3. Resultats

3.1. KRG va inhibir l'activitat TYR i va suprimir el contingut de melanina al sistema lliure de cèl·lules

L'enzim TYR participa en l'etapa limitant la velocitat de la melanogènesi [20,21]. Per tant, per comprovar si KRG va ser capaç de suprimir la producció d'aquest enzim, vam realitzar un assaig TYR de bolets sense cèl·lules. Com es mostra a la figura 1A, KRG va inhibir potentment la producció de TYR. Les cèl·lules B16/F10 es van tractar amb KRG i es van estimular amb a-MSH per induir la secreció de melanina, i es va trobar que era suprimida de manera eficient per KRG, tal com es mostra a la figura 1B. L'àcid kòjic, un agent blanquejador conegut, es va utilitzar com a control positiu en ambdós experiments.

Segons estudis rellevants, el cistanche és una herba comuna que es coneix com "l'herba miracle que allarga la vida". El seu component principal és el cistanòsid, que té diversos efectes com ara la promoció de la funció antioxidant, antiinflamatòria i immune. El mecanisme entre el cistanche i el blanqueig de la pell rau en l'efecte antioxidant dels glucòsids de cistanche. La melanina a la pell humana es produeix per l'oxidació de la tirosina catalitzada per la tirosinasa, i la reacció d'oxidació requereix la participació de l'oxigen, de manera que els radicals lliures d'oxigen del cos es converteixen en un factor important que afecta la producció de melanina. Cistanche conté cistanòsid, que és un antioxidant i pot reduir la generació de radicals lliures al cos, inhibint així la producció de melanina.

Feu clic a Beneficis de les tauletes Cistanche

Per a més informació:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

3.2. Efectes de KRG sobre l'ARNm i les expressions de proteïnes de MITF i TRP

Els resultats esmentats anteriorment van indicar els efectes de KRG sobre el contingut de TYR i melanina. Tanmateix, per dilucidar el mecanisme d'inhibició de la melanina per part del KRG, vam avaluar la transcripció i traducció de gens relacionats amb la via de la melanogènesi: TRP-1 i TRP-2, TYR i factor de transcripció associat a la microftàlmia (MITF). ). Com es mostra a les figures 2A i B, els quatre components de la via de la melanogènesi van ser fortament inhibits per KRG. Per tant, es va confirmar KRG com un agent blanquejador eficaç en l'estudi in vitro.

3.3. Efecte de la suplementació oral de KRG sobre el pes corporal i la ingesta d'aliments

L'exposició a UVB artificial indueix estrès en els animals, que pot provocar una pèrdua de gana; per tant, vam avaluar la ingesta dietètica i l'eficiència dietètica dels ratolins HRM-2 exposats a UVB durant 5 setmanes, tractats amb protector solar i administrats per via oral KRG. Com es mostra a la figura 3A, no hi va haver cap canvi significatiu en el pes corporal en els grups normals, de control UVB o de tractament. També es va trobar que la ingesta d'aliments augmentava significativament en els grups de control positiu i tractats amb KRG, tal com es mostra a la figura 3B. Aquests resultats mostren que, tot i que els UVB van induir estrès en ratolins, el tractament amb KRG va prevenir eficaçment la pèrdua de gana i pes en els ratolins.

3.4. Anàlisi de l'expressió de gens relacionats amb les arrugues en ratolins HRM-2 irradiats amb UVB

Per mesurar l'efecte del KRG en la formació d'arrugues de la pell, els ratolins HRM-2 van ser irradiats amb UVB per induir les arrugues. Després de 5 setmanes d'irradiació, es van aïllar els teixits de la pell i es va analitzar l'expressió dels gens relacionats amb les arrugues (és a dir, IL-1b, MMP-2 i MMP{- 9). Com es mostra a les figures 4A i B, l'expressió de proteïnes de MMP-2, determinada per ELISA, i l'expressió d'ARNm, determinada per PCR en temps real, van ser significativament més baixes en el grup de control positiu i el tractament amb KRG. grups que els del grup control irradiat amb UVB. Els nivells de MMP-9 i IL{-1b també es van reduir significativament en els grups tractats amb KRG en comparació amb el grup control irradiat amb UVB, tal com es mostra a la PCR en temps real (Fig. 4C i D).

3.5. Efectes de KRG sobre la melanogènesi en danys a la pell irradiats amb UVB

Per confirmar l'eficàcia de blanqueig de KRG, es va examinar la diferència en la formació de melanina a les setmanes 1, 3 i 5 d'irradiació UVB dividint la pell dorsal dels ratolins HRM-2 en esquerra (no tractada) i dreta (UVB). i seccions tractades amb mostra). Tal com es mostra a la figura 5A, durant la setmana 1 d'exposició dels ratolins a UVB amb el tractament de protecció solar i KRG, no hi va haver una disminució significativa de la producció de melanina en ambdues dosis de KRG. A la setmana 3, hi va haver una disminució menor de la producció de melanina en el grup de control positiu tractat amb protector solar i els grups KRG en comparació amb el grup control irradiat amb UVB, tal com es mostra a la figura 5B. A la setmana 5, com es mostra clarament a la figura 5C, el grup tractat amb protector solar de control positiu i els dos grups tractats amb KRG van mostrar una disminució significativa de la producció de melanina. Aquests resultats van indicar que KRG era un agent eficaç per blanquejar la pell.

3.6. Anàlisi dels efectes del KRG sobre la formació d'arrugues en ratolins HRM-2

Per determinar els efectes del KRG sobre la formació i la profunditat de les arrugues, es van irradiar ratolins HRM-2 amb UVB per induir el fotoenvelliment i es va mesurar la profunditat de les arrugues de la pell mitjançant un analitzador 3D, tal com es descriu a Materials i mètode. secció (2.11), a les setmanes 3, 4 i 5. Com es mostra a les figures 6A i B, el grup tractat amb protector solar de control positiu i els dos grups tractats amb KRG van mostrar disminucions significatives en la formació i la profunditat d'arrugues.

3.7. Efecte del KRG sobre la disminució del gruix epidèrmic i l'augment del col·lagen

La radiació UV pot augmentar el gruix epidèrmic, fent que la pell es torni més gruixuda i rugosa. A més, l'exposició contínua a UVB pot degradar els MMP i provocar una pèrdua de col·lagen, que és essencial per a una bona salut de la pell [22]. Com es mostra a la figura 7A, el gruix epidèrmic induït per UVB es va reduir potentment pel grup tractat amb protector solar de control positiu i amb els dos grups tractats amb KRG. A més, a la figura 7B, es mostra que el gruix epidèrmic, tal com es visualitza per la tinció d'hematoxilina i eosina, es va reduir en el grup tractat amb protector solar de control positiu i en els dos grups tractats amb KRG. La tinció de tricoma de Masson, realitzada per visualitzar els components de la matriu a la pell de ratolins HRM-2, va revelar una intensitat de tinció reduïda en el grup control irradiat amb UVB com a resultat de la degradació de les fibres de col·lagen; per contra, en els ratolins tractats amb protecció solar i ambdues dosis de KRG, la intensitat de la tinció va augmentar dràsticament en comparació amb el grup control UVB (Fig. 7C). Aquests resultats van demostrar clarament que KRG és un tractament segur i eficaç amb efectes blanquejants i anti-envelliment de la pell.

3.8. Efectes de la crema de ginseng vermell sobre la pell humana

L'elasticitat de la pell (també anomenada resiliència) es va mesurar tal com es mostra a la taula 1. Es va observar un augment mitjà de la resiliència de 0.03386 en el grup experimental que va rebre l'aplicació de la crema que contenia un 3% de vermell. ginseng. El grup control, que va rebre crema sense ginseng, va mostrar un augment mitjà de la resistència de 0,0255.

El contingut d'oli del grup experimental es va augmentar fins al 67,8 per cent en comparació amb el grup control, en el qual el contingut d'oli era del 45,6 per cent, tal com es mostra a la taula 2. En detall, els resultats van mostrar que el contingut d'oli va augmentar en un 50 per cent en tots els casos. grups experimentals: 46,6% a l'hemisferi, 25,4% a la galta esquerra i 32,6% en general.

El contingut d'humitat es va reduir tant en el grup control com en el grup experimental, tal com es mostra a la taula 3. Es va considerar que això era atribuïble al canvi de les condicions meteorològiques entre octubre i novembre a la República de Corea.

El canvi de to de pell en el grup experimental va ser una disminució mitjana de 8,24; per contra, el grup control va mostrar un augment de 2,12 (taula 4). En detall, es va augmentar el to de pell del front tant en el grup control com en el grup experimental. En el grup experimental, el to de la pell va disminuir tant a la galta dreta com a la galta esquerra; per contra, en el grup control, el seu to de pell va augmentar tant al front com a la galta dreta, la qual cosa indicava que la pell s'havia enfosquit. Per tant, concloem que la crema de ginseng va disminuir la tendència de la pell a perdre el seu color; en altres paraules, va millorar l'efecte il·luminador.

L'eritema mitjà de la pell es va reduir en 33,8 en el grup experimental i en 3,6 en el grup control (taula 5). Aquests resultats suggereixen fortament els efectes positius de l'extracte de ginseng vermell en la millora de l'estat general de la pell sense induir cap efecte secundari.

4. Discussió

Els melanòcits són les cèl·lules especialitzades productores de melanina que es troben a la capa basal de l'epidermis. Aquestes cèl·lules estan implicades en la producció i transport de melanina als queratinòcits veïns i la consegüent formació d'una capa uniforme de pigmentació de la pell. La melanina és un pigment essencial que compleix dues funcions. La primera funció, i la més important, és pigmentar la pell, i la segona funció és protegir la pell de la radiació UV nociva mitjançant la disminució del nombre d'espècies reactives d'oxigen [23,24]. Quan la pell està exposada als UV, s'activa l'hormona a-MSH, que provoca la producció de melanina a partir dels melanòcits [25]. Els reguladors clau de tot aquest procés de producció de melanina són MITF, un factor transcripcional per a la regulació de TYR, i proteïnes relacionades amb la tirosina (TRP-1 i TRP{-2) [4,26e28]. Aquests components estan implicats en la producció de melanina i en la pigmentació de la pell.

L'envelliment de la pell es pot classificar a grans trets en dos tipus [29]. L'envelliment intrínsec (o endogen) és un fenomen d'envelliment inevitable que es produeix amb l'envelliment humà. Les característiques clíniques d'aquest tipus d'envelliment són relativament lleus i inclouen línies fines, pell seca i elasticitat reduïda [30]. El fotoenvelliment (envelliment exògen) fa referència al fenomen d'envelliment observat a la pell exposada a la llum solar durant molt de temps. L'element responsable del dany és els UVB a la llum solar. Aquest tipus de fotoenvelliment es pot prevenir mitjançant l'aplicació d'un protector solar disponible comercialment abans de sortir al sol i minimitzant el temps d'exposició al sol. Les característiques clíniques de l'envelliment exògen són perjudicials, com ara pell molt rugosa, seca amb elasticitat reduïda i formació d'arrugues profundes amb flacciditat severa de la pell. La pell fotoenvellida també és molt propensa a malalties de pigmentació, com el lentigo solar [31,32].

A més, quan la pell està sobreexposada a la llum solar que conté UVB, la quantitat de MMP extracel·lulars augmenta, provocant la degradació de les proteïnes de la matriu, de les quals el col·lagen és un component principal [33]. El col·lagen s'accepta globalment com un element necessari per a l'elasticitat de la pell, i se sap que la seva degradació provoca la formació precoç d'arrugues i redueix l'elasticitat de la pell. Després de l'exposició a UVB, els augments de les MMP degraden el col·lagen i altres proteïnes de substrat [34]. Així doncs, es tracta d'un tipus de ferida infligida per la radiació solar a la pell, i el nostre cos fa esforços per curar les ferides mitjançant la síntesi de nou col·lagen. Tanmateix, com que el procés de cicatrització de ferides no sempre és perfecte, l'exposició contínua de la pell als UVB donarà lloc a símptomes clínics d'envelliment, incloses les arrugues.

Tot i que els melanòcits alliberen un gran nombre de components solubles, la prostaglandina E2, la prostaglandina F2a, l'hormona adrenocorticotròpica i el NO es consideren reguladors de la melanogènesi [35-38]. Tanmateix, els efectes de les citocines sobre el procés de melanogènesi són força complicats. Per exemple, entre la família IL, IL-1a/1b i els factors estimulants de colònies de granulòcits i macròfags estan implicats en l'estimulació de la melanogènesi; tanmateix, IL-6, el factor de creixement transformant beta 1 (TGF-b1) i el factor de necrosi tissular a (TNF-a) suprimeixen la producció de melanina. Els nostres resultats van mostrar que la IL-1b va augmentar en el grup control irradiat amb UVB, però es va reduir significativament amb el tractament amb KRG. En conclusió, la crema KRG i KRG van mostrar potents propietats anti-melanogèniques i blanquejadores de la pell i es poden convertir en un agent cosmètic disponible comercialment.

Conflictes d'interès

Agraïments

Annex A. Dades complementàries

Referències

[1] Brenner M, Audiència VJ. El paper protector de la melanina contra els danys UV a la pell humana. Photochem Photobiol 2008;84:539e49.

[2] Kim DS, Jeong YM, Park IK, Hahn HG, Lee HK, Kwon SB, Jeong JH, Yang SJ, Sohn UD, Park KC. Un nou 2-imino-1,3-derivat de tiazolina, KHG22394, inhibeix la síntesi de melanina a les cèl·lules de melanoma B16 del ratolí. Biol Pharm Bull 2007;30:180e3.

[3] Kim DS, Kim SY, Park SH, Choi YG, Kwon SB, Kim MK, Na JI, Youn SW, Park KC. Efectes inhibidors del 4-n-butil resorcinol sobre l'activitat de la tirosinasa i la síntesi de melanina. Biol Pharm Bull 2005;28:2216e9.

[4] Kim HR, Kim H, Jung BJ, You GE, Jang S, Chung DK. L'àcid lipoteicoic aïllat de Lactobacillus plantarum inhibeix la melanogènesi a les cèl·lules de melanoma de ratolí B16F10. Mol Cells 2015;38:163e70.

[5] Goldstein B. Ginseng: la seva història, dispersió i tradició popular. Am J Chin Med (Gard City NY) 1975;3:223e34.

[6] Chevallier A. Enciclopèdia de plantes medicinals. Sant Lleonard. Nova Gal·les del Sud: Dorling Kindersley pty limited; 1996.

[7] Kim BM, Kim DH, Park JH, Na HK, Surh YJ. El ginsenòsid Rg3 indueix l'apoptosi de cèl·lules de càncer de mama humà (MDA-MB-231). J Cancer Prev 2013;18:177e85.

[8] Kim EK, Lee JH, Cho SH, Shen GN, Jin LG, Myung CS, Oh HJ, Kim DH, Yun JD, Roh SS. Preparació del ginseng Panax negre mitjançant nous mètodes i la seva activitat antitumoral. The Korea Journal of Herbology 2008;23:85e92.

[9] Saba E, Jeong DH, Roh SS, Kim SH, Kim SD, Kim HK, Rhee MH. Els extractes de Chong-Myung-Tang enriquits amb ginseng negre milloren el comportament d'aprenentatge espacial en rates i provoquen efectes antiinflamatoris in vitro. J Ginseng Res 2017;41:151e 8.

[10] Saba E, Kim SH, Kim SD, Park SJ, Kwak DM, Oh JH, Park CK, Rhee MH. Alleujament de les complicacions de la diabetis amb l'extracte de ginseng vermell enriquit amb ginsenòsid Rg3-en ratolins/LDLe alimentats amb dieta occidental. J Ginseng Res 2017;42:352e5.

[11] Saba E, Son Y, Jeon BR, Kim SE, Lee IK, Yun BS, Rhee MH. Àcid acetil eburicoic de laetiporus sulfurous var. miniatures suprimeix la inflamació a les cèl·lules RAW 264.7 de macròfags murins. Micobiologia 2015;43:131e6.

[12] Dai D, Zhang CF, Williams S, Yuan CS, Wang CZ. Ginseng sobre el càncer: paper potencial en la modulació de l'angiogènesi mediada per la inflamació. Am J Chin Med 2017;45:13e22.

[13] Saba E, Jeon BR, Jeong DH, Lee K, Goo YK, Kim SH, Sung CK, Roh SS, Kim SD, Kim HK, et al. L'extracte de ginseng negre millora la hipercolesterolèmia en rates. J Ginseng Res 2016;40:160e8.

[14] Christensen LP. Química dels ginsenòsids, biosíntesi, anàlisi i efectes potencials sobre la salut. Adv Food Nutr Res 2009;55:1e99.

[15] Song M, Mun JH, Ko HC, Kim BS, Kim MB. Pols de ginseng vermell coreà en el tractament del melasma: un estudi observacional incontrolat. J Ginseng Res 2011;35:170e5.

[16] Cabanes J, Chazarra S, Garcia-Carmona F. L'àcid kòjic, un agent cosmètic per blanquejar la pell, és un inhibidor d'unió lenta de l'activitat de la catecolasa de la tirosinasa. J Pharm Pharmacol 1994;46:982e5.

[17] Bissett DL, Hannon DP, Orr TV. Un model animal de pell en edat solar: canvis histològics, físics i visibles en la pell del ratolí sense pèl irradiada amb UV. Photochem Photobiol 1987;46:367e78.

[18] Cardiff RD, Miller CH, Munn RJ. Tinció manual d'hematoxilina i eosina de seccions de teixit de ratolí. Cold Spring Harb Protoc 2014;2014:655e8.

[19] Chang JY, Kessler HP. La tinció de tricrom de Masson ajuda a diferenciar el miofibroma de les lesions musculars llises a la regió del cap i el coll. J Formos Med Assoc 2008;107:767e73.

[20] Ohguchi K, Tanaka T, Iliya I, Ito T, Iinuma M, Matsumoto K, Akao Y, Nozawa Y. Gnetol com a potent inhibidor de la tirosinasa del gènere Gnetum. Biosci Biotechnol Biochem 2003;67:663e5.

[21] Yokota T, Nishio H, Kubota Y, Mizoguchi M. L'efecte inhibidor de la glabridina dels extractes de regalèssia sobre la melanogènesi i la inflamació. Pigment Cell Res 1998;11:355e61.

[22] Jablonska-Trypuc A, Matejczyk M, Rosochacki S. Metaloproteinases de matriu (MMPs), els principals enzims de la matriu extracel·lular (ECM) en la degradació del col·lagen, com a objectiu de fàrmacs anticancerígens. J Enzyme Inhib Med Chem 2016;31: 177e83.

[23] Englaro W, Bertolotto C, Brunet A, Pagès G, Ortonne JP, Ballotti R. Inhibition of the mitogen-activated protein kinase pathway triggers B16 melanoma cell diferenciation. Journal of Biological Chemistry 1998;273:9966e70.

[24] Tam I, Stepien K. Melanòcits-cèl·lules pigmentades immunocompetents. Postepy Dermatologii I Alergologii 2007;24:188.

[25] Lee HJ, Lee WJ, Chang SE, Lee GY. L'hesperidina, un antioxidant popular inhibeix la melanogènesi mitjançant la degradació MITF mediada per erk1/2-. Int J Mol Sci 2015;16: 18384e95.

[26] Hu YH, Liu X, Jia YL, Guo YJ, Wang Q, Chen QX. Cinètica inhibidora dels àcids clorocinàmics sobre la tirosinasa de bolets. J Biosci Bioeng 2014;117:142e6.

[27] Masamoto Y, Ando H, Murata Y, Shiraishi Y, Tada M, Takahata K. Activitat inhibidora de la tirosinasa de bolets de l'esculetina aïllada de llavors d'Euphorbia lathyris L. Biosci Biotechnol Biochem 2003;67:631e4.

[28] Wu M, Hemesath TJ, Takemoto CM, Horstmann MA, Wells AG, Price ER, Fisher DZ, Fisher DE. c-Kit desencadena fosforilacions duals, que acoblen l'activació i la degradació del factor essencial dels melanòcits Mi. Genes Dev 2000;14:301e12.

[29] Tobin DJ. Introducció a l'envelliment de la pell. Journal of Tissue Viability 2017;26:37e 46.

[30] Helfrich YR, Sachs DL, Voorhees JJ. Visió general de l'envelliment de la pell i el fotoenvelliment. Dermatol Nurs 2008;20:177e83. prova 184.

[31] Fisher GJ, Kang S, Varani J, Bata-Csorgo Z, Wan Y, Datta S, Voorhees JJ. Mecanismes de fotoenvelliment i envelliment cronològic de la pell. Arxius de Dermatologia 2002;138:1462e70.

[32] El-Domyati M, Attia S, Saleh F, Brown D, Birk D, Gasparro F, Ahmad H, Uitto J. Envelliment intrínsec vs fotoenvelliment: un estudi histopatològic, immunohistoquímic i ultraestructural comparatiu de la pell. Dermatologia experimental 2002;11:398e405.

[33] Brennan M, Bhatti H, Nerusu KC, Bhagavathula N, Kang S, Fisher GJ, Varani J, Voorhees JJ. La metaloproteinasa de la matriu-1 és el principal enzim col·lagenolític responsable del dany del col·lagen a la pell humana irradiada amb UV. Fotoquímica i Fotobiologia 2003;78:43e8.

[34] Quan T, Qin Z, Xia W, Shao Y, Voorhees JJ, Fisher GJ. Metaloproteinases que degraden la matriu en el fotoenvelliment. J Investig Dermatol Symp Proc 2009;14:20e4.

[35] Gillbro JM, Olsson MJ. La melanogènesi i els mecanismes dels agents llamps de la pell: enfocaments existents i nous. Int J Cosmet Sci 2011;33:210e21.

[36] Roméro-Graillet C, Aberdam E, Clément M, Ortonne JP, Ballotti R. L'òxid nítric produït pels queratinòcits irradiats amb ultraviolat estimula la melanogènesi. Journal of Clinical Investigation 1997;99:635.

[37] Wakabayashi Y, Nakajima H, Imokawa G. L'efecte abrogant dels modificadors d'hidrats de carboni lligats a N sobre el factor de cèl·lules mare i l'endotelina-1-va estimular la pigmentació epidèrmica en equivalents epidèrmics humans. Journal of Dermatological Science 2013;69:215e28.

[38] Desenvolupament de melanòcits de Mizoguchi M.: amb un missatge d'encoratjament a les joves científiques. Pigment Cell Res 2004;17:533e44.

Per a més informació: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501