'organització del col·lagen i l'elastina (després de l'etiquetatge d'immunofluorescència) mitjançant el sistema d'imatge de fluorescència Thunder Leica acabat de comprar. Tanmateix, la resolució no era prou alta i, per tant, no es podia concloure de manera fiable sobre l'organització. La imatge CLSM basada en fluorescència ofereix una resolució més alta que la imatge de fluorescència de camp ampli convencional per permetre una visualització clara de l'organització del col·lagen i l'elastina. La imatge de fluorescència de camp ampli convencional està limitada pel domini de la fluorescència secundària i el gruix de les mostres, que no són una preocupació per a CLSM.

Hem pogut visualitzar l'organització del col·lagen mitjançant RCM (figura 4). RCM és una millor opció que CLSM perquè (1) RCM no utilitza cap etiqueta o tinció (a diferència de fluorescència-CLSM que requereix un etiquetatge d'immunofluorescència) eliminant qualsevol possibilitat d'incertesa o no especificitat a causa de les etiquetes, i (2) RCM és un va utilitzar la tècnica d'imatge dèrmica clínica per al col·lagen. Una millora en la textura de la fibra de col·lagen, fibres llargues i primes després del tractament amb un producte anti-envelliment (vs. fibres de col·lagen fragmentades denses i curtes en pell no tractada) indica el seu mode d'acció a nivell estructural. La resolució RCM era prou alta com per capturar fins i tot cèl·lules de fibroblast, la fàbrica de síntesi de col·lagen de la pell. Les fibres de col·lagen embolcallades al voltant dels fibroblasts podrien ser les fibres de col·lagen recentment sintetitzades, ja que és més prima de diàmetre que les fibres de col·lagen circumdants i els seus paquets (figura 4). A partir de l'anàlisi ConfoScan® d'imatges RCM aleatòries, podem concloure que la pell no tractada té un índex de col·lagen fragmentat molt més alt en comparació amb la pell tractada. Tot i que a les imatges RCM podem veure l'alineació paral·lela de les fibres de col·lagen després del tractament amb el producte de prova, no es pot concloure tret que es calculi la relació isotropia/anisotropia, cosa que estava fora de l'abast d'aquesta investigació. Tanmateix, la resolució ultraalta de l'AFM a nivell nanoescala revela evidències d'alineació de col·lagen a nivell de fibril·les individuals. A partir de la correlació positiva entre les imatges RCM i AFM sobre l'alineació paral·lela de les fibres de col·lagen (no tractades versus tractades), hi ha una gran possibilitat que el producte antienvelliment tingui la propietat de reorganització del col·lagen reclamada. Per a futures investigacions, l'estudi s'ha de realitzar per controlar el mateix punt (fibres de col·lagen) al llarg del temps (estudi longitudinal) abans i després del tractament amb el producte de prova per investigar si és l'alineació del col·lagen existent o les fibres de col·lagen recentment sintetitzades. més alineats. Tanmateix, aquest estudi longitudinal requerirà la integració d'instruments RCM i AFM per a la capacitat d'imatge de teixits vius i imatges de lapse de temps per capturar canvis en temps real en la remodelació del col·lagen.

5 CONCLUSIONS

A partir dels resultats de la nostra investigació d'aquest estudi de prova de concepte, podem concloure que les tècniques d'imatges histoquímiques, AFM i RCM són capaces de controlar els canvis en l'organització del col·lagen a escala nano, micro i macro, respectivament. Les imatges AFM i RCM mostren proves d'alineació de col·lagen a escala nano i micro després del tractament amb el producte de prova. L'anàlisi d'imatges histoquímiques i RCM aleatòries mitjançant enfocaments de processament d'imatges propietaris indica a més que la pell després del tractament amb el producte de prova té una fragmentació de col·lagen més baixa i una densificació més alta de col·lagen en comparació amb la no tractada. Tot i que s'ha fet un esforç per desenvolupar i validar algorismes de processament d'imatges3,5,6,12–14,16,17 es requereix més investigació en aquesta direcció per aconseguir decisions de diagnòstic i investigació preclínica i clínica basada en dades. El nostre enfocament holístic d'aplicar tècniques d'imatge d'alta resolució i alt contingut en combinació amb algorismes i programari potents i robusts de processament d'imatges és un pas en aquesta direcció.

Tot i que l'abast d'aquesta investigació es va limitar a investigar l'organització del col·lagen en resposta a un producte de prova anti-envelliment en biòpsia de pell humana ex vivo, aquestes tècniques d'imatge tenen implicacions per al seguiment i quantificació de la remodelació de l'ECM, que és el segell distintiu del desenvolupament normal. la cicatrització de ferides, així com un marcador clau en la fisiopatologia de les condicions que amenacen la vida com la fibrosi i el càncer que sorgeixen d'una remodelació incontrolada de l'ECM.2

CONFLICTES D'INTERÈS

Els autors declaren que no es pot percebre cap conflicte d'interessos com a perjudici de la imparcialitat de la investigació informada.

REFERÈNCIES

1. Shin JW, Kwon SH, Choi JY, Na JI, Choi HR, Park KC. Mecanismes moleculars de l'envelliment dèrmic i enfocaments antienvelliment. Int J Mol Sci. 2019;20(9):2126.

2. Cox TR, Erler JT. Remodelació i homeòstasi de la matriu extracel·lular: implicacions per a malalties fibròtiques i càncer. Dis Model Mech. 2011;4(2):165–78

3. Pittet JC, Freis O, Vazquez-Duchene MD, Perie G, Pauly G. Avaluació del contingut d'elastina / col·lagen a la dermis humana in vivo per tomografia multifotònica-variació amb profunditat i correlació amb l'envelliment. Cosmètics. 2014;1(3):211–21

4. Longo C, Casari A, Beretti F, Cesinaro AM, Pellacani G. Envelliment de la pell: avaluació microscòpica dels canvis epidèrmics i dèrmics mitjançant microscòpia confocal. J Am Acad Dermatol. 2013;68(3):e73–82.

5. Yamazaki K, Li E, Miyazawa A, Kobayashi M. Investigació resolta en profunditat de múltiples propietats òptiques i morfologia d'arrugues a les zones de les cantonades dels ulls amb tomografia de coherència òptica de matriu Jones multicontrast. Skin Res Technol. 2020;27(3):435–443.

6. Yow AP, Cheng J, Li A, Srivastava R, Liu J, Wong DWK, et al. Sistema de pell de tomografia de coherència òptica d'alta definició 3D automatitzat in vivo. Anual Int Conf IEEE Eng Med Biol Soc. 2016;2016:3895–8

7. Ruini C, Schuh S, Sattler E, Welzel J. Tomografia de coherència òptica confocal de camp de línia: aplicacions pràctiques en dermatologia i comparació amb mètodes d'imatge establerts. Skin Res Technol. 2021;27:340–52.

8. Tal S, Maresky HS, Bryan T, Ziv E, Klein D, Persitz A, et al.MRI en la detecció de farcits injectables cosmètics facials. Cap Cara Med. 2016;12(1):27.

9. Mandava A, Ravuri PR, Konathan R. Ecografia d'alta resolució de lesions cutànies. Indian J Radiol Imatge. 2013;23(3):269–7.

10. Edwards SJ, Mavranesouli I, Osei-Assibey G, Marceniuk G, Wakefield V, Karner C. Vivascope 1500 and 3000 systems detecting and monitoring skin lesions: a systematic review and economic evaluation. Avaluació Tecnològica Sanitària. 2016;20(58):1–260.

11. Ushiki T. Fibres de col·lagen, fibres reticulars, fibres elàstiques. Una comprensió integral des d'un punt de vista morfològic. Arch Histol Cytol. 2002;65(2):109–26

12. Starborg T, Kalson NS., Lu Y, Mironov A, Cootes T, Holmes D, et al. Utilitzant la microscòpia electrònica de transmissió i 3view(R) per determinar la mida de les fibril·les de col·lagen i l'organització tridimensional. Nat Protoc. 2013;8(7):1433–48.

13. Wegner KA, Keikhosravi A, Eliceiri AW, Vezina CM. Fluorescència del vermell picosirius multiplexat amb immunohistoquímica per a l'avaluació quantitativa del col·lagen en seccions de teixit. J Histochem Citoquímica. 2017;65(8):479–90.

14. Changoor A, Tran-Khanh N, Methot S, Garon M, Hurtig MB, Shive MS, et al. Un mètode de microscòpia de llum polaritzada per a una classificació precisa i fiable de l'organització del col·lagen en la reparació del cartílag. Cartil osteoartr. 2011;19(1):126–35.

15. Bernstein EF, Chen YQ, Kopp JB, Fisher L, Brown DB, Hahn PJ, et al. L'exposició solar a llarg termini altera el col·lagen de la dermis papil·lar. Comparació de pell protegida pel sol i fotoenvellida mitjançant anàlisi del nord, tinció immunohistoquímica i microscòpia d'exploració làser confocal. J Am Acad Dermatol. 1996;34(2 pt 1):209–18.

16. Schuurmann M, Stecher MM, Paasch U, Simon JC, Grunewald S. Avaluació de la tinció digital per a la microscòpia d'exploració làser confocal ex-vivo. JEADV. 2020;34(7):1496–9.

17. Gareau DS. Viabilitat de mosaics confocals multimodals tenyits digitalment per simular histopatologia. J Biomed Opt. 2009;14(3):034050.

18. Zhang Y, Ingham B, Cheong S, Ariotti N, Tilley RD, Naffa R, et al. Estudis de dispersió de raigs X en petit angle de sincrotró en temps real de l'estructura del col·lagen durant el processament de la pell. Ind Eng Chem Res. 2018;57(1):63–9.

19. De la imatge a la informació: Tractament d'imatges en dermatologia i biologia cutània. A: Hamblin, M., Avci, P., Gupta, G., editors. Imaging in dermatology, 1st ed.Academic Press: Amsterdam, Netherlands; 2016. pàg. 519–35.

20. Schneider SL, Kohli I, Hamzavi IH, Council ML, Rossi AM, Ozog DM. Tecnologies emergents d'imatge en dermatologia, part II: Aplicacions i limitacions. J Am Acad Dermatol. 2019;80(4):1121–31.

21. Guida S, Pellacani G, Ciardo S, Longo C. Reflectance microscopy imaging of aging skin and skin cancer. Concepte Dermatol Prac. 2021;11(3):2021068.

22. Wang H, Shyr T, Fevola MJ, Cula GO, Stamatas GN. Els canvis morfològics relacionats amb l'edat de la matriu dèrmica a la pell humana es van documentar in vivo mitjançant microscòpia multifotònica. J Biomed Opt. 2018;23(3):1–4.

23. Jones RR, Castelletto V, Connon CJ, Hamley IW. Efecte estimulant del col·lagen del pèptid amfífil C16-KTTKS sobre fibroblasts humans. Mol Pharm. 2013;10(3):1063–9.

24. Gorouhi F, Maibach HI. Paper dels pèptids tòpics en la prevenció o el tractament de la pell envellida. Int J Cosmet Sci. 2009;31(5):327–45.

25. Shinde AV, Humeres C, Frangogiannis NG. El paper de l'actina del múscul llis a en la contracció i remodelació de la matriu mediada per fibroblasts. Biochim Biophys Acta. 2017;1863(1):298–309.

26. Hinz B, Coletta G, Tomasek JJ, Gabbiani G, Chaponnier C. L'expressió de l'actina del múscul llis alfa regula l'activitat contràctil dels fibroblasts. Cèl·lula Mol Biol. 2001;12(9):2730–41.

27. Valcourt U, Alcaraz LB, Exposito JY, Lethias C, Bartholin L. Tenascin-X: Beyond the architectural function. Cel·lular Adh Migr. 2015;9(1–2):154–65.

28. Egging D, van den Berkmortel F, Taylor G, Bristow G, Schalkwijk J. Interactions of human tenascin-X domains with dermal extracell matrix molecules. Arch Dermatol Res. 2007;298(8):389–96.

29. Minamitani T, Ikuta T, Saito Y, Takebe G, Sato M, Sawa H, et al. Modulació de la fibril·logènesi del col·lagen per tenascina-X i col·lagen tipus VI. Res cel·la exp. 2004;298(1):305–15

INFORMACIÓ DE SUPORT

Es pot trobar informació addicional a la versió en línia de l'article al lloc web de l'editor.

【Per a més informació:george.deng@wecistanche.com/WhatApp:86 13632399501】