Paper de l'empalmament alternatiu en la regulació de la resposta de l'hoste a la infecció viral

Resum: S'ha reconegut àmpliament la importància de la regulació transcripcional dels gens hoste en la immunitat innata contra la infecció viral. Més recentment, els mecanismes reguladors post-transcripcionals han guanyat reconeixement com a capa addicional i important de regulació per afinar les respostes immunes de l'hoste. Aquí, revisem la importància funcional de l'empalmament alternatiu en les respostes immunitàries innates a la infecció viral. Descrivim com diversos components centrals de les vies de l'interferó de tipus I i III codifiquen isoformes empalmades per regular l'activació i la funció de l'IFN. A més, es discuteixen els papers funcionals dels factors d'empalmament i moduladors en la immunitat antiviral. Finalment, discutim com es regulen les vies de mort cel·lular mitjançant l'empalmament alternatiu, així com el paper potencial d'aquesta regulació en la immunitat de l'hoste i la infecció viral. En conjunt, aquests estudis destaquen la importància de l'empalmament de l'ARN en la regulació de les interaccions hoste-virus i suggereixen un paper en la regulació negativa de la immunitat innata antiviral; això pot ser fonamental per prevenir la inflamació patològica.

Paraules clau: empalmament alternatiu; resposta antiviral; immunitat innata; vies de mort cel·lular

Beneficis del suplement de cistanche: com enfortir el sistema immunitari

1. Introducció

La resposta de l'hoste a la infecció viral és polifacètica i incorpora la inducció d'un programa transcripcional antiviral, que inclou l'expressió d'interferons (IFN) i citocines, i l'activació de vies de mort cel·lular (apoptosi, necroptosi i piroptosi). Entre aquestes vies, molts passos estan estrictament regulats a diversos nivells per garantir l'homeòstasi dels teixits. En aquesta revisió, parlem dels rols funcionals de l'empalmament alternatiu i de diverses isoformes empalmades en la formació de la immunitat de l'hoste contra la infecció viral. L'empalmament de l'ARN pre-missatger és un pas important de maduració de l'ARN que implica la unió d'exons i l'eliminació d'introns. La gran majoria de les transcripcions produïdes per l'ARN polimerasa II (RNAP II), incloent la majoria dels ARNm, contenen introns i, per tant, s'han d'empalmar. L'empalmament es realitza als nuclis cel·lulars mitjançant un dels dos complexos de ribonucleoproteïnes macromoleculars, coneguts com a spliceosomes majors i menors [1]. S'estima que més del 90% dels gens humans expressats pateixen splicing alternatiu (AS) [2], que permet que els gens individuals generin múltiples ARNm diferents que poden codificar proteïnes diferents, ampliant així molt la complexitat del proteoma. S'han descrit molts tipus d'esdeveniments d'AS, i inclouen principalment exons de casset, exons mútuament exclusius, ús alternatiu del lloc d'empalmament 50, ús alternatiu del lloc d'empalmament 30 i retenció d'introns. Com que els esdeveniments es poden regular d'una manera depenent de l'espai-temporal [1] per l'acció combinada d'elements cis (per exemple, potenciadors d'empalmament d'exons (ESE)) i factors trans (per exemple, proteïnes d'unió a l'ARN) [3]. L'empalmament aberrant s'ha relacionat amb moltes malalties [4, 5], cosa que subratlla encara més la importància d'aquest procés altament regulat. Les isoformes d'AS i d'ARNm tenen un paper important en pràcticament tots els processos i vies cel·lulars i, per tant, no és d'estranyar que s'hagi observat que ambdues són crítiques per a una resposta antiviral eficaç.

cistanche tubulosa: millora el sistema immunitari

2. Empalmament alternatiu d'ARN i les seves isoformes a les respostes IFN tipus I i III

La resposta antiviral s'inicia quan els receptors de reconeixement de patrons cel·lulars (PRR) detecten patrons moleculars associats a patògens (PAMP). El gen I induïble per l'àcid retinoic citosòlic (RIG-I) i la proteïna 5 associada a la diferenciació del melanoma (MDA-5) detecten l'ARN de doble cadena (dsRNA) (RIG-I detecta específicament 50 -trifosfat o {{8} }}difosfat de molècules d'ARN) i pateixen canvis conformacionals per associar-se amb la proteïna de senyalització antiviral mitocondrial (MAVS) aigües avall. Posteriorment, MAVS s'associa amb TANK Binding Kinase 1 (TBK1) i I-kappa-B kinase epsilon (IKKε), promovent la fosforilació del factor regulador de l'interferó 3 (IRF3) i del factor regulador de l'interferó 7 (IRF7). Aquests dos factors de transcripció es transloquen al nucli i impulsen la transcripció i la producció d'ARNm d'interferó de tipus I i III (IFN). El sensor d'ADN citosòlic, GMP-AMP sintasa cíclica (cGAS), pot detectar l'ADN al citoplasma com a PAMP, quan els virus d'ADN infecten les cèl·lules i produeixen el dinucleòtid cíclic 20,30 -GMP-AMP cíclic (20,{{21} }}cGAMP) [6]. Aquest missatger secundari al seu torn activa l'estimulador dels gens d'interferó resident a l'ER (STING) i condueix a la fosforilació IRF3 depenent de TBK1-per a la producció d'IFN de tipus I i III. És important tenir en compte que s'ha demostrat que el cGAS també respon a la infecció per virus ARN, probablement a causa de l'alliberament citoplasmàtic de l'ADN mitocondrial de l'hoste [7]. A més, el receptor Toll-like 3 (TLR3) lligat a la membrana pot reconèixer dsRNA als compartiments endosòmics. La detecció de lligands per TLR3 desencadena la seva associació amb l'adaptador d'interferó que induce adaptador (TRIF) que conté dominis TIR i indueix la fosforilació IRF3 depenent de TBK1/IKKε. Tots aquests processos culminen amb la inducció transcripcional dels gens IFN tipus I i III i la producció d'aquests IFN (figura 1).

Figura 1. Empalmament alternatiu a la resposta IFN de tipus I i III de l'amfitrió. Les isoformes d'AS que regulen la resposta antiviral es mostren en verd, i les que regulen la resposta antiviral es mostren en vermell.

Els IFN de tipus I i III recentment sintetitzats es segreguen i activen la senyalització aigües avall de manera dependent tant d'autocrina com de paracrina. Aquestes dues classes d'IFN s'uneixen a diferents receptors de membrana. Els IFN de tipus I s'uneixen a les subunitats 1 i 2 del receptor d'interferó alfa i beta (IFNAR1 i IFNAR2), mentre que els IFN de tipus III utilitzen el receptor lambda d'interferó 1 (IFNLR1) i la subunitat beta del receptor d'interleucina 10 (IL10-RB) [8] ]. Una vegada que aquests receptors s'uneixen als seus lligands, els canvis conformacionals recluten quinases intracel·lulars que posteriorment fosforilen el transductor de senyal i activador de la transcripció 1 (STAT1) i el transductor de senyal i activador de la transcripció 2 (STAT2). STAT1 i STAT2 fosforilats s'associen amb el factor regulador d'interferó 9 (IRF9) per formar el complex ISGF3 que es transloca al nucli i activa centenars de gens estimulats per IFN (ISG) per establir un estat antiviral cel·lular. Els gens PRR codifiquen diverses variants d'empalmament per regular les seves funcions. S'ha informat que una variant d'empalmament de RIG-I sense exó 2 s'ha expressat juntament amb la isoforma de longitud completa després del tractament amb IFN i la infecció pel virus Sendai (SeV) [9]. Aquesta variant d'empalmament té una supressió en el seu domini CARD N-terminal, i aquesta supressió evita la ubiquitinació de RIG-I per motiu tripartit que conté 25 (TRIM25), un requisit previ per a l'activació de RIG-I. Com a resultat, es va demostrar que aquesta variant d'empalmament actua com a forma negativa dominant de RIG-I. L'expressió ectòpica d'aquesta variant d'empalmament RIG-I inhibeix la transcripció d'IFN induïda per SeV. Es va demostrar que TLR3 tenia diverses isoformes [10, 11]. Una isoforma que no té el domini transmembrana i la major part del domini TIR intracel·lular original té un paper inhibidor en la resposta IFN [10]. Els efectes reguladors negatius d'aquesta isoforma TLR3 poden ser causats per la competència per la unió de lligands perquè aquesta isoforma TLR3 té llocs d'unió dsRNA, mentre que no té el domini TIR citoplasmàtic necessari per a la transducció del senyal. Aquestes isoformes PRR suggereixen l'existència d'un bucle de retroalimentació negativa que afina la resposta antiviral a l'IFN. Les proteïnes efectores de senyalització clau aigües avall dels sensors virals en les respostes de tipus I i III també expressen diverses isoformes d'AS, i moltes d'elles actuen de manera negativa dominant. Es van observar múltiples isoformes de MAVS: MAVS 1a, 1b i 1c [12]. MAVS 1a es produeix a partir de l'omissió de l'exó 2 i codifica un MAVS truncat a causa d'un codó d'aturada prematur. Aquesta proteïna truncada té un domini CARD N-terminal intacte i la seva sobreexpressió bloqueja la transcripció d'IFN, presumiblement segrestant proteïnes del factor 2 associat al receptor de TNF (TRAF2). MAVS1b, que no té exó 3, també codifica una proteïna truncada per un codó d'aturada prematura a causa del canvi de marc. Tanmateix, aquest MAVS1b és capaç d'activar la transcripció d'IFN i inhibir la replicació del virus de l'estomatitis vesicular (VSV), cosa que suggereix un mecanisme bidireccional pel qual es regula l'activitat de MAVS. A més, STING, l'efector aigües avall del cGAS, té una isoforma empalmada, anomenada MRP [13]. En comparació amb STING, MRP no conté l'exó 7 i, per tant, no té un domini d'interacció TBK1 C-terminal. Es va demostrar que MRP pot dimeritzar amb STING i bloquejar la interacció STING-TBK1. Aquesta interferència en l'associació STING-TBK explica per què MRP inhibeix la transcripció d'IFN mediada per STING. D'acord amb aquesta troballa, la derrota de MRP redueix la replicació de VSV, presumiblement mitjançant la repressió de les respostes d'IFN de l'amfitrió. Curiosament, tot i que MRP bloqueja la via de senyalització d'IFN mediada per STING induïda per la infecció per SeV, MRP millora la resposta a l'IFN induïda pel virus de l'herpes simple tipus 1 (HSV-1). Així, sembla que la MRP té diferents papers en resposta a les infeccions per virus d'ARN i ADN. TRIF és un adaptador crític per a la via de senyalització3-iniciada per TLR. Es va observar una variant d'empalmament que no té un domini TIR central, anomenada TRIS, en un ampli espectre de línies cel·lulars [14]. Estudis anteriors han demostrat que TRIF està associat amb TLR3 a través dels seus respectius dominis TIR [15]; per tant, s'espera que un TRIS deficient en TIR actuï com a inhibidor de la senyalització mediada per TLR3-. Tanmateix, la sobreexpressió de TRIS, encara que en un grau menor que TRIF, activa la transcripció d'IFN i la derrocació de la transcripció d'IFN induïda per poli (I: C) reduïda per TRIS. Aquests resultats suggereixen un paper sorprenent, però no redundant, per a TRIS en la senyalització mediada per TLR3-. El factor 3 associat al receptor del factor de necrosi tumoral (TRAF3) és una proteïna accessoria en les vies RIG-I-MAVS i pateix SA a les cèl·lules T [16]. Aquest esdeveniment de salt de l'exó 8 a TRAF3 està mediat principalment per CUGBP ElavLike Family Member 2 (CELF2) i proteïnes heterogènies de ribonucleoproteïna C nuclear (hnRNP C) [17]. No obstant això, el paper d'aquest esdeveniment AS en la resposta antiviral de l'amfitrió encara està per determinar.

Beneficis del suplement de cistanche: augmenta la immunitat

També s'han identificat noves isoformes empalmades de TBK1 i IKKε que tenen papers reguladors negatius durant la resposta a l'IFN. TBK1s, una variant de transcripció empalmada TBK1, no té l'exó 3–6, que codifica un domini serina/treonina cinasa que media la fosforilació IRF3 i IRF7. Assajos funcionals i bioquímics addicionals mostren que els TBK1 inhibeixen la transcripció d'IFN bloquejant la interacció entre RIG-I i MAVS [18]. Curiosament, els TBK1 no s'expressen abundantment en cèl·lules no infectades. Després de la infecció per SeV, especialment en moments posteriors, l'expressió de TBK1 es fa més prominent. Aquesta regulació endarrerida suggereix que les cèl·lules han desenvolupat una estratègia per regular negativament l'activació d'IFN una vegada que s'elimina una infecció viral. A més, s'observa una isoforma empalmada a la infecció pel virus de la grip A (IAV), però encara queda per caracteritzar la seva importància funcional [19]. Pel que fa a IKKε, aquest gen expressa dues variants empalmades, IKKε sv1 i IKKε sv2, que difereixen en les regions carboxílicas, en comparació amb IKKε de longitud completa [20]. Tant IKKε sv1 com sv2 formen dímers amb IKKε de longitud completa i inhibeixen la senyalització IRF3 induïda per IKKε de longitud completa, inclòs el seu paper en la promoció de l'activitat antiviral. Curiosament, es va observar que la infecció pel virus del dengue (DENV) regulava l'expressió d'aquestes dues isoformes [21], cosa que suggereix que aquest flavivirus ha desenvolupat la capacitat d'interferir amb la immunitat innata mitjançant la regulació de l'AS. S'han caracteritzat múltiples isoformes d'IRF3 i IRF7 en mamífers. IRF3a és una variant IRF3 AS [22, 23] que utilitza un exó alternatiu 3a i produeix una proteïna truncada N-terminal a causa de l'ús d'un codó d'inici diferent. IRF3a no té un domini d'unió a l'ADN funcional i, per tant, no s'uneix al promotor d'IFN. Per tant, IRF3a inhibeix l'activitat transcripcional d'IRF3 [22]. La segona isoforma empalmada, IRF3-CL, és una transcripció derivada d'un lloc d'empalmament alternatiu de 30, 16 nucleòtids aigües amunt de l'exó 7 de la transcripció principal IRF3 [24]. IRF3-CL comparteix la regió N-terminal amb IRF3, però difereix als C-terminals. Aquesta isoforma regula negativament l'activitat IRF3 i s'expressa de manera ubiqua. Per contra, l'expressió de IRF3-nirs3 es limita a teixits específics [25]. Aquesta isoforma sembla expressar-se en cèl·lules de carcinoma hepatocel·lular humà, però no en hepatòcits humans primaris. Les transcripcions IRF-nirs3 no contenen l'exó 6, i aquesta exclusió dóna lloc a una proteïna que no té el domini central d'associació IRF, que és fonamental per a la seva homodimerització o heterodimerització amb IRF3 o altres IRF. Com era d'esperar, la sobreexpressió d'IRF3-nirs3 va reprimir la transcripció d'IFN i va facilitar la replicació viral [25]. S'identifiquen isoformes spliced ​​IRF3 addicionals amb diferents graus de capacitat per inhibir l'activació transcripcional d'IFN mediada per IRF 3- [26]. Finalment, es va demostrar que la ribonucleoproteïna nuclear heterogènia A1 (hnRNPA1) i el factor d'splicing ric en serina i arginina (SRSF1) promouen la inclusió de l'exó 2 i l'exó 3 de l'IRF3 i generaven l'IRF3 de longitud completa que es requereix per a IFN- activació transcripcional [27]. L'esgotament de hnRNPA1 o SRSF1 provoca una reducció de l'activació d'IFN induïda per poli (I: C). Més recentment, es va demostrar que l'expressió IRF7 estava regulada pel mecanisme de retenció d'introns mitjançant la proteïna BUD13 [28]. BUD13 reprimeix la retenció de l'intró 4 a la transcripció IRF7. Com a resultat, es produeix una transcripció madura d'IRF7 i es tradueix la proteïna IRF7 per donar suport a la resposta d'IFN. En suport d'aquesta observació, l'eliminació de BUD13 augmenta la retenció d'introns de la transcripció IRF7, que sembla degradar-se mitjançant la decadència mediada per sense sentit (NMD). En conseqüència, el nivell de proteïna IRF7 es redueix per facilitar la replicació viral [28]. S'han informat diverses altres variants de transcripció IRF7, i algunes poden ser induïdes per la infecció pel virus respiratori sincitial (RSV) [29, 30]. La majoria dels gens d'IFN de tipus I no tenen introns, mentre que els gens d'IFN de tipus III solen tenir múltiples introns, cosa que suggereix un mecanisme regulador potencial per part de l'AS. Un IFNL4 descobert recentment, un IFN de tipus III, està codificat per un gen que consta de cinc exons, i s'han observat diverses variants de transcripció [31]. La caracterització funcional mostra que les isoformes IFNL4 de longitud completa, però no les més curtes, presenten activitat antiviral [32]. Sorprenentment, les variants genètiques de l'exó 1 que es correlacionen negativament amb l'expressió d'IFNL4 funcional s'associen amb l'eliminació del virus de l'hepatitis C (VHC) [31,33]. Les proteïnes IFN de tipus I i III exerceixen les seves funcions (per exemple, desencadenant la producció d'ISG antivirals) unint-se als seus respectius receptors, que s'expressen com a diverses isoformes. IFNAR1 i IFNAR2 formen un complex receptor per a IFN de tipus I, i IFNAR2 produeix tres variants d'ARNm AS, incloses dues isoformes unides a la membrana (IFNAR2b i 2c) i una isoforma soluble (IFNAR2a) [34]. La transfecció d'IFNAR1 i IFNAR2c humà, però no d'IFNAR2b, va reconstituir la resposta antiviral a l'IFN [35]. Això és coherent amb les dades que IFNAR2b pot actuar com a regulador negatiu dominant de les respostes d'IFN [36]. A les cèl·lules humanes s'han descrit diverses variants d'empalmament d'IFNLR1, amb les quals IL-10RB forma el receptor d'IFN de tipus III [37–39]. IFNLR1 lligat a la membrana és una subunitat receptora funcional, mentre que una isoforma empalmada soluble, que no té el domini transmembrana que codifica l'exó 6, serveix com a forma negativa dominant. L'addició d'IFNLR1 soluble recombinant va reduir la transcripció ISG induïda per IFNs de tipus III a les cèl·lules mononuclears de sang perifèrica (PBMC) i a les cèl·lules Huh7.5 [40]. Després de la unió dels IFN tipus I i III als seus receptors, STAT1 i STAT2 fosforilats finalment es traslladen al nucli que condueix l'expressió ISG. STAT1 té dues isoformes [41], alfa i beta, que es diferencien en el domini de trans-activació C-terminal. Inicialment, es va considerar que STAT1 alfa era l'única isoforma funcional i, presumiblement, STAT1 beta actua com a regulador negatiu dominant [42,43]. No obstant això, estudis recents suggereixen que STAT1 alfa i beta activen un conjunt de gens superposats, però no redundants, que són importants per regular la immunitat [44]. A més d'aquestes dues isoformes, les proteïnes SM del virus Epstein-Barr (EBV) s'associen amb el factor de splicing host SRSF3 i promouen l'ús d'un lloc d'empalmament críptic de 50, generant la variant de transcripció STAT1 alfa0 [45,46]. El paper de la transcripció STAT1 alfa0, i si es tradueix o no, encara no està clar. Atesa la importància de STAT1 i STAT2 per impulsar l'expressió ISG per a l'establiment de l'estat antiviral, l'empalmament aberrant d'aquests gens s'ha relacionat amb una immunitat deteriorada i malalties víriques greus [47–49]. Per exemple, la mutació homozigota que condueix a saltar l'exó 3 de STAT1 dóna com a resultat la seva expressió i fosforilació reduïdes. Els pacients homozigots per a aquesta mutació mostren una profunda susceptibilitat a la infecció [49]. Una mutació a l'intró 4 de STAT2 provoca un empalmament aberrant i probablement provoca NMD. L'expressió de la proteïna STAT2 no es pot detectar a les cèl·lules del pacient homozigot, i l'expressió exògena de STAT2 rescata el fenotip i indueix un estat antiviral [48]. Comencen a sorgir proves que mostren que la funció ISG està regulada per AS. OAS1 és un component clau del sistema antiviral RNaseL 2-5. Un informe recent mostra que el gen Oas1g (un homòleg de ratolí de l'OAS1 humà) té un lloc d'empalmament alternatiu de 50 a l'intró entre l'exó 3 i l'exó 4, i l'ús d'aquest empalmament alternatiu de 50 condueix a una variant d'ARNm no funcional que és destinada a la degradació [50]. Curiosament, l'eliminació d'aquest lloc alternatiu de 50 empalmes augmenta l'expressió d'Oas1g i inhibeix la infecció viral. MxA és un altre ISG conegut que restringeix diversos virus. Curiosament, la infecció viral HSV-1 indueix la producció de varMxA [51]. Aquesta transcripció té els exons 14-16 suprimits i codifica una proteïna que admet la replicació del HSV-1. L'aparició d'isoformes d'exclusió d'exons MxA també es va observar a les cèl·lules infectades per DENV [21]. La seva funció reguladora sobre la replicació de DENV espera més investigacions. En resum, s'expressen diverses isoformes de components clau en les respostes d'IFN de tipus I i de tipus III per regular la immunitat innata en la resposta de l'hoste (figura 1). És intrigant que la majoria dels esdeveniments d'AS redueixin la resposta antiviral, cosa que suggereix que la regulació posttranscripció funciona per equilibrar la regulació de la transcripció de l'estat antiviral. Això implicaria que els defectes en la regulació post-transcripcional de la resposta immune innata antiviral donarien lloc a autoimmunitat i condicions inflamatòries patològiques.

Els beneficis de cistanche per als homes enforteixen el sistema immunitari

3. Altres vies immunitàries innates afectades per l'empalmament alternatiu d'ARN

La proteïna de la leucèmia promielocítica (PML), membre de la família de proteïnes TRIM, és un component clau de les estructures conegudes com a cossos nuclears PML que tenen un paper important en la senyalització immune innata [52,53]. El gen PML consta de nou exons i pateix una SA extensa, generant diverses variants de transcripció [54]. Aquestes isoformes comparteixen regions aminoterminals però difereixen a l'extrem C-terminal. És important destacar que semblen tenir papers diferencials en la modulació de la resposta d'IFN. S'ha informat que la isoforma IV de PML millora l'activitat d'IRF3, participant així en la producció d'IFN durant la infecció per VSV [55]. D'acord amb aquesta troballa, la sobreexpressió de la isoforma IV de PML és suficient per suprimir la replicació de DENV [56]. De la mateixa manera, la isoforma II de PML promou l'activació d'IFN [57] i aconsegueix aquesta millora associant-se a diversos complexos transcripcionals. L'esgotament de la isoforma II de PML va reduir el reclutament IRF3 i STAT1 als elements del promotor IFN i ISRE, respectivament. Per contra, a diferència de la isoforma II de PML, la derrota de la isoforma V de PML no va tenir cap impacte en l'activació d'IFN desencadenada per poli (I: C), cosa que suggereix que la isoforma V de PML no és necessària per a aquesta regulació de la resposta de l'IFN. 57]. Curiosament, la infecció per virus herpes simplex tipus 2 (HSV-2) va provocar un canvi de la isoforma II de PML a la isoforma IV de PML augmentant l'ús de l'intró 7a mitjançant proteïnes virals ICP27 [58]. Això està molt en línia amb una estratègia viral per antagonitzar la resposta de l'IFN hoste per a la replicació viral, ja que la isoforma II, així com la isoforma IV, promouen l'activació de l'IFN. Tanmateix, la restauració de la isoforma II de PML a les cèl·lules enderrocades per PML facilita la replicació de HSV2. L'esgotament de la isoforma II de PML per siRNA va reduir la infectivitat de HSV2, cosa que suggereix que la isoforma II de PML és un factor pro-HSV2. Aquests resultats suggereixen un paper complex i potser paradoxal del PML en les interaccions hoste-virus. La proteïna del dit de zinc (ZFR) participa en diverses funcions cel·lulars i és un potent modulador de splicing. ZFR controla la senyalització d'IFN evitant l'empalmament aberrant i la decadència mediada per sense sentit dels ARNm de macroH2A1 de la variant d'histona [59]. A les cèl·lules que expressen ZFR, ZFR promou l'ús de l'exó 6a de macroH2A1, donant lloc a la producció de macroH2A1 de longitud completa, que reprimeix el promotor d'IFN i prevé l'activació transcripcional. A les cèl·lules esgotades amb ZFR, l'ús mútuament exclusiu de l'exó 6b dóna lloc a una transcripció empalmada destinada a NMD. Com a conseqüència, el promotor d'IFN s'allibera de la repressió i pot ser accessible als factors de transcripció per a l'expressió gènica. De manera coherent, el derrocament de ZFR o macroH2A1 millora la transcripció d'IFN. A més, l'esgotament de ZFR restringeix la replicació viral [59]. hnRNP M pertany a la família de ribonucleoproteïnes nuclears heterogènies expressades de manera ubiqua (hnRNPs) i afecta el processament pre-ARNm i diversos altres aspectes del metabolisme i transport de l'ARNm. Recentment, s'ha demostrat que hnRNP M posseeix una capacitat de supressió immune mitjançant diferents mecanismes. En primer lloc, aquesta proteïna interacciona amb RIG-I per afectar la detecció immune [60]. A més, hnRNP M promou la retenció d'introns per reduir l'abundància de transcripcions IL-6. En general, com a conseqüència, l'esgotament de hnRNP M esmorteix la immunitat de l'hoste i facilita la replicació viral [61].

4. L'empalmament alternatiu regula les vies de mort de la cèl·lula hoste activades durant la infecció viral

S'han descrit diversos programes de mort cel·lular i els mecanismes moleculars d'aquests programes es superposen, però força divergents [62]. Aquí, parlem de la regulació AS de l'apoptosi, la necroptosi i la piroptosi en el context de les interaccions hoste-virus (figura 2). Els virus interaccionen àmpliament amb les vies apoptòtiques intrínseques i extrínseques cel·lulars [63,64], i les isoformes empalmades dels factors apoptòtics poden tenir un paper clau en la determinació del destí cel·lular [65,66]. L'apoptosi es concep generalment com un tipus no inflamatori de mort cel·lular programada, caracteritzat per canvis morfològics, inclosa la contracció cel·lular, la condensació nuclear i el vessament de la membrana plasmàtica. L'apoptosi intrínseca es controla principalment als mitocondris. La alteració de l'homeòstasi intracel·lular (per exemple, dany a l'ADN o estrès oxidatiu) i els estímuls pro-apoptòtics donen lloc a la inducció de la permeabilització de la membrana externa mitocondrial (MOMP) per les proteïnes BAX o BAK. En absència d'estímuls apoptòtics, aquestes proteïnes són segrestades en estat inactiu per membres antiapoptòtics de la família de proteïnes BCL2. MOMP allibera el citocrom c al citoplasma i desencadena la formació del complex proteic apoptosoma que conté el factor d'activació de la proteasa apoptòtica 1 (APAF1) i la caspasa 9, un membre de les proteases cisteïna-aspártiques cel·lulars. La caspasa 9 activada després escinda les caspases 3 i 7, la qual cosa desencadena una via que condueix a la mort cel·lular. Curiosament, la infecció viral activa les interaccions no transcripcionals IRF3-Bax i provoca MOMP i mort cel·lular [67,68]. La infecció viral també pot desencadenar apoptosi extrínseca [63]. La via extrínseca s'inicia principalment per la unió de lligands a diversos receptors de mort, activant la caspasa 8 i conduint a l'activació de la caspasa 3 i l'apoptosi.

Figura 2. L'empalmament alternatiu regula les vies de mort de la cèl·lula hoste activades durant la infecció viral.

La necroptosi és un tipus inflamatori de mort cel·lular, caracteritzat per la inflamació cel·lular, la pèrdua de la permeabilitat de la membrana plasmàtica i l'alliberament de contingut citosòlic a l'espai extracel·lular [77]. Algunes infeccions víriques desencadenen la necroptosi a través de receptors units a la membrana (per exemple, TLR3 [78,79]) o sensors citosòlics (per exemple, ZBP1 [80–82]), i culminen amb l'activació i la fosforilació de proteïnes semblants al domini de la cinasa de llinatge mixt (MLKL). ), que forma un complex homotrimèric que es trasllada a la membrana plasmàtica, on forma un porus i indueix la lisi cel·lular [83,84]. MLKL té dues isoformes, MLKL1 i MLKL2 [85]; MLKL2 és un inductor de necroptosi més potent que MLKL1 [86]. Aquest augment de l'activitat es pot atribuir a l'estructura de domini alterada de MLKL2. MLKL2 no té exons 4-8 i, per tant, MLKL2 no té la major part del domini de pseudoquinasa C-terminal que es creu que serveix com a funció de supressió. Els components clau addicionals de la via de la necroptosi inclouen la serina/treonina-proteïna quinasa 1 que interacciona amb el receptor (RIPK1) i la serina/treonina-proteïna quinasa 3 que interacciona amb el receptor (RIPK3), i s'ha informat que ambdós gens codifiquen variants de transcripció. El cribratge de tot el genoma CRISPR va identificar PTBP1 com un nou regulador de l'empalmament RIPK1 en la necroptosi [87]. PTBP1 suprimeix una inclusió d'exons alternativa entre els exons canònics 4 i 5 i promou l'expressió de proteïna RIPK1 de longitud completa per a la inducció de la mort cel·lular. D'acord amb el salt d'exons mediat per PTBP1-, es va identificar un tracte ric en CU de signatura a l'intró adjacent al lloc d'empalmament 30 [87]. Finalment, RIPK3 té dues variants d'empalmament, RIPK3 beta i RIPK3 gamma, totes dues semblen suprimir la mort cel·lular [88]. La piroptosi, que també és una forma inflamatòria de mort cel·lular, és induïda per l'activació de l'inflamsoma i és fonamental per a la resposta antiviral [89,90]. Aquesta via de mort s'inicia mitjançant la detecció de PAMP o patrons moleculars associats al perill (DAMP) per proteïnes inflamasomas, la majoria de les quals són membres de la família de receptors Nod-like (NLR) [91]. Posteriorment, el reclutament de proteïnes semblants a la molla associada a l'apoptosi de l'adaptador que conté una CARD (ASC) i la caspasa 1 forma un complex proteic inflamasoma. La caspasa 1 activada escindria el gas dermin D (GSDMD), alliberant el domini GSDMD-N. El domini GSDMD-N es trasllada a la membrana plasmàtica i s'oligomeritza per generar porus de membrana. Aquesta formació de porus altera el potencial osmòtic, donant lloc a la inflamació cel·lular i, finalment, a la lisi. A més, la caspasa activa-1 processa pro-IL-1 i pro-IL{-18 en formes bioactives, promovent la inflamació. Entre molts NLR, el domini de pirina de la família NLR que conté 3 (NLRP3) és important en la resposta antiviral [89], i recentment s'ha demostrat que està regulat a nivell d'empalmament. Una nova variant empalmada NLRP3 que no té l'exó 5 codifica una fracció del domini LRR [92]. La supressió d'aquesta regió elimina la seva interacció amb la proteïna quinasa 7 relacionada amb NIMA (NEK7), la unió de la qual és un requisit previ per a l'activació de NLRP3 i, per tant, fa que NLRP3 ∆exon5 sigui inactiu. Un altre component crític de l'inflamsoma és l'adaptador ASC, format per un domini PYD N-terminal per a l'associació amb les proteïnes NLR, una regió d'enllaç i un domini CARD C-terminal per a la interacció amb les proteïnes caspases. Una variant empalmada d'ASC-b no té l'exó 2, que codifica l'enllaç i és capaç d'activar l'inflamsoma NLRP3 [93]. En línia amb això, un pacient que alberga aquesta supressió de l'exó 2 ASC presenta un nivell més alt de proteïna IL-1 al sèrum [94]. Una altra isoforma ASC-c empalmada té una supressió al domini PYD. Actua com a regulador negatiu dominant i redueix l'activació de NLRP3 [93].

Beneficis del suplement de cistanche: augmenta la immunitat

Feu clic aquí per veure els productes Cistanche Enhance Immunity

【Demanar més】 Correu electrònic:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

5. Conclusions

La infecció viral desencadena miríades d'esdeveniments cel·lulars a l'hoste. La majoria dels estudis anteriors s'han centrat en el paper de la transcripció en la configuració de la resposta antiviral cel·lular. En aquesta revisió, parlem del paper poc explorat de l'AS en la regulació de la resposta de l'hoste durant la infecció viral. La majoria dels esdeveniments reguladors de l'AS descoberts fins ara semblen modular negativament la resposta antiviral. Això implicaria que els defectes en la regulació post-transcripcional de la resposta immune innata antiviral donarien lloc a autoimmunitat i condicions inflamatòries patològiques. Amb l'arribada de la seqüenciació de nova generació, s'han fet nous descobriments per delimitar com es modula la maquinària d'empalmament de l'hoste durant la infecció viral [95,96]. És evident que l'AS té un paper crític en la regulació d'una resposta immune innata productiva; tanmateix, la importància funcional de moltes isoformes noves d'AS i els mecanismes reguladors pels quals es generen aquestes variants empalmades encara no s'entenen del tot. Una investigació posterior hauria d'explorar l'AS com a capa important de regulació de les interaccions virus-hoste i identificar potencialment nous objectius per al desenvolupament terapèutic per tractar malalties infeccioses.

Referències

1. Wilkinson, ME; Charenton, C.; Nagai, K. Empalmament d'ARN per l'espliceosoma. Ann. Rev. Biochem. 2020, 89, 359–388. [CrossRef] [PubMed]

2. Wang, ET; Sandberg, R.; Luo, S.; Khrebtukova, I.; Zhang, L.; Mayr, C.; Kingsmore, SF; Schroth, metge de capçalera; Burge, CB Regulació alternativa d'isoformes en transcriptomes de teixits humans. Natura 2008, 456, 470–476. [CrossRef] [PubMed]

3. Fu, XD; Ares, M., Jr. Control depenent del context de l'empalmament alternatiu mitjançant proteïnes d'unió a l'ARN. Nat. Reverent Genet. 2014, 15, 689–701. [CrossRef] [PubMed]

4. Evsyukova, I.; Somarelli, JA; Gregori, SG; Garcia-Blanco, MA Empalmament alternatiu en esclerosi múltiple i altres malalties autoimmunes. ARN Biol. 2010, 7, 462–473. [Ref creuat]

5. Tazi, J.; Bakkour, N.; Stamm, S. Empalmament i malaltia alternatius. Biochim. Biofísica. Acta 2009, 1792, 14–26. [Ref creuat]

6. Hopfner, KP; Hornung, V. Mecanismes moleculars i funcions cel·lulars de la senyalització cGAS-STING. Nat. mossèn Mol. Biol cel·lular. 2020, 21, 501–521. [Ref creuat]

7. Sol, B.; Sundstrom, KB; Mastegar, JJ; Bist, P.; Gan, ES; Tan, HC; Va, KC; Chawla, T.; Tang, CK; Ooi, EE El virus del dengue activa el cGAS mitjançant l'alliberament d'ADN mitocondrial. Ciència. Rep 2017, 7, 3594. [CrossRef]

8. Lazear, HM; Schoggins, JW; Diamant, MS Funcions compartides i diferents dels interferons tipus I i tipus III. Immunitat 2019, 50, 907–923. [Ref creuat]

9. Gack, MU; Kirchhofer, A.; Shin, YC; Inn, KS; Liang, C.; Cui, S.; Myong, S.; Barret.; Hopfner, KP; Jung, JU Rols de la TARJETA tàndem N-terminal RIG-I i la variant d'empalmament en la transducció de senyal antiviral mediada per TRIM25-. Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 2008, 105, 16743–16748. [Ref creuat]

10. Seo, JW; Yang, EJ; Kim, SH; Choi, IH Una isoforma d'empalmament alternativa inhibidora del receptor 3 de tipus Toll és induïda per interferons tipus I en línies cel·lulars d'astròcits humans. BMB Rep. 2015, 48, 696–701. [Ref creuat]

11. Yang, E.; Shin, JS; Kim, H.; Parc, HW; Kim, MH; Kim, SJ; Choi, IH Clonació de la isoforma TLR3. Yonsei Med. J. 2004, 45, 359–361. [CrossRef] [PubMed]

12. Xaval, SP; Yang, G.; Scott, DA; Chao, TH; Correia Jda, S.; de la Torre, JC; Li, E. Identificació de variants d'empalmament MAVS que interfereixen amb la senyalització de la via RIGI/MAVS. Mol. Immunol. 2008, 45, 2277–2287. [CrossRef] [PubMed]

13. Chen, H.; Pei, R.; Zhu, W.; Zeng, R.; Wang, Y.; Wang, Y.; Lu, M.; Chen, X. Una isoforma d'empalmament alternativa de MITA antagonitza la inducció mediada per MITA d'IFN de tipus I. J. Immunol. 2014, 192, 1162–1170. [Ref creuat]

14. Han, KJ; Yang, Y.; Xu, LG; Shu, HB L'anàlisi d'una variant d'empalmament sense TIR de TRIF revela un mecanisme inesperat de senyalització mediada per TLR3-. J. Biol. Chem. 2010, 285, 12543–12550. [CrossRef] [PubMed]

15. Oshiumi, H.; Matsumoto, M.; Funami, K.; Akazawa, T.; Seya, T. TICAM-1, una molècula adaptadora que participa en la inducció d'interferó-beta mediada pel receptor 3-Toll-like. Nat. Immunol. 2003, 4, 161–167. [Ref creuat]

16. Michel, M.; Wilhelmi, I.; Schultz, AS; Preussner, M.; Heyd, F. L'empalmament alternatiu del factor 3 (Traf3) associat al factor de necrosi tumoral induïda per activació controla la via del factor nuclear kappa B no canònic i l'expressió de quimiocines a les cèl·lules T humanes. J. Biol. Chem. 2014, 289, 13651–13660. [Ref creuat]

17. Schultz, AS; Preussner, M.; Bunse, M.; Karni, R.; Heyd, F. L'empalmament alternatiu de l'exó 8 de TRAF3 depenent de l'activació està controlat per CELF2 i hnRNP C la unió a un element intrònic aigües amunt. Mol. Biol cel·lular. 2017, 37, e00488-16. [Ref creuat]

18. Deng, W.; Shi, M.; Han, M.; Zhong, J.; Li, Z.; Li, W.; Hu, Y.; Yan, L.; Wang, J.; Ell, Y.; et al. Regulació negativa de la via de senyalització IFN-beta activada pel virus mitjançant splicing alternatiu de TBK1. J. Biol. Chem. 2008, 283, 35590–35597. [Ref creuat]

19. Fabozzi, G.; Oler, AJ; Liu, P.; Chen, Y.; Mindaye, S.; Dolan, MA; Kenney, H.; Gucek, M.; Zhu, J.; Rabin, RL; et al. La seqüenciació d'ARN dual específica de cadena de cèl·lules epitelials bronquials infectades amb virus de la grip A/H3N2 revela l'empalmament del segment 6 del gen i noves interaccions hoste-virus. J. Virol. 2018, 92, e00518-18. [Ref creuat]

20. Koop, A.; Lepenies, I.; Braum, O.; Davarnia, P.; Scherer, G.; Fickenscher, H.; Kabelitz, D.; Adam-Klages, S. Noves variants d'empalmament de l'IKKepsilon humà regulen negativament l'activació IRF3 i NF-kB induïda per IKKepsilon. Eur. J. Immunol. 2011, 41, 224–234. [Ref creuat]

21. De Maio, FA; Risso, G.; Iglesias, NG; Shah, P.; Pozzi, B.; Gebhard, LG; Mammi, P.; Mancini, E.; Yanovski, MJ; Andino, R.; et al. La proteïna NS5 del virus del dengue s'introdueix en l'espliceosoma cel·lular i modula l'empalmament. PLoS Pathog. 2016, 12, e1005841. [CrossRef] [PubMed]

22. Karpova, AY; Ronco, LV; Howley, PM Caracterització funcional del factor regulador de l'interferó 3a (IRF-3a), una isoforma d'empalmament alternativa de l'IRF-3. Mol. Biol cel·lular. 2001, 21, 4169–4176. [Ref creuat]

23. Karpova, AY; Howley, PM; Ronco, LV La doble utilització d'un lloc d'empalmament acceptor/donant regula l'empalmament alternatiu del gen IRF-3. Genes Dev. 2000, 14, 2813–2818. [Ref creuat]

24. Li, C.; Ma, L.; Chen, X. El factor regulador de l'interferó 3-CL, una isoforma d'IRF3, antagonitza l'activitat d'IRF3. Cel·lular Mol. Immunol. 2011, 8, 67–74. [CrossRef] [PubMed]

25. Marozin, S.; Altomonte, J.; Stadler, F.; Thasler, WE; Schmid, RM; Ebert, O. Inhibició de la resposta IFN-beta en el carcinoma hepatocel·lular mitjançant l'isoforma empalmada alternativament del factor regulador de l'IFN-3. Mol. Allà. 2008, 16, 1789–1797. [CrossRef] [PubMed]

26. Li, Y.; Hu, X.; Cançó, Y.; Lu, Z.; Ning, T.; Cai, H.; Ke, Y. Identificació de noves variants alternatives d'empalmament del factor regulador de l'interferó 3. Biochim. Biofísica. Acta 2011, 1809, 166–175. [CrossRef] [PubMed]

27. Guo, R.; Li, Y.; Ning, J.; Sol, D.; Lin, L.; Liu, X. HnRNP A1/A2 i SF2/ASF regulen l'empalmament alternatiu del factor regulador de l'interferó-3 i afecten les funcions immunomoduladores en cèl·lules humanes de càncer de pulmó de cèl·lules no petites. PLoS ONE 2013, 8, e62729. [Ref creuat]

28. Frankiw, L.; Majumdar, D.; Burns, C.; Vlach, L.; Moradian, A.; Sweredoski, MJ; Baltimore, D. BUD13 promou una resposta d'interferó de tipus I contrarestar la retenció d'introns a Irf7. Mol. Cel·la 2019, 73, 803–814. [Ref creuat]

29. Xu, X.; Mann, M.; Qiao, D.; Brasier, AR Processament alternatiu de l'ARNm de les vies de resposta innata en la infecció pel virus respiratori sincitial (RSV). Virus 2021, 13, 218. [CrossRef]

30. Zhang, L.; Pagano, JS Estructura i funció de l'IRF-7. J. Interferon Cytokine Res. 2002, 22, 95–101. [Ref creuat]

31. Prokunina-Olsson, L.; Molt més, B.; Tang, W.; Pfeiffer, RM; Park, H.; Dickensheets, H.; Hergott, D.; Porter-Gill, P.; Mòmia, A.; Kohaar, I.; et al. Una variant aigües amunt d'IFNL3 (IL28B) que crea un nou gen d'interferó IFNL4 s'associa amb una eliminació deteriorada del virus de l'hepatitis C. Nat. Genet. 2013, 45, 164–171. [Ref creuat]

32. Hong, M.; Schwerk, J.; Lim, C.; Kell, A.; Jarret, A.; Pangallo, J.; Loo, YM; Liu, S.; Hagedorn, CH; Gale, M., Jr.; et al. L'expressió d'interferó lambda 4 és suprimida per l'hoste durant la infecció viral. J. Exp. Med. 2016, 213, 2539–2552. [Ref creuat]

33. Fang, MZ; Jackson, SS; O'Brien, TR IFNL4: Variants notables i fenotips associats. Gene 2020, 730, 144289. [CrossRef] [PubMed]

34. Lutfalla, G.; Holanda, SJ; Cinato, E.; Monneron, D.; Reboul, J.; Rogers, NC; Smith, JM; Stark, GR; Gardiner, K.; Mogensen, KE; et al. Les cèl·lules mutants U5A es complementen amb una subunitat del receptor d'interferó-alfa beta generada pel processament alternatiu d'un nou membre d'un grup de gens del receptor de citocines. EMBO J. 1995, 14, 5100–5108. [Ref creuat]

35. Cohen, B.; Novick, D.; Barak, S.; Rubinstein, M. Associació induïda per lligands dels components del receptor d'interferó de tipus I. Mol. Biol cel·lular. 1995, 15, 4208–4214. [CrossRef] [PubMed]

36. Gazziola, C.; Cordani, N.; Carta, S.; De Lorenzo, E.; Colombatti, A.; Perris, R. Els nivells relatius d'expressió endògena de les isoformes IFNAR2 influeixen en l'efecte citostàtic i pro-apoptòtic d'IFNalfa sobre les cèl·lules del sarcoma pleomòrfic. Int. J. Oncol. 2005, 26, 129–140.

37. Sheppard, P.; Kindsvogel, W.; Xu, W.; Henderson, K.; Schlutsmeyer, S.; Whitmore, TE; Kuestner, R.; Garrigues, U.; Birks, C.; Roraback, J.; et al. IL-28, IL-29 i el seu receptor de citocines de classe II IL-28R. Nat. Immunol. 2003, 4, 63–68. [CrossRef] [PubMed]

38. Dumoutier, L.; Lejeune, D.; Hor, S.; Fickenscher, H.; Renauld, JC Clonació d'un nou transductor de senyal activador del receptor de citocines de tipus II i activador de la transcripció (STAT)1, STAT2 i STAT3. Bioquímica. J. 2003, 370, 391–396. [CrossRef] [PubMed]

39. Witte, K.; Gruetz, G.; Volk, HD; Looman, AC; Asadullah, K.; Sterry, W.; Sabat, R.; Wolk, K. Malgrat l'expressió del receptor IFN-lambda, les cèl·lules immunitàries de la sang, però no els queratinòcits ni els melanòcits, tenen una resposta deteriorada als interferons de tipus III: Implicacions per a aplicacions terapèutiques d'aquestes citocines. Gens Immun. 2009, 10, 702–714. [Ref creuat]

40. Santer, DM; Minty, GES; Golec, DP; Lu, J.; maig, J.; Namdar, A.; Shah, J.; Elahi, S.; Orgullós, D.; Joyce, M.; et al. L'expressió diferencial de les variants d'empalmament del receptor interferó-lambda 1 determina la magnitud de la resposta antiviral induïda per l'interferó-lambda 3 a les cèl·lules immunitàries humanes. PLoS Pathog. 2020, 16, e1008515. [Ref creuat]

41. Schindler, C.; Fu, XY; Improta, T.; Aebersold, R.; Darnell, JE, Jr. Proteïnes del factor de transcripció ISGF-3: un gen codifica les proteïnes 91-i 84-kDa ISGF{-3 que s'activen per l'interferó alfa. Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 1992, 89, 7836–7839. [CrossRef] [PubMed]

42. Baran-Marszak, F.; Feuillard, J.; Najjar, I.; Le Clorennec, C.; Bechet, JM; Dusanter-Fourt, I.; Bornkamm, GW; Rafael, M.; Fagard, R. Rols diferencials de STAT1alpha i STAT1beta en l'aturada i l'apoptosi del cicle cel·lular induïda per fludarabina en cèl·lules B humanes. Sang 2004, 104, 2475–2483. [CrossRef] [PubMed]

43. Walter, MJ; Mira, DC; Tidwell, RM; Roswit, WT; Holtzman, MJ Inhibició dirigida de l'expressió de la molècula d'adhesió intercel·lular-1 (ICAM-1) depenent de l'interferó gamma mitjançant Stat1 dominant-negatiu. J. Biol. Chem. 1997, 272, 28582–28589. [Ref creuat]

44. Sempre, C.; Leitner, NR; Lassnig, C.; Parrini, M.; Mahlakoiv, T.; Rammerstorfer, M.; Lorenz, K.; Rigler, D.; Muller, S.; Kolbe, T.; et al. STAT1beta no és un negatiu dominant i és capaç de contribuir a la immunitat innata depenent de l'interferó gamma. Mol. Biol cel·lular. 2014, 34, 2235–2248. [CrossRef] [PubMed]

45. Verma, D.; Swaminathan, la proteïna SM del virus S. Epstein-Barr funciona com a factor d'empalmament alternatiu. J. Virol. 2008, 82, 7180–7188. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Verma, D.; Bais, S.; Gaillard, M.; La proteïna Swaminathan, S. Epstein-Barr Virus SM utilitza el factor d'empalmament cel·lular SRp20 per mediar l'empalmament alternatiu. J. Virol. 2010, 84, 11781–11789. [Ref creuat]

47. Du, Z.; Fan, M.; Kim, JG; Eckerle, D.; Lothstein, L.; Wei, L.; Pfeffer, LM La línia cel·lular Daudi resistent a l'interferó amb un defecte Stat2 és resistent a l'apoptosi induïda per agents quimioterapèutics. J. Biol. Chem. 2009, 284, 27808–27815. [Ref creuat]

48. Hambleton, S.; Goodbourn, S.; Jove, DF; Dickinson, P.; Mohamad, SM; Valappil, M.; McGovern, N.; Cant, AJ; Hackett, SJ; Ghazal, P.; et al. Deficiència de STAT2 i susceptibilitat a malalties víriques en humans. Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 2013, 110, 3053–3058. [Ref creuat]

49. Vairo, D.; Tassone, L.; Tabellini, G.; Tamassia, N.; Gasperini, S.; Bazzoni, F.; Plebani, A.; Porta, F.; Notarangelo, LD; Parolini, S.; et al. Deteriorament greu de les respostes d'IFN-gamma i IFN-alfa en cèl·lules d'un pacient amb una nova mutació d'splicing STAT1. Sang 2011, 118, 1806–1817. [Ref creuat]