Aïllament preparatiu i purificació de quatre compostos de Cistanches Deserticola YC Ma mitjançant cromatografia a contracorrent d'alta velocitat

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

Resum:

Després d'un pas d'enriquiment de constituents en una columna de gel de sílice, quatreglicòsids feniletanoideses van aïllar amb èxitCistanches deserticolai purificat per cromatografia preparativa a contracorrent d'alta velocitat (HSCCC) amb un sistema de dissolvents de dues fases compost d'acetat d'etil-n-butanol-etanol-aigua (40:6:6:50, v/v /v/v). Un total de 30,9 mg d'acteòsid, 13,0 mg d'isoacteòsid, 12,5 mg de siringalida A 3'- -L-ramnopiranòsid i 7,2 mg de 2'-acetilacteòsid amb una puresa superior al 95 per cent, tal com determina HPLC-ELSD obtingut en una separació d'un sol pas a partir de 297 mg deExtracte de Cistanche deserticola, respectivament. Les seves estructures es van identificar mitjançant HR-MS, 1H-NMR i 13C-NMR.

Paraules clau: cromatografia a contracorrent d'alta velocitat;Cistanches deserticola YC Ma;glicòsids feniletanoides; acteòsid; isoacteòsid; siringalida A 3'- -L-ramnopiranòsid; 2'-acetilacteòsid.

Introducció

Cistanches deserticolaYC Ma, una espècie deCistancsque pertany a la família Orobanchaceae, és una medicina tradicional xinesa coneguda per al tractament de la deficiència renal, la infertilitat femenina, la leucorrea mòrbida, la neurapràxia i el restrenyiment senil [1]. És una planta parasitària que es troba àmpliament distribuïda al nord-oest de la Xina. Fins ara, d'aquesta espècie s'han aïllat diversos compostos, inclosos glicòsids feniletanoides (PhG), iridoides i lignans [2]. S'ha informat que alguns dels PhG posseeixen activitats antioxidants, hepatoprotectores i neuroprotectores [3–6]. Tanmateix, el procediment d'aïllament i purificació dels PhG és difícil i requereix molt de temps. A més, els mètodes cromatogràfics múltiples clàssics no només utilitzen un gran nombre de dissolvents orgànics, sinó que també donen una menor recuperació de la mostra. La cromatografia a contracorrent d'alta velocitat (HSCCC), una tècnica cromatogràfica de partició líquid-líquid sense suport, ofereix una excel·lent recuperació de mostres en comparació amb alguns mètodes convencionals i s'ha utilitzat àmpliament per a la separació i purificació de diversos productes naturals [7–9] . Tot i que s'han purificat diversos PhGCistancsgènere i altres per HSCCC [10–14], cap document ha informat de la purificació d'acteòsid, isoacteòside, siringalida A 3'- -L-ramnopiranòsid i 2'-acetilacteòsid en un sistema bifàsic.

En aquest article, informem d'un mètode senzill per a la separació i purificació de quatre PhG de C. deserticola. Finalment, es van obtenir 30}, 9 mg d'acteòsid, 13,0 mg d'isoacteòsid, 12,5 mg de siringalida A 3'{- -L-ramnopiranòsid i 7,2 mg de 2'-acetilacteòsid en un sol pas separació de 297 mg de fracció amb pureses del 99 per cent, 95 per cent, 99 per cent i 98 per cent, respectivament. Les seves estructures es van caracteritzar a partir de dades espectrals de RMN 1H i 13C i espectres HR-MS. Les estructures dels quatre PhG identificats en aquesta investigació es mostren a la figura 1.

Resultats i discussió

Anàlisi HPLC de l'extracte brut

La fracció enriquida en components de l'extracte n-butanoic de C. deserticola es va analitzar mitjançant HPLC-UV. La columna utilitzada va ser un Accurasil C18 (250 mm × 4, 6 mm, id 5 μm) (Thermo-Fisher Scientific Instruments, ciutat, estat abrev, EUA), la fase mòbil era metanol-aigua (30:70, v/v). El cabal era d'1 ml/min. La longitud d'ona del detector es va establir en 254 nm. El cromatograma HPLC es mostra a la figura 2. Els pics 1 a 4 corresponen a acteòsid (1), isoacteòsid (2), siringalida A 3'- -L-ramnopiranòsid (3) i 2'-acetilacteòsid (4), respectivament.

Selecció del sistema solvent bifàsic

L'èxit de la separació per HSCCC depèn en gran mesura de la selecció d'un sistema de dissolvent bifàsic adequat, el sistema de dissolvent bifàsic es va seleccionar segons els valors del coeficient de partició (K) de cada component objectiu i un rang òptim de K hauria de ser de {{ 2}}.5 a 2.

A l'experiment, els valors de K dels components objectiu de diversos sistemes de dissolvents bifàsics es mostren a la taula 1 (encara que una mica més alts per al pic 4, es va demostrar que els resultats eren acceptables). Entre ells, acetat d'etil-n-butanol-etanol-aigua (40:6:6:50, v/v/v/v) va donar coeficients de partició adequats per als compostos objectiu. Finalment, el sistema de dissolvents compost d'acetat d'etil-n-butanol-etanol-aigua (40:6:6:50, v/v/v/v) es va utilitzar per aïllar i purificar quatre compostos de C. deserticola, tal com es mostra a Figura 3. Tal com es mostra a la figura 2, l'anàlisi HPLC de cada fracció HSCCC va revelar que quatre PhG purs (acteòsid, 99 per cent; isoacteòsid, 95 per cent; siringalida A 3'- -L-ramnopiranòsid 99 per cent i 2'-). acetilacteòsid 98 per cent) es podria obtenir a partir de la fracció crua.

Experimental

Aparell

L'equip HSCCC emprat en el present estudi va ser un sistema de cromatografia a contracorrent d'alta velocitat TBE-300B (Shanghai Tauto Biotech Co., Xangai, Xina) amb tres columnes preparatives de separació de bobines multicapa connectades en sèrie (diàmetre del tub).=2,6 mm, volum total=300 ml) i un bucle de mostra de 20 ml. El radi de revolució o la distància entre l'eix del suport i el centreeix de la centrífuga (L'eix de la centrífuga (R) era de 5 cm i el valor variava de 0,5 al terminal intern a 0,8 al terminal extern (= r/R, on r és la distància des de la bobina fins a l'eix del suport). Es va utilitzar un instrument de circulació de temperatura constant HX 1{05 (Beijing Changliu Lab Instrument Company, Beijing, Xina) per controlar la temperatura a l'experiment. El sistema HSCCC estava equipat amb una bomba de flux constant de pressió mitjana model TBP-5002, un detector UV model TBP-2000 que funcionava a 254 nm i una estació de treball model V4.0 (Jinda Biochemistry Instrument Company, Xangai, Xina).

L'equip de cromatografia líquida d'alt rendiment (HPLC) utilitzat va ser un sistema Agilent 1200 que consta d'una bomba binària G1312A, un mostreig automàtic G1329A, un detector de longitud d'ona variable (VWD) G1314A, un compartiment de columna termostat G1316A, un desserador G1379B i un G1316A. estació de treball. Es va utilitzar un Alltech 3300 ELSD per a la detecció de les pureses. Els espectròmetres RMN Agilent 6520 Q-TOF i Bruker AVANCE III 500-S'han utilitzat per a la identificació estructural dels compostos. Els espectres de RMN 1H i 13C (a 500 i 125 MHz, respectivament) es van mesurar a temperatura ambient (22 graus / 295,1 K).

Reactius i materials

L'acetat d'etil, n-butanol i etanol eren de grau analític i el metanol era de grau HPLC. Tots els dissolvents es van comprar a Tianjin Concord Technology Company (Tianjin, Xina). Es va utilitzar aigua Milli-Q (18,2 MΩ) (Millipore, Bedford, MA, EUA) per a totes les solucions i dilucions. El rizoma de C. deserticola es va recollir a la província de Mongòlia Interior, República Popular de la Xina, el juny de 2009. La planta va ser identificada pel professor Lijuan Zhang i es va dipositar un exemplar de val (núm. 20091001) al nostre laboratori.

Preparació de la mostra bruta

Les tiges carnoses assecades a l'aire en pols de C. deserticola (1 kg) es van refluxar dues vegades amb etanol aquós (8 L, 60 per cent v/v) durant 2 h cada vegada. L'extracte es va evaporar a pressió reduïda i a una temperatura de 60 graus fins a l'evaporació total de l'etanol. El residu es va suspendre en aigua i es va extreure successivament tres vegades amb cloroform, acetat d'etil i n-butanol, donant 5,16 g d'extracte n-butanoic després de l'evaporació a sequedat a pressió reduïda. L'extracte n-butanoic es va separar en una columna de gel de sílice (200-300 malles) mitjançant una elució de gradient progressiu (CHCl3-MeOH, 10:1→1:1) per donar vuit fraccions. La fracció 6 (297 mg) es va utilitzar per a un aïllament i separació addicionals de HSCCC.

Selecció dels sistemes solvents bifàsics

Els sistemes de dissolvents bifàsics es van seleccionar segons el coeficient de partició (K) dels components objectiu en la fracció de C. deserticola. Els valors de K es van determinar mitjançant anàlisi LC de la següent manera: es va dissoldre una quantitat adequada d'extracte en pols (fracció 6) a la fase inferior del sistema de dissolvents i es va analitzar per HPLC. Les àrees dels cims es van registrar com a A1. A continuació, es va afegir un volum igual de la fase superior a la solució i es va barrejar a fons per aconseguir l'equilibri de partició. La fase inferior es va analitzar de nou per HPLC. Aquestes últimes zones pic es van registrar com a A2. Els valors K es van calcular segons l'equació següent: K=(A1 − A2)/A2 [15,16].

Preparació del sistema solvent bifàsic i solució de mostra

En el present estudi, es va utilitzar el sistema de dissolvents de dues fases compost per acetat d'etil-n-butanol-etanol-aigua (40:6:6:50, v/v/v/v) per a la separació de HSCCC. Cada dissolvent es va afegir a un embut separador i es va equilibrar completament a temperatura ambient. La fase superior i la fase inferior es van separar i desgasificar per sonicació durant 30 minuts poc abans de l'ús. La solució de mostra es va preparar dissolent 297 mg de la fracció 6 en 15 ml de la fase inferior d'acetat d'etil-n-butanol-etanol-aigua (40:6:6:50, v/v/v/v).

Procediment de separació HSCCC

HSCCC es va realitzar de la següent manera. La columna enrotllada multicapa es va omplir primer amb la fase estacionària orgànica superior. La fase mòbil aquosa inferior es va bombejar a l'extrem capçal de la columna a un cabal d'1, 5 ml/min i, al mateix temps, l'aparell HSCCC es va fer funcionar a una velocitat de revolució de 900 rpm. Després d'establir l'equilibri hidrodinàmic, tal com indica una fase mòbil clara que elueix a la sortida de la cua (unes dues hores més tard), es va injectar una solució de mostra de 15 ml que contenia 297 mg d'extracte brut (fracció 6) a través de la vàlvula d'injecció. L'efluent de la columna es va controlar contínuament a 254 nm. Es van recollir quatre fraccions pics segons el cromatograma i després es van evaporar a pressió reduïda. La temperatura de l'aparell es va establir a 25 graus.

Anàlisi HPLC i identificació de fraccions pic de HSCCC

Les fraccions màximes de HSCCC es van analitzar mitjançant HPLC-ELSD. La columna utilitzada va ser un Accurasil C18 (250 mm × 4,6 mm, id 5 μm), la fase mòbil era metanol-aigua (30:70, v/v). El cabal era d'1 ml/min. ELSD es va operar en les condicions següents: temperatura 45 graus, gas 1,6 L/min. La identificació estructural de les quatre fraccions de pic HSCCC es va dur a terme mitjançant espectroscòpia HR-ESI-MS, 1H i 13C-NMR.

La identificació estructural

Fracció I: HR-ESI-MS observat a m/z 623,2001 (M−H)−, calculat per a C29H35O15, 623,1981. 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 de ramnosa), 2,79 (2H, t, J=7,5 Hz, Ar-CH 2-), 4,37 (1H, d, J=8 Hz, H{-1 de glucosa), 5,18 (1H, d, J=1 Hz, H{{34} } de ramnosa), 6,27 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH{=CH-), 7,59 (1H, d, J {= 15,5 Hz, Ar -CH=CH-), 6,5–7,1 (6H, H aromàtic).13C-RMN (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,5 (C{-1), 117,2 (C{{65} }), 146,2 (C{-3), 144,7 (C{-4), 116,4 (C{-5), 121,3 (C{-6), 72,4 (C-), 36,6 (C- ), 127,7 (Caf{-1), 115,3 (Caf{-2), 146,9 (Caf{-3), 149,8 (Caf{{-4), 116,6 (Caf{{{ 98}}), 123,2 (Caf-6), 168,3 (Caf- ), 114,8 (Caf- ), 148,1 (Caf- ), 104,3 (G{-1), 76,1 (Glc{{{116} }), 81,7 (Glc-3), 70,5 (Glc{-4), 76,3 (Glc{-5), 62,4 (Glc{-6), 103,1 (Rha{{131} }), 72,3 (Rha{-2), 72,1 (Rha{-3), 73,9 (Rha{-4), 70,7 (Rha{-5), 18,5 (Rha{{{146} }). En comparació amb les dades proporcionades a la literatura [17], la fracció I correspon a l'acteòsid.

Fracció II: HR-ESI-MS observat a m/z 623,1987 (M−H)−, calculat per a C29H35O15, 623,1981. 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,25 (3H, d, J=6,5 Hz, CH3 de ramnosa), 2,78 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,33 (1H, d, J=8 Hz, H-1 de glucosa), 5,17 (1H, d, J {{ 33}} Hz, H-1 de ramnosa), 6,28 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH{=CH-), 7,56 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 6,5–7,0 (6H, H aromàtic). 13C-RMN (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,5 (C-1), 117,2 (C{-2), 146,2 (C{-3), 144,7 (C{-4 ), 116,5 (C{-5), 121,3 (C{-6), 72,4 (C- ), 36,7 (C- ), 127,8 (Caf{-1), 115,2 (Caf{{{89} }}), 146,8 (Caf{-3), 149,7 (Caf{-4), 116,6 (Caf{-5), 123,2 (Caf{-6), 169,2 (Caf-), 115,0 (Caf- ), 147,3 (Caf- ), 104,5 (G{-1), 75,5 (Glc{-2), 84,2 (Glc{-3), 70,1 (Glc{-4 ), 75,7 (Glc{-5), 64,7 (Glc{-6), 102,8 (Rha{-1), 72,4 (Rha{-2), 72,4 (Rha{-3 ), 74,1 (Rha{-4), 70,5 (Rha{-5), 17,9 (Rha{-6). Les dades espectrals 1H-NMR i 13C-NMR estaven d'acord amb les de l'isoacteòsid tal com s'informa a la literatura [18].

Fracció III: HR-ESI-MS observat a m/z 6{{108}}7,2032 (M−H)−, calculat per a C29H35O14, 607,2032. 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 de ramnosa), 2,84 (2H, t, J=7,5 Hz, Ar-CH 2-), 4,37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 de glucosa), 5,19 (1H, d, J=1,5 Hz, H{{ 35}} de ramnosa), 6,27 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH{=CH-), 7,59 (1H, d, J {= 16 Hz, Ar-CH =CH-), 6,6–7,1 (7H, H aromàtic). 13C-RMN (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 130,8 (C-1), 116,2 (C{-2), 130,9 (C{-3), 156,8 (C{-4 ), 130,8 (C{-5), 116,2 (C{-6), 72,4 (C-), 36,4 (C-), 127,8 (Caf{-1), 114,8 (Caf{{{88) }}), 149,8 (Caf{-3), 146,9 (Caf{-4), 116,6 (Caf{-5), 123,2 (Caf{-6), 168,3 (Caf-), 115,4 (Caf- ), 148,0 (Caf- ), 104,3 (G{-1), 76,3 (Glc{-2), 81,7 (Glc{-3), 70,4 (Glc{-4 ), 76,1 (Glc{-5), 62,5 (Glc{-6), 103,0 (Rha{-1), 72,3 (Rha{-2), 72,2 (Rha{-3 ), 73,9 (Rha{-4), 70,7 (Rha{-5), 18,4 (Rha{-6). Segons la literatura [18], la fracció III corresponia a la siringalida A 3'{- -L-ramnopiranòsid.

Fracció IV: HR-ESI-MS observat a m/z 665,21{{20}} (M−H)−, calculat per a C31H37O16, 665,2087. 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,09 (3H, d, J=6,5 Hz, CH3 de ramnosa), 2,00 (3H, s, OAc), 2,72 (2H, t, J { {25}},5 Hz, Ar-CH2-), 4,55 (1H, d, J=8 Hz, H-1 de glucosa), 4,90 (1H, d, J { {37}} Hz, H-1 de ramnosa), 6,29 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH{=CH-), 7,62 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH{=CH-), 6,5–7,0 (6H, H aromàtic). 13C-RMN (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,9 (C-1), 117,3 (C{-2), 146,1 (C{-3), 144,7 (C{-4 ), 116,4 (C{-5), 121,4 (C{-6), 72,7 (C- ), 36,4 (C- ), 127,7 (Caf{-1), 115,4 (Caf{{{93} }}), 146,9 (Caf{-3), 149,9 (Cafe{-4), 116,6 (Cafe{-5), 123,2 (Caf{-6), 168,1 (Caf-), 114,7 (Caf- ), 148,2 (Caf- ), 101,8 (G-1), 75,3 (Glc{-2), 80,3 (Glc{-3), 70,8 (Glc{-4 ), 76,2 (Glc{-5), 62,3 (Glc{-6), 103,3 (Rha{-1), 72,0 (Rha{-2), 71,8 (Rha{-3 ), 73,7 (Rha{-4), 70,8 (Rha{-5), 18,5 (Rha{-6), 171,5 (C{=O), 20,9 (OAC). Les dades espectrals 1H-NMR i 13C-NMR estaven d'acord amb les del 2'-acetilacteòsid [17].

Conclusions

Un mètode HSCCC per a la separació i purificació preparatives d'acteòsid, isoacteòsid, siringalida A 3'- -L-ramnopiranòsid i 2'-acetilacteòsid deCistanches deserticola YC Maestava establert. El present estudi indica que HSCCC és una tècnica molt potent per a la separació preparativa i purificació de components bioactius a partir de materials vegetals. A més, els compostos es poden aïllar a una escala prou gran amb pureses elevades i després es poden utilitzar com a substàncies de referència per a estudis de cromatografia o bioactivitat. El mètode és una tècnica factible, econòmica i eficient per a un ràpid aïllament preparatiu de productes naturals complicats.

Agraïments

Aquest treball va comptar amb el suport del Programa per a Estudiants de Changjiang i Equip de Recerca Innovadora a la Universitat (PCSIRT), el Projecte de Pla de Cooperació Internacional del Ministeri de Ciència i Tecnologia de la Xina (2008DFB30070) i ​​el Programa Científic de Left Banner d'Alashan ({{2 }}).

Referències

1. Comissió de la Farmacopea Xinesa. Farmacopea de la República Popular de la Xina; People's Medical Publishing House: Beijing, Xina, 2010; Volum 1, pàg. 126.

2. Jiang, Y.; Tu, PF Anàlisi de constituents químics en espècies de Cistanche. J. Cromatogr. 2009, 1216, 1970–1979.

3. Morikawa, T.; Pan, Y.; Ninomiya, K.; Imura, K.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M.; Yuan, D.; Muraoka, O. Aminoglucòsids feniletanoides acilats amb activitat hepatoprotectora de la planta del desert Cistanche tubulosa. Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 1882–1890.

4. Chen, H.; Jing, FC; Li, CL; Tu, PF; Zhang, QS; Wang, ZH Echinacoside impedeix que els nivells extracel·lulars estriatals de neurotransmissors monoamines disminueixin en les rates de 6-hidroxidopamina. J. Etnofarmacol. 2007, 114, 285–289.

5. Muraoka, O.; Ninomiya, K.; Morikawa, T.; Wakayama, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Components hepatoprotectors de les tiges de Cistanche tubulosa. Yakugaku Zasshi 2007, 127, 49–51.

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, OH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Activitats neuroprotectores in vitro dels glucòsids feniletanoides del dichotoma de Callicarpa. Planta Med. 2005, 71, 778–780.

7. Li, M.; Liu, RM; Sol, AL; Wu, SJ; Liu, NN Separació i purificació de rutina i acaciïna de l'herba medicinal xinesa Herba Cirsii mitjançant la combinació de resina d'adsorció macroporosa i cromatografia a contracorrent d'alta velocitat. J. Cromatogr. Ciència. 2009, 47, 329–332.

8. Yin, H.; Zhang, S.; Luo, XM; Liu, YH Aïllament i purificació preparatius de dos glucòsids benzoxazinoides d'Acanthus ilicifolius L. mitjançant cromatografia a contracorrent d'alta velocitat. J. Cromatogr. 2008, 1205, 177–181.

9. Peng, AH; Li, R.; Hu, J.; Chen, LJ; Zhao, X.; Luo, HD; Sí, HY; Yuan, Y.; Wei, YQ Separació per cromatografia a contracorrent d'alta velocitat de gradient de cabal de cinc diterpenoides de Triperygium wilfordii i ampliació. J. Cromatogr. 2008, 1200, 129–135.

10. Xie, J.; Deng, J.; Tan, F.; Su, J. Separació i purificació d'echinacòsid de Penstemon barbatus (Can.) Roth mitjançant el reciclatge de cromatografia a contracorrent d'alta velocitat. J. Cromatogr. B2010, 878, 2665–2668.

11. Li, L.; Tsao, R.; Yang, R.; Liu, C.; Jove, JC; Zhu, H. Aïllament i purificació de glicòsids feniletanoidesCistanche deserticolamitjançant cromatografia a contracorrent d'alta velocitat. Química dels Aliments. 2008, 108, 702–710.

12. Li, L.; Tsao, R.; Liu, ZQ; Liu, SY; Yang, R.; Jove, JC; Zhu, HH; Deng, ZY; Xie, MEU; Fu, ZH Aïllament i purificació d'acteòsid i isoacteòsid de Plantago psyllium L. mitjançant cromatografia a contracorrent d'alta velocitat. J. Cromatogr. 2005, 1063, 161–169. Molècules 2012, 17 8284

13. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Ito, Y. Aïllament i purificació preparatius d'acteòsid i 2'-acetil acteòsid de salsa Cistanches (CA Mey.) G. Beck per cromatografia a contracorrent d'alta velocitat. J. Cromatogr. 2001, 912, 181–185.

14. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Chen, FK; Ito, Y. Aïllament preparatiu i purificació de glicòsids feniletanoides a partir de l'extracte de femta de gossos beagle mitjançant cromatografia a contracorrent d'alta velocitat. J. Liq. Cromatogr. Relat. Tecnol. 2001, 24, 2187–2195.

15. Gao, SY; Feng, B.; Zhu, RN; Ma, JK; Wang, W. Aïllament preparatiu de tres antraquinones de Rumex japonicus mitjançant cromatografia a contracorrent d'alta velocitat. Molècules 2011, 16, 1201–1210.

16. Ell, F.; Bai, YH; Wang, J.; Wei, J.; Yu, CY; Li, S.; Yang, WL; Han, CH Aïllament i purificació de l'oridonina de la planta sencera d'Isodon rubescens mitjançant cromatografia a contracorrent d'alta velocitat. Molècules 2011, 16, 7949–7957.

17. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. New phenylethanoid glycosides from cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. I. Chem. Farmàcia. Bou. 1987, 35, 3309–3314.

18. Yoshizawa, F.; Deyama, T.; Takizawa, N.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Els constituents de cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. II. Aïllament i estructures d'un nou glicòsid feniletanoide i d'un nou glicòsid de neoligna. Chem. Farmàcia. Bou. 1990, 38, 1927–1930.