Mapatge del paisatge proteòmic de la malaltia de Behçet resolta per òrgans utilitzant proteòmica de plasma en profunditat per identificar l'expressió de la proteïna d'unió hialurònica 2 associada a l'afectació vascular

Objectiu.

Aquest estudi es va dur a terme per dilucidar la patogènesi i l'heterogeneïtat de la malaltia de Behçet (BD) que implica diferents òrgans mitjançant proteòmica en profunditat per identificar els biomarcadors per a l'avaluació clínica i el tractament de pacients amb BD.

Mètodes.

Hem mesurat els nivells d'expressió de proteïnes en mostres de plasma de 98 pacients amb BD i 31 controls sans mitjançant la nostra plataforma de proteòmica en profunditat amb un espectròmetre de masses d'adquisició independent de les dades i un microarray d'anticossos. Vam realitzar anàlisis bioinformàtiques dels processos biològics i les vies de senyalització que es van canviar al grup BD i vam construir un paisatge proteòmic de la patogènesi de la BD resolta per òrgans. A continuació, vam validar els biomarcadors de la gravetat de la malaltia i el subconjunt vascular en una cohort independent de 108 pacients amb BD i 29 controls sans mitjançant un assaig immunosorbent lligat a enzims.

cistanche tubulosa: millora el sistema immunitari

Resultats.

El grup BD tenia 220 proteïnes expressades de manera diferent, que discriminaven entre pacients amb BD (88,6%) i controls sans (95,5%). Les anàlisis bioinformàtiques van revelar diferents processos biològics associats a la patogènesi de BD, inclosa l'activació del complement, la cicatrització de ferides, l'angiogènesi i la immunitat mediada per leucòcits. A més, el paisatge proteòmic construït de la BD resolta per òrgans va identificar les característiques proteòmiques de la BD associades a diferents òrgans i dianes de proteïnes que es podrien utilitzar per al desenvolupament del tractament. La proteïna d'unió hialurònica 2, la tenascina i la serpina A3 es van validar com a biomarcadors potencials per a l'avaluació clínica de la BD vascular i els objectius de tractament.

Conclusió.

Els nostres resultats proporcionen una visió valuosa de la patogènesi de la BD resolta per òrgans en termes de característiques proteòmiques i biomarcadors potencials per a l'avaluació clínica i teràpies potencials per a la BD vascular.

INTRODUCCIÓ

La malaltia de Behçet (BD) és una vasculitis crònica multisistèmica que és molt freqüent a la població al llarg de l'antiga ruta comercial coneguda com la Ruta de la Seda. Un estudi del 2016 va trobar que la prevalença de BD a Turquia era de 602 per 100,000 en la població adolescent/adult (1). La BD és molt heterogènia i els pacients presenten afectació multiorgànica, com ara úlceres orals, úlceres genitals, uveïtis i lesions cutànies; La BD pot ser mortal com a resultat d'aneurismes vasculars trencats o complicacions neurològiques greus. Es desconeixen les característiques moleculars de la BD associades a diferents òrgans. Els mètodes de diagnòstic clínic i les opcions de tractament posteriors depenen principalment dels símptomes clínics. No obstant això, no hi ha biomarcadors disponibles que permetin diferenciar la BD en funció de la implicació de diferents òrgans. En comparació amb la genòmica, la proteòmica ofereix un enfocament alternatiu per adquirir informació abundant sobre la patogènesi de la BD i trobar biomarcadors per al diagnòstic i la teràpia de la BD. Lee et al van descobrir 22 proteïnes expressades de manera diferencial mitjançant electroforesi 2-dimensional combinada amb espectrometria de masses en tàndem de desorció/ionització làser assistida per matriu (2). Tres proteïnes úniques a la BD intestinal (fibrina, apolipoproteïna A-IV i amiloide sèric A) es van validar encara més en una cohort independent mitjançant un assaig immunosorbent lligat a enzims (ELISA). Utilitzant matrius de perles de citocines Bio-Rad que contenen 25 citocines inflamatòries, Lopalco et al van trobar que gp130/receptor secretat d'interleucina{-6 (IL{-6), receptor IL{-6 secretat, IL{{19} }, i els nivells sèrics de limfopoietina estromal tímica es van millorar significativament en el subconjunt de BD amb manifestacions mucocutània i afectació ocular en comparació amb el subgrup amb només afectació mucocutània (3). Tanmateix, la informació obtinguda en aquests estudis va ser limitada perquè els grups de proteïnes i pacients eren petits i els biomarcadors identificats no havien estat ben validats. Per a aquest estudi, hem realitzat, segons el nostre coneixement, el primer perfil complet de proteoma de plasma de BD mitjançant la nostra plataforma de proteòmica en profunditat integrada amb l'espectròmetre de masses d'adquisició independent de dades (DIA-MS) amb microarrays d'anticossos personalitzables (4). Amb les dades de proteòmica, es van analitzar proteïnes que s'expressaven de manera diferent entre pacients amb BD i un grup de control sa i els processos biològics i vies d'aquestes proteïnes sobre la patogènesi de la BD. A més, vam construir un paisatge de BD resolt per òrgans i vam identificar les característiques proteòmiques de cada òrgan. Els biomarcadors de la BD vascular i la gravetat de la malaltia es van validar en una cohort independent.

PACIENTS I MÈTODES

Aquest estudi va ser aprovat pel Comitè d'Ètica Mèdica de l'Hospital Peking Union Medical College (JS-2049). Aquest article no conté dades identificables per a cap pacient BD o participant de control saludable. La cohort de descobriment incloïa 98 pacients amb BD i 31 controls sans. El proteoma plasmàtic es va mesurar en profunditat mitjançant DIA-MS i microarray d'anticossos. Les anàlisis bioinformàtiques es van utilitzar per identificar els mecanismes biològics alterats en el grup BD i per construir el paisatge proteòmic del BD resolt per òrgans. Els biomarcadors de plasma candidats es van validar mitjançant ELISA en cohorts independents que comprenien controls sans i pacients amb arteritis BD i Takayasu. Les característiques clíniques i la informació del tractament de les cohorts de descobriment i validació es mostren a les taules suplementàries 1-6, i els procediments experimentals detallats es descriuen als materials suplementaris, disponibles al lloc web d'Artritis i reumatologia a https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348.

RESULTATS

Característiques del pacient. Les característiques clíniques dels pacients amb BD i el seu ús de glucocorticoides (GC) i immunosupressors en el moment de la recollida de sang es mostren a la Taula Suplementària 1, disponible al lloc web d'Artritis i Reumatologia a https://onlinelibrary.wiley.com/doi / 10.1002/art.42348. A la nostra anàlisi de proteòmica, no es van observar diferències significatives en sexe i edat entre els 98 pacients amb BD i els 31 controls sans (cohort de descobriment) (taula suplementària 1). En el grup BD, 45, 38 i 15 pacients tenien BD lleu, moderada i greu, respectivament. Tots els pacients amb BD tenien úlceres orals i > el 20% tenien úlceres genitals (80,6%), lesions cutànies (65,3%), lesions oculars (23,5%) i afectació vascular (22,4%). La implicació vascular dels pacients amb BD a la cohort de descobriment es mostra a la taula suplementària 2, i les característiques de les cohorts de validació que es van aplicar per verificar l'expressió de biomarcadors candidats es mostren a les taules complementàries 3-5 (disponible al lloc web d'Artritis i reumatologia). a leshttps://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348).

cistanche tubulosa: millora el sistema immunitari

Feu clic aquí per veure els productes Cistanche Enhance Immunity

【Demanar més】 Correu electrònic:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Perfil en profunditat del proteoma plasmàtic en pacients amb BD mitjançant DIA-MS i microarrays d'anticossos. A la figura 1A i a la figura suplementària 1 es mostra una il·lustració esquemàtica de l'estudi del perfil de proteïnes, disponible al lloc web d'Artritis i reumatologia a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1{{11} }02/art.42348. Totes les mostres de plasma dels pacients amb BD i els controls sans es van mesurar mitjançant la nostra plataforma de proteòmica de plasma en profunditat que consta de DIA-MS i microarrays d'anticossos amb alta reproductibilitat. Els coeficients de correlació de Spearman de detecció de proteïnes plasmàtiques mitjançant microarrays d'anticossos eren 0,98 i 0,93 dins i entre diferents matrius, respectivament (figures suplementàries 2A i 2B, disponibles al lloc web d'Artritis i Reumatologia a https ://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). El coeficient de correlació de Spearman de detecció de proteïnes plasmàtiques mitjançant DIA-MS va ser de 0, 92 (rang 0, 87-0, 96; figura suplementària 2C). Imatges escanejades representatives per microarray d'anticossos per als pacients amb BD i controls sans es mostren a la figura suplementària 3, disponible a https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348. Els resultats van mostrar que, en general, les proteïnes plasmàtiques dels pacients amb BD estaven regulades en comparació amb les proteïnes plasmàtiques dels controls sans. Amb la nostra plataforma de proteòmica plasmàtica en profunditat, vam identificar 759 proteïnes (figures suplementàries 1, 4 i 5, disponibles al lloc web d'artritis i reumatologia a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348), que es van distribuir en aproximadament 10 ordres de magnitud en plasma (figura 1B). Aquestes proteïnes incloïen 410 biomarcadors de proteïnes (Human Disease Plasma Protein Biomarker Database, en línia a http://biokb.ncpsb.org. cn/hdpp/#/) i 388 dianes terapèutiques que actualment estan aprovades o s'estan investigant en assaigs clínics en curs (Therapeutic). Target Database, en línia a http://db.idrblab.net/ttd/) (Figura 1B). Les anotacions funcionals d'aquests biomarcadors i dianes terapèutiques indiquen que aquestes proteïnes pertanyen a diverses malalties autoimmunes i autoinflamatòries, com ara BD, nefritis lúpica, espondilitis anquilosant i vasculitis (figures 1C i 1D i taules suplementàries 7 i 8, disponibles a Artritis & Rheumatology). lloc web a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348). Aquests resultats suggereixen que les proteïnes plasmàtiques detectades amb la nostra plataforma estan estretament associades amb l'aparició i desenvolupament de BD.

Figura 1. Perfil de proteoma de mostres de plasma de pacients amb malaltia de Behçet (BD) mitjançant una plataforma de proteòmica en profunditat amb espectrometria de masses d'adquisició independent de dades (DIA-MS) i anàlisi de microarrays d'anticossos. Un flux de treball del nostre estudi de proteòmica de BD. B, Distribució de les concentracions de proteïnes plasmàtiques detectades amb DIA-MS i microarray d'anticossos segons les concentracions de referència en una base de dades de proteoma plasmàtic humà (http://www.plasmaproteometatabase.org/). C, Malalties associades als biomarcadors de proteïnes detectats, que es van identificar mitjançant una base de dades de biomarcadors de proteïnes plasmàtiques de malalties humanes (HDPP) (http://biokb.ncpsb.org.cn/hdpp/#/). D, Malalties associades a les proteïnes diana terapèutiques detectades, que es van identificar mitjançant una base de dades d'objectius terapèutics (TTD) (http://db.idrblab.net/ttd/). Les mides dels cercles en C i D corresponen al nombre de proteïnes enriquides en cada malaltia. HC=control saludable; Preparació de mostres assistida per filtre FASP =; Espectròmetre de masses QE-HF=Exactive HF Hybrid Quadrupole Orbitrap (ThermoFisher); Strep-PE=estreptavidina-ficoeritrina; ELISA=assaig immunoabsorbent lligat a enzims; IgA=immunoglobulina A.

Anàlisi a tot el proteoma de proteïnes plasmàtiques expressades de manera diferent associades a BD. La figura suplementària 1, disponible a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348, mostra el diagrama de flux de com es van identificar i integrar les proteïnes expressades de manera diferencial dels resultats de microarrays DIA-MS i anticossos. DIA-MS va dirigir un total de 493 proteïnes, de les quals 379 es van retenir amb<29 missing values in the BD group and < 7 missing values in the healthy control group. After 36 proteins with potential contaminations from blood cells (5) were removed, we analyzed 343 additional proteins for hypothesis testing, of which 166 proteins showed a statistically significant difference between the BD and healthy control groups. The antibody microarray detected 549 proteins. After 5 control proteins were removed, we retained 544 proteins for further analysis; of these, 74 proteins showed statistically significant differences between the BD group and the healthy control group (Supplementary Figure 1). In total, 220 (29.0%) of 759 proteins were significantly differently expressed between the BD group and the healthy control group (P < 0.05), as shown using our in-depth proteomics platform comprising DIA-MS and the antibody microarray (Figure 2A and Supplementary Figures 1 and 5, available at https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). The number of differentially expressed proteins is 10-fold more than previously reported (2,3,6). Among these proteins, 5 were identified as potential plasma or serum biomarkers in proteomics research for patients with BD, including haptoglobin, apoprotein, transthyretin, immunoglobulin light chain, and immunoglobulin heavy chain. Furthermore, growth arrest–specific 6, resistin, von Willebrand factor (VWF), and others were also identified to be increased in the BD group (Figure 2B). We identified 215 new proteins associated with BD, including serpin A3 (SERPINA3), glycosylphosphatidylinositol specific phospholipase D1 (GPLD1), and attractin (ATRN) (Figure 2C).

cistanche tubulosa: millora el sistema immunitari

Per determinar si els pacients amb BD es poden distingir dels controls sans, vam realitzar una anàlisi de agrupació jeràrquica no esbiaixada de 220 proteïnes expressades de manera diferent (P <0.05), en què 0 {3}},0% dels pacients amb BD i 86,4% dels controls sans es van agrupar (figura suplementària 6, disponible al lloc web d'Artritis i Reumatologia a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/). 10.1002/art.42348). Entre 130 proteïnes expressades de manera diferent (P <0, 01), vam trobar que el 88, 6% dels pacients amb BD i el 95, 5% dels controls sans estaven agrupats (figura 2D). Una anàlisi discriminant de mínims quadrats parcials va revelar que els pacients del grup BD eren clarament distingibles dels controls sans segons la classificació de proteïnes expressades de manera diferencial (figura suplementària 7, disponible al lloc web d'Artritis i Reumatologia a https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). L'enriquiment de malalties mitjançant la plataforma DisGeNET (7) va indicar, a més, que aquestes proteïnes expressades de manera diferent s'associen significativament amb la inflamació i les malalties autoimmunes i vasculars, incloses la BD i la vasculitis (figura 2E i taula suplementària 9, disponible al lloc web d'Artritis i Reumatologia a https ://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). En la nostra anàlisi bioinformàtica utilitzant Cytoscape i CluGo, es van identificar els següents 8 processos biològics principals en BD: 1) activació del complement, 2) regulació dels nivells de partícules de lipoproteïnes plasmàtiques, 3) cicatrització de ferides, 4) angiogènesi, 5) immunitat mediada per leucòcits, 6. ) activitat peptidasa, 7) regulació positiva de l'activació cel·lular i 8) migració de leucòcits (figura 2F i taula suplementària 10, disponible al lloc web d'Arthritis & Rheumatology a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). ). Aquests processos biològics convergeixen al mecanisme patològic d'inflamació i coagulació durant el desenvolupament de la BD, en què els perfils lipídics i la modificació per l'estrès oxidatiu durant la inflamació condueixen a disfunció endotelial i esdeveniments vasculars (8-11).

De manera consistent, la via més significativa de la base de dades KEGG (disponible a http://www.genome.ad.jp/kegg) van ser les cascades de complement i coagulació (figura 3A), on 38 proteïnes (P <{2}}.05). ), incloent 19 components de complements (C) (C1QA, C1QB, C1QC, C1S, C2, C4B, cadena alfa de proteïnes d'unió a C4b [C4BPA], C5, C6, C7, cadena alfa C8, cadena beta C8, cadena gamma C8 cadena [C8G], C9, factor del complement [CF] B, CFH, proteïna 4 relacionada amb CFH [CFHR4], CFI i proteïna similar al receptor 1 del component), 5 factors de coagulació (F11, F12, F13B, F5 i F9). ), 4 proteïnes relacionades amb la coagulació (activador del plasminogen de tipus tissular [PLAT], proteïna C, proteïna anticoagulant S [PROS1] i VWF) i 5 proteïnes de la família de les serpines (SERPINA1, SERPINC1, SERPIND1, SERPINF2 i SERPING1). Vint-i-cinc proteïnes de la cascada eren objectius farmacològics per al tractament terapèutic (figura 3B). Curiosament, la majoria de proteïnes incloses a la via KEGG i a les cascades de complement i coagulació es van solapar amb les implicades en els processos biològics més enriquits de coagulació de la sang/cicatrització de ferides (figura 3B i taula suplementària 10, disponible a https:// onlinelibrary.wiley.com/). doi/10.1002/art.42348.). Es van identificar diverses vies d'infecció patògena mitjançant l'anàlisi de la via KEGG a l'estudi, inclosa la infecció per Staphylococcus aureus, la malaltia priònica, la tos ferina, la infecció per virus del papil·loma humà, la infecció pel virus herpes simplex 1 i les interaccions de proteïnes virals amb citocines i receptors de citocines, destacant el paper de la infecció patògena. a BD (figura suplementària 8A, disponible al lloc web d'Artritis i Reumatologia ahttps://onlinelibrary.

Figura 2. Les proteïnes es van expressar de manera diferent entre el pacient BD i els grups de control sans identificats per DIA-MS i microarray d'anticossos. Una trama del volcà que il·lustra les proteïnes desregulades en el pacient amb BD versus grups de control sans. Les proteïnes regulades significativament a l'alça i a la baixa (P <{3}}.05) s'indiquen com a punts vermells i blaus, respectivament. B, Gràfics de dispersió que mostren la intensitat d'expressió de proteïnes representatives al plasma de pacients amb BD i controls sans. Els símbols representen mostres individuals; les línies horitzontals indiquen la mediana. C, diagrama de Venn que compara el nombre de proteïnes expressades de manera diferencial en pacients amb BD identificats al nostre estudi amb els identificats en estudis anteriors. D, Anàlisi de agrupació jeràrquica de proteïnes expressades de manera diferencial (P <0.01) entre els grups control BD i sans, on es van agrupar el 88,6% dels pacients amb BD i el 95,5% dels HC. L'àrea rectangular puntejada indica cada grup juntament amb les proteïnes altament expressades corresponents. E, Enriquiment de malalties (derivades de la plataforma DisGeNET) associades a proteïnes desregulades en pacients amb BD en relació amb controls sans (log10 [valor q] <-15). F, processos biològics significativament enriquits identificats mitjançant proteïnes expressades de manera diferent en pacients amb BD en relació amb els controls de salut (P <0.05). *=P < 0,05; **=P <0,01; ***=P <0,001; ****=P <0,0001. GAS6=detenció del creixement específic 6; RETN=resistin; factor VWF=von Willebrand; SERPINA3=serpina A3 (1-antiquimotripsina); GPLD1=fosfolipasa D1 específica de glicosilfosfatidilinositol; ATRN=attractin (vegeu la figura 1 per a altres definicions).

Figura 3. Vies de senyalització associades a la patogènesi de la BD. A, les vies de senyalització significativament enriquides associades a proteïnes expressades de manera diferent en pacients amb BD en relació amb els controls sans identificats van utilitzar les bases de dades KEGG i Reactome (P <0.01). La lletra vermella indica vies relacionades amb la coagulació de la sang i l'activació del complement. B, Cascades de complement i coagulació, identificades mitjançant la base de dades KEGG, que mostren les associacions més significatives amb proteïnes expressades de manera diferencial en pacients amb BD en relació amb controls sans. S'indiquen les proteïnes de signatura que poden ser dirigides per medicaments aprovats coneguts. C i D, el domini proteic significativament enriquit (C) i els components cel·lulars (D) identificats per les proteïnes expressades significativament en pacients amb BD en relació amb controls sans (P <0, 01). A A, C i D, les longituds de les barres indiquen la base logarítmica 10 del valor P, i els números al costat de les barres indiquen el nombre de proteïnes implicades en cada categoria. IGF=factor de creixement semblant a la insulina; IGFBP=proteïna d'unió al factor de creixement semblant a la insulina; C=complement; ER=reticle endoplasmàtic; ECM=matriu extracel·lular; CUB=complementa C1r/C1s, Uegf i Bmp1; EGF=factor de creixement epidèrmic; Amunt=regulat a l'alça; Avall=regulat a la baixa (vegeu la figura 1 per a altres definicions).

wiley.com/doi/10.1002/art.42348) (12–17). La via KEGG de la infecció per Staphylococcus aureus que implica 13 proteïnes expressades de manera diferencial (P <0, 05) es va enriquir significativament (algunes d'elles estan marcades a la figura suplementària 8B), cosa que implica el paper de la infecció per Staphylococcus aureus en la patogènesi de BD (18, 19). Finalment, l'anàlisi d'enriquiment va identificar els dominis del complement, inclòs el domini abundant en proteïnes de control del complement, la repetició de Sushi, el complex d'atac a la membrana/perforina, el domini C1q del component del complement i el domini CUB (per als complements C1r/C1s, Uegf i Bmp1). ) (Figura 3C). L'anàlisi d'enriquiment de components cel·lulars va revelar que les proteïnes regulades a l'alça es van enriquir, entre d'altres, en la matriu extracel·lular que conté col·lagen, el lumen del grànul secretor, el grànul alfa de plaquetes i la partícula de lipoproteïna plasmàtica, però les proteïnes regulades a la baixa es van enriquir principalment en el espai extracel·lular i exosoma (figura 3D).

Per investigar la influència del tractament sobre les proteïnes plasmàtiques, vam agrupar els pacients amb BD segons el tractament amb GC i immunosupressors. Els pacients amb BD amb o sense tractament es podrien distingir clarament dels controls sans (figura suplementària 9A, disponible al lloc web d'Artritis i Reumatologia a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art. 42348). L'anàlisi va demostrar que la majoria dels processos biològics que van canviar en pacients amb BD que van ser tractats versus pacients amb BD que no van ser tractats amb GC i immunosupressors estaven relacionats amb la regulació de les respostes immunològiques (figura suplementària 9B). També es va comparar l'expressió diferencial de proteïnes plasmàtiques entre pacients amb BD sense tractament i pacients amb BD que rebien tractament GC i immunosupressor. Els resultats van identificar 68 proteïnes expressades de manera diferencial (P <0, 05) implicades, per exemple, en la regulació dels nivells de partícules de lipoproteïnes plasmàtiques i l'activitat de l'endopeptidasa de tipus serina (figura suplementària 10, disponible al lloc web d'Arthritis & Reumatologia a https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348).

Paisatge de proteòmica de la BD resolta per òrgans. La BD és una malaltia molt heterogènia amb afectació multiorgànica, que presenta diferents manifestacions fenotípiques (taula suplementària 1, disponible a https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art .42348). Els estudis han intentat subcategoritzar la BD en funció de les manifestacions clíniques (20–23). Per investigar l'heterogeneïtat entre pacients amb BD basant-se en dades de proteòmica, vam realitzar un agrupament de consens no supervisat a les 220 proteïnes expressades de manera diferent (figura 4A). L'anàlisi dels components principals va revelar una separació diferent del subtipus I i el subtipus II del subtipus III (figura 4B). Les proteïnes específiques del subtipus I estan implicades principalment en la coagulació de la sang i l'activació del complement, les proteïnes específiques del subtipus II estan implicades principalment en el metabolisme de la glucosa i proteïnes-lípids, i les proteïnes específiques del subtipus III participen en la resposta inflamatòria (figura 4D i figura suplementària 11, disponible al lloc web d'Artritis i Reumatologia a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Tot i que no es van trobar diferències estadísticament significatives pel que fa a les característiques clíniques entre els grups de BD subtipats de proteòmica, vam trobar que el subtipus I i el subtipus II eren similars (figura 4B), cosa que era coherent amb els resultats de l'anàlisi de components principals. Els pacients amb TB amb subtipus I i subtipus II tenien percentatges més alts de símptomes greus, inclosa afectació del sistema nerviós (13,8% entre el subtipus I i 8,2% entre el subtipus II versus 0% entre el subtipus III) i afectació vascular (27,6% entre el subtipus I i 22,4%). % entre el subtipus II enfront del 0% entre el subtipus III). Tot i que els pacients amb TB amb subtipus III tenien símptomes relativament lleus a moderats, presentaven un percentatge més elevat de lesions cutànies (87,5% entre el subtipus III enfront del 51,7% entre el subtipus I i el 65,3% entre el subtipus II) (Figura 4E, taula suplementària). 11, disponible al lloc web d'Artritis i Reumatologia a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Hi ha proves acumulades que mostren canvis en múltiples processos biològics durant el desenvolupament de la BD, com ara l'autoinflamació, el desequilibri redox, les alteracions metabolòmiques, la dislipèmia i la disfunció de la coagulació (8,24–27). Per tant, els nostres resultats suggereixen que, tot i que els pacients amb BD que pertanyen als grups de proteòmica del subtipus I i del subtipus II tenen una gravetat de BD més alta, els mecanismes biològics per als 2 grups poden ser diferents.

planta de cistanche per augmentar el sistema immunitari

Vam realitzar una anàlisi de clúster de la cohort BD basada en dades clíniques (sexe, edat, puntuació de gravetat i manifestacions clíniques) mitjançant una anàlisi de clúster de {{{0}}etapes (23). Tal com es mostra a la figura 4E, els pacients amb BD es van classificar en 2 grups (grups 1 i 2), on els pacients es van classificar per símptomes com ara úlceres orals, lesions cutànies, lesions oculars i úlceres genitals. Els pacients amb BD del grup 1 tenien una incidència significativament més gran del fenotip de l'artritis que implicava símptomes d'artràlgia (40,0%) i afectació del sistema gastrointestinal (8,9%), vascular (48,9%) i nerviós (22,2%) en comparació amb els pacients amb BD del grup 1. clúster 2. A continuació, vam comparar la classificació clínica i proteòmica en la mateixa cohort de BD. Els resultats van indicar que els pacients de les classificacions de subtipus I i II de proteòmica i del clúster clínic 1 compartien característiques clíniques similars, amb els pacients que presentaven afectació multiorgànica (és a dir, sistema gastrointestinal, vascular i nerviós) i una major gravetat de la malaltia (figura 4E). Per contra, els pacients de la classificació del subtipus de proteòmica III i del clúster clínic 2 van mostrar característiques clíniques similars, sense que cap demostrava afectació gastrointestinal, vascular i del sistema nerviós. Aquestes troballes es poden recolzar encara més amb anàlisis de agrupació jeràrquica no esbiaixada (figura 4F), en què els pacients del subtipus de proteòmica III es van agrupar amb el clúster clínic 2 i els pacients del subtipus de proteòmica I i II es van agrupar amb el clúster clínic 1. Aquests resultats demostren la utilitat potencial. de la classificació proteòmica per indicar l'heterogeneïtat i la gravetat de la BD. L'estratègia terapèutica per als pacients amb TB depèn en gran mesura de les característiques clíniques i de l'òrgan implicat. Tanmateix, es desconeixen les característiques proteòmiques de la BD resolta per òrgans.

Figura 4. Classificació dels pacients amb BD mitjançant proteòmica plasmàtica i variables clíniques. A, Mapa de calor de la matriu de consens que mostra proporcions concomitants de pacients amb BD amb cada subtipus de proteòmica. B, anàlisi de components principals dels subtipus I, II i III de proteòmica en pacients amb BD, mostrant diferències notables entre clústers. C, Anàlisi de agrupació jeràrquica de proteïnes expressades de manera diferencial (P <{2}}.05, diferència d'expressió mitjana P > 0,2) en els 3 subtipus de proteòmica en pacients amb BD. D, Grups funcionals de processos biològics segons les proteïnes específiques relacionades amb els 3 subtipus. E, Distribució de les característiques demogràfiques i clíniques dels pacients amb BD segons subtipus de proteòmica i clústers de classificació clínica. F, Distribució de cada característica clínica segons subtipus de proteòmica i clústers de classificació clínica a la cohort BD, basada en l'anàlisi de agrupació jeràrquica no esbiaixada. Vegeu la figura 1 per a les definicions.

Figura 5. Cartografia del paisatge de la BD resolta per òrgans mitjançant proteòmica plasmàtica. A, Paisatge de proteòmica de la BD resolta per òrgans. Esquerra: diagrama que il·lustra el canvi de plec en l'expressió de proteïnes en pacients amb BD en relació amb controls sans segons el fenotip. Els 3 blocs representen, d'esquerra a dreta, controls sans, pacients amb BD sense (wo) símptomes corresponents i pacients BD amb símptomes corresponents. La intensitat del color de cada bloc és proporcional al canvi de plec en l'expressió de proteïnes entre els grups de control BD i sans. El vermell i el blau indiquen proteïnes regulades a l'alça i a la baixa, respectivament. A la dreta, el procés biològic associat a cada proteïna expressada de manera diferent, amb la intensitat grisa dels quadrats que indica el valor P basat en log10-i el nombre que indica el nombre de proteïnes implicades en cada categoria. B, Correlació (de Pearson o Spearman) entre l'expressió de la proteïna 2 d'unió a hialurona (HABP2), tenascina C (TNC) i serpina A3 (1-antiquimotripsina) (SERPINA3) i les puntuacions de gravetat dels pacients amb BD. L'ombrejat indica un IC del 95%. C, trames de violí que mostren la intensitat d'expressió d'HABP2, TNC i SERPINA3 versus la gravetat de la malaltia en el control sa i els grups BD lleus, moderats i greus. Els símbols representen mostres individuals; la línia horitzontal vermella de punts indica la mediana, amb les línies negres de punts superior i inferior que indiquen el rang interquartil. *=P < 0.{{20}}5; **=P <0,01; ***=P <0,001; ****=P <0,0001. Vegeu la figura 1 per a les definicions.

Així, vam identificar 58 proteïnes expressades específicament en diferents grups de pacients amb BD que mostraven diferents fenotips d'òrgans (figura 5A). La nostra cerca a la base de dades DrugBank (disponible a https://go.drugbank.com/) va revelar que 26 proteïnes, és a dir, apolipoproteïna A-IV, CFI, ceruloplasmina (CP), glutamat deshidrogenasa 1 (GLUD1), proteïna d'unió hialurònica 2. (HABP2), F5, SERPINC1, SERPINA3, proteïna del receptor de transferrina 1 (TFRC), VWF, SERPINF2, CD44, receptor de la regió Fc III-A, alanina aminotransferasa 1, leucotrien A-4 hidrolasa, proproteïna convertasa subtilisina/kexina tipus 9, l'angiotensinogen, C8G, haptoglobina, peptidil-prolil cis-trans isomerasa A, selenoproteïna P, SERPIND1, SERPING1, C4BPA, limfotoxina alfa, C4B i la cadena pesada de la intertripsina 4, són objectius dels fàrmacs terapèutics utilitzats en clíniques o en desenvolupament. (Taula suplementària 12, disponible al lloc web d'Artritis i Reumatologia a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348.). Entre els fenotips, el fenotip de l'artritis que implica símptomes d'artralgia s'enriqueix amb els processos biològics associats a l'autoimmunitat, inclosa la regulació de la resposta immune humoral mediada per les immunoglobulines circulants, la regulació de la immunitat mediada per les cèl·lules B i la regulació de la resposta immune mediada per les immunoglobulines. ; el fenotip gastrointestinal s'associa amb la regulació de l'activació del complement i la immunitat mediada per cèl·lules B; el fenotip implicat en el cor s'associa amb l'activitat del receptor de citocines, la regulació del procés metabòlic del col·lagen i el desmuntatge de la matriu extracel·lular; el fenotip de l'epididimitis s'associa amb la resposta en fase aguda; i el fenotip de la lesió cutània s'associa amb l'activitat inhibidora de l'endopeptidasa de tipus serina, la coagulació de la sang, la resposta immune humoral mediada per la immunoglobulina circulant i altres processos (figura 5A i taula suplementària 13, disponible al lloc web d'Artritis i Reumatologia a https://onlinelibrary). .wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348).

El fenotip vascular té el major nombre de proteïnes expressades de manera diferencial, incloent GLUD1, tenascina C (TNC), lligand de quimiocines amb motiu XC 2, factor de creixement epidèrmic que conté proteïna de matriu extracel·lular de fibulina 1, HABP2, F5, ATRN, SERPINC1, GPLD1, similar a la insulina. la proteïna d'unió del factor de creixement 6, la unió a la lectina manosa 2, SEPRINA3, TFRC, VWF, SERPINF2 i el membre de la família de la ribonucleasa A 4 (figura 5A). L'anàlisi bioinformàtica va revelar a més que aquestes proteïnes expressades de manera diferent estan implicades en la desgranulació plaquetària, la coagulació de la sang, la fosforilació de proteïnes postraduccionals, l'activitat inhibidora de l'endopeptidasa de tipus serina i la resposta inflamatòria aguda, entre altres funcions. Tots aquests resultats demostren el paisatge proteòmic de la BD resolta per òrgans, a partir del qual es podria desenvolupar una medicació personalitzada per a les proteïnes diana de cada fenotip d'òrgan.

Beneficis de cistanche per a homes enforteixen el sistema immunitari

Identification of plasma proteins related to BD severity. Among the 220 unique differentially expressed proteins (P < 0.05), 28 were positively correlated with the severity of BD (Figures 5B and 5C and Supplementary Figure 12, available on the Arthritis & Rheumatology website at https://onlinelibrary. wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Seven proteins displayed a linear correlation with the severity score, namely, TNC, HABP2, SERPINA3, F5, ATRN, C4B, and CFH (Figure 5B and Supplementary Figure 12A). The expression of these 7 proteins was up-regulated in the severe BD group compared with the mild and moderate BD groups and the healthy control group, as indicated in the scatter plot in Figure 5C (see also Supplementary Figure 12A). Next, we selected and validated 7 protein candidates (TNC, HABP2, SERPINA3, ATRN, C4BPA, GPLD1, and C5) in an independent cohort composed of 108 patients with BD and 29 healthy controls by using quantitative ELISA (Supplementary Table 3, available at https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). The reproducibility of the ELISA for the validation of plasma proteins was >0.9 (Figura suplementària 13, disponible a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Els nivells plasmàtics elevats d'HABP2, TNC i SERPINA3 es van confirmar al grup BD en comparació amb el grup control sa (figura 6A), així com la seva correlació amb la gravetat de la malaltia (figures 6B i 6C). També vam comparar l'expressió d'HABP2, tal com es va avaluar mitjançant ELISA, entre pacients amb BD (n=39) i grups control de pacients amb arteritis de Takayasu (n=8) i controls sans (n ​​= 10 ) (Figura suplementària 14 i taula suplementària 5, disponibles al lloc web d'Artritis i reumatologia a https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348.). Els resultats van indicar que la concentració d'HABP2 era significativament més alta en el grup BD que la concentració en els grups d'arteritis de Takayasu i control sans (figura suplementària 14), cosa que indica l'especificitat d'HABP2 com a biomarcador potencial per al diagnòstic de BD.

Segons la puntuació de gravetat de Krause, els símptomes vasculars tenen el pes màxim. Així, vam dividir els pacients en grups de BD vascular i BD no vascular segons la presència de trombosi venosa, estenosi arterial, oclusió, dilatació o aneurisma (taula suplementària 4, disponible a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/1). 0.10{{20}}2/art.42348). Hem comparat els nivells d'expressió d'HABP2, TNC i SERPINA3 entre els grups de control vascular, BD no vascular i control sans. Els resultats van mostrar que les 3 proteïnes estaven significativament regulades al grup BD vascular (figura 6D). També es va realitzar una anàlisi de la corba característica de funcionament del receptor per a HABP2, TNC i SERPINA3, en què es va determinar el tall, la sensibilitat i l'especificitat (Taula suplementària 14, disponible a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/1{{24} }}.1002/art. 42348.). Els resultats van indicar que HABP2 (àrea sota la corba [AUC] 0,68, sensibilitat 0,69 i especificitat 0,69) i TNC (AUC 0,71, sensibilitat 0,58 i especificitat 0,77) poden distingir la BD vascular de la no vascular. Es van comparar els nivells dels 3 biomarcadors entre pacients amb BD vascular inactiva i activa. Els resultats van mostrar que els nivells d'expressió d'HABP2, TNC i SERPINA3 eren constantment més alts en pacients amb BD independentment de l'activitat de BD vascular (figura suplementària 15, disponible al lloc web d'Arthritis & Rheumatology a https://onlinelibrary.wiley.com/doi). /10.1002/art.42348).

Figura 6. Validació dels biomarcadors de BD vasculars avaluats per ELISA a la cohort independent. A, C i D, concentracions plasmàtiques (Conc) de la proteïna d'unió a hialurònics 2 (HABP2), tenascina C (TNC) i serpina A3 (1-antiquimotripsina) (SERPINA3) al grup control sa versus tots els BD pacients (A), versus pacients amb BD en els grups de malaltia lleu, moderat i greu (C) i enfront de pacients amb BD no vascular (N-VBD) i BD vascular (VBD) (D). B, Correlació (Pearson o Spearman) entre les concentracions de HABP2, TNC i SERPINA3 i les puntuacions de gravetat de BD. L'ombrejat indica un IC del 95%. *=P < 0.05; **=P < 0.01; ***=P <0,001; ****=P <0,0001. Vegeu la figura 1 per a les definicions.

Anàlisi de correlació entre proteïnes plasmàtiques, puntuació del formulari d'activitat actual de la malaltia de Behçet i dades clíniques. HABP2, TNC i SERPINA3 van mostrar nivells elevats en el grup BD actiu en comparació amb els grups control BD inactiu i sans (P <0.001) (Figura suplementària 16A, disponible a Artritis i Reumatologia). lloc web a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). El nivell de SERPINA3 es va elevar en grups amb puntuacions altes de la forma d'activitat actual de la malaltia de Behçet (BDCAF) (figura suplementària 16B). A més, en pacients amb BD, els nivells de puntuacions de SERPINA3 i BDCAF estaven correlacionats positivament (r=0.39, p=0.0036), mentre que els nivells de HABP2 i TNC no van mostrar cap correlació positiva amb el Puntuació del BDCAF. Es va analitzar més la correlació entre els nivells de plasma del pacient i les dades clíniques (figura suplementària 17A i taula suplementària 15, disponible a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348.). Es va destacar un coeficient de correlació de r > 0,3 a la gràfica d'acords. Els diagrames de dispersió representatius es mostren a les figures complementàries S17B-G. Els resultats van mostrar que els nivells d'HABP2, TNC i SERPINA3 estaven correlacionats positivament amb el nivell de proteïna C reactiva, el recompte de neutròfils, l'amplada de distribució de glòbuls vermells, la relació entre neutròfils i limfòcits, el recompte de plaquetes i l'amplada de distribució de plaquetes. Tots aquests resultats demostren que HABP2, TNC i SERPINA3 s'associen funcionalment amb la inflamació, la funció endotelial i l'activació plaquetària i poden servir com a biomarcadors per indicar la gravetat i l'activitat de la BD, que s'hauria de validar en una cohort clínica diferent en el futur. .

DISCUSSIÓ

La BD és una vasculitis sistèmica amb una presentació clínica heterogènia que reflecteix els diferents mecanismes patògens responsables d'induir la inflamació a les artèries i venes de totes les mides en teixits i òrgans humans. En aquest estudi, vam identificar un gran conjunt de proteïnes desregulades (n=220) al grup de pacients amb BD que participen en diferents processos biològics i vam utilitzar anàlisis bioinformàtiques per determinar la interacció immunoinflamatoria, la presència de trombosi i el paper patològic mediat pel sistema del complement en la BD. L'anàlisi KEGG va revelar a més l'associació de BD amb les cascades de complement i coagulació i la infecció bacteriana. El sistema del complement media la immunitat innata i la inflamació per defensar-se dels patògens mitjançant la desgranulació, la quimiotaxi, la fagocitosi, la via de senyalització del receptor de cèl·lules B i la lisi cel·lular pel complex d'atac a la membrana, mentre que les cascades de coagulació estan implicades en la resposta antiinflamatòria, vasodilatació, augment de la permeabilitat endotelial i activació plaquetària. Utilitzant dades d'associació a tot el genoma, Bakir-Gungor et al van demostrar que les cascades de complement i coagulació són una de les 6 vies compartides entre pacients amb BD turcs i japonesos, cosa que dóna suport als nostres resultats des del fons genètic i demostra encara més el mecanisme inflamatori i la vasculopatia / trombofília en la patogènesi de la BD (28). La immunitat mediada per leucòcits, la regulació positiva de l'activació cel·lular i la migració de leucòcits demostren les respostes immunes i inflamatòries actives a la BD. Els neutròfils s'activen per produir radicals lliures d'oxigen i trampes extracel·lulars de neutròfils, causant danys inflamatoris a les cèl·lules endotelials vasculars, trombosi venosa i aneurismes. Les espècies reactives d'oxigen produïdes pels neutròfils actius també podrien provocar l'oxidació i modificació de lípids i lipoproteïnes, especialment les lipoproteïnes de baixa densitat, com es mostra amb l'augment de la peroxidació lipídica (9,11), que en conseqüència augmenta el risc cardiovascular (9,10) i, en torn, augmenta la resposta inflamatòria (10). Aquest esdeveniment està d'acord amb els processos biològics de regulació dels nivells de partícules de lipoproteïnes plasmàtiques i de remodelació del complex proteïna-lípid observats en el nostre estudi. L'evidència del nostre estudi és coherent amb les troballes d'Emmi et al que uneixen la producció d'espècies reactives d'oxigen de leucòcits i la peroxidació de lípids plasmàtics (8).

L'anàlisi de agrupació de consens mitjançant proteòmica va revelar l'heterogeneïtat dels pacients amb BD. Els pacients amb el subtipus I tenien símptomes més greus, que poden estar associats amb el procés biològic actiu de coagulació de la sang i activació del complement. En canvi, els pacients amb el subtipus III tenien símptomes relativament lleus i la resposta inflamatòria podria ser el principal procés patològic d'aquest subgrup. A més, vam identificar les característiques proteòmiques dels pacients amb TB amb afectació d'òrgans diferents. Les nostres anàlisis bioinformàtiques il·lustren eficaçment les funcions de les característiques proteiques de cada fenotip d'òrgan, com s'exemplifica amb l'associació entre l'autoimmunitat i el fenotip de l'artritis amb símptomes d'artràlgia (29–31). Els esdeveniments vasculars importants, les lesions oculars i l'afectació neurològica són les principals causes de morbiditat i mortalitat (16). El tractament de la BD depèn del tipus d'òrgan implicat i de la gravetat de la malaltia dins d'aquest sistema d'òrgans. No obstant això, segons el que sabem, fins ara no hi ha cap teràpia dirigida per a la BD. Els nostres resultats suggereixen que els procediments de diagnòstic i la terapèutica per a cada BD resolt per òrgans poden diferir a causa de l'heterogeneïtat dels mecanismes patògens. Algunes proteïnes clau podrien ser dianes farmacològiques per a fenotips, incloses lesions gastrointestinals, neuronals, oculars, articulars i vasculars.

La proporció de pacients amb TB vascular entre diferents races i ètnies oscil·la entre el 7,7% i el 43% (32); la malaltia gairebé sempre s'associa amb una trombosi arteriovenosa i/o aneurisma d'alt risc, una gravetat elevada de la malaltia i una taxa de recurrència acumulada 5-any del 38,4% (33). Es considera que la immunitat i els factors inflamatoris contribueixen a l'afectació vascular i les manifestacions de la BD. Se sap que el dany a les cèl·lules endotelials provoca una tendència al risc trombòtic (34). A més, la deterioració de les parets dels vasos després de la fibrosi pot provocar un debilitat de les parets arterials i la distensió de les parets dels vasos amb aneurismes posteriors (35,36). Les irregularitats, l'estrenyiment i l'oclusió també es poden induir durant la inflamació aguda i després de la fibrosi (37), mentre que la inflamació crònica afavoreix encara més les propietats vasodilatadores disfuncionals de l'endoteli (38). L'HABP2, també anomenada proteasa activadora del factor VII, es va descobrir originalment a través de la seva capacitat d'unir-se a l'àcid hialurònic, un glicosaminoglicà que té un paper en la regulació de la barrera de les cèl·lules endotelials (39), i està implicat en la coagulació de la sang i la fibrinòlisi (40). Estudis anteriors han informat que HABP2 pot activar la inflamació, l'apoptosi i el creixement cel·lular en el múscul llis vascular i les cèl·lules endotelials (41-43) i podria servir com a regulador de la integritat i la permeabilitat vascular a través dels receptors activats per proteases (PAR; similar a la trombina). )/RhoA/ Via de senyalització de la proteïna cinasa associada a Rho (ROCK) (44). El silenciament (utilitzant un petit ARN interferent) de HABP2 o PAR/RhoA/ROCK inhibeix la interrupció de la barrera de les cèl·lules endotelials mediada per HABP2-(44). El TNC és una glicoproteïna de matriu extracel·lular proinflamatòria que contribueix a la formació i ruptura de la placa activant les plaquetes o regulant a la baixa l'activador del plasminogen tissular (45). Els nivells sèrics de TNC s'han correlacionat amb la gravetat de l'aterosclerosi (46), i s'ha demostrat que l'expressió transitòria de TNC està regulada a l'alça durant el dany vascular, però es va eliminar un cop es va completar la reparació (45).

SERPINA3, també coneguda com a 1-antiquimotripsina, inhibeix diverses serina proteases, especialment la catepsina G (47). A més de les cèl·lules inflamatòries, les cèl·lules musculars llises menys contràctils es podrien desdiferenciar d'un fenotip semblant als macròfags, que també pot ser la font de citocines i SERPINA3 al lloc de la lesió de la paret del vas (48). Estudis anteriors han indicat que el paper actiu de SERPINA3 en la regulació negativa de la proliferació de cèl·lules musculars llises vasculars (49) o la inhibició de l'acumulació de neutròfils (47) podria ser predictiu de l'aparició d'esdeveniments cardiovasculars adversos. Tanmateix, encara no està clar si SERPINA3 té un paper durant la patogènesi de la vasculitis en pacients amb BD o és un producte del procés patogènic. En particular, l'àcid hialurònic del fàrmac HABP2 és un glicosaminoglicà aniònic no sulfatat que demostra propietats antiinflamatòries, reparadores de ferides, regeneració de teixits i altres propietats importants; L'àcid hialurònic s'ha investigat en el tractament del càncer, oftalmologia, artrologia, pneumologia, rinologia i urologia i per a altres usos (50). Hi ha diverses molècules petites (acetat de zinc, sulfat de zinc, zinc, clorur de zinc) dirigides a SERPINA3 (Taula suplementària 12, disponible a https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Aquests resultats demostren que els biomarcadors identificats en el nostre treball també poden servir com a objectius en el desenvolupament de noves teràpies per a pacients amb BD. El nostre estudi té diverses limitacions. En primer lloc, el nombre de mostres de plasma era limitat; els biomarcadors identificats al nostre estudi haurien de ser validats en una cohort diferent i més gran amb diferents malalties autoinflamatòries i autoimmunes com a controls. En segon lloc, els resultats s'han de verificar en cohorts de pacients amb BD que no han rebut tractament. En tercer lloc, les funcions biològiques de les proteïnes biomarcadores en la patogènesi de la BD s'han d'examinar en estudis futurs utilitzant models cel·lulars i animals.

En conjunt, aquest és, que sabem, el primer estudi que analitza de manera exhaustiva les característiques proteòmiques de la BD resolta per òrgans. Els resultats proporcionen coneixements fonamentals sobre l'heterogeneïtat i la patogènesi de la BD i destaquen les proteïnes plasmàtiques (HABP2, TNC i SERPINA3) com a biomarcadors potencials per a una futura avaluació clínica i tractament de la BD vascular.

REFERÈNCIES

1. Bas¸ Y, Seçkin HY, Kalkan G, et al. Investigació de la malaltia de Behçet i la freqüència d'estomatitis aftosa recurrent: la prevalença més alta a Turquia. Balkan Med J 2016;33:390–5.

2. Lee HJ, Kim JH, Kim SW, et al. Anàlisi proteòmica de l'amiloide sèric com a marcador potencial en la malaltia de Behçet intestinal. Dig Dis Sci 2017;62:1953–62.

3. Lopalco G, Lucherini OM, Lopalco A, et al. Signatures de citocines en la malaltia de Behçet mucocutània i ocular. Front Immunol 2017; 8:200.

4. Xu M, Deng J, Xu K, et al. La proteòmica sèrica en profunditat revela biomarcadors de la gravetat de la psoriasi i la resposta a la medicina tradicional xinesa. Theranostics 2019;9:2475–88.

5. Geyer PE, Voytik E, Treit PV, et al. Perfil de proteoma plasmàtic per detectar i evitar biaixos relacionats amb la mostra en estudis de biomarcadors. EMBO Mol Med 2019;11:e10427.

6. Mao L, Dong H, Yang P, et al. MALDI-TOF/TOF-MS revela un nivell elevat d'haptoglobina sèrica i amiloide A a la malaltia de Behcet. J Proteome Res 2008;7:4500–7.

7. Piñero J, Ramírez-Anguita JM, Saüch-Pitarch J, et al. La plataforma de coneixement DisGeNET per a la genòmica de malalties: actualització de 2019. Nucleic Acids Res 2020;48:D845–55.

8. Emmi G, Bagni G, Lastraioli E, et al. Un perfil de miRNA circulant únic destaca la tromboinflamació a la síndrome de Behçet. Ann Rheum Dis 2022;81:386–97.

9. Orem A, Yandi YE, Vanizor B, et al. L'avaluació dels autoanticossos contra la lipoproteïna de baixa densitat (LDL) modificada oxidativament, la susceptibilitat de les LDL a l'oxidació, els nivells de lípids sèrics i d'hidroperòxid lipídic, l'estat antioxidant total, les activitats enzimàtiques antioxidants i la disfunció endotelial en pacients amb malaltia de Behçet. Clin Biochem 2002; 35:217–24.

10. Kayatas K, Karatoprak C, Cebeci F, et al. Presència de nivells baixos de lípids en pacients amb malaltia de Behcet com a protector contra l'aterosclerosi. Eur Rev Med Pharmacol Sci 2013;17:2330–4.

11. Buldanlioglu S, Turkmen S, Ayabakan HB, et al. Òxid nítric, peroxidació lipídica i sistema de defensa antioxidant en pacients amb malaltia de Behçet activa o inactiva. Br J Dermatol 2005;153:526–30.

12. Cho SB, Zheng Z, Ahn KJ, et al. Reactivitat sèrica d'IgA contra GroEL de Streptococcus sanguinis i ribonucleoproteïna nuclear heterogènia humana A2/B1 en pacients amb malaltia de Behçet. Br J Dermatol 2013;168:977–83.

13. Zheng Z, Sohn S, Ahn KJ, et al. Reactivitat sèrica contra la proteïna UL48 tipus 1 del virus de l'herpes simple en pacients amb malaltia de Behçet i un model de ratolí semblant a la malaltia de Behçet. Acta Derm Venereol 2015;95:952–8.

14. Lule S, Colpak AI, Balci-Peynircioglu B, et al. El sèrum de la malaltia de Behçet és immunoreactiu al medi de neurofilaments que comparteix epítops comuns amb l'HSP bacteriana-65, un putatiu desencadenant. J Autoimmun 2017;84: 87–96.

15. Tong B, Liu X, Xiao J, et al. Immunopatogènesi de la malaltia de Behcet. Front Immunol 2019;10:665.

16. Greco A, De Virgilio A, Ralli M, et al. Malaltia de Behçet: nous coneixements sobre fisiopatologia, característiques clíniques i opcions de tractament. Autoimmun Rev 2018;17:567–75.

17. Marta M, Santos E, Coutinho E, et al. El paper de les infeccions en la malaltia de Behçet i la síndrome neuro-Behçet. Autoimmun Rev 2015;14: 609–15.

18. Hatemi G, Bahar H, Uysal S, et al. Les lesions cutànies pustuloses de la síndrome de Behcet no són estèrils. Ann Rheum Dis 2004;63:1450–2.

19. Galeone M, Colucci R, D'Erme AM, et al. Etiologia infecciosa potencial de la malaltia de Behçet. Patholog Res Int 2012;2012:595380.

20. Karaca M, Hatemi G, Sut N, et al. El grup de lesions papulopustulars/artritis de la síndrome de Behçet també s'agrupa en famílies. Reumatologia (Oxford) 2012;51:1053–60.

21. Tascilar K, Melikoglu M, Ugurlu S, et al. Afectació vascular en la síndrome de Behçet: una anàlisi retrospectiva de les associacions i el curs del temps. Reumatologia (Oxford) 2014;53:2018–22.

22. Zou J, Luo JF, Shen Y, et al. Anàlisi de grups de fenotips de pacients amb síndrome de Behçet: un gran estudi de cohorts d'un centre de referència a la Xina. Arthritis Res Ther 2021;23:45.

23. Soejima Y, Kirino Y, Takeno M, et al. Els canvis en la proporció de clústers clínics contribueixen a l'evolució fenotípica de la malaltia de Behçet al Japó. Arthritis Res Ther 2021;23:49.

24. Leiba M, Seligsohn U, Sidi Y, et al. Els factors trombofílics no són la principal causa de trombosi en la malaltia de Behçet. Ann Rheum Dis 2004;63:1445–9.

25. Becatti M, Emmi G, Silvestri E, et al. L'activació de neutròfils afavoreix l'oxidació del fibrinogen i la formació de trombes a la malaltia de Behçet. Circulació 2016;133:302–11.

26. Zheng W, Wu X, Goudarzi M, et al. Alteracions metabolòmiques associades a la malaltia de Behçet. Arthritis Res Ther 2018;20:214.

27. Xu J, Su G, Huang X, et al. L'anàlisi metabolòmica de l'humor aquós identifica el metabolisme aberrant d'aminoàcids i àcids grassos en la malaltia de VogtKoyanagi-Harada i Behcet. Front Immunol 2021;12: 587393.

28. Bakir-Gungor B, Remmers EF, Meguro A, et al. Identificació de possibles vies patògenes en la malaltia de Behçet mitjançant dades d'estudi d'associació a tot el genoma de dues poblacions diferents. Eur J Hum Genet 2015;23:678–87.

29. Tong D, Lönnblom E, Yau AC, et al. Un epítop compartit de col·lagen tipus XI i tipus II és reconegut pels anticossos patògens en ratolins i humans amb artritis. Front Immunol 2018;9:451.

30. Durlik-Popinska K, _ Zarnowiec P, Lechowicz Ł, et al. Els anticossos aïllats de pacients amb artritis reumatoide contra el lipopolisacàrid Proteus mirabilis O3 (S1959) que conté lisina poden reaccionar amb col·lagen tipus I. Int J Mol Sci 2020;21:9635.

31. Jung JH, Han KD, Lee YB et al. La malaltia de Behçet s'associa amb l'esclerosi múltiple i l'artritis reumatoide: un estudi basat en la població coreana. Dermatologia 2021:1–6.

32. Düzgün N, Ates¸ A, Aydintug OT, et al. Característiques de l'afectació vascular en la malaltia de Behçet. Scand J Rheumatol 2006;35:65–8.

33. Tascilar K, Melikoglu M, Ugurlu S, et al. Afectació vascular en la síndrome de Behçet: una anàlisi retrospectiva de les associacions i el curs del temps. Reumatologia (Oxford) 2014;53:2018–22.

34. Le Joncour A, Martos R, Loyau S, et al. El paper crític de les trampes extracel·lulars de neutròfils (NET) en pacients amb malaltia de Behcet. Ann Rheum Dis 2019;78:1274–82.

35. Al-Basheer M, Hadadin F. Tipus de formació d'aneurisma de la malaltia de Behcet vascular. Heart Lung Circ 2007;16:407–9.

36. Chambers JC, Haskard DO, Kooner JS. Funció endotelial vascular i mecanismes d'estrès oxidatiu en pacients amb síndrome de Behçet. J Am Coll Cardiol 2001;37:517–20.

37. Demirtürk OS, Tünel HS, Alemdaroglu U. Manifestacions vasculars de la malaltia de Behçet. A: Gonul M, Kartal S, editors. Malaltia de Behcet. Londres: IntechOpen; 2017.

38. Aksu K, Donmez A, Keser G. Trombosi induïda per la inflamació: mecanismes, associacions de malalties i gestió. Curr Pharm Des 2012;18:1478–93.

39. Choi-Miura NH, Tobe T, Sumiya J, et al. Purificació i caracterització d'una nova proteïna d'unió a hialuronans (PHBP) del plasma humà: té tres EGF, un kringle i un domini de serina proteasa, similar a l'activador del factor de creixement dels hepatòcits. J Biochem 1996;119: 1157–65.

40. Kanse SM, Parahuleva M, Muhl L, et al. Proteasa activadora del factor VII (FSAP): funcions vasculars i paper en l'aterosclerosi. Thromb Haemost 2008;99:286–9.

41. Byskov K, Boettger T, Ruehle PF, et al. La proteasa activadora del factor VII (FSAP) regula l'expressió de gens inflamatoris al múscul llis vascular i a les cèl·lules endotelials. Atherosclerosis 2017;265: 133–9.

42. Parahuleva MS, Maj R, Hölschermann H, et al. Regulació de la funció de monòcits/macròfags per la proteasa activadora del factor VII (FSAP). Aterosclerosi 2013;230:365–72.

43. Kannemeier C, Al-Fakhri N, Preissner KT et al. La proteasa activadora del factor VII (FSAP) inhibeix la proliferació cel·lular mediada pel factor de creixement i la migració de cèl·lules musculars llises vasculars. FASEB J 2004;18: 728–30.

44. Mambetsariev N, Mirzapoiazova T, Mambetsariev B, et al. La proteïna 2 d'unió a l'àcid hialurònic és un nou regulador de la integritat vascular. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2010;30:483–90.

45. Midwood KS, Hussenet T, Langlois B, et al. Avenços en biologia de la tenascina-C. Cell Mol Life Sci 2011;68:3175–99.

46. ​​Gao W, Li J, Ni H, et al. Tenascina C: un biomarcador potencial per predir la gravetat de l'aterosclerosi coronària. J Atheroscler Thromb 2019;26:31–8.

47. Sánchez-Navarro A, Gonzalez-Soria I, Caldiño-Bohn R, et al. Una visió integradora de les serpines en salut i malaltia: la contribució de SerpinA3. Am J Physiol Cell Physiol 2021;320:C106–18.

48. Sorokin V, Woo CC. Paper de Serpina3 en la biologia vascular. Int J Cardiol 2020;304:154–5.

49. Qian LL, Ji JJ, Guo JQ, et al. Paper protector de serpina3c com a nou inhibidor de la trombina contra l'aterosclerosi en ratolins. Clin Sci (Londres) 2021;135:447–63.

50. Fallacara A, Baldini E, Manfredini S, et al. Àcid hialurònic al tercer mil·lenni. Polímers (Basilea) 2018;10.