Glicòsids monoterpènics iridoides i acíclics, kankanòsids L, M, N, O i P de Cistanche Tubulosa
Mar 06, 2022
Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com
Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) és una planta paràsit perenne que creix a les arrels d'espècies de Salvadora o Calotropis, distribuïda al nord d'Àfrica, Aràbia i països asiàtics.1) Les tiges d'aquesta planta (Kanka-nikujuyou en japonès) han estat tradicionalment s'utilitza per al tractament de la impotència, l'esterilitat, el lumbago i la debilitat corporal, així com un agent promotor de la circulació sanguínia. vint-i-quatre aminoglucòsids feniletanoides inclosos els kancanosids H1, H2, I, J1, J2, K1 i K2, i dos oligosucres acilats de tiges fresques de Cistanchetubulosa.5,6) A més, els principalsglicòsids feniletanoides,equinacòsid, acteòsid,i isoacteòsid, es va trobar que inhibeixen l'augment dels nivells sèrics d'aspartat aminotransferasa (sAST) i alanina aminotransferasa (sALT) en el fetge lesionat dels ratolins induït per D-galactosamina (D-GalN) / lipopolisacàrid a dosis de 25-100 mg/kg per os ( po). També es van dilucidar els requisits estructurals dels glicòsids feniletanoides per a l'activitat hepatoprotectora.5) En aquest estudi continuat sobre els constituents de les tiges fresques de Cistanchetubulosa, vam aïllar encara més onze glicòsids iridoides, inclosos els kankanòsids L (1), M (2), i N (3), set glicòsids monoterpènics acíclics inclosos els kancanosids O (4) i P (5), tres fenilpropanoides i quatre lignans. Aquest article tracta de l'aïllament i elucidació de l'estructura de cinc nous compostos (1—5).
Les tiges fresques de C. tubulosa (cultivades a Urumuqi, província de Xin jiang, Xina) es van extreure amb metanol sota reflux per obtenir un extracte metanòlic (8,36 per cent de les tiges fresques). A partir de l'extracte metanòlic, es van obtenir fraccions eluïdes amb H2O i MeOH (5,63 per cent i 2,73 per cent, respectivament) mitjançant cromatografia en columna Diaion HP-20 (H2O→MeOH) tal com es va descriure anteriorment.5) La fracció eluïda amb MeOH va ser sotmesos a cromatografies de columna de SiO2 i ODS i finalment HPLC per proporcionar kancanosids L (1, 0.0026 per cent), M (2, 0.{{ 27}}001 per cent ), N (3, 0.00{{{60}}7 per cent ) , O (4, 0.0{{{0}}2{{1{05}} per cent ) i P (5, {{118} }.0002 per cent ), 6-desoxicatalpol3,7) (6, 0,197 per cent ), bartsioside3,7) (7, 0.{0583 per cent ), gluròsid3,7) (8, 0,0443 per cent ), kankanoïsid A3) (9, 22,3 mg, 0,0010 per cent ), àcid mussenosídic3,7) (10, 0,0056 per cent), 8- àcid epilogànic3,8) (11, 0,0023 per cent), 8-àcid epideoxilogànic3,7) (12, 0,0004 per cent), àcid genipòdic3,7) (13, 0,0040 per cent ), kankanòsid E3) (14, 0,0026 per cent ), (2E,6Z)-8-b D-glucopiranosiloxi-2,6-dimetil{-2,6-àcid octadienoic3,9) (15, 31,0 mg, 0,0014 per cent), (2E,6E){{95 }},7-dimetil-8-hidroxioctadi{-1-il-ObD-glu copranòsid10) (16, 0,0082 per cent), 8-hidroxigeraniol 8-Ob-D-glucopiranòsid11 ) (17, 0,0044 per cent ), betulalbusida A12) (18, 0,0004 per cent ), coniferina13) (19, 0,0002 per cent ), syringin13) (20, 0,0015 per cent ), aldehid sinàpic 4-ObD14-2glucopirano, 14 0,0001 per cent ), ( )-pinoresinol ObD-glucopiranòsid4,8,15) (22, 0,0010 per cent ), eucommin A16) (23, 0,0002 per cent ), isoeucommina A17) (24, 0,0010 per cent ) i ( )-aresinol-syring glucopyra noside4,8,18) (25, 0,0044 per cent).
Cistanche tubulosamillorar la funció sexual
Estructures dels kankanòsids L (1), M (2) i N (3)
Kankanoside L (1) es va obtenir com una pols blanca amb rotació òptica negativa ([a] D 26 45,7 en MeOH). El seu espectre IR va mostrar una forta banda d'absorció a 3433 i 1{{20}}80 cm 1 suggeridora d'un fragment de glucòsid. El bombardeig ràpid d'àtoms (FAB)-MS d'1 execució en els modes d'ions positius i negatius va mostrar pics d'ions quasimoleculars a m/z 371 [M Na] i 347 [MH], respectivament, i la fórmula molecular es va determinar com a C15H24O9. mitjançant mesura FAB-MS d'alta resolució. La hidròlisi àcida d'1 amb àcid clorhídric (HCl) 1,0 M va alliberar D-glucosa, que es va identificar mitjançant anàlisi HPLC mitjançant un detector de rotació òptic. 2), que van ser assignats per diversos experiments de RMN,19) van mostrar senyals com a signables a quatre metilens [d 1,43 (1H, br dd, J ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 (1H, br dd, J). aprox. 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= aprox. 8, 14 Hz, 6b-H), 3,50 ( 1H, ddd, J 2,4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H cadascun, tots dos d, J 13,1 Hz, 10-H2)], dues metines [d 2,15 (1H, dd, J 7,2, 8,9 Hz, 9-H) i 2,23 (1H, m, 5- H)], i un grup acetal [d 4,81 (1H, d, J 8,9 Hz, 1-H)] juntament amb un fragment b-glucopiranosil [d 4,70 (d, J 7,9 Hz, 1 - H)]. Com es mostra a la figura 1, l'experiment d'espectroscòpia de correlació 1 H–1H (1 H–1 H COSY) a 1 va indicar la presència d'estructures parcials escrites en negreta. A l'experiment de correlació d'enllaços múltiples heteronuclears (HMBC) a 1, es van observar correlacions de llarg abast entre els protons i carbonis següents (1-H i 3-C, 8-C; {1- 124}}H i 1-C; 7-H i 8-C, 10-C; 9-H i 8-C; {{131 }}H2 i 7-C, 8-C; 1 -H i 1-C) tal com es mostra a la figura 1. A continuació, l'estereoestructura relativa d'1 es va caracteritzar per un nuclear sensible a la fase Experiment d'espectroscòpia de millora Overhauser (NOESY sensible a la fase), que va mostrar correlacions NOE entre els següents parells de protons (1-H i 3a H; 3a-H i 4a-H; 3b-H i 4b-H; 4b-H; 4b-H i 5-H, 9-H; 5- H i 6b-H, 9-H; 6a-H i 7-H; 7-H i 10-H2), tal com es mostra a la figura 1. Els espectres de RMN 1 H i 13C de 1 es superposaven als del constituent iridoide principal 6-desoxicatalpol (6), excepte pels senyals deguts. al fragment saturat de d-lactol. Finalment, la hidrogenació de 6 va donar 1, de manera que es va dilucidar l'estereoestructura del kankanòsid L que era 3,4- dihidro-6-desoxicatalpol (1).
Kankanoside M (2) es va obtenir com una pols blanca amb rotació òptica negativa ([a] D 26 18,7 en MeOH). L'espectre IR de 2 va mostrar bandes d'absorció a 3433, 1736, 1655 i 1076 cm 1 atribuïbles a fragments d'hidroxil, d-lactona, olefina i èter. L'espectre FAB-MS d'ions positius de 2 va mostrar un pic d'ions quasimoleculars a m/z 353 [M Na], i la fórmula molecular es va determinar com a C15H22O8 mitjançant la mesura de FAB-MS d'ions positius d'alta resolució. La hidròlisi àcida de 2 amb HCl 1,0 M va alliberar D-glucosa. Els espectres de RMN 1H i 13C de 2 (CD3OD, taules 1, 2) mostraven senyals assignables a quatre metilens [d 1,66, 2,11 (1H cadascun, tots dos m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1H cadascun). , tots dos m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J 2,8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (1H cadascun, tots dos d, J 13,1 Hz, 10- H2), 4,35 (1H, ddd, J 3,1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], dues metines [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, {{{ 84}}H)], una olefina [d 5,94 (1H, m, 7-H)] i un grup lactona saturat (d C 174,9) juntament amb un fragment bD-glucopiranosil [d 4,32 (1H, d) , J 7,9 Hz, 1 -H)]. Tal com es mostra a la figura 1, l'experiment 1 H–1H COSY a 2 va indicar la presència d'estructures parcials escrites en negreta i, a l'experiment HMBC, es van observar correlacions de llarg abast entre els següents parells de protons i carboni ({{105 }}H i 1-C; 7-H i 9-C; 9-H i 1-C, 8-C; {{112} }H2 i 7-C, 8-C, 9-C; 1 -H i 10-C). L'estereoestructura relativa de 2 es va caracteritzar per un experiment NOESY sensible a la fase, que va mostrar correlacions NOE entre els següents parells de protons (3a-H i 4a-H; 3b-H i 4b-H; 4b-H i 5- H; 5-H i 6b-H, 9-H) tal com es mostra a la figura 1. Així, l'estereoestructura de 2 es va dilucidar tal com es mostra.
Kankanoside N (3) es va aïllar com una pols blanca amb rotació òptica negativa ([a] D 25 24,6 en MeOH). En el FAB-MS d'ions positius de 3, es va observar un pic d'ions quasimoleculars a m/z 371 [M Na] . La fórmula molecular C16H28O8 es va determinar mitjançant la mesura FAB-MS d'alta resolució. Hidròlisi àcida de 3 amb 1.0 M HCl alliberat D-glucosa. Les dades de RMN 1H i 13C (CD3OD, taules 1, 2) mostraven senyals assignables a un metil [d 1.07 (3H, d, J 7,2 Hz, 10-H3)] , quatre metilens {d 1,37, 1,87 (1H cadascun, tots dos m, 7-H2), 1,65, 1,81 (1H cadascun, tots dos m, 6-H2), [3,65 (1H, dd, J 9,1) , 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J 5,9, 9,8 Hz), 11-H2] i [3,70 (1H, dd, J 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), {{ 71}}H2]}, quatre metines [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8- H), 2,16 (1H, m, 5-H)] i un grup hemiacetal [d 4,67 (1H, d, J 7,4 Hz, 1-H)] juntament amb un fragment bD-glucopiranosil [ d 4,26 (1H, d, J 7,9 Hz, 1 -H)]. L'estructura iridoide de 3 es va aclarir mitjançant experiments 1 H–1 H COSY i HMBC i l'estereoestructura relativa es va caracteritzar per un experiment NOESY sensible a la fase tal com es mostra a la figura 1. En conseqüència, l'esteroestructura de 3 es va dilucidar tal com es mostra.
Estructures dels kankanòsids O (4) i P (5)
Els kankanòsids O (4) i P (5), C16H26O8, també es van obtenir com a pols blanques amb rotacions òptiques negatives (4: [a]D 23 26,1; 5: [a]D 21 32,7 ambdós en MeOH). Els espectres IR de 4 i 5 mostraven bandes d'absorció a 3433, 1696, 1647 i 1076 cm 1 per a 4, i a 3434, 1701, 1647 i 1{{96} }76 cm 1 per 5, atribuïble a les funcions glicosídiques, carboxíliques i olefines. Els seus espectres UV van mostrar un màxim d'absorció comú a 217 nm que indica la presència d'un fragment d'àcid carboxílic b-insaturat en tots dos. La hidròlisi àcida de 4 i 5 va alliberar D-glucosa, mentre que per la hidròlisi enzimàtica amb b glucosidasa, 4 i 5 van donar (2E,6E)-8-hidroxi{-2,6-dimetil{{39 }},{{40}}àcid octadecenoic20) (4a) i (2E,6E)-8-hidroxi-3,7- dimetil{{ 48}}, 6-àcid octadecenoic21) (5a), respectivament. Les dades de 1 H- i 13C-RMN de 4 (CD3OD, taules 2, 3) van mostrar senyals assignables a dos metils [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J 1,0 Hz). , 9-H3)], tres metilens {d 2,19 (2H, br t, J aprox. 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [ 4,24 (1H, dd, J 7,6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J 6,2, 12,0 Hz), 8-H2]} i dues olefines trisubstituïdes [d 5,41 (1H, ddd, J 1,2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1H, tq, J 7,2, 1,0 Hz, 3-H)] juntament amb una part de glucopiranosil bD [d 4,34 (d, J 7,8 Hz, 1 -H)]. Mitjançant la comparació dels senyals de carboni a l'espectre 13C-RMN de 4 amb els de 4a, es va observar un canvi de glicosilació a la posició 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). La posició de l'enllaç glucòsid també es va confirmar mitjançant experiments HMBC, tal com es mostra a la figura 2. En conseqüència, es va aclarir que l'estereoestructura de 4 era (2E,6E)-8-bD-glucopiranosiloxi-2,{{ 143}}àcid dimetil-2,6-octadecenoic. D'altra banda, les dades de 1H- i 13C-RMN de 5 (CD3OD, taules 2, 3) van indicar la presència d'un (2E,6E)-8-hidroxi{-3,{{158} }dimetil-2,6-part àcid octadecenoic [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9-H3), 2,24 ( 2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (1H cadascun, tots dos br d, J aprox. 12 Hz, 8-H2) , 5,47 (1H, tq, J 7,1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H)] juntament amb una part de bD-glucopiranosil [d 4,23 (d, J) 7,7 Hz, 1 -H)]. La connectivitat del fragment bD-glucopiranosil en 5 es va dilucidar a partir dels experiments HMBC tal com es mostra a la figura 2. A més, es va observar un canvi de glicosilació típic per als senyals a la posició 8- (d C 5: 75,6; 5a: 68,8). Sobre la base de l'evidència esmentada anteriorment, es va determinar que l'estereoestructura de 5 era (2E,6E)-8-bD-glucopiranosiloxi-3,7-dimetil-2,{ {230}}àcid octa dienoic.
Efectes dels components sobre la citotoxicitat induïda pel factor de necrosi tumoral-a (TNF-a) a les cèl·lules L929
Se sap que el TNF-a media una varietat de lesions d'òrgans mitjançant la seva inducció de l'apoptosi cel·lular. En el cas del fetge, els efectes biològics del TNF-a han estat implicats en lesions hepàtiques induïdes per toxines hepàtiques, isquèmia/reperfusió, hepatitis viral i alcohol.22—24) Per tant, es considera que el TNF-a és un important objectiu per descobrir agents antiinflamatoris i hepatoprotectors. Sobre la base del concepte esmentat anteriorment, vam investigar els components protectors de productes naturals sobre la mort cel·lular induïda per TNF-a en cèl·lules L929, una línia cel·lular sensible a TNF-a.25) Anteriorment, hem informat que diversos constituents de Piper Chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) i Sapindus rarak, 36-38) es va trobar que mostraven efectes inhibidors del TNF-a. -Citotoxicitat induïda a les cèl·lules L929. Atès que els constituents feniletanoides de C. tubulosa (per exemple, equinacòsid, acteòsid i isoacteòsid, etc.) 5) també van inhibir aquesta citotoxicitat, vam examinar més els constituents iridoides, fenilpropanoides i lignans tal com es mostra a la taula 4. Com a resultat, el kankanòsid A (9, inhibició: 16,3 2,0 per cent a 100 mM), àcid mussaenosídic (10, 44,7 8,7 per cent), 8-àcid epilogànic (11, 10,7 0,4 per cent), 8-hidroxigeraniol 8-ObD-glucopiranòsid (17, 21,3 2,4 per cent) i ( )-pinoresinol ObD-glucopiranòsid (22, 22,3 1,6 per cent), mostraven una activitat significativa. Tot i que les seves activitats eren més febles que les de l'equinacòsid (IC50 31,1 mM), l'acteòsid (17,8 mM) i l'isoaceteòsid (22,7 mM), els principals constituents feniletanoides.
Experimental
Per obtenir dades espectrals i físiques s'han utilitzat els següents instruments: rotacions específiques, polarímetre digital Horiba SEPA-300 (l 5 cm); espectres UV, espectròmetre Shimadzu UV-1600; espectres IR, espectròmetre Shimadzu FTIR-8100; 1 espectres de RMN H i 13C, espectròmetres JEOL JNM-ECA600 (600, 150 MHz) i JEOL JNM-ECS400 (400, 100 HMz) amb tetrametilsilà com a estàndard intern; FAB-MS i FAB-MS d'alta resolució, espectròmetre de masses JEOL JMS-SX 102A; Detector HPLC, Shimadzu RID-10un índex de refracció, Shimadzu SPD-10A UV-VIS i detectors de rotació òptica Shodex OR-2. La columna HPLC, Cosmosil 5C18-MS-II i les columnes pNAP (Nacalai Tesque Inc., 250 4,6 mm id) i (250 20 mm id) es van utilitzar amb finalitats analítiques i preparatives, respectivament.
Per a la cromatografia es van utilitzar les condicions experimentals següents: cromatografia en columna de gel de sílice en fase normal (CC), gel de sílice 60N (Kanto Chemical Co., Ltd., malla 63—21{0, esfèrica, neutral); gel de sílice de fase inversa CC, Diaion HP-20 (Nippon Rensui) i Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., malla 100-200); TLC de fase normal, plaques de TLC prerevestides amb gel de sílice 60F254 (Merck, 0,25 mm); TLC de fase inversa, plaques de TLC prerevestides amb gel de sílice RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm); HPTLC de fase inversa, plaques TLC prerevestides amb gel de sílice RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm), la detecció es va aconseguir mitjançant polvorització amb 1 per cent de Ce(SO4)2– 10 per cent d'H2SO4 aquós, seguit d'escalfament .
Material vegetal
Aquest tema es va descriure en un informe anterior.
Extracció i aïllament
Les tiges fresques de C. tubulosa (2,98 kg) es van tallar finament i es van extreure tres vegades amb metanol a reflux durant 3 h. L'evaporació del dissolvent a pressió reduïda va proporcionar un extracte metanòlic (249,1 g, 8,36 per cent). L'extracte metanòlic es va sotmetre a Diaion HP-20 CC (5,0 kg, H2O→MeOH) per donar fraccions eluïdes amb H2O i MeOH (167,84 g, 5,63 per cent i 81,21 g, 2,73 per cent, respectivament). La fracció eluïda amb MeOH (61,00 g) es va sotmetre a gel de sílice en fase normal CC [1,8 kg, CHCl3– MeOH–H2O (15: 3: 0.4→1{{ 36}} : 3 : 0.5→6 : 4 : 1, v/v/v)→MeOH] per donar set fraccions [Fr. 1 (1,12 g), 2 (9,56 g), 3 (0,89 g), 4 (1{0,69 g), 5 (8,84 g), 6 (12,52 g) i 7 (4,6{{104}} g)], tal com es va descriure anteriorment.5) La fracció 1 (1,12 g) es va separar mitjançant gel de sílice CC de fase inversa [55 g, MeOH–H2O (4 0 : 60, v/v)→MeOH] per donar cinc fraccions [Fr. 1-1 (132,8 mg), 1-2 (267,0 mg), 1-3 (182,8 mg), {{8{0}} (31{{ 156}},9 mg) i 1-5 (91,4 mg)]. La fracció 1-1 (132,8 mg) es va purificar més per HPLC [Cosmosil 5C{{9{{160}}}}MS-II, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (1{{166} } : 90, v/v)] per donar kankanòsid M (2, 2,8 mg, 0.{{2{03}}{{22{{24{{248 }}}}}}01 per cent ), bartsiòsid (7, 5,2 mg, 0.00{02 per cent ), aldehid sinàpic {{1{{295 }}6}}O-bD-glucopiranòsid (21, 1,4 mg, {{3{{3{{3{{310}}9}}5}}{{320} }}}.0001 per cent). La fracció 1-2 (267.{{35{0}} mg) es va purificar més per HPLC [Cosmosil 5C{18-MS-II, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (7: 93, v/v)] per donar (2E,6E)-3,{7-dimetil-8-hidroxioctadi{{{13{{360}}}}il-O-bD -glucopiranòsid (16, 15,8 mg, {{370}}.{{{06}}007 per cent ), 8-hidroxigeraniol 8-ObD glucopiranòsid (17, 5,2 mg, 0,0002 per cent), ( )-pinoresinol ObD-glucopyra noside (22, 22,0 mg, 0,0010 per cent), eucommin A (23, 5,0 mg, 0,0002 per cent A), isoeu commin A (24, 21,3 mg, 0,0010 per cent) i ()-siringaresinol ObD-glucopia ranòsid (25, 98,0 mg, 0,0044 per cent). La fracció 2 (9,56 g) es va separar mitjançant gel de sílice CC de fase inversa [400 g, MeOH–H2O (10: 90, v/v) → MeOH → acetona] per donar cinc fraccions [Fr. 2-1 (55,9 mg), 2-2 (4,48 g), 2-3 (3,42 g), 2-4 (1,16 g) i 2-5 (31,9 mg) ], tal com es va descriure anteriorment.5) La fracció 2-2 (500,0 mg) es va sotmetre a HPLC [Cosmosil 5C{18-MS-II, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (5: 95, v/v )] per donar kankanòsid L (1, 6,6 mg, 0,0026 per cent) i 6-desoxicatalpol (6, 455,5 mg, 0,182 per cent). La fracció 2-3 (1,00 g) es va sotmetre a HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (7: 93, v/v)] per donar set fraccions [Fr . 2-3-1 (66,5 mg), 2-3-2 (20,4 mg), 2-3-3 (26,0 mg), 2-3-4 (136,6 mg), 2-3-5 [ 7 (380,6 mg) , 0,0581 per cent )], 2-3-6 [gluròsid (8, 285,1 mg, 0,0435 per cent )] i 2-3-7 (84,9 mg)]. La fracció 2-3-4 (106,6 mg) es va purificar més per HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (5: 95, v/v)] per donar 6 (68,4 mg, 0,0134 per cent) juntament amb salidroside5) (13,7 mg, 0,0027 per cent). La fracció 2-4 (1,16 g) es va sotmetre a HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 per cent AcOH aquós (15: 85, v/v) i Cosmosil pNAP, CH3CN–1 per cent AcOH aquós (10: 90 o 15: 85, v/v)] per donar kankanòsids N (3, 15,6 mg, 0,0007 per cent), O (4, 44,1 mg, 0,0020 per cent) i P (5, 4,2 mg, 0,0002). per cent), 6 (24,0 mg, 0,0011 per cent), 8 (17,7 mg, 0,0008 per cent), kankanoiside A (9, 22,3 mg, 0,0010 per cent), 8-àcid epideoxilogànic (12, 8,1 mg, 0,0004 per cent), kankanòsid E (14, 58,1 mg, 0,0026 per cent), (2E,6Z)-8-bD-glucopia ranosiloxi-2,6-dimetil-2,6-octadienoic àcid (15, 31,0 mg, 0,0014 per cent), 16 (168,6 mg, 0,0075 per cent), 17 (94,3 mg, 0,0042 per cent), betulalbusida A (18, 8,1 mg, 0,0004 per cent), coniferina (19,2 mg, 0,03,0 per cent), ), i siringina (20, 33,9 mg, 0,0015 per cent). La fracció 4 (10, 69 g) es va separar mitjançant gel de sílice CC de fase inversa [500 g, MeOH–H2O (30: 70, v/v) → MeOH → acetona] per donar quatre fraccions [Fr. 4-1 (878,2 mg), 4-2 (7,06 g), 4-3 (1,57 g) i 4-4 (792,8 mg)], tal com es va descriure anteriorment.5) El La fracció 4-1 (500,0 mg) es va purificar per HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (10: 90, v/v)] per donar àcid mussenosídic (10, 39,1). mg, 0,0031 per cent) i àcid geniposidic (13, 51,2 mg, 0,0040 per cent). La fracció 5 (8, 84 g) es va separar mitjançant gel de sílice CC de fase inversa [400 g, MeOH–H2O (20: 80 → 30: 70, v/v) → MeOH → acetona] per donar set fraccions [Fr. 5-1 (870,2 mg), 5-2 (478,9 mg), 5-3 (3,72 g), 5-4 (979,9 mg), 5-5 (1,19 g), 5-6 (1,27 g) i 5-7 (130,1 mg)], tal com es va descriure anteriorment.5) La fracció 5-1 (870,2 mg) es va purificar més per HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN -1 per cent d'AcOH aquós (5: 95, v/v)] per donar-ne 10 (55,3 mg, 0,0025 per cent) i 8-àcid epilogànic (11, 51,5 mg, 0,0023 per cent).
Kankanòsid L (1): una pols blanca, [a]D 26 45,7 (c 0,48, MeOH). FAB-MS d'ions positius d'alta resolució: calculada per C15H24O9Na [M Na] 371,1318; S'ha trobat 371.1309. IR (KBr, cm 1 ): 3433, 2928, 1080. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: donat a la taula 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: donat a la taula 2. Positiu- ió FAB-MS m/z: 371 [M Na] . FAB-MS d'ions negatius m/z: 347 [MH].
Kankanòsid M (2): una pols blanca, [a]D 26 18,7 (c 0,11, MeOH). FAB-MS d'ions positius d'alta resolució: calculada per C15H22O8Na [M Na] 353,1212; S'ha trobat 353.1208. IR (KBr, cm 1 ): 3433, 2924, 1736, 1655, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: donat a la taula 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: donat a la taula 2. FAB-MS d'ions positius m/z: 353 [M Na] .
Kankanòsid N (3): una pols blanca, [a]D 25 24,6 (c 1.00, MeOH). FAB-MS d'ions positius d'alta resolució: calculada per C16H28O8Na [M Na] 371,1682; S'ha trobat 371.1686. IR (KBr, cm 1 ): 3415, 2874, 1076, 1028. 1 H- RMN (600 MHz, CD3OD) d: donat a la taula 1. 13C-RMN (150 MHz, CD3OD) d C: donat a la taula 2. FAB-MS d'ions positius m/z: 371 [M Na] .
Kankanòsid O (4): una pols blanca, [a]D 23 26,1 (c 2,30, MeOH). FAB-MS d'ions positius d'alta resolució: calculada per C16H26O8Na [M Na] 369,1525; S'ha trobat 369.1528. UV [l màx (log e), MeOH, nm]: 217 (4,04). IR (KBr, cm 1 ): 3433, 2926, 1696, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: donat a la taula 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: donat a la taula 2. FAB-MS d'ions positius m/z: 369 [M Na] .
Kankanòsid P (5): una pols blanca, [a]D 21 32,7 (c 0,18, MeOH). FAB-MS d'ions positius d'alta resolució: calculada per C16H26O8Na [M Na] 369,1525; S'ha trobat 369.1520. UV [l màx (log e), MeOH, nm]: 217 (4,08). IR (KBr, cm 1 ): 3434, 2926, 1701, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: donat a la taula 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: donat a la taula 2. FAB-MS d'ions positius m/z: 369 [M Na] .
Hidròlisi àcida de kankanòsids L—P (1—5): eren solucions d'1—5 (1.0 mg cadascuna) en 1.0 M HCl (1.0 ml) escalfat a 80 graus durant 3 h. Després de refredar-se, la mescla de reacció es va neutralitzar amb Amberlite IRA-400 (forma OH) i les resines es van eliminar per filtració. Després d'eliminar el dissolvent a pressió reduïda, el residu es va separar mitjançant la columna de cartutx Sep-Pak C18 (H2O → MeOH). La fracció eluïda amb H2O es va sotmetre a anàlisi HPLC en les condicions següents: columna HPLC, Kaseisorb LC NH2-60-5, 4,6 mm d.di. 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tòquio, Japó); detecció, rotació òptica [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tòquio, Japó); fase mòbil, CH3CN–H2O (85: 15, v/v); velocitat de col·laboració 0,8 ml/min]. La identificació de la D-glucosa present a les fraccions eluïdes amb H2O d'1-5 es va dur a terme comparant els seus temps de retenció i rotació òptica amb la d'una mostra autèntica [tR 17, 9 min (positiu)].
Hidrogenació de {{{0}}Desoxicatalpol (6) Una suspensió de 6 (12,0 mg) i 10 per cent de carboni de pal·ladi (5,0 mg) en MeOH (2, 0 ml) es va agitar a temperatura ambient sota una atmosfera d'H2 durant 2 h. El catalitzador es va filtrar i el filtrat es va condensar a pressió reduïda per donar 1 (12,0 mg, quant.).
Hidròlisi enzimàtica de kankanòsids O (4) i P (5) amb b-glucosidasa A una solució de 4 (8,0 mg) en H2O (1,5 ml) es va afegir b-glucosidasa (4,7 mg, d'ametlla, Oriental Yeast Co., Tòquio, Japó) i la solució es va agitar a 37 graus durant 24 h. La reacció es va apagar mitjançant l'addició d'EtOH (5,0 ml), la mescla es va condensar a pressió reduïda. El residu es va extreure amb EtOAc i l'evaporació del dissolvent va donar (2E,6E)-8-hidroxi-2,{{20}}dimetil-2,{{22} }àcid octadecenoic20) (4a, 3,9 mg, 92 per cent). Mitjançant un procediment similar, (2E,6E)-8-hidroxi-3,7-dimetil{-2, 6-àcid octadecenoic21) (5a, 0,9 mg, 94 per cent ) es va obtenir a partir del kankanòsid P (5, 1,8 mg).
Mètode de bioassaig L'efecte inhibidor de la citotoxicitat induïda per TNF-a en cèl·lules L929 es va analitzar pel mètode descrit en un article anterior.5)
Estadístiques Els valors s'expressen com a mitjans SEM Per a l'anàlisi estadística es va utilitzar l'anàlisi unidireccional de la variància (ANOVA) seguida de la prova de Dunnett. Els valors de probabilitat (p) inferiors a 0,05 es van considerar significatius.
herba cistanche
