Estudi de farmacodinàmica dels glucòsids de feniletanol de Cistanche en lesions renals agudes induïdes per gentamicina en rates

Contacte: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Resum

Objectiu Estudiar l'efecte protector deglicòsids feniletanoides(phGs) sobre la gentamicina induïdalesió renal agudaen rates. Mètodes Es van dividir aleatòriament un total de 54 rates mascles SD en el grup control (10 d, 15 d, solució salina normal 10 ml/kg), grup model (10 d, 15 d, solució salina normal 10 ml/kg), phGs 500 mg/ grup kg (10 d, 15 d), grup phGs 250 mg/kg (10 d, 15 d) i grup clínic simulat (21 d, solució salina normal 10 ml/kg), cada grup tenia sis rates. El model de rata de lesió renal aguda es va establir mitjançant la injecció intraperitoneal de gentamicina a 75 mg/kg durant 10 dies. Al final de l'experiment, es va recollir l'orina de les rates de 24 hores, es va extreure la sang de les rates de l'aorta abdominal, es van prendre els ronyons bilaterals de les rates i es va calcular l'índex renal. La creatinina sèrica (Scr), el nitrogen ureic en sang (BUN) es van mesurar mitjançant un autoanalitzador. Es van detectar nivells de superòxid dismutasa (SOD), glutatió peroxidasa (GSH-Px), catalasa (CAT) i malonaldehid (MDA) al teixit renal. Resultats En comparació amb el grup control en blanc, Scr, BUN, volum d'orina de 24 hores i expressió de MDA el nivell del teixit renal es va incrementar en el grup del model de 10 d i 15 d, i les activitats de SOD, CAT i GSH-PX al teixit renal es van reduir significativament (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" scr,="" bun,24="" h="" urine="" volume,="" and="" the="" expression="" of="" mda="" in="" kidney="" tissue="" were="" decreased="" in="" 10="" d="" and="" 15="" d="" phgs="" high="" and="" low="" dose=""><0.05), while="" the="" activities="" of="" sod,="" cat,="" and="" gsh-px="" in="" kidney="" tissue="" were=""><0.05). conclusion="" phgs="" had="" a="" protective="" effect="" on="" gentamicin-induced="">lesió renal agudaen rates.

Paraules clau:Cistanche Herba; glucòsid feniletanoides; gentamicina;lesió renal aguda

Cistanche Herba

Lesió renal aguda (IRA)és una síndrome clínica de disminució o pèrdua sobtada i ràpida de la funció de filtratge del ronyó causada per diverses raons [1]. Actualment, la incidència de l'IRA augmenta any rere any. Les seves causes són diverses i poden provocar una varietat de complicacions, i els mètodes d'intervenció per al tractament clínic són molt limitats [2·3]. Els estudis han trobat que el tractament continu amb antibiòtics aminoglucòsids és un factor de risc independent per a AKI [4], i el seu mecanisme inductor està relacionat amb la producció de radicals lliures mediada per fàrmacs, la deposició de fosfolípids, la disminució del flux sanguini renal i la inflamació local [5]. Clínicament, les tècniques de control de fàrmacs terapèutics s'utilitzen sovint per tractar la lesió renal aguda induïda per antibiòtics aminoglucòsids, però no poden millorar ni revertir el risc de lesió renal causada per aquests antibiòtics des de l'origen [6]. La intervenció precoç de la nefrotoxicitat dels antibiòtics aminoglucòsids és un punt calent en la investigació sobre l'aplicació racional dels antibiòtics aminoglucòsids. La medicina tradicional xinesaCistancsL'herba és una tija carnosa seca amb fulles escamosesCistancsplanta de la família de les OrobanchaceaeCistancs. Té les funcions de nodrir el yang del ronyó i l'essència i la sang nutritives [7]. És de naturalesa càlida, de gust dolç i torna al meridià del ronyó.glicòsids feniletanoidessón els principals components químicsCistanche, que pot augmentar l'activitat de la superòxid dismutasa sèrica, inhibir l'expressió del malondialdehid, millorar la capacitat del cos per eliminar els radicals lliures d'oxigen, reduir l'acumulació de radicals lliures al cos i protegir el cos de l'estrès excessiu. Efecte de dany oxidatiu [8]. En aquest estudi, la gentamicina es va utilitzar per construir un model de rata de lesió renal aguda per explorar els efectes preventius i terapèutics de la citronel·la.glicòsids feniletanoidessobre la lesió renal aguda induïda per gentamicina. L'informe és el següent.

1 Material i mètodes

1.1 Animals d'experimentació

54 rates SD, mascles, pes corporal (200 ± 20) g, comprades al Centre Experimental d'Animals de la Universitat Mèdica de Xinjiang, número de llicència de producció animal: SCXK (nou) 2016-0003, tots els animals es crien a la Universitat Mèdica de Xinjiang SPF entorn de barrera del Animal Experiment Center, número de llicència: SYXK (nou) 2016-0002, temperatura ambient 24-26 grau , temperatura i humitat constants, humitat relativa 40 per cent -70 per cent , les rates mengen i beuen lliurement .

1.2 Medicament de prova

Glucòsids totals de fenetil de Cistanche (aquest grup de recerca està enriquit i purificat a partir de Cistanche tubulosa, el contingut total de glucòsids d'alcohol fenetílic és del 89,5 per cent, el contingut d'equinacòsid és superior al 40 per cent i el contingut de verbascòsid és superior al 16,0 per cent) ; Injecció de gentamicina (Henan Furen Huaiqingtang Pharmaceutical Co., Ltd., número de lot 16122411), kit de detecció de malondialdehid (MDA) (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., número de lot VAAAK6S286), kit d'enzim de desproporció de superòxid (SODuhan) Biotechnology Co., Ltd., número de lot WSH27SS9GB), kit de detecció de Catalase (CAT) (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., número de lot FGS3J66D2K), kit de detecció de Valley Glutathione Peroxidase (GSH-PX) (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., número de lot DK8A622XZP), kit de quantificació de proteïnes BCA (Beijing Soleibao Technology Co., Ltd., número de lot 20190622).

1.3 Instrument experimental

Balança electrònica TD50002A (Yuyao Jinnuo Balance Instrument Co., Ltd.), lector de microplaques de longitud d'ona completa Multiskan (US Thermo Fisher Company), analitzador bioquímic automàtic BS-320 (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.), Biofugeprimo centrífuga refrigerada d'escriptori (Thermo Fisher Company, EUA).

1.4 Mètodes de modelització, agrupació i administració

Després d'1 setmana d'alimentació adaptativa, 54 rates mascles SD es van dividir aleatòriament en grup de control en blanc de 10d, 15d, grup model 10d, 15d, grup de dosis altes d'alcohol fenílic Cistanche cistanche, grup de dosis baixes d'alcohol fenílic Cistanche cistanche, 10d, 15d grup de dosis baixes de Cistanche fenil etanol El grup de dosi i el grup de tractament clínic simulat 21d, cada grup té 6 animals. Excepte els grups de control en blanc 10d i 15d, les rates de cada grup van ser injectades per via intraperitoneal amb gentamicina (75 mg/kg de pes corporal) durant 10 dies consecutius per establir un model de lesió renal aguda. Mètode d'administració: (1) A les rates de control en blanc de 10d i 15d se'ls va administrar una injecció intraperitoneal de solució salina normal (10 ml/kg de pes corporal) i una sonda sonda durant 10d i 15d respectivament; (2) Les rates models 10d i 15d s'han modelat simultàniament. Les rates dels grups de dosis altes de 10d i 15d van rebre solució salina normal (10 mL/kg de massa corporal) per sonda a 10d i 15d respectivament; Estómac a 10d i 15d; (4) Les rates del grup de dosis baixes de 10 d i 15 d es van modelar diàriament i es van rebre glucòsids totals de feniletanol de Cistanche (250 mg/kg de pes corporal) per sonda durant 10 d i 15 d; (5) Grup clínic simulat 21d Al mateix temps, a les rates se'ls va donar solució salina normal (10 ml/kg de pes corporal) per sonda durant 21 dies. Les rates es pesen setmanalment i la dosi del fàrmac s'ajusta segons el pes corporal.

1.5 Recollida de mostres

Les rates de cada grup es van recollir l'orina de 24 hores els dies 10, 15 i 21 (l'animal es va col·locar a la gàbia metabòlica el dia anterior i un animal a cada gàbia metabòlica, es va treure després de 24 hores), centrifugat a 3000 r/min durant 20 minuts a 4 graus, recollir el sobrenedant i congelar a -20 graus per al seu ús posterior. Després de l'experiment, les rates de cada grup van ser dejunades sense menjar i anestesiades amb un 10% d'hidrat de cloral a la cavitat abdominal. Es va extreure sang de l'aorta abdominal i es va deixar reposar a temperatura ambient durant 1 h a 4 graus, es va centrifugar a 3500 r/min durant 15 minuts i es va repartir en alíquotes la capa superior de líquid transparent groc clar. Emmagatzemar congelat a 20 graus per al seu ús posterior. Les rates de cada grup van ser anestesiades, la cavitat abdominal estava totalment exposada, les artèries i venes dels extrems distals i proximals dels teixits renals es van fixar amb pinces hemostàtiques, es van tallar les venes renals i es va injectar solució salina normal isotònica de 4 graus. l'aorta abdominal, i el color dels ronyons estava perfós. Després de posar-se pàl·lid, treure ràpidament els dos ronyons i col·locar-los sobre paper de filtre per absorbir aigua i pesar-los per calcular l'índex d'òrgans. Agafeu 0,4 g de còrtex de ronyó dret de rata fresca, afegiu solució salina normal pre-refrigerada a 1:9, feu que el 10% del teixit renal s'homogeneïtzi en un ambient de baixa temperatura, congeleu-lo i reserveu-lo per a un ús posterior. La fórmula de càlcul de l'índex d'òrgans és la següent: índex renal=massa renal bilateral × 103/massa corporal de rata.

1.6 Detecció de nivells de creatinina sèrica i nitrogen ureic en rates

Agafeu les mostres de sèrum a analitzar i poseu-les en un analitzador bioquímic automàtic per a la determinació. D'acord amb les instruccions del kit, determineu el contingut de creatinina i nitrogen ureic en sèrum de rata.

1.7 Detecció de SOD, CAT, GSH-PX i MDA en teixits renals de rata

Agafeu l'homogeneïtat de ronyó de rata per descongelar-lo a temperatura ambient, centrifugueu a 3000r/min durant 20 minuts a 4 graus, recolliu el sobrenedant i utilitzeu el kit de BCA per provar els ronyons de rata a cada grup de concentració de proteïnes del teixit. Seguiu les instruccions del kit per determinar l'activitat del contingut de superòxid dismutasa (SOD), catalasa (CAT), glutatió peroxidasa (GSH-Px) i malondialdehid (MDA) al teixit renal. 1.8 Anàlisi estadística El programari estadístic SPSS21.0 es va utilitzar per a l'anàlisi estadística. Les dades de mesura es van expressar com a mitjana ± desviació estàndard (-x ± s). La comparació entre els dos grups es va realitzar mitjançant la prova t, amb el nivell de prova =0.05.

extracte de cistanche

2 Resultats

2.1 Els efectes dels glucòsids totals de l'alcohol fenetílic de cistanche sobre la massa corporal, l'índex renal i la producció d'orina de 24 hores de rates de cada grup

There was no significant difference in the body mass of rats in each group before modeling (P>0.05). Després de la modelització, en comparació amb el grup control en blanc, la massa corporal de cada grup model va disminuir i l'índex renal i la producció d'orina de 24 hores van augmentar, la diferència va ser estadísticament significativa (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" the="" body="" mass="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" total="" glycosides="" increased,="" and="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" output="" decreased,="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" body="" mass="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05), there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" volume="" (p="">0.05)

2.2 L'efecte dels glucòsids feniletanoides de Cistanche sobre el contingut de creatinina sèrica de rates de cada grup

En comparació amb el grup control en blanc, el contingut de creatinina sèrica de les rates de cada grup model va augmentar i la diferència va ser estadísticament significativa (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" creatinine="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" compared="" with="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" difference="" in="" serum="" creatinine="" content="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).

2.3 L'efecte dels glucòsids feniletanoides de Cistanche sobre el contingut de nitrogen ureic sèric de rates de cada grup

En comparació amb el grup control en blanc, el contingut de nitrogen ureic sèric de rates de cada grup model va augmentar i la diferència va ser estadísticament significativa (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" urea="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" 10d="" and="" 15d.="" nitrogen="" content="" is="" reduced,="" and="" the="" difference="" is="" statistically="" significant="" (p="" difference="" is="" not="" statistically="">a prop del llit de {{0}}. 0 grup 5)

2.4 L'efecte dels glucòsids feniletanoides de Cistanche sobre l'activitat SOD al teixit renal de cada grup de rates

En comparació amb el grup control en blanc, l'activitat SOD al teixit renal de cada grup model es va reduir i la diferència va ser estadísticament significativa (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" on="" 10d="" and="" 15d="" the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><>

2.5 L'efecte dels glicòsids feniletanoides de cistanche sobre l'activitat del CAT al teixit renal de cada grup de rates

En comparació amb el grup control en blanc, l'activitat de CAT al teixit renal de cada grup model va disminuir i la diferència va ser estadísticament significativa (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" group="" the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p=""> 0.05)

2.6 Efectes dels glucòsids feniletanoides de Cistanche sobre l'activitat de GSH-PX en teixits renals de rates de cada grup

En comparació amb el grup control en blanc, l'activitat GSH-PX al teixit renal de cada grup model es va reduir i la diferència va ser estadísticament significativa (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" high="" and="" low="" dose="" groups="" the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p=""> 0.05).

2.7 Efectes dels glucòsids feniletanoides de Cistanche sobre el contingut de MDA en teixits renals de rates de cada grup

En comparació amb el grup control en blanc, el contingut de MDA al teixit renal de cada grup model va augmentar i la diferència va ser estadísticament significativa (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" were="" larger="" than="" those="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" of="" mda="" in="" rat="" kidney="" tissue="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" mda="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" (p="">0.05)

cistanche protegeix la funció renal

3 Discussió

Una reacció adversa greu comuna dels antibiòtics aminoglucòsids és la nefrotoxicitat [9]. Aquest tipus de fàrmac es filtra fàcilment a través del glomèrul com a fàrmac prototip, i alguns fàrmacs es secreten a l'orina, i la majoria de fàrmacs s'acumulen selectivament a l'escorça renal, fent que la concentració en aquest lloc sigui diverses vegades superior a la concentració de el fàrmac al sèrum (10) ], l'acumulació d'aquest tipus de fàrmac provoca inevitablement danys cel·lulars i disminució de la funció renal. Durant molt de temps, el tractament clínic de l'IRA causada per fàrmacs aminoglucòsids sempre ha seguit el principi del tractament simptomàtic i de suport de la retirada de fàrmacs i la rehidratació rutinària. dany. Per tant, aquest estudi va establir un grup de tractament clínic simulat de 21-dia per simular el tractament clínic rutinari i la rehabilitació corporal tant com sigui possible, per tal d'investigar més objectivament l'efecte terapèutic dels glucòsids feniletanoides de Cistanche. En el tractament clínic, Scr i BUN s'utilitzen sovint com a indicadors per avaluar la funció renal. Com més alt és el nivell de Scr i BUN, més greu es reflecteix el dany de la funció renal [11]. En aquest estudi, es va establir un model AKI mitjançant la injecció intraperitoneal de gentamicina 75 mg/kg en rates durant 10 dies consecutius. En comparació amb el grup de control en blanc, els nivells de Scr i BUN al grup del model van augmentar, cosa que indica que el model va tenir èxit. Després de la intervenció dels glucòsids feniletanoides de Cistanche durant 10 i 15 dies, el Scr i el BUN de rates de cada grup de tractament van disminuir, cosa que indica que els glucòsids feniletanoides de Cistanche van tenir un bon efecte en la millora de l'AKI causada per gentamicina.

Els estudis han trobat que l'augment d'espècies reactives d'oxigen (ROS) té un paper important en el procés patològic del dany tubular renal causat per gentamicina [12]. MDA és una de les principals substàncies que reflecteixen el nivell de ROS al cos [13-14]. El sistema de defensa antioxidant (antioxidants) del cos contra ROS inclou SOD, CAT, GSH-PX, etc. Com el principal component efectiu de Cistanche deserticola, els glucòsids feniletanoides totals poden exercir una activitat antioxidant significativa en animals [15]. Després de la intervenció dels glucòsids totals d'alcohol fenetílic de Cistanche, el contingut de MDA al teixit renal de rates del grup d'administració es va reduir significativament i les activitats SOD, CAT i GSH-PX es van augmentar significativament, cosa que suggereix que els glucòsids totals d'alcohol fenetílic de Cistanche pot millorar el dany de l'estrès oxidatiu renal i alleujar el dany renal.

En resum, els glucòsids totals de l'alcohol fenetílic de cistanche tenen un efecte protector sobre la lesió renal aguda induïda per gentamicina. Exerceix efectes antioxidants inhibint la producció de radicals lliures i activant els enzims eliminadors de radicals lliures, millorant l'estat d'estrès oxidatiu del cos i millorant l'efecte antioxidant del cos. Capacitat oxidant, redueix el dany renal.

cistanche protegeix la funció renal