La isoastilbina inhibeix l'apoptosi neuronal i l'estrès oxidatiu en el model d'Arat de lesió per isquèmia-reperfusió al cervell: implicació de SIRT1/3/6

Per a més informació Correu electrònictina.xiang@wecistanche.com

Resum

Fons.S'ha demostrat que té isoastilbina (IAB).antioxidanti funcions antiapoptòtiques. Un estudi recent va trobar que l'IAB pot reduiroxidatiuestrès en la malaltia d'Alzheimer. Tanmateix, encara es desconeix si la funció antioxidant de l'IAB també és protectora en altres malalties del cervell.
Objectius.Investigar els papers i els mecanismes subjacents de l'IAB en la reperfusió d'oclusió de l'artèria cerebral mitjana (MCAO/R) en rates.
Materials i mètodes.Les rates Wistar mascles es van dividir aleatòriament en 5 grups: grup simulat, grup MCAO/R i 3 grups MCAO/R als quals se'ls va administrar IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg o 80 mg/kg) un cop al dia durant 3 dies. Mida de l'infart, puntuació de gravetat neurològica modificada (mNSS),oxidatiuestrèsmarcadors i marcadors d'apoptosi neuronal per avaluar la funció de l'IAB.
Resultats.En comparació amb el grup MCAO/R, l'administració d'IAB va reduir la mida de l'infart i les puntuacions de mNSS en rates MCAO/R. La isoastilbina també va disminuir el nivell de malondialdehid (MDA) i va millorar l'activitat de la catalasa (CAT), la superòxid dismutasa (SOD) i la glutatió peroxidasa (GSH-PX). El tractament amb isoastilbina va atenuar la neurona induïda per MCAO/Rapoptosien comparació amb el grup theMCAO/R, tal com indiquen els resultats dels assajos de nick-end X-dUTP mediats per desoxinucleòtids transferases terminals (TUNEL) i Western blot. La isoastilbina també va revertir la baixada de l'expressió de proteïnes SIRT1/3/6 induïda per MCAO/R.
Conclusions.Aquestes observacions suggereixen que IAB protegeix contraoxidatiuestrès i apoptosi neuronal en rates després d'una lesió per isquèmia-reperfusió (I/R) cerebral mitjançant la regulació de SIRT1/3/6, cosa que indica que l'IAB podria ser un agent terapèutic prometedor per a la lesió cerebral I/R.
Paraules clau:apoptosi, estrès oxidatiu, isoastilbina, lesió focal d'isquèmia-reperfusió cerebral

Fons

L'ictus isquèmic i hemorràgic es troben entre les principals causes de discapacitat i mort a tot el món.1,2 L'ictus isquèmic és causat per obstruccions als vasos sanguinis, de manera que els òrgans diana estan en risc de mort cel·lular.3 Encara que el tractament més eficaç per a la isquèmia cerebral és restablir el subministrament de sang, la teràpia trombolítica pot augmentar la mida de l'infart i agreujar la lesió per isquèmia-reperfusió (I/R) dins del cervell.1,4 Per tant, hi ha una necessitat urgent de desenvolupar nous fàrmacs per al tractament de la lesió cerebral I/R.

La lesió per isquèmia-reperfusió al cervell implica una fisiopatologia complexa, inclosa l'aparició deoxidatiuestrès, l'apoptosi i l'esgotament de l'adenosina trifosfat (ATP), tot això pot provocar lesions neuronals.5 Durant la isquèmia es produeixen espècies reactives d'oxigen (ROS)apoptosii disfunció neurològica.6 Concretament, les NADPH oxidases generen ROS durant la lesió I/R, que provocaoxidatiuestrès. Aquest estrès està marcat per un augment de la peroxidació lipídica, una disminució de l'activitat de la catalasa (CAT) i la superòxid dismutasa (SOD) i una disminució del nivell de glutatió (GSH).7–11 Nivells elevats de ROS ioxidatiuestrèsal seu torn, desencadenarà la mort cel·lular a través de la via apoptòtica mitocondrial després d'una lesió cerebral I/R.12 Els porus de transició de la permeabilitat mitocondrial poden obrir-se com a conseqüència de l'acumulació superflua de ROS, donant lloc a un menor potencial transmembrana mitocondrial i una major producció d'activadors de caspases com ara com el citocrom c, iniciant finalment la cascada de caspases i donant lloc a la mort cel·lular.12 Geng et al. va proposar que l'apoptosi de les cèl·lules neuronals està mediada almenys parcialment per la via de l'apoptosi mitocondrial en la lesió cerebral I/R.13 En conseqüència, la inhibició o la reversió de l'estrès oxidatiu i l'apoptosi neuronal són nous mètodes prometedors per atenuar la lesió cerebral I/R.

Per explorar el mecanisme mitjançant el qual l'IAB atenua els danys induïts per I/R, ens vam centrar en la cascada de senyalització SIRT. Estudis recents han demostrat un paper protector de SIRT1/3/6 en diverses malalties, inclosa la degeneració neuronal del cervell, la inflamació dels vasos sanguinis i l'acumulació de greix corporal. De fet, vam trobar que el tractament amb IAB augmenta el nivell d'expressió de SIRT durant la lesió I/R, cosa que indica que l'IAB pot protegir contra les cèl·lules.apoptosiregulant l'expressió SIRT. En conjunt, els nostres resultats suggereixen que l'IAB és un tractament potencialment útil per a la lesió cerebral I/R clínica.

Objectius

El nostre objectiu general era examinar els efectes i els mecanismes subjacents de l'IAB en lesions I/R mitjançant el model animal MCAO/R.

Materials i mètodes

Animals

Les rates Wistar mascles es van adquirir de la Shanghai Laboratory Animal Company (Xangai, Xina). Les rates d'entre 60 i 90 dies amb pes corporal normal (200-250 g) van ser alimentades ad libitum amb menjar i aigua i es van mantenir en un entorn consistent (25 ± 2 graus, 40 ± 10 per cent d'humitat relativa i 12 h de cicle de llum/foscor) . Els animals es van manipular segons les directrius per a la cura i l'ús d'animals de laboratori del Jiamusi College, Universitat de Medicina Tradicional Xinesa de Heilongjiang, Xina. El Comitè Institucional de Cura i Ús d'Animals del Jiamusi College de la Universitat de Medicina Xinesa de Heilongjiang va aprovar procediments per a animals (aprovació núm. 20190815).

Establiment de lesions MCAO/R i tractament IAB

La toxicitat de l'IAB es va determinar tal com es va descriure anteriorment.15 La isoastilbina (Chengdu Purechem-Standard Co., Ltd., Chengdu, Xina) es va diluir a concentracions finals de 20 mg/kg, 40 mg/kg i 80 mg/kg en fosfat. -solució tamponada (PBS). Els animals van ser aleatoritzats en 5 grups: 1. simulació; 2. MCAO/R; 3. MCAO/R seguit de 20 mg/kg IAB; 4. MCAO/R seguit de 40 mg/kg IAB; i 5. MCAO/R seguit de 80 mg/kg IAB.

Les rates es van anestesiar mitjançant una injecció intraperitoneal (ip.) de 5 0 mg/kg de pentobarbital sòdic (Sinopharm Chemical Reagent, Beijing, Xina). Per introduir MCAO/R, vam exposar les artèries caròtides, és a dir, l'artèria caròtida externa (ECA), l'artèria caròtida comuna dreta (CCA) i l'artèria caròtida interna (ICA). L'ECA i el CCA estaven lligats de manera proximal. L'ICA es va lligar mitjançant una sutura monofilament de 0, 285 mm, inserida al lumen de l'ICA durant uns 18 mm a través del monyó de l'ECA per obstruir l'artèria cerebral mitjana (MCA). Un làserEs va utilitzar Doppler (USCN KIT INC., Wuhan, Xina) per confirmar que el flux sanguini es va reduir a menys del 20 per cent del nivell normal. El grup de farsa es va sotmetre a la mateixa operació; tanmateix, les artèries no estaven lligades. Després de 2 h d'oclusió, es van reperfondre les artèries lligades i les rates es van donar amb IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg o 80 mg/kg) o PBS diàriament durant 3 dies consecutius. Finalment, 72 h després de MCAO/R, es va avaluar la capacitat neurològica de les rates.

Avaluació del volum d'infart cerebral de rata

Després del tractament amb IAB, els cervells es van pesar ràpidament per mesurar el seu pes humit. Posteriorment, els cervells es van deshidratar a 100 graus durant 24 h per avaluar el seu pes sec. La concentració d'aigua al cervell es va calcular com: ((pes humit ‒ pes sec)/pes humit) × 100 per cent.

puntuació de gravetat neurològica modificada (mNSS)

Les funcions neurològiques sensorials, motores, d'equilibri i reflexes es van avaluar 72 h després de la cirurgia MCAO mitjançant mNSS.17 La gravetat dels dèficits neurològics es va classificar en una escala de 0 a 10, amb una puntuació més alta que indicava danys més greus al sistema nerviós.

Mesura de la superòxid dismutasa (SOD), malondialdehid (MDA), catalasa (CAT) i glutatió peroxidasa (GSH-PX)

Després del tractament amb IAB, es va determinar el contingut de proteïnes dels teixits cerebrals. La concentració de proteïnes dels homogeneïtats corticals es va determinar mitjançant kits de BCA (Beyotime, Xangai, Xina). El SOD, MDA, CAT i GSH-PX es van detectar mitjançant els kits corresponents (núm. de catàleg A003-1, A001-3, A007 i A005; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Xina). Breument, es va recollir el sobrenedant d'homogeneïtat cortical. Per a SOD, les mostres es van incubar amb una solució de treball WST-8/enzim a 37 graus durant 30 min. L'absorció es va mesurar a una longitud d'ona de 450 nm. Una unitat d'activitat enzimàtica (U) SOD es va definir com la quantitat de mostra necessària per aconseguir una taxa d'inhibició del 50% del colorant formazà WST-8. Per a MDA, les mostres es van barrejar amb una solució de treball i després es van escalfar a 100 graus durant 15 min. L'absorció del sobrenedant es va mesurar a una longitud d'ona de 532 nm. Per a CAT, les mostres es van barrejar amb tampó de detecció CAT i solució de peròxid d'hidrogen i després es van incubar a 25 graus durant 5 min. L'absorció es va detectar a una longitud d'ona de 520 nm. Per a GSH-PX, les mostres es van barrejar amb GSH a 37 graus durant 5 min. L'absorció del sobrenedant es va mesurar a una longitud d'ona de 412 nm. Es va definir una unitat (U) d'activitat enzimàtica com la quantitat de GSH-PX en 1 mg de proteïna que va catalitzar el consum d'1 μmol/L de GSH mentre deduïa l'efecte de la reacció no enzimàtica.

Tinció terminal de desoxinucleotidil transferasa dUTP nick end labeling (TUNEL).

Els teixits cerebrals de l'hemisferi ipsilateral es van aïllar, es van fixar en un 4% de paraformaldehid i es van incrustar en parafina. A continuació, es van tallar els teixits en rodanxes de 5- μm i es van exposar l'antigen després de 10 minuts d'escalfament al microones en tampó de citrat. L'apoptosi neuronal es va avaluar mitjançant l'assaig TUNEL (In Situ Cell Death Detection Kit; Roche, Penzberg, Alemanya), segons les instruccions del fabricant. En resum, es van col·locar rodanxes de cervell en paraformaldehid al 4% de gel durant 30 minuts i després es van incubar a les fosques amb la barreja de reacció TUNEL a 37 graus durant 1 h. Posteriorment, els nuclis es van tacar amb 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; Sigma-Aldrich). Es van fer imatges de mostres i es va calcular l'índex d'apoptosi com el nombre de cèl·lules positives per a TUNEL dividit pel nombre total de cèl·lules.

Western blot

Els teixits del cervell de rata es van lisar mitjançant un tampó d'assaig de radioimmunoprecipitació (RIPA) (Beyotime, Dalian, Xina). Les proteïnes es van sotmetre a electroforesi en gel de dodecilsulfat de sodi-poliacrilamida del 12 al 15% (SDS-PAGE) i després es van transferir a membranes de fluorur de polivinilidè (PVDF) (Millipore, Billerica, EUA). Les membranes es van bloquejar amb llet al 5% sense greix i es van incubar amb anticossos primaris a 4 graus durant la nit. Els anticossos secundaris conjugats a la peroxidasa de rave picant (HRP) es van incubar posteriorment a temperatura ambient durant 2 h. Es van detectar senyals específics de proteïnes marcades mitjançant un sistema de quimioluminescència. La -actina es va utilitzar per normalitzar els nivells d'expressió de proteïnes de Bcl-2, Bax i Sirtuin (SIRT1/3/6). Les imatges es van analitzar mitjançant el programari ImageJ.

Anàlisis estadístics

Les dades es presenten com a mitjana ± desviació estàndard (SD) de 3 experiments independents. Es va confirmar que les dades de cada grup seguien una distribució normal mitjançant la prova de Shapiro-Wilk. Les diferències entre grups es van analitzar mitjançant l'anàlisi unidireccional de la variància (ANOVA), seguida de la prova post hoc de Tukey amb el programari Prism v. 8 (GraphPad Software, San Diego, EUA). Un valor de p< 0.05 indicated="" statistical="" significance.="" a post="" hoc="" power="" analysis="" was="" performed="" using="" g*power="" 3.1.9.7="" software="" (heinrich="" heine="" university,="" düsseldorf,="">

Resultats

La isoastilbina protegeix les neurones de lesions induïdes per MCAO/R

Per explorar si l'IAB protegia neurones sotmeses a I/R cerebral, es va analitzar la concentració d'aigua al cervell i el volum de l'infart. En animals control, no hi va haver infart i la concentració d'aigua era relativament baixa (Fig. 1B, C; grup simulat). Després de la cirurgia MCAO/R, vam observar augments significatius en la mida de l'infart i la concentració d'aigua (Fig. 1B, C). L'infart i l'edema isquèmic indiquen que el nostre enfocament va generar amb èxit el model I/R en rates. Curiosament, quan vam aplicar diferents concentracions de IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg i 80 mg/kg) immediatament després de la lesió, vam observar una recuperació de l'infart i l'edema cerebral isquèmic depenent de la dosi (Fig. 1B, C). Aquest resultat suggereix que l'IAB protegeix contra el dany cerebral induït per la isquèmia. A continuació, vam examinar la cèl·lulaapoptosiutilitzant l'assaig mNSS. Tal com es mostra a la figura 1D, les rates operades per simulació no van mostrar dèficits neurològics evidents, mentre que les rates MCAO/R van mostrar un augment significatiu de les puntuacions de mNSS. D'acord amb els canvis morfològics que es mostren a la figura 1B i la figura 1C, el tractament amb IAB va disminuir significativament la puntuació mNSS de les rates MCAO/R (Fig. 1D). En conjunt, aquests resultats proporcionen proves que l'IAB té una funció neuroprotectora en un model de rosegador Vivo de lesió cerebral I/R. Atès que una concentració més alta d'IAB tenia millors efectes protectors sense efectes secundaris evidents, vam utilitzar 80 mg/kg per als experiments següents.

La isoastilbina atenua l'estrès oxidatiu en rates MCAO/R

Per avaluar la influència de l'IAB enestrès oxidatiu, es van avaluar els nivells de GHS-PX, MDA, SOD i CAT després del tractament amb IAB. A causa de l'augment de l'estrès oxidatiu, les rates sotmeses a MCAO/R tenien nivells més alts de MDA en comparació amb les rates simulades. Aquest efecte es va atenuar amb el tractament amb IAB (Fig. 2A). A més, els nivells de CAT, SOD i GHS-PX van disminuir en rates MCAO/R en comparació amb les rates simulades (Fig. 2B, D). El tractament amb IAB va elevar els nivells de CAT, SOD i GHS-PX en rates MCAO/R (Fig. 2B, D), cosa que suggereix que l'IAB va protegir contra lesions cerebrals I/R mitjançant l'atenuació de l'estrès oxidatiu.

La isoastilbina inhibeix l'apoptosi neuronal en rates MCAO/R

A continuació, vam utilitzar l'assaig TUNEL per avaluar neuronalapoptosidesprés d'una lesió cerebral I/R. Tal com es mostra a la figura 3A, hi va haver un augment del nombre de cèl·lules positives de TUNEL en rates MCAO/R, que es va reduir amb el tractament amb IAB (Fig. 3A). Per explorar els mecanismes subjacents de la protecció de l'IAB, vam examinar l'expressió de les proteïnes d'apoptosi Bax i Bcl-2 mitjançant Western blot. En rates sotmeses a MCAO/R, l'expressió de Bax (marcador pro-apoptòtic) es va regular a l'alça, mentre que la de Bcl-2 (marcador anti-apoptòtic) es va regular a la baixa, en comparació amb el grup simulat (Fig. 3B, C). ). Tanmateix, el tractament amb IAB va prevenir els canvis induïts per MCAO/R (Fig. 3B, C). Aquests resultats suggereixen que l'IAB va inhibir l'apoptosi neuronal en rates MCAO/R.

La isoastilbina regula l'expressió SIRT

A continuació, hem intentat examinar com l'IAB protegeix les neuronesestrès oxidatiu. S'ha trobat que la SIRT, una desacetilasa dependent de NAD plus localitzada principalment als mitocondris, s'associa amb la supervivència cel·lular i l'apoptosi, el metabolisme cel·lular i la resposta a l'estrès. El SIRT pot activar senyals i vies mitocondrials per promoure la proliferació de mitocondris i la generació d'ATP. També participa en la inflamació, de manera que la reducció de SIRT condueix a l'augment dels factors d'inflamació crònica, com l'activitat NFκB i RelA/p65.18–20 Curiosament, diversos estudis han trobat que SIRT exerceix un efecte protector neuronal i atenua l'oxidació. estrès en la fisiopatologia de la lesió cerebral I/R.21 Aquí, hem investigat l'expressió cerebral de SIRT1/3/6 en rates sotmeses a MCAO/R. Vam trobar que la lesió MCAO/R va disminuir els nivells de proteïnes de SIRT1/3/6, mentre que el tractament amb IAB va atenuar aquests efectes (Fig. 4A-D). Aquestes dades suggereixen que l'IAB podria ser protector en rates MCAO/R regulant l'expressió SIRT1/3/6 en protecció contra l'estrès oxidatiu.

Discussió

La concentració de ROS augmenta fins a un màxim, la qual cosa pot induir apoptosi o necrosi cel·lular.25–28 Hi ha diversos marcadors ben establerts d'estrès oxidatiu. Per exemple, MDA, un compost citotòxic produït per la peroxidació lipídica,29 augmenta en cardiomiòcits de rata després d'un dany per I/R.30 Els enzims antioxidants SOD, CAT i GHS-PX tenen un paper important en l'eliminació de superòxids i en la prevenció del dany oxidatiu.31, 32 A més, els canvis en l'activitat d'aquests enzims també estan relacionats amb l'estrès oxidatiu. L'atenuació de l'estrès oxidatiu és una manera potencial de protegir els teixits de lesions I/R.

Un estudi recent va demostrar que l'efecte neuroprotector de l'IAB podria ser degut a la modulació de l'estrès oxidatiu. Concretament, l'estudi va trobar que l'IAB va inhibir la generació de ROS i va induir SOD i GSH-PX per millorar el dany oxidatiu en un model d'AD de ratolí.15 No obstant això, encara no se sap si i com protegeix IAB contra lesions I/R al cervell. En el present estudi, vam demostrar que l'IAB atenua amb èxit la lesió cerebral I/R reduint el volum de l'infart i els dèficits neurològics després de la lesió MCAO/R. Per provar si els efectes de l'IAB es deuen a l'atenuació de les espècies ROS, vam mesurar diversos marcadors d'estrès oxidatiu. Es va trobar que el tractament amb isoastilbina després de MCAO/R disminueix els nivells de MDA, però augmenta l'activitat de CAT, SOD i GSH-PX. Aquests resultats suggereixen que el mecanisme subjacent de la neuroprotecció mediada per IAB contra la lesió I/R passa per la reducció de l'estrès oxidatiu.

De fet, l'I/R cerebral és capaç d'induir l'apoptosi de les neurones.33,34 L'activació de proteïnes pro-apoptòtiques (Bax i Bak) i la inactivació paral·lela de proteïnes anti-apoptòtiques (com ara Bcl-2) es va produir durant el cervell. Lesió I/R. Tant Bcl-2 com Bax es troben a la part exterior de la membrana mitocondrial i participen en la modulació de l'apoptosi cel·lular.35–37 Estudis anteriors han demostrat que la sobreexpressió de Bcl-2 bloqueja la mort neuronal in vitro i in vivo.38Erfani et al. va trobar que la relació Bax/Bcl-2 augmentava durant la lesió cerebral I/R, contribuint a l'apoptosi neuronal.39 A més, es va trobar la regulació a l'alça de Bax i la baixada de Bcl-2 en cervells de ratolins sotmesos a MCAO/R. 40 A més, s'ha trobat que l'IAB modula els nivells d'expressió de proteïnes tant de Bcl-2 com de Bax per millorar el sistema redox en ratolins amb MA, cosa que indica el paper anti-apoptòtic de l'IAB en aquesta condició.15 En l'actualitat. estudi, vam demostrar que l'administració d'IAB va reduir l'apoptosi neuronal induïda per I/R in vivo regulant Bax i augmentant Bcl-2. Aquestes troballes impliquen que la capacitat neuroprotectora de l'IAB depèn de la seva activitat anti-apoptòtica a les rates. Tanmateix, l'I/R també pot provocar necrosi, que no està mediada per l'estrès oxidatiu.25–28 És de gran interès examinar si la IAB també pot funcionar inhibint la necrosi per atenuar la lesió I/R.

Per examinar el mecanisme mitjançant el qual l'IAB atenua l'estrès oxidatiu, ens vam centrar en les proteïnes SIRT. Un informe anterior ha trobat que la sobreexpressió de SIRT3 inhibia la fissió mitocondrial per protegir contra lesions cerebrals I/R. A més, SIRT6 pot protegir el cervell contra danys I/R mitjançant la supressió de l'estrès oxidatiu.2 Aquí, vam descobrir que SIRT1/3/ 6 es va reduir significativament a les rates MCAO/R, mentre que l'administració d'IAB va augmentar l'expressió de SIRTl/3/6. Segons el que sabem, aquest estudi és el primer que demostra que l'IAB pot augmentar l'expressió de proteïnes SIRT1/3/6 per atenuar l'estrès oxidatiu i l'apoptosi neuronal induïda per una lesió cerebral I/R.

Limitacions

Hi ha moltes vies de protecció diferents contra l'estrès oxidatiu. Aquí, vam demostrar que el mecanisme de senyalització de la protecció IAB és a través de SIRT 1/3/6. Tanmateix, s'haurien d'aclarir encara més altres mecanismes contra l'estrès oxidatiu o la lesió cerebral I/R. Durant la lesió I/R, tant l'apoptosi com la necrosi estan implicades; tanmateix, només ens vam centrar en l'apoptosi. Per tant, seran necessàries més investigacions sobre el paper de l'IAB en la necrosi per explicar completament la funció protectora de l'IAB durant la lesió I/R.

Conclusions

Aquí, vam demostrar que l'IAB pot alleujar l'estrès oxidatiu i l'apoptosi de les neurones en rates sotmeses a I/R cerebral. A més, l'estrès antioxidant i les funcions anti-apoptòtiques de l'IAB podrien sorgir mitjançant la regulació de l'expressió SIRT1/3/6. En conjunt, les nostres dades suggereixen que l'IAB és un tractament candidat per a la lesió cerebral I/R.

ORCID ids Lifeng An  https://orcid.org/0000-0002-4835-1817 Dandan Zhu  https://orcid.org/0000-0001-9119-9956 Xin Zhang  https://orcid.org/0000-0002-9496-1691 Jingwen Huang  https://orcid.org/0000-0001-6449-5362 Guangbao Lu https://orcid.org/0000-0002-2465-8996

Lifeng An1,B,D, Dandan Zhu2,B, Xin Zhang2,C, Jingwen Huang1,C, Guangbao Lu1,A,F

1 Jiamusi College, Universitat de Medicina Xinesa de Heilongjiang, Xina

2 Escola de Postgrau, Universitat de Medicina Xinesa de Heilongjiang, Jiamusi, Xina

A – concepte i disseny de recerca; B – recollida i/o muntatge de dades; C – anàlisi i interpretació de dades;

D – escriure l'article; E – revisió crítica de l'article; F – Aprovació definitiva de l'article

Referències

1. Rossi DJ, Brady JD, Mohr C. Metabolisme i senyalització dels astròcits durant la isquèmia cerebral. Nat Neurosci. 2007;10(11):1377–1386. doi:10.1038/ nn2004
2. Ribeiro PW, Cola PC, Gatto AR, et al. Relació entre la disfàgia, la puntuació de l'escala d'ictus dels Instituts Nacionals de Salut i els predictors de pneumònia després d'un ictus isquèmic. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2015; 24(9):2088–2094. doi:10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2015.05.009
3. Hu X, De Silva TM, Chen J, Faraci FM. Malaltia vascular cerebral i lesió neurovascular en ictus isquèmic. Circ Res. 2017;120(3):449–471. doi:10.1161/circresaha.116.308427
4. Tabassum R, Vaibhav K, Shrivastava P, et al. L'alcohol peril·lílic millora els resultats funcionals i histològics contra la lesió per isquèmia-reperfusió mitjançant l'atenuació de l'estrès oxidatiu i la repressió de COX-2, NOS-2 i NF-κB en rates d'oclusió de l'artèria cerebral mitjana. Eur J Pharmacol. 2015;747:190–199. doi:10.1016/j.ejphar.2014.09.015
5. Woodruff TM, Thundyil J, Tang SC, Sobey CG, Taylor SM, Arumugam TV. Fisiopatologia, tractament i models animals i cel·lulars de l'ictus isquèmic humà. Mol Neurodegener. 2011;6(1):11. doi:10.1186/1750- 1326-6-11
6. Gonzalez-Rodriguez PJ, Xiong F, Li Y, Zhou J, Zhang L. La hipòxia fetal augmenta la vulnerabilitat de la lesió cerebral hipòxica-isquèmica en rates neonatals: paper dels receptors de glucocorticoides. Neurobiol Dis. 2014;65:172–179. doi:10.1016/j.nbd.2014.01.020
7. Rodrigo R, Fernández-Gajardo R, Gutiérrez R, et al. Estrès oxidatiu i fisiopatologia de l'ictus isquèmic: noves oportunitats terapèutiques. Objectius de fàrmacs del trastorn neuronal del SNC.2013;12(5):698–714. doi:10.2174/ 1871527311312050015
8. Zhang C, Ling CL, Pang L, et al. Lliurament directe de fàrmacs macromoleculars a l'àrea d'isquèmia cerebral mitjançant nanopartícules mediades per neutròfils. Teranòstics. 2017;7(13):3260–3275. doi:10.7150/thno.19979
9. Kahles T, Luedike P, Endres M, et al. La NADPH oxidasa té un paper central en el dany de la barrera hematoencefàlica en l'ictus experimental. Ictus. 2007;38(11):3000–3006. doi:10.1161/strokeaha.107.489765
10. Chen H, Song YS, Chan PH. La inhibició de la NADPH oxidasa és neuroprotectora després d'isquèmia-reperfusió. J Cereb Blood Flow Metab. 2009; 29(7):1262–1272. doi:10.1038/jcbfm.2009.47
11. Kapoor M, Sharma N, Sandhir R, Nehru B. Efecte de l'apocinina inhibidora de la NADPH oxidasa sobre la lesió de l'hipocamp per isquèmia-reperfusió al cervell de rata. Biomed Pharmacother. 2018;97:458–472. doi:10.1016/j. biopha.2017.10.123
12. Yu S, Wang C, Cheng Q, et al. Un component actiu dels polipèptids d'Achyranthes bidentata proporciona neuroprotecció mitjançant la inhibició de la via apoptòtica dependent dels mitocondris en neurones cultivades i en models animals d'isquèmia cerebral. PLoS One. 2014; 9(10):e109923. doi:10.1371/journal.pone.0109923
13. Geng HX, Li RP, Li YG, et al. 14,15-EET suprimeix l'apoptosi neuronal en isquèmia-reperfusió a través de la via mitocondrial. Neurochem Res.2017;42(10):2841–2849. doi:10.1007/s11064-017-2297-6
14. Du Q, Li L, Jerz G. Purificació d'astilbina i isoastilbina a l'extracte del rizoma smilax glabra mitjançant cromatografia a contracorrent d'alta velocitat. J Chromatogr A. 2005;1077(1):98–101. doi:10.1016/j.chroma. 072.04.2005
15. Yu H, Yuan B, Chu Q, Wang C, Bi H. Funcions protectores de la isoastilbina contra la malaltia d'Alzheimer mitjançant l'antioxidació i l'anti-apoptosi mediades per Nrf2-. Int J Mol Med.2019;43(3):1406–1416. doi:10.3892/ijmm. 2019.4058
16. Zhou X, Xu Q, Li JX, Chen T. Revisió estructural de dos glucòsids de flavanonol de Smilax glabra. Planta Med. 2009;75(6):654–655. doi:10. 1055/s-0029-1185360
17. Morimoto J, Yasuhara T, Kameda M, et al. L'estimulació elèctrica millora la capacitat migratòria de les cèl·lules estromals de medul·la òssia trasplantades en un model d'ictus isquèmic de rosegadors. Cell Physiol Biochem. 2018; 46(1):57–68. doi:10.1159/000488409
18. Torrens-Mas M, Pons DG, Sastre-Serra J, Oliver J, Roca P. El silenciament SIRT3 sensibilitza les cèl·lules canceroses de mama als tractaments citotòxics mitjançant un increment en la producció de ROS. J Cell Biochem. 2017;118(2):397–406. doi:10.1002/jcb.25653
19. Nassir F, Arndt JJ, Johnson SA, Ibdah JA. La regulació de la proteïna trifuncional mitocondrial modula la malaltia del fetge gras no alcohòlic en ratolins. J Lipid Res. 2018;59(6):967–973. doi:10.1194/jlr.M080952
20. Torrens-Mas M, Hernández-López R, Oliver J, Roca P, Sastre-Serra J. Sirtuin 3 silencining improves oxaliplatin efficacy through acetyla tion of MnSOD in colon cancer. J Cell Physiol. 2018;233(8):6067–6076. doi:10.1002/jcp.26443
21. Hernández-Jiménez M, Hurtado O, Cuartero MI, et al. El regulador d'informació silenciós 1 protegeix el cervell contra el dany isquèmic cerebral. Ictus. 2013;44(8):2333–2337. doi:10.1161/strokeaha.113.001715
22. Chen GY, Nuñez G. Inflamació estèril: detectar i reaccionar al dany. Nat Rev Immunol. 2010;10(12):826–837. doi:10.1038/nri2873
23. Eltzschig HK, Eckle T. Isquèmia i reperfusió: del mecanisme a la traducció. Nat Med. 2011;17(11):1391–1401. doi:10.1038/nm.2507
24. Dziedzic T. La inflamació sistèmica com a diana terapèutica en l'ictus isquèmic agut. Expert Rev Neurother.2015;15(5):523–531. doi:10.1586/ 14737175.2015.1035712
25. Yemisci M, Gursoy-Ozdemir Y, Vural A, Can A, Topalkara K, Dalkara T. La contracció del pericit induïda per l'estrès oxidatiu-nitratiu afecta el refluig capil·lar malgrat l'obertura reeixida d'una artèria cerebral oclusa. Nat Med. 2009;15(9):1031–1037. doi:10.1038/nm.2022
26. Chen H, Yoshioka H, ​​Kim GS, et al. L'estrès oxidatiu en el dany cerebral isquèmic: mecanismes de mort cel·lular i dianes moleculars potencials per a la neuroprotecció. Senyal antiòxid Redox. 2011;14(8):1505–1517. doi:10.1089/ars.2010.3576
27. Olmez I, Ozyurt H. Espècies reactives d'oxigen i malaltia cerebrovascular isquèmica. Neurochem Int. 2012;60(2):208–212. doi:10.1016/j. neuint.2011.11.009
28. Guo J, Cheng C, Chen CS, et al. La sobreexpressió de Fibulina-5 atenua la lesió per isquèmia/reperfusió després de l'oclusió de l'artèria cerebral mitjana en rates. Mol Neurobiol. 2016;53(5):3154–3167. doi:10.1007/s12035- 015-9222-2
29. Qiang M, Xu Y, Lu Y, et al. Autofluorescència de proteïnes modificades amb MDA com a sonda in vitro i in vivo en l'anàlisi de l'estrès oxidatiu. Cèl·lula proteica. 2014;5(6):484–487. doi:10.1007/s13238-014-0052-1
30. Hou S, Zhao MM, Shen PP, et al. Efecte neuroprotector dels àcids salvianòlics contra la lesió per isquèmia/reperfusió cerebral. Int J Mol Sci. 2016;17(7). doi:10.3390/ijms17071190
31. Adibhatla RM, Hatcher JF. Oxidació i peroxidació de lípids en la salut i la malaltia del SNC: des de mecanismes moleculars fins a oportunitats terapèutiques. Senyal antiòxid Redox. 2010;12(1):125–169. doi:10.1089/ ars.2009.2668
32. Staroń A, Mąkosa G, Koter-Michalak M. Estrès oxidatiu en eritròcits de pacients amb artritis reumatoide. Reumatol Int. 2012; 32(2):331–334. doi:10.1007/s00296-010-1611-2
33. Aşcı S, Demirci S, Aşcı H, Doğuç DK, Onaran İ. Efectes neuroprotectors de pregabalina sobre la isquèmia cerebral i la reperfusió. Balkan Med J. 2016;33(2):221–227. doi:10.5152/balkanmedj.2015.15742
34. Tao T, Li CL, Yang WC, et al. Efectes protectors del propofol contra la lesió total de la isquèmia/reperfusió cerebral en rates mitjançant la inhibició de la via del factor inductor de l'apoptosi. Brain Res.2016;1644: 9–14. doi:10.1016/j.brainres.2016.05.006
35. Martinou JC, Youle RJ. Mitocondris en apoptosi: membres de la família Bcl-2 i dinàmica mitocondrial. Cèl·lula de desenvolupament. 2011;21(1):92–101. doi:10.1016/j.devcel.2011.06.017
36. Borner C, Andrews DW. El porus apoptòtic dels mitocondris: estem trencant o seguim enganxats? La mort cel·lular difereix. 2014;21(2):187–191. doi:10.1038/cdd.2013.169
37. Siddiqui WA, Ahad A, Ahsan H. El misteri de la família BCL2: proteïnes Bcl-2 i apoptosi. Una actualització. Arch Toxicol. 2015;89(3):289–317. doi:10.1007/s00204-014-1448-7
38. Maes ME, Schlamp CL, Nickells RW. BAX als conceptes bàsics: com la família de gens BCL2 controla la mort de les cèl·lules ganglionars de la retina. Prog Retin Eye Res. 2017;57:1–25. doi:10.1016/j.preteyeres.2017.01.002
39. Erfani S, Khaksari M, Oryan S, Shamsaei N, Aboutaleb N, Nikbakht F. Nampt/PBEF/visfatin exerceix efectes neuroprotectors contra la lesió per isquèmia/reperfusió mitjançant la modulació de la relació Bax/Bcl-2 i la prevenció de la caspasa{{ {2}} activació. J Mol Neurosci. 2015;56(1):237–243. doi:10.1007/s12031-014-0486-1

40. Chen L, Cao J, Cao D, et al. Efecte protector de la dexmedetomidina

contra la lesió de reperfusió/isquèmia cerebral exacerbada per la hiperglucèmia diabètica: un estudi in vivo i in vitro, Life Sdi,2019:235:116553.doi; 10.1016/ilfs.2019116553

41. Zhao H, Luo Y, Chen L, et al. Sirt3 inhibeix la lesió per isquèmia-reperfusió cerebral mitjançant la normalització de la via Wnt/-catenina i el bloqueig de la fissió mitocondrial. Chaperones d'estrès cel·lular. 2018;23(5):1079–1092. doi:10.1007/s12192-018-0917-y

42. Zhang W, Wei R, Zhang L, Tan Y, Qian C. Sirtuin 6 protegeix el cervell de lesions per isquèmia/reperfusió cerebral mitjançant l'activació de NRF2. Neurociència.2017;366:95–104. doi:10.1016/j.neuroscience.2017.09.035