L'esgotament dels macròfags redueix la patologia de la malaltia en la glomerulonefritis Ⅱ mediada pel complex immune dependent del factor H
Jan 18, 2024
3. Resultats
Vam induir CSS en ratolins mitjançant immunització repetitiva amb apoferritina de melsa de cavall. Els animals generen una immunitat humoral IgG antiapoferritina activaresposta i dipositar IgG als glomèruls. Els nostres estudis anteriors van revelar que hi ha un augment de Mϕinfiltració als ronyonsen aquest entorn.
3.1. L'expressió gènica dels macròfags augmenta en els ronyons ICGN dependents de FH. Per avaluar la presència de Mϕs en els ronyons ICGN dependents de FH, es va realitzar qRT-PCR amb marcadors de macròfags M2, CD204 (receptor 1 del depurador Mϕ) i CD206 (receptor de manosa Mϕ 1) [21–24]. L'expressió d'ambdós gens al ronyó es va regular significativament després del tractament amb apoferritina en ratolins FHKO (figura 1), cosa que indica unaugment de la presència de macròfags al ronyó.
FEU CLIC AQUÍ PER OBTENIR EXTRACTE DE CISTANX ORGÀNIC NATURAL AMB 25% ECHINACOSIDE I 9% ACTEOSIDE PER A LA FUNCIÓ RENOLÓ
Servei de suport de Wecistanche: el major exportador de cistanche a la Xina:
Correu electrònic:wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel:+86 15292862950}
Compreu per obtenir més detalls de les especificacions:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
3.2. Canvis de temps per tractament amb clodronat en la infiltració de macròfags renals en ratolins FHKO tractats amb apoferritina. Per determinar el mètode eficaç de reduir Mϕs en ICGN depenent de FH, hem esgotat Mϕs en ratolins fh-/-
Figura 3: Dades complementàries. Es donen els perfils de citometria de flux dels monòcits F4/80+ dels ratolins control i tractats amb clodronat. Les cèl·lules F4/ 80+ es redueixen significativament arribant a menys del 10% amb el tractament amb clodronat. Cada punt temporal n=6.
3.4. L'esgotament dels macròfags redueix el glomerular
Patologia en ICGN mediat per FH. Al final de l'experiment es van avaluar els dipòsits de complexos immunitaris al ronyó i les característiques histopatològiques de l'ICGN. La tinció d'immunofluorescència per a C3 i IgG va revelar que l'esgotament de Mϕ no modulava els complexos immunitaris en aquest entorn. La tinció i la histopatologia d'immunofluorescència representatives es mostren a la figura 5. La característica histopatològica principal era la hipercel·lularitat difusa dels flocs glomerulars en ratolins fh-/- amb CSS es va reduir significativament en l'esgotament de Mϕs.
3.5. Els macròfags modulen les citocines en ICGN dependent de FH.
Un cop Mϕsinfiltrar-se al ronyói estan exposats a estímuls inflamatoris, alliberen citocines. Es van avaluar, mitjançant ELISA, els nivells de TNF i IL{0}} circulants en plasma i el mCSF del ronyó en ratolins FHKO tractats amb solució salina, apoferritina o apoferritina i clodronat. Els nivells circulants d'IL-6 eren molt baixos en els ratolins de tipus salvatge i van augmentar en els ratolins FHKO i es van reduir en els ratolins FHKO tractats amb clodronat (figura 6). Les tres citocines, TNF, IL-6 i mCSF van augmentar significativament en els ratolins tractats amb apoferritina en comparació amb els controls tractats amb solució salina. L'esgotament de Mϕ per clodronat va limitar significativament l'augment de citocines en aquest entorn
3.6. Els macròfags modulen profibròtics
Molècules i laminina en ICGN dependent de FH. Un cop elels ronyons desenvolupen una malaltia, tendeixen a esdevenir fibròtiques. Els Mϕ participen en el procés fibròtic sobreproduint molècules profibròtiques. La PCR en temps real va revelar un augment del 75% en l'expressió d'ARNm del factor de creixement transformant beta1 (TGFbeta1), un augment del 100% de l'expressió de metaloproteinasa -9 (MMP9) i un augment del 230% de l'ARNm de laminina. D'acord amb l'expressió de l'ARNm, l'expressió de proteïna de laminina augmenta significativament en els ratolins fh-/- amb CSS, que es va reduir en absència de Mϕs (figura 7).
4. Discussió
Els nostres estudis recents han demostrat que en absència de FH, els ratolins es desenvolupen difusosglomerulonefritis proliferativa(GN) amb F4/80+ Mϕs al voltant dels llocs d'IC [10]. A més, els nostres estudis demostren que els ratolins Cd11b-/- fh-/- tenen característiques agreujades de la glomerulonefritis [26]. Atès que la presència de macròfags M1 inflamatoris augmentats i la seva activació sostinguda podria causar patologia dels teixits, i la seva repolarització en el fenotip antiinflamatori ajudaria a resoldre la patologia de la malaltia, l'estudi actual es va dur a terme per entendre millor el paper dels Mϕs en fh. -/- ratolins amb ICGN. L'augment de la presència de Mϕs al ronyó i la resolució de la patologia de la malaltia per l'esgotament dels macròfags durant l'ICGN mediat per FH demostren el paper crític dels Mϕs en aquest entorn i, per tant, podrien servir com a objectius terapèutics importants en aquest entorn.
Figura 5: l'esgotament de Mϕs redueix la patologia glomerular en ICGN dependent de FH. Es donen imatges representatives de glomèruls de ratolins amb deficiència de FH tractats amb solució salina (a), tractats amb apoferritina (b) i tractats amb apoferritina + clodronat. A (A), les seccions es tenyeixen amb C3 (verd) i IgG (vermell), mentre que (B) mostra les seccions tenyides amb PAS. Els dipòsits d'IgG que es van augmentar amb el tractament amb apoferritina es van mantenir sense canvis, mentre que els glomèruls semblaven més a prop de la normalitat amb l'esgotament dels macròfags.
L'absència de FH condueix a un augment de la producció de C5a. C5a s'uneix a C5aR1 senyalitzant Mos al ronyó on s'afegeixen al medi inflamatori. A més, els nostres estudis també van demostrar que en aquest entorn de generació excessiva de C5a, la inactivació de C5a sembla limitar la malaltia [10]. L'activació de Mos fa que es polaritzan, però romanen en un estat de continu [27]. Els nostres resultats en aquest estudi mostren que la malaltia glomerular en CSS es va reduir en ratolins fh-/- en els quals es van esgotar els Mϕ en comparació amb els ratolins fh-/- sense esgotament dels macròfags. Així, l'eliminació de l'ICGN alleviada de Mϕ en ratolins fh-/- redueix la patologia de la malaltia. Tanmateix, els Mϕ també són necessaris per al procés de reparació, i com que els Mϕ canvien d'estat d'estats pro- a antiinflamatoris i viceversa, serà el nostre esforç futur entendre si alterar el paisatge de Mϕ sense esgotar-los podria alterar la patologia de la malaltia.
Els Mϕ tenen un paper important en l'inici i el manteniment de la fibrosi i també estan implicats en la supressió, resolució i reversió de la fibrosi [28]. Els nostres resultats mostren una major expressió dels marcadors CD204+ i CD206+ Mϕ que suggereixen la seva presència més gran en aquest entorn. Com que aquests Mϕ són una font important de molècules profibròtiques, els nostres resultats que mostren un augment de TGF -1 així com de MMP9 suggereixen que aquests Mϕ podrien estar contribuint tant directament com indirectament als processos fibròtics en ICGN mediat per FH mitjançant diferents mecanismes ( 1,3,8,44). El TGF -1 pot alterar la fibrosi mitjançant la regulació de citocines. A més, el TGF -1 modula la biosíntesi i l'expressió del C3 i del factor B als monòcits [29], i l'alteració del complement a les cèl·lules immunitàries i a les cèl·lules renals pot facilitar la fibrosi dels teixits [30]. Tanmateix, cal desxifrar les interaccions exactes entre els macròfags i el complement, els mecanismes implicats, els seus rols i la compartimentació dels teixits [31]. Els nostres estudis van mostrar una expressió reduïda de laminina en ratolins esgotats amb Mϕs en comparació amb ratolins suficients amb Mϕ. Per entendre millor com la FH regula el procés fibròtic, hem d'identificar els subconjunts específics de Mϕ que estan presents a l'ICGN mediat per FH i dilucidar les contribucions de cada subconjunt de població. Aquests estudis són importants ja que les terapèutiques complementàries s'han convertit en una realitat clínica. S'han desenvolupat i es continuen desenvolupant inhibidors contra diferents dianes de la cascada del complement que bloquejaran els passos aigües avall de les vies d'activació. Actualment, un dels inhibidors del complement en ús clínic és l'anticossos anti-C5, Eculizumab [32]. Per tant, identificar els components patògens del complement en la malaltia i complementar-ho amb la regulació de la població Mϕs no és un punt trivial.
Figura 7: Deposició de laminina aRonyons amb deficiència de FHamb ICGN es redueix per l'esgotament de Mϕs. ( a ) qRT-PCR per a TGFB, MMP9 i laminina de laARNm del ronyóaïllat de ratolins després de 5 setmanes de solució salina i apoferritina i 3 setmanes de clodronat. L'expressió està normalitzada a GAPDH (n=6/grup). ( b ) Fotomicrografies IF representatives per a la tinció de laminina als ronyons dels mateixos grups de ratolins. ∗P <0:01.
En resum, aquí hem estudiat el paper de Mϕs en el model ICGN depenent de FH. Els resultats també es poden aplicar en entorns d'activació del complement no regulada amb complexos immunitaris com els observats en diferents malalties com la nefritis lúpica, la nefropatia IgA i la nefropatia membranosa. Mostrem la importància tant de la regulació del complement per FH com de l'estat de Mϕs en la malaltia. Així, l'orientació farmacològica de la cascada del complement i l'estat de Mϕs en la GN mediada per IC té una rellevància clínica potencial.
Referències
[1] T. Mijovic, A. Zeitouni i I. Colmegna,"Pèrdua auditiva neurosensorial autoimmune: la interfície otologia-reumatologia," Reumatologia, vol. 52, núm. 5, pàg. 780–789, 2013. [2] M. Abongwa, KE Baber, RJ Martin i AP Robertson,"El morantel colinomimètic com a bloquejador de canal obert de l'Ascaris suum ACR-16 nAChR," Neurociència dels invertebrats, vol. 16, núm. 4, 2016.
[3] AS De Vriese, S. Sethi, J. Van Praet, KA Nath i FC Fer venza,"Malaltia renal causada per la desregulació de la via alternativa del complement: un enfocament etiològic," Revista de la Societat Americana de Nefrologia, vol. 26, núm. 12, pàg. 2917– 2929, 2015. [4] RJ Quigg,"Malalties glomerulars autoimmunes i complementàries," Orientacions actuals en autoimmunitat, vol. 7, pàg. 165– 180, 2003.
[5] MC Carroll,"El sistema del complement en la regulació de la immunitat adaptativa," Immunologia de la natura, vol. 5, no. 10, pàg. 981– 986, 2004. [6] MV Carroll i RB Sim,"Complement en salut i malaltia," Revisions avançades de lliurament de medicaments, vol. 63, núm. 12, pàg. 965–975, 2011.
[7] M. Noris i G. Remuzzi,"Visió general de l'activació i regulació del complement," Seminaris de Nefrologia, vol. 33, núm. 6, pàg. 479–492, 2013.
[8] VP Ferreira, AP Herbert, C. Cortes et al.,"La unió del factor H a un complex de polianions fisiològics i C3b a les cèl·lules es veu afectada en la síndrome urèmica hemolítica atípica," Revista d'Immunologia, vol. 182, núm. 11, pàg. 7009–7018, 2009.
[9] JJ Alexander, MC Pickering, M. Haas, I. Osawe i RJ Quigg,"El factor de complement h limita la deposició del complex immune i evita l'entradaFlinflamació i cicatrització en glomèruls de ratolins amb malaltia sèrica crònica," Revista de la Societat Americana de Nefrologia, vol. 16, núm. 1, pàg. 52–57, 2005.
[10] JJ Alexander, L. Chaves, A. Chang i RJ Quigg,"El receptor C5a té un paper clau en la glomerulonefritis del complex immune en el factor del complement H-defiratolins antics," Ronyó Internacional, vol. 82, núm. 9, pàg. 961–968, 2012.
[11] CV Jakubzick, GJ Randolph i PM Henson,"Monòcit diFffuncions d'erenciació i de presentació d'antigen," Ressenyes de natura. Immunologia, vol. 17, núm. 6, pàg. 349–362, 2017.
[12] Q. Cao, Y. Wang i DC Harris,"Heterogeneïtat dels macròfags, fenotips i papers en la funció renalFibrosis," Kidney International. Suplement, vol. 4, no. 1, pàg. 16–19, 2014.
[13] Q. Cao, Y. Wang, XM Wang et al.,"Els fagòcits mononuclears F4/80+ CD11c+ renals mostren característiques fenotípiques i funcionals dels macròfags en salut i en la nefropatia adriamicina," Revista de la Societat Americana de Nefrologia, vol. 26, núm. 2, pàg. 349–363, 2015.
