Efecte protector de l'oli essencial de Thymus Serrulatus sobre la nefrotoxicitat induïda pel cadmi en rates, mitjançant la supressió de l'estrès oxidatiu i la regulació a la baixa de l'expressió de MRNA NF-κB, INOS i Smad2
Mar 17, 2022
Contacte: ali.ma@wecistanche.com
Mohd Nazam Ansari1,*, Najeeb Ur Rehman1,*, Aman Karim2, Imam Faisal3 i Abubaker M. Hamad4,5
Cistanche deserticola ma per a la malaltia renal, feu clic aquí per obtenir la mostra
Resum:
L'objectiu de la investigació era examinar l'efecte protector de l'oli essencial de thymus serru latus Hochst. ex Benth. (oli TSA) contracadmiinduïda per (Cd).renaltoxicitat. El protocol experimental es va dissenyar utilitzant 30 rates albines Wistar adultes sanes assignades a grups de fitxers que contenien sis animals a cada grup. El grup 1 es va tractar com a control normal i els grups 2, 3, 4 i 5 es van tractar ambcadmiclorur (CdCl2, 3 mg/kg, IP) durant 7 dies. El grup 3 també es va tractar amb silimarina (100 mg/kg, PO) com a grup estàndard, mentre que els grups 4 i 5 es van administrar amb oli TSA a dosis de 100 i 200 mg/kg PO, respectivament. La nefrotoxicitat es va mesurar amb diversos paràmetres com araronyómarcadors de funció, marcadors d'estrès oxidatiu (glutatió (GSH) i malondialdehid (MDA)) i nivells d'expressió d'àcid ribonucleic missatger (ARNm) de factors inflamatoris. Els estudis histològics també es van avaluar en el protocol experimental. Els grups tractats amb CdCl2-va mostrar un augment significatiu dels nivells de sèrumronyómarcadors de funció juntament amb nivells de MDA en l'homogeneïtat de ronyó. Malgrat això,renalEs va trobar que el nivell de GSH es va reduir significativament. Es va trobar que CdCl2 va augmentar significativament els nivells de factor nuclear de kappaB (NF-κB p65), òxid nítric sintasa inducible (iNOS) i mares petites contra decapentaplejic (Smad2) en comparació amb el grup control normal. D'altra banda, l'oli TSA va millorar significativament els nivells més elevats de marcadors de funció renal sèrica, antioxidants no enzimàtics i peroxidació lipídica. A més, l'oli TSA va reduir significativament l'augment de l'expressió de NF-κBp65, iNOS i Smad2 en rates intoxicades amb Cd. A més, els canvis histològics en les mostres de teixit del ronyó dels grups tractats amb Cd es van millorar significativament en els grups tractats amb oli de silimarina i TSA. El present estudi revela que l'oli TSA millora l'induït per Cdrenallesions, i també es proposa que l'efecte nefroprotector observat podria ser degut al potencial antioxidant de l'oli de TSA i la curació a causa de la seva acció antiinflamatòria.
Paraules clau:cadmi; inflamació; NF-κB; lesió renal; Smad 2; Timo serrulatus
1. Introducció
L'exposició a productes químics ambientals continua sent un problema de salut pública important a nivell mundial. L'exposició al cadmi (Cd), un dels metalls tòxics més reactius, ha augmentat a la biosfera tant de fonts naturals com antropogèniques [1]. L'exposició al Cd també es deu a la contaminació del sòl, l'aire, l'aigua i els aliments, així com el fum de la cigarreta [2]. Un augment significativa de l'absorció juntament amb una disminució de la taxa d'excreció condueix a un augment de la càrrega de Cd en diferents òrgans. El Cd pot danyar diversos òrgans depenent de la seva dosi, ruta i durada, però afecta principalmentronyonsi provoca insuficiència renal [3].
Elronyonssón òrgans vitals del cos humà i són responsables de diverses funcions essencials, inclosa l'eliminació de metabòlits nocius, residus nitrogenats i alguns fàrmacs amb l'orina [4]. Estudis anteriors van informar que la toxicitat per Cd provoca una disfunció irreversiblerenaltúbuls [5] i provoca una disminució de l'eliminació de les substàncies químiques tòxiques, fàrmacs o ambdues que condueixen a un agutronyófracàs. A més,renalla lesió causada per l'exposició crònica al Cd pot provocar insuficiència renal crònica i, si no es tracta, pot provocar la mort [6,7]. L'acumulació de Cd als túbuls contornejats proximals obstrueix la reabsorció tubular i provoca poliúria i proteinúria. Hi ha hagut estudis sobre efectes anormals comuns del Cd sobre la funció renal, però encara hi ha una manca d'informació detallada sobre els mecanismes moleculars i la necessitat d'explorar-ho més endavant [8].
Els estudis realitzats durant les últimes dècades van revelar que la màxima probabilitat derenalel dany es deu a l'alliberament de Cd a la cèl·lula que provoca estrès oxidatiu [9,10]. Un dels mecanismes suggerits és la pertorbació del sistema de defensa antioxidant natural, que a més provoca la sobreproducció de radicals lliures d'oxigen (OFR) [11] i provoca una disminució dels nivells de glutatió (GSH) i, al seu torn, l'apoptosi relacionada amb l'estrès oxidatiu. 12]. Entre diversos mecanismes reportats, la disminució del contingut de GSH i el dany cel·lular induït per OFR són els principals responsables de la peroxidació lipídica [13,14].
La literatura anterior també troba que la correlació entre l'estrès oxidatiu i la inflamació millora diversosrenalmalalties [15]. Per tant, es pot suggerir que la toxicitat renal és causada pel Cd a través de vies complexes de senyalització intracel·lular que es dirigeixen principalment per l'estrès oxidatiu. El factor nuclear-κB (NF-κB) controla diversos gens inflamatoris en tot tipus de cèl·lules [16]. NF-κB és la causa principal de diversosronyómalalties i es poden activar per exposició al Cd. La malaltia renal crònica s'ha trobat tant en models humans com animals mitjançant la regulació de les proteïnes Smad2 [9]. Estudis anteriors van afirmar que la regulació a la baixa de NF-κB i Smad2 podria ser mecanismes beneficiosos per als fàrmacs antiinflamatoris [17].
Entre les polítiques de tractament, es planteja la hipòtesi que l'atenuació de l'estrès oxidatiu induït per Cd mitjançant antioxidants de fonts naturals o sintètiques es considera com el principal enfocament possible per al tractament de la nefrotoxicitat induïda per Cd. Per tant, recentment els investigadors han buscat mecanismes defensius contra la toxicitat causada per productes químics o fàrmacs i també han considerat compostos biològicament actius amb impacte antioxidant i inflamatori [18,19].
A diferents parts del món, tradicionalment s'han utilitzat diferents espècies del gènere Thymus per tractar diversos trastorns com ara bronquitis, asma, tos ferina, laringitis, amigdalitis i tos [20]. Thymus serrulatus Hochst. Ex Benth (família Lamiaceae) creix a Etiòpia i s'ha utilitzat tradicionalment per tractar la grip [21] i la tos [22]. T. serrulatus és un subarbust perenne molt ramificat que creix a les zones afromuntanes i afroalpines d'Etiòpia i Eritrea [23].
S'ha informat que T. serrulatus posseeix activitats antihelmíntiques, antibacterianes, fungicides [23], diürètiques [22], vasodilatadores [24] i antihiperlipidèmiques [25]. A més, s'ha informat que l'oli essencial de T. serrulatus (oli TSA) posseeix propietats antisèptiques, antifúngiques i vermífugues, entre d'altres [26]. L'oli essencial de la planta de diferents localitats etíops va mostrar una activitat hepatoprotectora prometedora en rates [27]. A més, estudis anteriors han demostrat que les activitats farmacològiques de l'oli essencial estan positivament correlacionades amb la presència d'ingredients actius com ara timol, carvacrol, p-cimen, -terpinè i àcid rosmarínic [26,27]. D'altra banda, el timol i el carvacrol, que s'han trobat com a components principals de l'oli essencial, són productes naturals importants amb activitats d'eliminació de radicals lliures i propietats antioxidants [28]. Un estudi anterior va informar que una combinació de timol i carvacrol tenia un nefroprotector sinèrgic
efecte que es pot atribuir a activitats antioxidants, antiinflamatòries i antiapoptòtiques [29]. A més, el timol i el carvacrol, que s'han trobat com a components principals en plantes que contenen oli essencial, també van provocar una disminució de la immunoglobulina E (IgE), interleucina-4 (IL{-4), interleucina{ Nivells de {6}} (IL-5) i d'interleucina-13 (IL{{-13), així com el nombre de cèl·lules inflamatòries que causen trastorns de les vies respiratòries [30].
Pel que sabem, no s'ha informat de l'efecte de T. serrulatus sobre la nefrotoxicitat. Així, en aquest estudi, hem plantejat i intentat investigar l'efecte nefroprotector de l'oli essencial extret de T. serrulatus d'origen etíop contra la nefrotoxicitat induïda per Cd mitjançant rates albines Wistar mitjançant l'avaluació.ronyómarcadors de funció, marcadors inflamatoris, estat antioxidant i canvis histològics.
2. Resultats
2.1. Rendiment d'oli essencial (per cent)
La hidrodestil·lació de la part aèria de T. serrulatus va donar un 0,09 per cent (v/p) d'oli essencial de color groc pàl·lid amb una olor característica.
2.2. Efecte de l'oli TSA sobre els biomarcadors de la funció renal
Es va trobar que els nivells d'urea en sang, àcid úric, creatinina i nitrogen ureic en sang (BUN) estaven significativament elevats (p <{0}},01) en="" rates="" que="" només="" van="" ser="" tractades="" amb="" cd="" (3="" mg/kg,="" ip).="" )="" durant="" 7="" dies.="" no="" obstant="" això,="" l'administració="" d'oli="" tsa="" i="" silimarina="" a="" rates="" intoxicades="" amb="" cd="" va="" millorar="" substancialment="" la="" induïda="" per="">ronyódany tal com s'especifica per nivells suprimits d'urea en sang, àcid úric, creatinina i BUN (figura 1A-D).
2.3. Efecte de l'oli TSA sobre la peroxidació lipídica i l'estrès oxidatiu
ElrenalEl teixit de rates va mostrar un augment significatiu dels nivells de peroxidació lipídica en termes de MDA i reducció del contingut de GSH després de l'administració de Cd. A més, el tractament amb oli TSA a dosis de 100 i 200 mg/kg disminueix els nivells de MDA depenent de la dosi en rates intoxicades amb Cd. A més, els nivells de GSH es van elevar significativament als grups tractats amb oli TSA i silimarina en comparació amb el grup Cd (figura 2A, B).
2.4. Efectes de l'oli TSA sobre l'expressió d'ARNm p65, NF-κB, iNOS i Smad2
Els canvis en els esdeveniments de senyalització es van avaluar mitjançant Western blotting. L'anàlisi de Western blot va suggerir que l'exposició al Cd va regular significativament (p <{0}}.001) l'expressió="" d'arnm="" de="" nf-κb="" p65,="" inos="" i="" smad2="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" de="" referència.="" el="" tractament="" amb="" oli="" tsa="" va="" reduir="" significativament="" l'expressió="" d'arnm="" de="" p65,="" nf-κb,="" inos="" i="" smad2="" de="" manera="" dependent="" de="" la="" dosi="" en="" relació="" amb="" les="" rates="" sotmeses="" només="" a="" l'exposició="" al="" cd="" (figura="">
2.5. Efecte de l'oli TSA sobre la histopatologia
L'anàlisi histopatològic de les rates del grup control va mostrar normalronyóarquitectura histològica amb túbuls convoluts normals, glomèruls i càpsula de Bowman amb espai normal, així com l'estat normal de les fibres de col·lagen i els materials positius per l'àcid periòdic-Schiff (PAS) com la membrana basal (figura 4). Les microfotografies del grup tòxic mostren glomèruls anormals (G), degeneració (D) i necrosi (N) de túbuls envolupats i espai de Bowman degenerat i gairebé absent. Els túbuls contorneats anormals indiquen una interrupció histològica (T), bloquejada per teixit danyat (B) i necrosi. La microfotografia del grup tòxic tenyit de tricoma de Masson (MT) mostra un augment dels materials col·lagènics (C). A més, la microfotografia del grup tòxic tenyit amb PAS mostra una deposició anormal de materials positius PAS (P) que van desplaçar el parènquima del ronyó; també mostra debilitat o pèrdua de la membrana basal intacta (L). El tractament amb oli TSA a dosis baixes va restablir els glomèruls normals i els túbuls contorneats normals, tot i que encara hi havia un lleuger patiment d'efectes tòxics en forma de túbuls bloquejants (B) i poc augment del material col·lànic (C), així com deposició anormal de Materials PAS-positius (P). El tractament amb oli TSA a dosis altes va donar imatges histològiques d'aspecte histològic gairebé normal molt propers al tractament estàndard (ampliació 400 × i barra d'escala 20 µm per a totes les microfotografies).
3. Discussió
En el medi ambient, els metalls pesants solen estar presents i són propensos a l'absorció, l'oxidació i la interferència amb el destí de les cèl·lules. En particular, el Cd és un compost industrial natural que causa nombrosos impactes tòxics i perillosos, inclosa la nefrotoxicitat, en la salut humana [31,32]. La seva deposició en diversos òrgans provoca estrès oxidatiu que debilita la funció del sistema antioxidant natiu i, com a resultat, condueix al desenvolupament de diverses malalties patològiques greus.33]. La via de la toxicitat induïda per Cd inclou la producció d'espècies reactives d'oxigen (ROS), que posteriorment causa dany renal [34]. Per tant, es pot suposar que els antioxidants poden ser un bon objectiu per al possible enfocament terapèutic cap a la toxicitat relacionada amb el Cd [35]. En aquest informe, hem estudiat l'efecte millorador prometedor de l'oli TSA sobre l'estrès oxidatiu induït per Cd i la lesió renal mitjançant rates.
Un dany renal greu induït per Cd es pot associar amb nivells sèrics elevats d'urea, àcid úric i creatinina a causa de la filtració al torrent sanguini [36,37]. En el present estudi, també es van reportar nivells significativament augmentats d'urea, àcid úric i creatinina en sèrum després d'una exposició a Cd durant 7 dies, cosa que va confirmar la lesió renal greu (figura 1). Els resultats observats corroboren estudis anteriors [19,38]. L'administració d'oli de TSA en ambdues dosis (100 i 200 mg/kg, PO) millora significativament la disfunció renal induïda per Cd que va ser recolzada per la disminució dels nivells sèrics d'urea, àcid úric i creatinina. En el present estudi, s'ha observat que l'exposició al Cd provocaronyódany en augmentar la peroxidació lipídica i pertorbar el sistema antioxidant natural, indicant així un augment de l'estrès oxidatiu. Les troballes observades suggereixen que l'oli TSA podria prevenir els canvis induïts per Cd en les variables relacionades amb els antioxidants a les rates. Aquestes troballes estan d'acord amb les de Kawamoto et al. [39], que va informar d'un augment de la peroxidació lipídica després de l'exposició al Cd. Estudis anteriors van informar que l'exposició crònica al Cd va donar lloc a una disminució dels antioxidants no enzimàtics (GSH tissular) [40]. Les troballes del present estudi corroboren les de Koyuturk et al. [41], que va descriure un contingut de GSH renal reduït en rates intoxicades amb Cd. La disminució del contingut de GSH podria ser deguda al seu consum en la prevenció de la peroxidació lipídica causada per l'estrès oxidatiu [41] i la desintoxicació de metalls pesants [42,43]. Tanmateix, les nostres troballes no estan d'acord amb les de Kamiyama et al. [44], que va descriure un nivell elevat de GSH renal en rates tractades amb Cd. La peroxidació de lípids i el nivell d'antioxidants en rates tractades amb Cd es van modular significativament amb l'administració d'oli de TSA, cosa que indica una disminució de ROS, un reequilibri del sistema de defensa antioxidant o ambdós. Aquestes troballes corroboren les d'un estudi anterior que va descriure l'efecte millorador de la timoquinona contra la lesió renal induïda per productes químics [45].
L'apoptosi es produeix als teixits i varia des de la necrosi en determinats trastorns funcionals [46]. L'apoptosi és una de les principals característiques dels relacionats amb Cdronyólesió. Anteriorment, es va descriure que la toxicitat per Cd provoca apoptosi als túbuls proximals mitjançant l'estimulació de la via NF-kB, que contribueix a la disfunció renal [47,48]. En aquest estudi també es va observar una expressió de proteïna NF-kBp65 augmentada en rates tractades amb Cd. Tanmateix, l'administració d'oli TSA a rates tractades amb Cd va restaurar substancialment l'expressió de la proteïna NF-kBp65. Les troballes observades coincideixen amb les troballes anteriors [18, 19]. Per tant, la inhibició de NF-kB en rates intoxicades amb Cd ha evidenciat la capacitat antiinflamatòria de l'oli TSA.
L'òxid nítric sintasa inducible (iNOS) s'expressa molt en condicions inflamatòries i infeccions. Per tant, és un component vital de la resposta adaptativa de l'hoste a estímuls nocius. Abans es va informar que la lesió renal induïda per Cd està mediada per la síntesi d'òxid nítric mitjançant l'estimulació iNOS [49]. En aquest estudi també, es va trobar que l'exposició al Cd provocava una expressió més gran d'iNOS (figura 3B), mentre que l'oli de TSA en ambdues dosis podria revertir significativament l'expressió d'iNOS en rates intoxicades amb Cd.
La literatura anterior va informar que el Cd és un dels metalls pesants més tòxics i s'absorbeix principalment pels túbuls proximals i s'acumula principalment a l'escorça renal, la qual cosa provoca lesions en els túbuls contornejats proximals [50]. Aquestes troballes corroboren les del present estudi. MajorronyóEl dany es va verificar per la presència de danys importants als glomèruls en rates tractades amb Cd. Aquestes troballes corroboren les de Damek Poprawa i Sawicka-Kapusta [51], que van informar d'atròfia dels capil·lars glomerulars i necrosi dels túbuls proximals. Les troballes deronyómarcadors de funció i marcadors d'estrès oxidatiu, on l'oli TSA va millorar els canvis degeneratius induïts per Cd i va millorarronyófunció a causa dels seus possibles efectes antioxidants i antiinflamatoris, han estat confirmats per observacions histopatològiques.
4. Materials i Mètodes
4.1. Productes químics i reactius
El clorur de cadmi (CaCl2) es va obtenir de Sigma Chemicals Co. (St. Louis, MO, EUA).RonyóEls kits de diagnòstic de funcions es van obtenir de Crescent Diagnostics (Jeddah, KSA). Els anticossos (primaris i secundaris) es van obtenir a Santa Cruz (Dallas, TX, EUA). Els productes químics utilitzats eren de grau analític i d'alta qualitat que no requerien una purificació addicional.
4.2. Material vegetal i extracció
Parts aèries fresques de T. serrulatus Hochst. L'ex Benth es va recollir a la zona de la muntanya Amba Alaje, South Tigray, Etiòpia. El material vegetal va ser autenticat per un botànic, el doctor Getinet Masresha, del Departament de Biologia de la Universitat de Gondar, i l'exemplar es va dipositar a l'herbari de la universitat (TH-001/2011).
Les parts aèries fresques es van tallar en trossos petits i es van sotmetre a hidrodestil·lació durant 3 h amb un aparell Clevenger. La hidrodestil·lació es va realitzar 11 vegades fins que es va recollir una quantitat suficient. L'oli essencial obtingut es va assecar amb sulfat de sodi anhidre i es va emmagatzemar en un recipient ben tancat a 4 ◦ C fins a un nou ús [26]. El rendiment d'oli essencial calculat es va expressar en percentatge (percentatge v/p), basat en el pes del material vegetal fresc.
4.3. Animals
Es van obtenir trenta rates albines mascles amb un pes de 180 a 220 g d'Animal House, College of Pharmacy, Prince Sattam Bin Abdulaziz University (PSAU), KSA. Les rates es van aclimatar durant 1 setmana i es van mantenir per sota de cicles de llum/foscor de 12 h amb instal·lacions estàndard de laboratori. Durant el període experimental i d'aclimatació, els animals van ser alimentats amb una dieta de pellets i accés lliure a l'aigua. En realitzar tots els experiments es van seguir les instruccions i directrius proporcionades per la unitat de cura d'animals, PSAU, KSA. El protocol va ser aprovat prèviament pel Comitè d'Investigació Bioètica (BERC), PSAU (BERC-004-12-19).
4.4. Disseny experimental
Per a l'avaluació de l'efecte nefroprotector de l'oli TSA contra la toxicitat induïda per Cd, les rates es van assignar aleatòriament en cinc grups (n=6). El grup 1 (control normal) va rebre una solució de sal fisiològica (0,9 per cent de NaCl) diàriament durant 7 dies. El grup 2 (control tòxic) va rebre clorur de cadmi (3 mg/Kg, IP, 7 dies). El grup 3 (control positiu) es va administrar conjuntament CdCl2 i silimarina (100 mg/kg, PO) durant 7 dies consecutius. Els grups 4 i 5 van ser coadministrats amb oli de CdCl2 i TSA a dosis de 100 i 200 mg/Kg (PO, 7 dies), respectivament. La dosi de CdCl2 es va seleccionar a partir de la literatura prèviament informada [19,52].
Després de 24 h de tractament, totes les rates mascles van ser anestesiades amb una petita quantitat d'èter dietílic per recollir les mostres de sang del plexe retroorbital seguit de centrifugació, i es va realitzar la separació del sèrum i es va emmagatzemar a -20 ◦ C fins a un nou ús. per a la determinació deronyómarcadors de funció (com l'àcid úric, la creatinina i la urea). Després de la recollida de sèrum amb èxit, els dos ronyons es van aïllar de totes les rates. L 'esquerraronyóes va emmagatzemar immediatament a -80 ◦ C fins a l'anàlisi posterior del marcador d'estrès oxidatiu (MDA i GSH) i l'anàlisi de Western blot. Mentrestant, el ronyó dret s'emmagatzemava per a estudis histopatològics.
4.5. Determinació del biomarcador de la funció renal
sBiomarcadors deronyóLa funció, és a dir, l'àcid úric, la urea i la creatinina, es van avaluar mitjançant l'ús de kits comercials específics segons els mètodes esmentats als protocols dels fabricants.
4.6. Determinació de marcadors d'estrès oxidatiu al ronyó
Els teixits es van homogeneïtzar i es van picar (10 per cent p/v) en tampó de fosfat 0,1 M fred amb gel a pH 7,4, i la solució es va centrifugar durant 30 min a 12,000×g i 4◦ C. L'homogeneïtat obtingut es va utilitzar per a l'estimació dels nivells de GSH i MDA.
El marcador de peroxidació lipídica MDA es va estimar mitjançant un mètode descrit anteriorment [53]. Breument, es va incubar 0,25 ml d'homogenat a una temperatura de 37 graus durant 1 h en un agitador metabòlic. Després de la incubació, es va afegir 0,5 ml d'àcid tiobarbitúric 0,67% (TBA) i 0,5 ml d'àcid tricloroacètic (TCA) refrigerat al 5% (p/v) , seguit de centrifugació (1000 × g, 15 min). Després, el sobrenedant es va mantenir en un bany d'aigua bullint durant 10 minuts. L'absorbància desenvolupada es va mesurar a 535 nm, és a dir, es va observar el color rosat.
Per a GSH, Jollow et al. [54] es va seguir el mètode. Breument, després de la precipitació d'1 ml de PMS amb 1 ml d'àcid sulfosalicílic (4 per cent), les mostres de prova es van incubar (4 ◦C, 1 h), seguida de centrifugació (1200× g). , 15 min, 4 ◦C). La barreja d'assaig contenia sobrenedant (0,1 ml), tampó fosfat (0,1 M, pH 7,4) (1,7 ml) i àcid ditiol-bis{-2-nitrobenzoic (DTNB) (0,4 per cent en tampó fosfat, 0,1 M, pH 7,4) (0,2 ml) en un volum total de 2,0 ml. L'absorbància de les mostres es va analitzar a 412 nm en 5 minuts després de l'addició de DTNB a les mescles de reacció.
4.7. Tècnica Western Blot
L'anàlisi Western blot i l'extracció de proteïnes es van realitzar tal com es va esmentar a l'estudi anterior [55].Ronyóels teixits es van picar i l'homogeneïtat es va preparar en una barreja d'inhibidors de proteases i tampó de lisi de proteïnes en fred [55]. Per aïllar les proteïnes totals, els lisats de teixit es van conservar en gel durant 60 min, amb vortex alternatiu (després de 10 min), es va continuar amb la centrifugació a 12, 000 × g (4 ◦ C, 10 min). El mètode de Lowry et al. [56] es va seguir per determinar la proteïna total. Per a l'anàlisi de Western blot, es va aïllar breument la proteïna (25-50 µg) de cada grup i es va traslladar a membranes de nitrocel·lulosa obtingudes de Bio-Rad USA. Immediatament el bloqueig de les taques de proteïnes es va fer a 4 ◦ C (durant 24 h); després d'això, es va realitzar la incubació amb anticossos primaris contra NF-κB p65, iNOS i Smad2 i anticossos secundaris conjugats amb peroxidasa a temperatura ambient. Les proteïnes es van analitzar amb l'ajuda d'un kit de detecció de quimioluminescència (GE Health Care, Mississauga, Canadà). La intensitat de la banda de proteïnes es va normalitzar a bandes de beta-actina mitjançant ImageJ (NIH, Bethesda, EUA). Les imatges es van capturar amb un escàner Western blot quimioluminiscent aC-Digit obtingut de LI-COR, EUA.
4.8. Anàlisi histopatològica
Dretronyóels teixits de mostra fixats en formalina neutra al 10% es van gestionar en una màquina de processament de teixits (ASP300s, Leica Biosystems, IL, EUA); cada mostra es va incrustar en cera de parafina i es va tallar en seccions de 4–5-µm de gruix. Es van triar tres seccions de cada grup i es van tenyir amb colorant d'hematoxilina i eosina (H&E), tinció d'àcid periòdic-Schiff (PAS) i tinció de tricrom de Masson (MT) [57]. Totes les seccions de teixit es van analitzar mitjançant un microscopi (Olympus BX 52) per a la descripció histopatològica que va ser registrada per un histopatòleg, cec als grups experimentals. Per fer fotografies es va utilitzar la càmera Olympus DP21 fixada sobre el microscopi.
4.9. Anàlisi estadística
Els valors es van expressar com a mitjana ± SEM. Es va utilitzar l'anàlisi ANOVA unidireccional mitjançant la prova post hocTukey per mesurar la importància de les dades bioquímiques dels diferents grups. Les diferències es van mesurar significativament als valors de p < 0.05="" en="" relació="" amb="" el="" grup="" control="" normal="" o="" control="" tòxic.="" la="" investigació="" estadística="" es="" va="" aconseguir="" mitjançant="" graphpadprism="" v.="" 4.0="">
5. Conclusions
Aquest estudi conclou que l'oli essencial de T. serrulatus va millorar la insuficiència renal induïda per Cd, que possiblement va ser mediada per la millora dels paràmetres alterats d'estrès bioquímic i oxidatiu, a més de la millora de les estructures histològiques. A més, T. serrulatus podria ser un agent adequat que es desenvoluparà en el futur per a la protecció renal ironyó- Trastorns relacionats.
Finançament:Aquesta investigació no va rebre cap finançament extern.
Declaració de disponibilitat de dades:L'intercanvi de dades no és aplicable.
Conflictes d'interès:Els autors declaren que no hi ha conflictes d'interessos. Els finançadors no van tenir cap paper en el disseny de l'estudi; en la recollida, anàlisi o interpretació de dades; en la redacció del manuscrit; o en la decisió de publicar els resultats.
Disponibilitat de mostra:Els autors disposen de mostres de l'oli essencial TSA.
Referències
1. Dua, TK; Dewanjee, S.; Khanra, R.; Bhattacharya, N.; Bhaskar, B.; Zia-Ul-Haq, M.; De Feo, V. Els efectes de dues herbes comestibles comunes, Ipomoea aquatic i Enhydra fluctuans, en la fisiopatologia induïda per cadmi: un focus en la defensa oxidativa i el mecanisme anti-apoptòtic. J. Trad. Med. 2015, 13, 245. [CrossRef] [PubMed]
2. Elkhadragy, MF; Abdel Moneim, AE Efecte protector de l'extracte metanòlic de Fragaria ananassa sobre l'hepatotoxicitat induïda per clorur de cadmi (CdCl2) en rates. Toxicol. Mech. Mètodes 2017, 27, 335–345. [Ref creuat]
3. Wu, H.; Liao, Q.; Chillrud, SN; Yang, Q.; Huang, L.; Bi, J.; Yan, B. Exposició ambiental al cadmi: avaluació del risc per a la salut i les seves associacions amb la hipertensió i la funció renal deteriorada. Ciència. Rep 2016, 6, 29989. [CrossRef]
4. Ferguson, MA; Vaidya, VS; Bonventre, JV Biomarcadors de lesió renal aguda nefrotòxica. Toxicologia 2008, 245, 182–193. [CrossRef] [PubMed]
5. Ibrahim, MA; Almaden, AH; El Moneim, MA; Tammam, HG; Khalifa, AM; Nasibe, MN Toxicitat hematològica, renal i hepàtica induïda pel cadmi: la millora per Spirulina platensis. Saudi J. Forense Med. Ciència. 2018, 1, 5–13. [Ref creuat]
6. Galera, IC Es pot prevenir la insuficiència renal aguda? JR Coll. Surg. Edinb. 2000, 45, 45–50. [PubMed]
7. Finn, W.; Porter, G. Biomarcadors urinaris i nefrotoxicitat. A Clinical Nephrotoxins, 2a ed.; Kluwer Academic Publishers: Norwell, MA, EUA, 2003; pàgines 621–655.
8. Prozialeck, WC; Edwards, JR Mecanismes de lesió del túbul proximal induïda pel cadmi: nous coneixements amb implicacions per a la biovigilància i les intervencions terapèutiques. J. Pharmacol. Exp. Allà. 2012, 343, 2–12. [CrossRef] [PubMed]
9. Lan, HY Funcions diverses del TGF-8/Smads en la fibrosi renal i la inflamació. Int. J. Biol. Ciència. 2011, 7, 1056–1067. [CrossRef] [PubMed]
10. Luo, T.; Liu, G.; Llarg, M.; Yang, J.; Cançó, R.; Wang, Y.; Yuan, Y.; Bian, J.; Liu, X.; Gu, J.; et al. Tractament del dany oxidatiu renal induït pel cadmi en rates mitjançant l'administració d'àcid alfa-lipoic. Entorn. Ciència. Contaminar. Res. Int. 2017, 24, 1832–1844. [CrossRef] [PubMed]
11. Angeli, JK; Cruz Pereira, CA; de Oliveira Faria, T.; Stefanon, I.; Padilha, AS; Vassallo, DV L'exposició al cadmi indueix lesions vasculars a causa de l'estrès oxidatiu endotelial: el paper de l'angiotensina II i la COX locals-2. Radic Lliure. Biol. Med. 2013, 65, 838–848. [Ref creuat]
12. Orororo, OC; Asagba, SO; Tonukari, NJ; Okandeji, OJ; Mbanugo, JJ Efectes d'Hibiscus Sabdarrifa L. Antocianines sobre l'estrès oxidatiu induït per cadmi en rates Wistar. J. Appl. Ciència. Entorn. Gestionar. 2018, 22, 465–470. [Ref creuat]
13. Inoue, M. Mecanismes protectors contra espècies reactives d'oxigen. A El fetge: biologia i patobiologia, 5a ed.; Arias, IM, Boyer, JL, Fausto, N., Jokoby, WB, Schachter, DA, Shafritz, DA, Eds.; Raven Press: Nova York, NY, EUA, 2011; pàgines 443–459.
14. Yadav, RK; Singh, M.; Roy, S.; Ansari, MN; Saeed, AS; Kaithwas, G. Modulació de la resposta a l'estrès oxidatiu per l'oli de llinosa: paper de la peroxidació lipídica i els mecanismes subjacents. Prostaglandines Altres lípids Mediat. 2018, 135, 21–26. [CrossRef] [PubMed]
15. Gong, X.; Ivanov, VN; Davidson, MM; Hei, TK Tetrametilpirazina (TMP) protegeix contra la nefrotoxicitat induïda per l'arsenit de sodi suprimint la producció de ROS, la disfunció mitocondrial, les vies de senyalització pro-inflamatòries i la mort cel·lular programada. Arc. Toxicol. 2015, 89, 1057–1070. [CrossRef] [PubMed]
16. Bonizzi, G.; Karin, M. Les dues vies d'activació de NF-KB i el seu paper en la immunitat innata i adaptativa. Tendències. Immunol. 2004, 25, 280–288. [Ref creuat]
17. Imam, F.; Al-Harbi, NO; Al-Harbi, MM; Ansari, MA; Al-Asmari, AF; Ansari, MN; Al-Anazi, WA; Bahashwan, S.; Almutairi, MM; Alshammari, M.; et al. Apremilast prevé l'apoptosi induïda per la doxorubicina i la inflamació al cor mitjançant la inhibició de l'activació mediada per l'estrès oxidatiu de les vies de senyalització NF-B. Pharmacol. Rep. 2018, 70, 993–1000. [Ref creuat]
18. Erboga, M.; Kanter, M.; Aktas, C.; Sener, U.; Erboga, ZF; Donmez, YB; Gurel, A. Thymoquinone millora la nefrotoxicitat induïda pel cadmi, l'apoptosi i l'estrès oxidatiu en rates es basa en les seves propietats antiapoptòtiques i antioxidants. Biol. Traça Elem. Res. 2016, 170, 165–172. [Ref creuat]
19. Ansari, MN; Aloliet, RI; Ganaie, MA; Khan, TH; Rehman, N.; Imam, F.; Hamad, AM Roflumilast, un inhibidor de la fosfodiesterasa 4, atenua la toxicitat renal induïda pel cadmi mitjançant la modulació de l'activació de NF-KB i la inducció de NQO1 en rates. Exp. humana Toxicol. 2019, 38, 588–597. [Ref creuat]
20. Fer créixer, F.; Engelbertz, J.; Feistel, B.; Lehnfeld, R.; Bauer, K.; Verspohl, EJ Impacte del timol en extractes de farigola sobre la seva acció antiespasmòdica i la seva neteja ciliar. Planta Med. 2010, 76, 311–318. [Ref creuat]