Optimització del procés de descolorització i activitat antioxidant de Cistanche Deserticola Polisacàrid Extracte per metodologia de la superfície de resposta

Resum:

 

Objectiu:Per optimitzar el procés de descolorització dels polisacàrids de Cishanche Deserticola i explorar la seva activitat antioxidant.

Mètodes que utilitzen carboni activat com a agent descoloritzant, es van investigar els efectes de 4 factors que inclouen la dosi de carboni activat, la temperatura de descolorització, el temps de descolorització i el pH sobre la taxa de descolorització i la taxa de recuperació de polisacàrids. Basat en experiments de factors únics, es va optimitzar el procés de descolorització de l'extracte de polisacàrids de Cistanche Desertonticola mitjançant la metodologia de la superfície de resposta. Utilitzant un mètode d'avaluació d'activitat antioxidant in vitro, la capacitat de caça de radicals lliures d'1, 1- difenil -2- Picrylhidrazine (DPPH), capacitat de reducció total, capacitat de caça radical hidroxil i 2,2'-azino) Bis (3- etilbenzotiazol - 6- àcid sulfonic) Sal de diamoni (abts) Cation La capacitat de cavar de radicals lliures dels polisacàrids de la cistanche desertaticola es va determinar. Resultats Les condicions òptimes del procés de descolorització per a l’extracte de polisacàrids de Cistanche deserticola van ser les següents: Dosi de carboni actiu 20%, temperatura de descolorització de 37 graus, temps de descolorització 49 min, pH 5,03. En aquestes condicions òptimes, la taxa de descoloizació i la taxa de recuperació de polisacàrids va ser del 62,66% i del 96,16%, respectivament. Després de la descolorització, es van incrementar significativament les capacitats de la caça radical DPPH i el radical lliure hidroxil, mentre que les capacitats de cavar el radical anió abts van disminuir significativament. Conclusió El procés de descolorització és fàcil d’operar, amb bons efectes de descolorització i taxa de recuperació de polisacàrids. Té un valor important de l'aplicació i proporciona una base per a la posterior investigació i desenvolupament del polisacàrid de Cistanche Deserticola.

Paraules clau: Cishanche Deserticolapolisacàrid; descolorització; Metodologia de la superfície de resposta; Activitat antioxidant

CistancheEfectes deserticola

 

1.2.3 Mesura de la taxa de recuperació de polisacàrids

Preparació de la corba estàndard:
Es va utilitzar el mètode d’àcid fenol-sulfúric. Aproximadament 0. 0 5 0 0 g de l'estàndard de glucosa (assecat a pes constant a 105 graus) es va pesar amb precisió i es va diluir a un matràs volumètric de 50 ml per preparar la solució d'estoc. A continuació, es va mesurar amb precisió 1,0 ml de la solució en estoc i es va diluir a 10 ml en un matràs volumètric per obtenir una solució estàndard de 0,1 mg/ml. Les solucions estàndard de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 i 100 µl de glucosa es van mesurar amb precisió en tubs de centrífuga de 1,5 ml. Es va afegir aigua destil·lada a cada tub per constituir un volum total de 100 µl. Es va utilitzar com a solució de control en blanc un altre tub de centrífuga d’1,5 ml que contenia 100 µl d’aigua destil·lada. A cada tub, es van afegir 100 µl de solució de fenol del 5%, es van barrejar a fons, i després es van afegir ràpidament 500 µl d’àcid sulfúric concentrat. Els tubs van ser vortexats durant 3 minuts i es van deixar reposar durant 35 minuts. A continuació, es van transferir 200 µl de la solució de reacció a una placa de pou 96- i es va mesurar l'absorbància a 490 nm mitjançant un lector automàtic de microplaques. Es va representar una corba estàndard amb absorbància (y) com a eix vertical i concentració de glucosa (x, ug/ml) com a eix horitzontal. L’equació de corba estàndard obtinguda va ser:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

Mesura del contingut de polisacàrids:
Una alícuota de 100 µl de diluïdaCishanche DeserticolaL’extracte de polisacàrids es va mesurar amb precisió en un tub de centrífuga d’1,5 ml. El valor d’absorbància es va determinar mitjançant el mètode descrit anteriorment i es va calcular la concentració de polisacàrids mitjançant la corba estàndard.

Mesura de la taxa de recuperació de polisacàrids:
La massa de polisacàrids alCishanche DeserticolaExtracte abans i després de la descolorització es va mesurar mitjançant el mètode anterior. La taxa de recuperació de polisacàrids es va calcular mitjançant l’equació (2):

Taxa de recuperació de polisacàrids (%)
= (MAFTERMBEFORE) × 100%\ left (\ frac {m _ \ text {després de}} {m _ \ text {abans}} \ right) \ vegades 100 \%(mBefore mafter) × 100%100%
On:

mBeforem _ \ text {abans} mBefore i mafterm _ \ text {després de} mafter són les masses deCishanche DeserticolaPolisacàrids abans i després de la descolorització, respectivament (G).

 

 

1.2.4 Disseny experimental d’un sol factor

Els efectes de la dosi de carboni activada per quatre factors, la temperatura de descolorització, el temps de descolorització i la taxa de descolorització i la taxa de recuperació de polisacàrids deCishanche DeserticolaEs va investigar l'extracte de polisacàrids.

Efecte de la dosi de carboni activat:
Temps de descolorització fixat a 30 minuts, temperatura de descolorització a 50 graus i pH a 5,03 (valor de mostra mesurat). Es va estudiar la influència de la dosi de carboni activada en la taxa de descolorització i la taxa de recuperació de polisacàrids.

Efecte de la temperatura de descolorització:
La dosi de carboni activada fixa al 20% (m: m), el temps de descolorització a 30 minuts i el pH a 5,03. Es va estudiar la influència de la temperatura de descolorització en la taxa de descolorització i la taxa de recuperació de polisacàrids.

Efecte del temps de descolorització:
La dosi de carboni activada fixa al 20%, la temperatura de descolorització a 50 graus i el pH a 5,03. Es va estudiar la influència del temps de descolorització en la taxa de descolorització i la taxa de recuperació de polisacàrids.

Efecte del pH:
La dosi de carboni activada fixa al 20% (m: m), la temperatura de descolorització a 50 graus i el temps de descolorització a 30 minuts. Es va estudiar la influència del pH en la taxa de descolorització i la taxa de recuperació de polisacàrids.

 

1.2.5 Disseny experimental d’optimització de la superfície de resposta

A partir dels intervals de condició òptim identificats en els experiments d’un factor d’un sol factor, es va utilitzar el mètode de disseny experimental de caixa-behnken per realitzar un disseny de tres factors de tres nivells per a les condicions de descolorització deCishanche DeserticolaExtracte de polisacàrids. La taxa de descolorització i la taxa de recuperació de polisacàrids es van utilitzar com a índexs d'avaluació. Els paràmetres de disseny es mostren a la taula 1.

1.2.6 Determinació de l’activitat antioxidant deCishanche DeserticolaPolisacàrids

(1) Determinació deCishanche DeserticolaCapacitat de caça radical DPPH de Polisacàrides

Basat en el mètode de Kan Jintao et al. [21] Amb lleugeres modificacions, 0. 5 ml de 1. 0 mg/ml Solució aquosa de polisacàrids es va barrejar amb 2,4 ml de 0. (1, {{1 0}} difenil -2- PicrylHidrazine) i 1,1 ml d'aigua destil·lada. Es va deixar que la barreja reaccionés a les fosques a 37 graus durant 30 minuts. L’absorbància de la solució de reacció es va mesurar a 517 nm i es va calcular la velocitat d’afaitar radical DPPH d’1,0 mg/ml de polisacàrids abans i després de la descolorització mitjançant l’equació (3):

Taxa de caça radical DPPH (%)

{{{0}} [1− (a1 - a2) a 0] × 100%= \ left [1 - \ frac {(a _1 - 100 \%= [1 - A0 (A1 −A2)] × 100%

On:

A1a _1 A1 és l'absorbància del tub d'assaig de mostra,

A2a _2 a2 és l'absorbància quan l'etanol anhidre substitueix la solució DPPH,

A {{{0} A _0 a0 és l'absorbància quan l'aigua destil·lada substitueix la mostra.

 

(2) Determinació del poder reductor total deCishanche DeserticolaPolisacàrids

En referència al mètode de Lu Xue et al. [22], 1. 0 polisacàrids mg/ml abans i després de la descolorització es van preparar. Es va afegir una mostra de 5 µl i 180 µl de FRAP (una potència antioxidant que redueix els ions fèrics) a una placa de pou 96-, barrejada a fons i es va deixar reaccionar a 37 graus durant 5 minuts. L’absorbància es va mesurar a 593 nm i es va expressar la potència reductora total dels polisacàrids en termes de la concentració de solució estàndard FESO4.

(3) Determinació de la capacitat de cavar radical hidroxilCishanche DeserticolaPolisacàrids

Seguint el mètode descrit a la literatura [23] i les instruccions del kit d'assaig de caça radical hidroxil, 1. 0 mg/ml de polisacàrids abans i després de la descolorització. L’aigua destil·lada es va utilitzar per substituir el peròxid d’hidrogen per l’absorbància del grup de control (acontrola _ \ text {control} acontrol), i es va utilitzar l’aigua destil·lada per substituir la mostra per l’absorbància del grup en blanc (Ablanka _ \ text {en blanc} ablank). Els valors d’absorbància es van mesurar a 550 nm i es va calcular la velocitat d’escalfament radical d’hidroxil mitjançant l’equació (4):

Taxa de caça de radicals hidroxil (%)

= [(acontrol --asample) (acontrol - nokank)] × 100%= \ left [\ frac {(a _ \ text {control} - a _} \ text {sample})} {(a {6} A _ \ text {en blanc})} \ right] \ Times 100 \%= [(acontrol −ablank) (acontrol −asemple)] × 100%

On:

Asamplea _ \ text {sample} asample és l'absorbància del grup de mostra,

Acontrola _ \ text {control} acontrol és l'absorbància del grup de control,

ABlanka _ \ text {en blanc} aBlank és l'absorbància del grup en blanc.

 

(4) Determinació de la capacitat de caça radical de la catióCishanche DeserticolaPolisacàrids

Segons el mètode descrit a la literatura [24] i les instruccions del kit d'assaig de caven radical de la catió ABTS, 1. 0 mg/ml de polisacàrids abans i després de la descolorització es van preparar. Es va barrejar una mostra de 10 µl amb 20 µl de solució de treball de reactiu quatre i 170 µl de solució de treball ABTS, ben barrejada i es va deixar reaccionar a la foscor a temperatura ambient durant 6 minuts. L’aigua desionitzada es va utilitzar com a control en blanc. L’absorbància es va mesurar a 405 nm i es va calcular la velocitat d’escalfament de radicals de catió ABTS mitjançant l’equació (5):

Taxa de caça radical de catió (%)

= [(bBlank - bigample) bBlank] × 100%= \ left [\ frac {(b _ \ text {en blanc} - b _ \ tet 100 \%= [bBlank (bblank −bsample)] × 100%

On:

BBlankB _ \ text {en blanc} BBlank és l'absorbància de la reacció entre l'aigua destil·lada i la solució ABTS,

BsampleB _ \ text {sample} bsample és l'absorbància de la reacció entre la solució de mostra i ABTS.

 

1.3 Processament de dades

El programari SIGMAPLOT 12.5 es va utilitzar per traçar i es va utilitzar el programari Expert en disseny 8. 0. 6 Per a l'anàlisi de dades.