Part 1: efectes de l'extracte aquós de Cistanche Tubulosa a la microbiota intestinal dels ratolins amb trastorns intestinals

Siusplau contactaoscar.xiao@wecistanche.comper a més informació

Els trastorns de la microbiota intestinal estan associats a moltes malalties. *extracte aquós deCistanche tubulosa (TC), una fórmula herbal tradicional xinesa, s'ha informat que hi juga un paperprotegint l'intestí humà. No obstant això, es coneix poc sobre els seus efectes sobre la microbiota intestinal. * El present estudi es va dur a terme per determinar si l'extracte aquós CT pot modular el microbioma intestinal en ratolins amb trastorns intestinals. Hem trobat que el danyatmorfologia intestinalresultant del tractament amb cefixima es podria rescatar mitjançant l'extracte aquós CT. * La comparació de la diversitat microbiana entre els ratolins tractats amb l'extracte de CT i els ratolins control també va indicar que el trastorn a la comunitat de microbioma dels grups models es podria restaurar mitjançant el tractament amb concentracions altes i mitjanes de l'extracte aquós. El tractament amb cefixima va provocar una disminució significativa dels bacteris làctics; tanmateix, la suplementació de l'extracte aquós CT va recuperar el creixement d'aquests bacteris làctics. A més, l'extracte aquós CT va ser capaç de moderar els canvis dramàtics en les vies metabòliques del microbioma intestinal induïts per la cefixima. * Aquestes troballes van proporcionar una visió dels efectes beneficiosos de l'extracte aquós CT sobre la microbiota intestinal i també van proporcionar una referència important per al desenvolupament de fàrmacs relacionats en el futur.

Cistanche per relaxar els intestins, feu clicaquíper saber-ne més

Introducció

han demostrat que C.polisacàrids deserticolaindueix la melanogènesimelanòcits, reduir l'estrès oxidatiu [15], alleujar la disfunció cognitiva mitjançant la regulació dels processos antioxidants i antiinflamatoris a les rates [16], protegir les cèl·lules PC12 contra lesions induïdes per OGD/RP [17], millorar l'absorció d'equinacòsids in vivo i afectar la microbiota intestinal [17]. 18]. Els probiòtics són microorganismes vius no patògens que tenen beneficis per a la salut i confereixen equilibri microbià al tracte gastrointestinal quan s'administren en quantitats adequades [19]. *Ey poden millorar les respostes immunes cel·lulars inespecífiques caracteritzades per l'activació de macròfags, cèl·lules assassines naturals (NK) i limfòcits T citotòxics específics d'antigen i l'alliberament de diverses citocines d'una manera específica de la soca i depenent de la dosi [20]. Les soques probiòtiques milloren les propietats de l'epiteli intestinal mitjançant la modulació de TJ, i s'ha demostrat que les soques probiòtiques específiques regulen l'expressió de mucina, influint així en les propietats de la capa de moc i regular indirectament el sistema immunitari intestinal [21]. Les soques de bacteris làctics (LAB) i Bifidobacterium són probiòtics principals que s'han utilitzat en molts camps [22–26]. *Els seus beneficis per a la salut són nombrosos, la seva capacitat antioxidant és un factor important en les seves funcions relacionades amb la salut[27]. Els probiòtics poden quelar els ions metàl·lics per evitar que catalitzin l'oxidació [28, 29]; també poden augmentar l'expressió d'enzims antioxidants [30, 31], produir diversos metabòlits amb activitat antioxidant [32, 33], mediar les vies de senyalització antioxidant [34-36] i regular els enzims que produeixen espècies reactives d'oxigen (ROS) i la resposta de l'intestí. microorganismes a l'estrès oxidatiu[37].Un estudi recent va demostrar que els polisacàrids de la CD podrien estimular el creixement d'alguns bacteris àcids làctics, que podrien beneficiar la salut humana [38]. Tanmateix, el contingut de polisacàrids a la CD és diferent del de la TC [7, 39], i aquesta diferència pot provocar efectes diferents en els microorganismes intestinals. A més, tot i que els polisacàrids CD poden reduir l'estrès oxidatiu activant la via NRF2/HO-1 [15], els efectes dels polisacàrids únics poden diferir de l'efecte global de diverses composicions a la TC. *ns, cal definir amb precisió els efectes dels extractes aquosos de TC sobre els microorganismes intestinals. A més, els aficionats també poden resistir l'estrès oxidatiu [40] i suprimir les respostes inflamatòries mediades pel lipolisaccha activant la via Keap1/Nrf2/HO-1 [41]. *abans, determinar l'efecte de l'extracte aquós CT és de gran valor. A més, els efectes de certs components de l'extracte aquós de CD sobre l'estrès oxidatiu i la flora intestinal suggereixen que la resistència a l'estrès oxidatiu podria estar correlacionada amb els canvis de la flora intestinal. Per tal d'omplir els buits de coneixement sobre els temes esmentats anteriorment, vam investigar els efectes de l'extracte CTaqueous sobre la microbiota intestinal de ratolins amb trastorns de la flora intestinal. *Aquests resultats proporcionaran informació valuosa sobre els possibles mecanismes mitjançant els quals canvia la flora intestinal i confereix resistència intestinal a l'estrès oxidatiu.

2. Materials i Mètodes

s'administraven diàriament a les 12:00 h, i altres substàncies es van administrar diàriament a les 15:00 h. Durant els experiments, els grups C, D, E i F es van mantenir en l'estat model de trastorns intestinals. * Les femtes es van recollir cada set dies en una taula operable estèril i es van emmagatzemar a -20 graus .2.4. Observació histopatològica del còlon de ratolins. Al final de l'experiment, els ratolins van ser assassinats per luxació cervical i el seu contingut de còlon es va recollir en una taula operable estèril i es va emmagatzemar a -80 graus; al mateix temps, es van fixar mostres de teixit colònic en formalina neutra al 10 per cent.*en, les mostres es van deshidratar amb gradient de concentració d'etanol, es van hialinitzar amb xilè, es van incrustar en parafina, es van seccionar i es van tacar amb hematoxilina-eosina. Es van observar i comparar canvis morfològics a la mucosa del còlon mitjançant un microscopi òptic. Es va mesurar la longitud de les vellositats i la profunditat de la cripta al còlon i es va calcular la relació entre la longitud de les vellositats i la profunditat de la cripta (valor V/C) (51).2.5. Extracció d'ADN i construcció de biblioteques. L'ADN es va extreure de les femtes mitjançant el kit d'ADN del sòl EZNA ® (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, EUA) segons el protocol del fabricant. La qualitat de l'ADN es va determinar mitjançant un fluoròmetre (QuantiFluor™–ST, Promega Corporation, EUA). Els cebadors aparellats a la regió V3-V4 de l'ADNr de 16s es van dissenyar per amplificar la regió i produir fragments d'ADN de 466 pb. *El cebador directe era 341F (-5-CCTACGGGNGGCWGCAG-3-) i el cebador invers era 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-). Cada volum de PCR era de 25 μl, que contenia 2, 5 μl de 10 × tampó de PCR, 2 μl de dNTP, 1 μl de cada cebador i 20-30 ng d'ADN plantilla. *ca, els adaptadors indexats es van connectar a l'extrem dels amplicons per generar biblioteques de seqüenciació. *Les biblioteques es van validar mitjançant un fluoròmetre QuantiFluor™ i es van quantificar a 10 nmol.2.6. 16s Seqüenciació de gens d'ARNr i anàlisi de comunitats microbianes. * La plataforma Illumina (Illumina MiSeq) es va utilitzar per obtenir dades d'extrem aparellat de 2 × 250 bp. Les unitats taxonòmices operatives (OTU) es van obtenir mitjançant el programari Uparse mitjançant un clustering estàndard amb un 97 per cent de similitud. * Es va utilitzar l'algorisme d'assignació bayesiana ingenu del classificador RDP per alinear les OTU amb la base de dades Greengene Release 13.5 i realitzar anotacions d'espècies. * La diversitat alfa de la microbiota intestinal es va calcular mitjançant els índexs de Shannon i Simpson, i les diferències entre grups es van analitzar mitjançant una anàlisi discriminant lineal de la mida de l'efecte (LEfSe). * La diversitat beta es va analitzar mitjançant l'anàlisi de coordenades principals (PCoA) de les dissimilaritats Brady-Curtis. PICRUSt2 es va utilitzar per estimar la capacitat metabòlica microbiana del microbioma intestinal [42].2.7. Anàlisi de dades estadístiques. Es va utilitzar SPSS 20 per a ANOVA unidireccional i les dades experimentals es van expressar com a X ± S; X indica el valor mitjà i S indica la desviació estàndard.

Cistanche per millorar la immunitat

3. Resultats

3.1. 8 Efecte de l'extracte aquós CT sobre la morfologia del còlon.* Els compostos representatius (echinacòsid i acetònid) i les seves concentracions de l'extracte CT es van validar per HPLC (Figura S1). Per determinar l'efecte de l'extracte aquós sobre l'intestí, es va investigar la longitud de les vellositats del còlon i la profunditat dels recessos després del tractament amb l'extracte aquós. * Les vellositats del còlon dels grups de dosis normals i altes (A, B i D) eren més llargues i semblants a uns dits, mentre que les vellositats del còlon dels grups model i de dosis baixes (C i F) eren curtes, i les puntes de la es van trencar les vellositats del còlon (figura 1). En conseqüència, l'extracte aquós de TC a dosis altes va augmentar significativament la longitud de les vellositats del còlon i va reduir la profunditat del recés en ratolins amb trastorns intestinals en comparació amb els ratolins del grup model (P <0.01). en="" canvi,="" la="" profunditat="" del="" recés="" no="" va="" ser="" significativament="" diferent="" entre="" el="" grup="" de="" dosis="" altes="" i="" el="" grup="" normal="" (p=""> 0, 05) (taula S1). *Aquests resultats van indicar que l'alta dosi d'extracte aquós CT pot millorar la morfologia dins del còlon de ratolins amb trastorns intestinals.3.2. 8e Efecte de l'extracte aquós CT sobre la diversitat de la microbiota intestinal. Hem realitzat la seqüenciació del gen rRNA 16s per investigar la causa potencial dels canvis morfològics dins del còlon i investigar els canvis en la microbiota intestinal després del tractament amb l'extracte aquós CT. A partir de les dades en brut, es va obtenir una mitjana de 100.553 etiquetes efectives, que van des de 77.734 fins a 125.144 (taula S2). * Els cérvols es van agrupar en 4932 OTU (taula S3). Després vam analitzar la diversitat de la microbiota intestinal a partir de Teseu. * Els índexs de Shannon i Simpson no van mostrar cap diferència entre el grup A (normal amb l'extracte aquós CT) i el grup B (normal sense l'extracte aquós CT) (figura 2 (a)). * s'indica que en els ratolins sense tractament amb cefixima, l'extracte aquós CT podria no haver tingut efectes beneficiosos o nocius addicionals sobre la diversitat de la microbiota intestinal. Tanmateix, la -diversitat en el grup model (C) va mostrar una tendència decreixent en comparació amb la dels grups normals. * Els ratolins tractats amb extractes aquosos de CT a dosis altes i mitjanes van mostrar signes de recuperació de la diversitat, mentre que aquest fenomen no es va observar en els ratolins tractats amb l'extracte aquós de CT a dosis baixes (figura 2 (a)). Mentrestant, el PCoA va revelar que els grups normals (A i B) i els grups de trastorns intestinals als quals s'administraven extractes aquosos de dosis altes (D) i mitjanes (E) tendien a tenir distàncies entre mostres més curtes que els del grup model i dels baixos. -dosi CTaqueous extracte del grup de suplements (F) (Figura 2 (b)). *els resultats van indicar que l'extracte aquós CT podria ajudar a millorar la diversitat de la microbiota intestinal en ratolins amb trastorns intestinals.

3.3. Canvis en la composició de la microbiota intestinal tractada amb l'extracte aquós CT. *Es van comparar els perfils de composició de la microbiota entre diferents grups. A nivell de fílum, l'abundància relativa de Proteobacteris en el grup model era superior a la dels altres grups.

Figura 1: * efecte de l'extracte aquós de Cistanche tubulosa (CT) sobre la morfologia del còlon: A, un grup normal amb extracte aquós de Cistanche tubulosa (CT) a dosi mitjana afegit; B, grup normal; C, grup model; D, el grup model amb extracte aquós CT de dosi alta afegit; E, un grup model amb extracte aquós CT de dosi mitjana afegit; F, un grup model amb extracte aquós CT de dosis baixes afegit. (a) Grup A. (b) Grup B. (c) Grup C. (d) Grup D. (e) Grup E. (f ) Grup F.

(Figura 3 (a)). * L'augment de Proteobacteris va suggerir que el microbioma dels ratolins model va ser modificat per la cefixima i que l'extracte aquós CT podria beneficiar la microbiota intestinal, ja que l'augment de la prevalença de Proteobacteris és un marcador central de la flora intestinal desordenada [43–45]. A més, a nivell de gènere, l'abundància relativa de Lactobacillus en el grup model va disminuir en comparació amb la dels grups normals i amb dosis altes; tanmateix, va augmentar en comparació amb el grup de dosis mitjanes i baixes (figura 3 (b)). *Aquests resultats van indicar que l'extracte CTaqueous d'alta dosi podria promoure el creixement d'alguns bacteris del gènere Lactobacillus. La microbiota diferencial entre els grups estudiats es va determinar encara més segons l'anàlisi LEfSe. *l'anàlisi va demostrar que, després del tractament amb cefixima, les abundàncies relatives de Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteriales i Chloroflflexi van augmentar significativament, mentre que les abundàncies relatives de lactobacillus, Eubacterium{8}nodatum{{9}grup, Pseudononodatum. cardiales i el grup Christensenellaceae_R-7_ va disminuir significativament en comparació amb els del grup normal (figura 4 (a)). Sorprenentment, quan el grup model es va complementar amb l'extracte aquós CT d'alta dosi, les abundàncies relatives de Muribaculaceae, Lactobacillus, Kin eosporiaceae, Eubacterium sense grup de dades i Pedobacter van augmentar significativament en comparació amb les del grup model. Mentrestant, les abundàncies relatives de Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostri dium_9 i Candidatus Stoquefifichus van disminuir significativament en comparació amb les del grup model (Figura 4 (b))

Figura 2: Anàlisi de la diversitat de la microbiota intestinal de les femtes de ratolins. (a) -Diversitat de comunitats de bacteris mesurades per l'índex de Shannon (A) i l'índex de Simpson (B); (b) la trama de l'anàlisi de coordenades principals (PCoA) que visualitza les dades basades en les dissimilaritats de Bray-Curtis. A, grup normal amb extracte aquós de Cistanche tubulosa (CT) a dosi mitjana afegit; B, grup normal; C, grup model; D, grup model amb extracte aquós CT d'alta dosi afegit; E, grup model amb extracte aquós CT de dosi mitjana afegit; F, grup model amb extracte aquós CT a dosis baixes afegit.