Identificació d'EST responsius al peròxid d'hidrogen implicats en la biosíntesi de glicòsids feniletanoides en el cultiu de cèl·lules de salsa de Cistanche

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et al

Resum
El peròxid d'hidrogen és un elicitador abiòtic eficaç que pot induir la biosíntesi de metabòlits secundaris a les plantes. Mostrem que en el cultiu de suspensió cel·lular d'una planta medicinal tolerant a la salCistanchesalsa, la producció de components bioactiusfeniletanoideglicòsids(PeGs) es va augmentar després del tractament amb H2O2. Identificar gens relacionats amb PeGs(feniletanoideglucòsids)biosíntesi afectada per H2O2, vam construir una biblioteca d'hibridació subtractiva de supressió de gens sensibles a H2O2 mitjançant unCistanchesalsalínia cel·lular i va identificar 105 etiquetes de seqüència expressada (EST) i 85 gens. L'anotació funcional de la biblioteca EST i les anàlisis d'ontologia gènica van mostrar gens relacionats amb diverses respostes a l'estrès, la biosíntesi de metabòlits secundaris i la regulació transcripcional. Entre ells, vam identificar dos gens relacionats amb els PeG(feniletanoideglucòsids)via de biosíntesi (4-coenzim A de cumarat lligasa i cinamat 4-hidroxilasa) i dos factors de transcripció de tipus WRKY. Les expressions dels gens seleccionats després del tractament amb H2O2 es van analitzar mitjançant RT-qPCR. Augment precoç de la transcripció de PeG(feniletanoideglucòsids)Els gens de la via de biosíntesi després del tractament van revelar que l'H2O2 induïa PeGs(feniletanoideglucòsids)biosíntesi mitjançant la regulació positiva dels seus gens clau.
Paraules clau addicionals: cinamat-4-hidroxilasa, 4-cumarat coenzim A lligasa, supressió de la hibridació subtractiva.Cistanchesalsa. feniletanoideglicòsids.

Introducció

Cistanchesalsaés un paràsit de plantes perennes a l'arrel d'Haloxylos ammodendrun, i creix a la zona desèrtica de l'oest de la Xina. Per segles,Cistanchel'espècie s'ha utilitzat com a medicina tradicional a base d'herbes (Wang et al. 2012). Els components bioactius sónfeniletanoideglicòsids(PeG) que tenen un efecte notable sobre l'eliminació d'espècies reactives d'oxigen (ROS), la protecció contra la radiació, la millora de la immunitat i l'anti-envelliment (Nan et al. 2013). PeGs(feniletanoideglucòsids)biosíntesi enCistanches'inicia a partir de la fenilalanina (Fig. 1 Suppl.) i l'àcid cafeic sintetitzat és glicosilat per formar diversos PeG(feniletanoideglucòsids)(Wang et al. 2012). Tres PeG principals(feniletanoideglucòsids), equinacòsid, acteòsid i 2'-acetilacteòsid, es consideren els components més actius enCistanche(Kobayashi et al. 1984). Per tal de millorar el seu contingut enCistanchecultiu cel·lular, s'han provat diversos elicitadors, com ara quitosà, putrescina, Ag plus i estrès osmòtic (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu i Cheng 2008). Tanmateix, els gens implicats en els PeG(feniletanoideglucòsids)biosíntesi enCistanche, principalment gens de la via del metabolisme de la fenilalanina, s'han identificat poques vegades. Només es va identificar recentment un gen que codifica la fenilalanina amoníaco-liasa (PAL) a Cistanche deserticola (Hu et al. 2011). Altres gens que codifiquen, per exemple, la cinamat-4-hidroxilasa (C4H), que podria catalitzar la conversió de cinamat en àcid cumàric, i la 4-cumarat coenzim A lligasa (4CL), un gen essencial per a la lignina i els flavonoides biosíntesis, no s'han trobatCistanche.
Hem utilitzat el cultiu cel·lular deCistanchesalsaper estudiar PeGs(feniletanoideglucòsids)biosíntesi i expressió de gens relacionats. També vam investigar l'efecte d'un elicitador H2O2 efectiu sobre els PeG(feniletanoideglucòsids)biosíntesi. A més, trobar gens de resposta primerenc implicats en PeGs(feniletanoideglucòsids)biosíntesi, vam dur a terme una hibridació subtractiva de supressió (SSH) per construir una biblioteca d'ADNc de gens sensibles a H2O2-.

Fig. 1. Expressió gènica relativa determinada per RT-qPCR després del tractament amb H2O2. Factor de transcripció CsWRKY1 - WRKY (Contig07), CsC4H1 - cinamat 4-hidroxilasa (Contig{09), Cs4CL1 - 4-cumarat: ligasa (Contig03), proteïna de xoc tèrmic CsHSP1 - 70 kDa (Contig 01) i CsSOD1 - superòxid dismutasa (Contig16). Les cèl·lules es van tractar amb 80 ug dm-3 H2O2 en un medi líquid durant 2 hores i es van comparar les expressions amb un control tractat amb aigua. Significa més - SD de tres repeticions biològiques; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Materials i mètodes

La línia cel·lular CS2001 es va establir a partir de pètals deCistanchesalsa(CA Mey.) Beck recollit a la província de Neimenggu i subcultivat. El mètode de cultiu era similar a un protocol publicat anteriorment (Liu et al. 2007). En general, es va utilitzar un medi sòlid de Murashige i Skoog (1962; MS) per al subcultiu i un medi líquid per als PeG.(feniletanoideglucòsids)biosíntesi (era el medi MS modificat suplementat amb 30 g dm-3 glucosa i 2,0 mg dm-3 indol-3-àcid acètic). Per al tractament amb H2O2, es van inocular 5,0 ± 0,2 g de cèl·lules en un període de creixement ràpid, normalment de 20 a 30 dies després de subcultivar-les en el medi sòlid, en un medi líquid de 50 cm3 en un matràs Erlenmeyer de 250 cm3. i cultivat a la foscor amb o sense concentracions diferents d'H2O2. Els PeG(feniletanoideglucòsids)El contingut després de la inducció de 10 d per H2O2 es va analitzar segons un mètode publicat anteriorment (Liu et al. 2007) basat en la cromatografia líquida d'alt rendiment en fase inversa amb elució de gradient de metanol.

Les cèl·lules 2 h després del tractament amb H2O2 es van recollir del medi mitjançant paper de filtre mitjançant un embut Büchner, i després es van congelar en nitrogen líquid i es van triturar en pols. Cada 2 g de pols cel·lular es va lisar amb una barreja d'1 cm3 de 2-mercaptoetanol, 1 cm3 de 200 g dm{{{10}} sarcosil, i 8 cm3 d'un tampó GTC (isotiocianat de guanidini 5 M, Tris-HCl 62,5 mM, pH 8,0, EDTA 6,25 mM, pH 8,0, tiourea 5 mM i ditiotreitol 10 mM). A continuació, es van incubar les cèl·lules en gel durant 15 min, després es van afegir 1/3 de volum de CH3COOK 8,5 M, pH 6,0, i les cèl·lules es van incubar en gel durant 15 min i després es van centrifugar a 15 000 g durant 15 min. . El sobrenedant es va afegir a un volum igual d'isopropanol per precipitar l'ARN total. L'ARN total es va purificar encara més mitjançant un mini kit RNeasy (Qiagen, Hilden, EUA) segons les instruccions del fabricant. L'ARN missatger es va aïllar de l'ARN total mitjançant un kit midi d'ARNm Oligotex (Qiagen).

feniletanoideglicòsidsenCistancheSalsa

Es va generar una biblioteca SSH a partir de mostres de cèl·lules de control i un 30 per cent d'H2O2-2 h després de l'obtenció mitjançant un kit de resta d'ADNc de selecció de PCR (Clontech, Mountain View, EUA). Per a la construcció de biblioteques, els productes es van purificar per separat mitjançant un kit de purificació de gel (Qiagen) i es van clonar en un vector pGEM mitjançant un kit de clonació TA (Tiangen, Beijing, Xina). Els plasmidis de clons independents es van aïllar i seqüenciar mitjançant el primer T7. Totes les seqüències d'etiquetes de seqüències expressades (EST) de la biblioteca (amb les seqüències vectorials eliminades) es van utilitzar per al muntatge contig amb CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). Els EST es van agrupar en contigs i singletons; es van utilitzar per a la cerca d'homologia mitjançant el programa BLASTx a NCBI (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov). A continuació, les seqüències es van anotar, analitzar i classificar segons termes d'ontologia gènica (GO) mitjançant Blast2GO (http://www.blast2go.com).
La reacció en cadena de la polimerasa quantitativa en temps real (RT-qPCR) es va realitzar segons Bustin et al. (2009). Les mostres d'ADNc es van sintetitzar mitjançant un kit de reactius PrimeScript RT (Takara, Dalian, Xina) a partir de 0,5 ug d'ARN total. La RT-qPCR es va dur a terme mitjançant els kits SYBR Premix Ex Taq II i ROX plus (Takara) en un sistema de PCR en temps real ABI 7300 (Applied Biosystems, Foster City, EUA) amb tres rèpliques tècniques. Els primers es van dissenyar utilitzant el programari en línia Primer3 segons les instruccions proporcionades per Takara; els primers utilitzats en aquest estudi es mostren a la Taula 1 Suppl. Les expressions gèniques es van normalitzar a ARN 18S, l'expressió del qual era estable en totes les mostres.

Els resultats es van analitzar mitjançant la versió R 3.1.1, la significació de les diferències es va verificar mitjançant la prova t de Student.

Resultats

El peròxid d'hidrogen va induir la biosíntesi dels tres PeG principals(feniletanoideglucòsids)enCistanchesalsacèl·lules en suspensió (taula 1), però sense efectes evidents sobre el creixement cel·lular (Fig. S2). El contingut d'equinacòsid ja va augmentar després del tractament amb 10 ug dm-3 H2O2 (P <0.05), es="" va="" registrar="" un="" augment="" més="" elevat="" després="" dels="" 20="" ug="" dm-3="" -3="" tractament="" amb="" h2o2="" (p="">< 0,01)="" i="" l'augment="" més="" alt="" es="" va="" produir="" després="" dels="" tractaments="" de="" 40,="" 80="" i="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2.="" es="" mostren="" resultats="" similars="" per="" a="" l'acteòsid,="" però="" el="" seu="" contingut="" va="" assolir="" el="" màxim="" després="" del="" tractament="" amb="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2.="" la="" biosíntesi="" del="" 2'-acetilacteòsid="" va="" ser="" menys="" sensible="" al="" tractament="" amb="" h2o2;="" un="" augment="" significatiu="" del="" seu="" contingut="" (p="">< 0,05)="" va="" ser="" a="" concentracions="" d'h2o2="" superiors="" a="" 40="" ug="" dm-3.="" després="" del="" tractament="" de="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2,="" la="" quantitat="" dels="" tres="" peg="">(feniletanoideglucòsids)augmentat significativament (P <0.01) sobre="" el="" control.="" per="" tant,="" aquesta="" concentració="" es="" va="" utilitzar="" en="" experiments="">
Per generar una biblioteca enriquida per a gens de resposta primerenc que estan regulats per H2O2, hem utilitzat ADNc deCistanchesalsacèl·lules en suspensió tractades amb 80 ug dm-3 H2O2 durant 2 h. La seqüenciació d'un sol pas de 129 clons recombinants a la biblioteca SSH va produir 105 EST nets després de l'exclusió de la seqüència vectorial. Aquests EST clars es van utilitzar per al muntatge per CAP3 i es van generar 18 contigs i 67 singletons (taula 2). Així, es van aïllar 85 gens en aquesta biblioteca. La longitud mitjana dels 105 EST nets va ser de 527 pb, la qual cosa és adequada per a una classificació funcional basada en la similitud de seqüències.

feniletanoideglicòsidsenCistancheSalsa

Els 85 gens obtinguts a la biblioteca van ser recuperats per BLASTx contra la base de dades de proteïnes no redundants GenBank per a la similitud de seqüències (valor E inferior o igual a 0.001). Vint-i-un gens no van mostrar cap èxit a la base de dades, podrien ser específicsCistanchesalsa. Els resultats amb BLASThits es van importar al programari Blast2GO per a més anàlisis d'enriquiment de les vies GO i KEGG. Dels 64 gens amb èxits BLAST, 50 es van anotar segons la descripció de gens homòlegs d'altres espècies. Els gens anotats es van nomenar segons la descripció dels hits BLAST. L'anàlisi GO (Fig. 3 Suppl.) mostra que entre aquests 50 gens, hi havia 14 gens implicats en respostes a estímuls, i més de 30 gens relacionats amb processos metabòlics (Taules 1 i 2). Entre aquests gens, es van aïllar dos homòlegs de gens de la via de biosíntesi de PeG com s'esperava: 4-coenzim A lligasa de cumarat (anomenada Cs4CL1: Contig03) i cinamat 4-hidroxilasa (anomenada CsC4H1: Contig14). A més, es va realitzar RT-qPCR per confirmar les expressions induïdes de gens de la biblioteca després del tractament amb H2O2.

Per confirmar que els gens essencials identificats a la biblioteca SSH responien al tractament amb H2O2, les expressions de dos PeG(feniletanoideglucòsids)Els gens relacionats amb la via de biosíntesi (Cs4CL1, CsC4H1), dos gens induïts per ROS (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) i un gen semblant al factor de transcripció de la família WRKY (CsWRKY1: Contig 07) es van mesurar després del tractament amb RT-qPCR. amb H2O2 (Fig. 1). Les expressions CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 i CsWRKY1 es van regular més de 15-, 3-, 45- i 4- vegades, respectivament 2 h després de l'H2O2 tractament. L'expressió de CsHSP1 es va alterar només 1,8 vegades després del tractament amb H2O2.
El curs temporal de les expressions de CsWRKY1, CsC4H1 i Cs4CL1 després del tractament amb H2O2 es va analitzar més per RT-qPCR (Fig. 2). Les expressions CsC4H1 i Cs4CL1 van augmentar molt (més de 80- vegades i 50- vegades, respectivament) després del tractament 16-h i després es van regular a la baixa després de 32 h. L'expressió de CsWRKY1 es va regular més de 20- vegades a les 4 h i després va disminuir a partir de les 8 h després (figura 2).

Fig. 2. L'expressió relativa de CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) i Cs4CL1 (C) en diferents moments després del tractament amb 80 ug dm-3 H2O2. Les expressions es van normalitzar a un control; (tractat amb aigua). Significa més - SD de tres repeticions biològiques; * - P <0,05, **="" -="" p=""><>

Discussió

El peròxid d'hidrogen és un elicitador vegetal conegut que mostra diversos efectes sobre les plantes. Igual que ROS, pot induir el sistema d'eliminació de ROS format per superòxid dismutasa, catalasa, peroxidases, etc., i serveix com a senyal aigües avall de sal, osmòtica i deshidratació.

estressa (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Es va suggerir que la generació d'H2O2 a les plantes va acompanyada d'una biosíntesi de metabolits secundaris induïda en elCistanchesalsacultiu cel·lular. Com era d'esperar, els nostres resultats revelen que PeGs(feniletanoideglucòsids)biosíntesi en elSalsa de CistancheEl cultiu cel·lular es va induir després del tractament amb H2O2 (taula 1). El contingut de tres PeG principals(feniletanoideglucòsids)va augmentar després del tractament amb H2O2, cosa que indica el seu paper fonamental en la biosíntesi de PeGs. Els gens enriquits a la biblioteca SSH van suggerir encara més el seu efecte sobre els PeG(feniletanoideglucòsids)inducció de la biosíntesiSalsa de Cistanche.

Molts gens coneguts que responen a l'H2O2-, com l'ascorbat peroxidasa (CISTH069, Karyotou i Donaldson 2005), la h-quinona oxidoreductasa (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah et al. 2014), i els gens de resposta de resistència a malalties (Contig10, Nanda, et al. 2010), es van enriquir a la biblioteca SSH (Taula 3, Taula 2 Suppl.). Alguns d'aquests gens típics de resposta a ROS amb una expressió induïda després del tractament amb H2O2 es van confirmar encara més mitjançant RT-qPCR (Figs. 1 i 2), cosa que indica que aquí es va construir una biblioteca SSH qualificada. En aquesta biblioteca també es van trobar dos gens de la via de biosíntesi de PeG, CsC4H1 i Cs4CL1, i aquestes dues expressions gèniques van ser induïdes pel tractament amb H2O2 de manera dependent del temps (Fig. 2). Suggereix que el tractament amb H2O2 va induir PeGs(feniletanoideglucòsids)biosíntesi a nivell genètic mitjançant la regulació dels gens de la via PAL. Tanmateix, PAL i altres gens de biosíntesi de PeGs aigües avall (Wang et al. 2012) no es van identificar a la biblioteca SSH; pot ser perquè la biblioteca no s'ha seqüenciat prou. Una relació entre les expressions induïdes per CsC4H1 i Cs4CL1 i una augment de la biosíntesi de PeGs després del tractament amb H2O2 s'hauria d'aclarir mitjançant anàlisis posteriors.

A més dels gens de la via PAL induïts pel tractament amb H2O2, es van trobar dos factors de transcripció de la família WRKY (CsWRKY1, CsWRKY2) a la biblioteca SSH (Taula 3 i Taula 2 Suppl.), i es va confirmar una expressió induïda per CsWRKY1 mitjançant RT-qPCR. . La seva expressió va respondre al tractament amb H2O2 abans que l'expressió de dos gens de la via PAL, Cs4CL1 i CsC4H1 (Fig. 2). A partir d'estudis anteriors, s'ha observat a l'arròs la coexpressió d'alguns factors de transcripció WRKY i gens de la via PAL (Gupta et al. 2012). A més, l'expressió del gen PAL està regulada a l'alça en un mutant de sobreexpressió OsWRKY03 (Liu et al. 2005). Els dos factors de transcripció de la família WRKY esmentats anteriorment també podrien estar implicats en els PeG(feniletanoideglucòsids)biosíntesi enCistanchesalsa. Curiosament, es van trobar EST relacionats amb la deshidratació (CISTH067, CISTH064) a la biblioteca SSH, cosa que pot suggerir que el tractament amb H2O2 estava relacionat amb l'expressió de gens sensibles a la deshidratació enCistanchesalsatal com s'observa en altres plantes (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). A la biblioteca SSH es va identificar un gen relacionat amb la senyalització de la giberelina (GA), el receptor de la giberelina gid1b (CISTH092), que implica la connexió de la senyalització GA i el tractament amb H2O2 enCistanchesalsa, que també es va informar a l'ordi (Bahin et al. 2011). Tanmateix, calen més estudis per confirmar si aquests gens estan relacionats amb els PeG(feniletanoideglucòsids)biosíntesi. A part dels gens esmentats anteriorment, la biblioteca SSH construïda aquí també presenta gens amb o sense hits BLAST. Millora la nostra comprensió de l'efecte H2O2 sobre C. salsa i en primer lloc proporciona la informació dels seus gens implicats en la biosíntesi de PeGs.

En conclusió, vam avaluar l'efecte de l'H2O2 sobre els PeG(feniletanoideglucòsids)inducció en elCistanchesalsacultiu cel·lular. La biblioteca SSH es va construir després del tractament amb H2O2 i es va confirmar l'expressió dels gens seleccionats mitjançant RT-qPCR. Es van identificar dos gens relacionats amb la via de la biosíntesi de PeG i altres gens sensibles a H2O2-. Aquestes troballes ampliaran la nostra comprensió dels PeG induïts per H2O2-(feniletanoideglucòsids)biosíntesi enCistanchesalsaa nivell molecular, proporcionant la informació per a la manipulació de gensCistanchesalsacultius cel·lulars per millorar els PeG(feniletanoideglucòsids)producció.

De: "Identificació de les EST sensibles al peròxid d'hidrogen implicades en la biosíntesi de glicòsids feniletanoides en el cultiu de cèl·lules de salsa de Cistanche" perJ. CHEN et al.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-a

Referències

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: La diafonia entre espècies reactives d'oxigen i vies de senyalització hormonal regula la latència del gra a l'ordi. - Entorn cel·lular vegetal. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie, r P.: Les espècies reactives d'oxigen generades per un producte que indueix la proteïna de xoc tèrmic (Hsp) contribueixen a la producció de Hsp70 i Hsp{{1} }immunitat protectora mediada en Artemia franciscana contra vibris patògens. - Dev. Comp. Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: Expression of NAD(P)H: quinone oxidoreductase 1 in HeLa cells  paper of hydrogen peroxide and growth phase. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: estandardització de qPCR i RT-qPCR. - Genet. Eng. Biotecnologia. Notícies 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:CistancheCultius de suspensió cel·lular de deserticola:feniletanoideglicòsidsbiosíntesi i activitat antioxidant. - Bioquímica del procés. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ Millora defeniletanoideglicòsidsbiosíntesi enCistancheCultius de suspensió cel·lular de deserticola per elicitor de quitosà. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: L'àcid abscísic media la producció de peròxid d'hidrogen al cacauet induït per l'estrès hídric. - Biol. Planta. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: l'únic gen funcional de resistència a les explosions Pi54 activa un mecanisme de defensa complex en l'arròs. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Caracterització molecular del gen de la fenilalanina amonia-liasa deCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Respostes de les plantes a l'estrès hídric: paper de les espècies reactives d'oxigen. - Plant Signal Behavior 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Ascorbat peroxidasa, un eliminador de peròxid d'hidrogen a les membranes glioxisomals. - Arc. Bioquímica. Biofísica. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Estudis sobre els constituents decistancheés herba. 4. Aïllament i estructures de 2 nous glucòsids fenilpropanoides, cistànosid-C i cistànosid-D. - Química. Farmàcia. Bou. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: Millora defeniletanoideglicòsidsbiosíntesi en cultius cel·lulars deCistanchedeserticola per estrès osmòtic. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: acumulació millorada defeniletanoideglicòsidsper alimentació de precursors al cultiu de suspensió deCistanchesalsa. - Bioquímica. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, un activador transcripcional de l'arròs que funciona en la via de senyalització de defensa aigües amunt d'OsNPR1. - Res cel·lular. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Un medi revisat per a un creixement ràpid i assajos biològics amb cultius de teixits de tabac. - Physiol. Planta. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Feniletanoideglicòsidsamb activitats antiinflamatòries de les tiges deCistanchedeserticola cultivada al desert de Tarim. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Espècies reactives d'oxigen durant les primeres interaccions planta-microorganisme. - J. Integr. Biol vegetal. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: producció millorada defeniletanoide glicòsidsper alimentació de precursors al cultiu cel·lular deCistanchedeserticola. - Bioquímica del procés. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Millora de la producció defeniletanoideglicòsidsperCistancheCèl·lules deserticola cultivades en un bioreactor de transport aeri de bucle intern amb un tamís. - Enzima Microbiol. Tècnica. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Caracterització anatòmica i histoquímica de haustorium in vitro a partir d'arrels de Castilleja tenuiflora. - Biol. Planta. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: L'aclimatació del peròxid d'hidrogen millora la tolerància a la sal activant proteïnes relacionades amb la defensa en Panax ginseng CA Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 regula la senyalització depenent de les espècies reactives d'oxigen durant la resposta inicial a l'estrès salí
en arròs. - Plant Cell 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert Ginseng": una revisió. - Amer. J. barbeta. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Patró de deposició de peròxid d'hidrogen a les beines de les fulles de l'arròs sota estrès salí. - Biol. Planta. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 regula les respostes a l'estrès per sequera i l'obertura estomàtica induïda per la llum blava. inhibint l'acumulació d'espècies reactives d'oxigen a Arabidopsis. - Physiol vegetal. 162: 1030-1041, 2013.