Estudi sobre la funció neuroendocrina-immune de Cistanche Deserticola i els seus productes de vapor d'arròs en el model de rata induït per glucocorticoides-Ⅱ
Apr 16, 2024
3.2.4. Immunohistoquímica
L'apoptosi neuronal està controlada per molts gens apoptòtics i antiapoptòtics, principalment el gen promotor de l'apoptosi Bax i els gens antiapoptòtics de la família de gens Bcl-2. Bcl-2 es localitza en orgànuls reactius productors d'oxigen com els mitocondris, el reticle endoplasmàtic i les membranes nuclears. Bcl-2 té poc impacte sobre els radicals lliures d'oxigen, però potprevenir el dany oxidatiu a les cèl·lules. Bax es transporta des del citoplasma a la membrana mitocondrial, canvia l'estructura de la membrana mitocondrial i afavoreix l'alliberament del citocrom c i la inducció de l'apoptosi.
TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER A LA MILLORA DE LA FUNCIÓ SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%
Hi va haver una expressió al citoplasma suprarenal de la proteïna Bax i Bcl-2. La tinció mostrava totes les partícules grogues. En comparació amb la del grup BC, la densitat òptica mitjana de la proteïna Bax al grup MC va augmentar significativament (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).
La figura 5 (b) mostra que, en comparació amb la del grup BC, la densitat òptica mitjana de la proteïna Bcl-2 al grup MC va disminuir significativament (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).
La proteïna caspasa-3 es localitza principalment al citoplasma en la seva forma original en teixits normals i té poca expressió. Els senyals positius són groc pàl·lid o groc marró. En comparació amb la del grup BC, l'expressió de caspasa-3 al grup MC va augmentar significativament (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).
En teixits normals, l'expressió del gen Fas es va reduir i el senyal positiu per a la hibridació in situ era groc marronós. Com es mostra a la figura 5 (d), en comparació amb la del grup BC, la densitat òptica mitjana de la proteïna Fas al grup MC va augmentar (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).
La proteïna FasL es localitza principalment a la membrana cel·lular o al citoplasma, i els seus senyals positius són marrons. En comparació amb la del grup BC, la densitat òptica mitjana del gen FasL al grup MC va augmentar significativament (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).
Els resultats van demostrar que CD i WCD podrienindueix l'apoptosi a les cèl·lules inflamatòriesi reduir el dany suprarenal afavorint l'expressió de la proteïna FasL i unint-se a la proteïna Fas, activant la proteïna caspasa-3 i desencadenant una cascada de caspases. L'efecte del grup WCD-HD va ser el millor.
3.3. Determinació de la funció immune
3.3.1. Índex d'òrgans immunitaris
En comparació amb els del grup BC, el coeficient del tim i l'índex de melsa del grup MC van disminuir significativament (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.
TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER A LA MILLORA DE LA FUNCIÓ SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%
3.3.2. Detecció de subconjunts de limfòcits T a la sang perifèrica
El percentatge de cèl·lules CD4+ al quadrant superior esquerre i de cèl·lules CD8+ al quadrant inferior dret a la BC i a cada grup de fàrmacs va ser superior al del grup MC. En comparació amb la del grup BC, la proporció de CD4+ThCD8+ va disminuir significativament en el grup MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).
3.3.3. Determinació del nivell d'IL-10, IL-6, IL{-2, TNF-Α i IFN-C al sèrum
La figura 8 mostra que en comparació amb el del grup BC, el nivell d'IL-6, TNF- i IFN-c va augmentar significativament (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.
3.3.4. Resultats de l'experiment d'observació del microscopi de teixit Lymus
La figura 9 mostra que al grup BC hi havia un gran nombre de limfòcits. Els limfòcits i els reticulòcits estaven disposats al centre de manera fluixa amb timòcits rodons o ovals dispersos. No hi va haver necrosi, ni infiltració de cèl·lules inflamatòries ni canvis anormals.
El grup MC va mostrar una gran quantitat de teixit de necrosi limfoide, amb una disposició desordenada de limfòcits i reticulòcits al centre. Van desaparèixer els timòcits rodons o ovalats, es va evidenciar una degeneració cel·lular massiva o necrosi, i hi va haver infiltració cel·lular inflamatòria amb canvis patològics anormals.
En els grups de CD, les característiques morfològiques dels limfòcits havien tornat a la normalitat, i la disposició dels limfòcits centrals i dels reticulòcits era gairebé normal. Els timòcits rodons o ovalats s'havien recuperat, però quedaven un petit nombre de limfòcits degeneratius o necròtics i cèl·lules inflamatòries infiltrades.
En els grups WCD i el grup PC, les característiques morfològiques dels limfòcits es van reparar millor. Els limfòcits i reticulòcits del centre estaven ben alineats, els timòcits rodons o ovals eren gairebé normals, però quedava un petit nombre de limfòcits infiltrants i degeneratius.
3.4. Expressió del gen de la proteïna CaM
Es va considerar el valor RQ (ARNm CaM - ARNm d'actina) per examinar l'expressió de l'ARNm CaM. El RQ del grup BC va ser 1. L'expressió de l'ARNm CaM a l'hipotàlem del grup MC va augmentar significativament (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.
4. Discussió
La Farmacopea Xinesa [2] registra que el CD i el WCD es poden utilitzar a la clínica com els principals tipus de peces de decocció. Després de ser cuit al vapor amb vi d'arròs, elefectes antienvelliment i tonificants del yang del ronyóes van millorar. Mitjançant UPLC-QqQ-MS, vam detectar els canvis quantitatius en la base del material químic durant el procés de cocció al vapor del vi d'arròs. Els glicòsids iridoides eren inestables i el contingut d'aquests glucòsids va disminuir, fins i tot esdevenint indetectables. També va canviar el contingut de glicòsids de feniletanol, cosa que podria induir canvis en la farmacodinàmica i l'efecte clínic.
TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER A LA MILLORA DE LA FUNCIÓ SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%
El model clàssic de deficiència de ronyó-yang es va replicar mitjançant la injecció subcutània de corticosterona [19]. La sobredosi de corticosterona podria inhibir el secret de CRH a l'hipotàlem. Mentrestant, el secret de l'ACTH també es va inhibir. El nivell d'hormona de l'escorça suprarenal va disminuir i, per tant, es va reduir la funció de l'eix HPA. La hipofunció de l'eix HPA és una característica comuna de la deficiència de ronyó-yang [20]. Aleshores, les rates mostren fenòmens d'"esgotament" i els símptomes estan d'acord amb els de la deficiència de ronyó-yang a la clínica.
En el grup MC, el nivell de CRH, ACTH, T i CORT en sèrum de rata va disminuir significativament (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.
La modulació de la proporció de membres de la família Bcl-2 és un dels mecanismes bàsics pel qual FasThFasL media la via del receptor de la mort, i la família Bcl-2 regula la via mitocondrial [21]. El factor inhibidor de l'apoptosi Bcl-2 i els factors inductors de l'apoptosi, com Bax, pertanyen tots a la família Bcl-2 [22]. L'apoptosi cel·lular es pot determinar per la relació relativa de factors inhibidors de l'apoptosi i factors induïdors de l'apoptosi [23]. Els mitocondris tenen la funció de punts de control centrals per a moltes formes d'apoptosi [24]. El present estudi va demostrar que CD-MD i WCD podrien deduir l'expressió de Bax i augmentar Bcl-2 amillora la deficiència de ronyó-yang. Fas és el principal receptor de mort que indueix l'apoptosi per lligament amb el lligand Fas (FasL) [25]. L'expressió de Fas i FasL al grup MC va augmentar, mentre que aquesta expressió va augmentar significativament al grup WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).
La deficiència de la funció immune és una de les manifestacions importants de la deficiència del ronyó-yang [28]. En aquest estudi, vam trobar que l'índex de la melsa i el tim del grup WCD-MD es va recuperar significativament (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).
L'eix HPA és el sistema regulador més important perquè regula la secreció de glucocorticoides i el sistema endocrí per mantenir la funció secretora de l'escorça suprarenal [32]. La sobreexpressió de l'ARNm de CaM al teixit de l'hipotàlem es va relacionar amb la deficiència de yang renal. CD i WCD podrien bloquejar els canals de calci, inhibir l'expressió d'ARNm de CaM a l'hipotàlem i disminuir l'afluència de calci, disminuint així l'activitat del complex Ca2+·CaM.
La formació de la deficiència de ronyó-yang és un procés de desenvolupament de malalties cròniques. El ronyó ja no és un concepte purament anatòmic, i és un terme general per a la immunitat neuroendocrina i els sistemes genitourinari. La xarxa neuroendocrina-immune (NEI) és un important sistema regulador integrat [33]. CD i WCD poden regular la funció de l'eix HPAT i millorar la recuperació de la deficiència de ronyó-yang. Aquest resultat proporciona la base experimental per a la prevenció clínica i el tractament de la deficiència de yang renal.
TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER A LA MILLORA DE LA FUNCIÓ SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%
