Estudi sobre la separació i la immunocompetència de l'extracte aquàtic de polisacàrid de Cistanche Tubulosa

per a més informació:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1,LI Yang1,YAO Jun1,YUAN Jie2

（1. Escola de Farmàcia, Universitat Mèdica de Xinjiang, Urumqi 830011, Xina;2. Collage de Houbo, Universitat Mèdica de Xinjiang, Xinjiang Klamayi 834000, Xina)

OBJECTIU RESUM:Per aïllar l'extracte d'aigua depolisacàrids de Cistanche tubulosai investigar la seva immunocompetència in vitro. MÈTODES: es va utilitzar la resina d'adsorció macroporosa AB{{{{30}}} per decolorar el polisacàrid de C. tubulosa. El procés de decoloració es va optimitzar mitjançant una prova ortogonal amb la taxa de retenció i la taxa de decoloració del polisacàrid com a puntuació completa, i utilitzant la taxa d'adsorció, el temps de decoloració i la concentració de la mostra com a factors. Es van fer les proves de verificació. La columna d'intercanvi iònic DEAE-650M es va utilitzar per separar l'extracte d'aigua del polisacàrid de C. tubulosa decoloritzat. L'assaig CCK-8 es va utilitzar per detectar els efectes de diferents concentracions de polisacàrid (6.25-100 ug/mL) abans i després de l'aïllament sobre la taxa de proliferació del macròfag de ratolins RAW264.7. Es van adoptar el mètode de Griess i el test ELISA per detectar els efectes de la concentració baixa, mitjana i alta de polisacàrid (12,5,25,50 ug/mL) sobre l'alliberament de NO, IL-6 i TNF- en cèl·lules RAW264.7 induïdes per LPS. RESULTATS: En el procés de decoloració òptim de la resina d'adsorció macroporosa AB-8, el cabal d'adsorció va ser d'1,2 BV/h, el temps de decoloració va ser de 9 h i la concentració de la mostra va ser de 25 mg/mL. Les puntuacions completes de 3 vegades de proves de verificació van ser de 63,43％ ,63,29％ i 63,34％, respectivament, amb una mitjana de 63,35％（RSD＝0,11％ ,n＝3）. Un polisacàrid neutre (CTZ) i 5 polisacàrids àcids (CT1, CT2, CT3, CT4, CT5) es van aïllar del polisacàrid de C. cistanche, el contingut era de 299,2,168.0,123,2,121,6,5,5 11,2 mg/g. En comparació amb el grup control, 6.25-100 ug/mL CTZ (excepte 6,25 μ g/mL), CT2, CT4, CT5 i 6,25 μ g/mL CTC (el polisacàrid abans de la separació) podria augmentar significativament la taxa de proliferació de cèl·lules RAW264.7 (P＜{{80}}.05), mentre que 6.25-100 ug/mL CT1, CT3 i 50 ug/mL CTC podrien disminuir la taxa de proliferació de RAW264. 7 cel·les (P<0,05). en="" comparació="" amb="" el="" grup="" lps,="" l'alliberament="" de="" no="" es="" va="" reduir="" significativament="" en="" els="" grups="" de="" concentració="" baixa,="" mitjana="" i="" alta="" de="" ctc,="" ct2,="" ct3="" i="" ct5,="" el="" grup="" de="" baixa="" concentració="" ctz=""><0,05), mentre="" que="" es="" va="" augmentar="" significativament="" en="" els="" grups="" d'alta="" concentració="" de="" ct1="" i="" ct4="" （p＜0,05）.="" l'alliberament="" d'il-6="" (excepte="" el="" grup="" de="" concentració="" alta="" ct1="" i="" el="" grup="" de="" concentració="" baixa="" ct5)="" i="" tnf-="" (excepte="" el="" grup="" de="" concentració="" mitjana="" ct1)="" es="" va="" reduir="" significativament="" en="" els="" grups="" de="" concentració="" baixa,="" mitjana="" i="" alta=""><0,05). ）.="" conclusions:="" la="" tecnologia="" de="" decoloració="" optimitzada="" de="" la="" resina="" d'adsorció="" macroporosa="" és="" estable="" i="" factible="" en="" l'estudi.="" es="" poden="" aïllar="" un="" polisacàrid="" neutre="" i="" 5="" polisacàrids="" àcids="" de="" l'extracte="" d'aigua="" de="" polisacàrids="" de="" c.="" tubulosa,="" entre="" els="" quals="" el="" polisacàrid="" ct2="" té="" la="" capacitat="" antiinflamatòria="" més="">

PARAULES CLAU:polisacàrid de Cistanche tubulosa; Decoloració;Separació;Immunocompetència

Cistanche tubulosaés una tija seca i carnosa amb fulles escates deCistanche tubulosa (Schenk) Wightde la família de les Lidanaceae. Els estudis moderns han demostrat que Cistanche Tubula conté glicòsids d'alcohol fenetílic, glicòsids iridoides, lignans, polisacàrids, alcaloides i altres substàncies biològicament actives, que tenen propietats afrodisíaques, laxants, protectores del fetge i anti-envelliment. , La immunitat millorada contra la fatiga i els efectes nootròpics [1-4], es poden utilitzar per al tractament clínic de la deficiència de yang renal, deficiència d'essència i sang, impotència i infertilitat, debilitat de cintura i genolls, debilitat muscular i ossos, intestins secs i restrenyiment [5].

Feu clic als productes Cistanche herba

L'extracte d'aigua de laPolisacàrid de Cistanche tubulosaés de color groc marronós. L'experiment anterior del nostre grup de recerca va trobar que, a més de laCistanche tubulosa polisacàrid, l'extracte d'aigua també conté components no objectiu, com ara pigments i proteïnes solubles en aigua. Això contribueix a la separació i purificació dels polisacàrids. La investigació de l'activitat biològica ha causat grans dificultats. El tractament tradicional de decoloració de dissolvents orgànics destruirà l'estructura química del component objectiu a l'extracte cru i reduirà l'activitat farmacològica de la persona i la introducció d'ingredients nocius al cos humà [6]. La resina d'adsorció macroporosa és un material comú per a la decoloració de polisacàrids en extractes de medicina xinesa. És un material d'adsorció de polímers rendible amb propietats físiques i químiques estables. Pot ser objectiu pel seu rendiment d'adsorció selectiva i tamisat per als components del pigment. Per eliminar els pigments dels extractes de la medicina tradicional xinesa, a més, es pot regenerar mitjançant decapat i rentat alcalí, per la qual cosa s'utilitza àmpliament [7]. Aquest estudi té la intenció d'utilitzar resina d'adsorció macroporosa per decolorar l'extracte d'aigua del polisacàrid de Cistanche Tubula i utilitzar un experiment ortogonal per optimitzar les condicions de decoloració; després de la decoloració de l'extracte, d'acord amb la naturalesa diferent del grup transportat pel polisacàrid, es preveu utilitzar el mètode de cromatografia en columna d'intercanvi iònic separa encara més els components del polisacàrid neutre i àcid del polisacàrid deCistanche tubulosa.

Els estudis ho han demostratplanta de cistancheEls polisacàrids tenen efectes immunomoduladors i són immunomoduladors naturals que poden activar el sistema del complement i les cèl·lules immunitàries com els limfòcits T/B, els macròfags, les cèl·lules assassines naturals (NK), i també poden promoure una varietat de l'alliberament de citocines i promoure la producció d'anticossos. , etc. [8-11]. Els lipopolisacàrids (LPS) poden activar la via de senyal inflamatòria dels macròfags, induir òxid nítric (NO) i citocines proinflamatòries com la interleucina 6 (IL-6) i el factor de necrosi tumoral-alfa (TNF-). Síntesi i alliberament, provocant així una sèrie de reaccions inflamatòries al cos [12]. Aquest estudi pretén establir un model d'inflamació dels macròfags RAW264.7 del ratolí induït per LPS, a partir dels efectes del polisacàrid Cistanche Tubula sobre la proliferació de macròfags, la secreció de factors inflamatoris i la producció de NO, i una avaluació preliminar del seu efecte sobre l'activitat immune del cos. Té com a objectiu proporcionar una base teòrica per a l'estudi en profunditat de la base de principis actius antiinflamatoris deCistanche tubulosapolisacàrid i el desenvolupament dels seus recursos polisacàrids.

Els estudis preliminars han trobat que quan els polisacàrids de Cistanche cistanche s'extreuen amb aigua, es dissolen més substàncies solubles en aigua, la qual cosa afecta la puresa delcistanche polisacàrids de cistanche. Per tant, una major separació i purificació d'ells pot establir les bases per a l'estudi de la base del material polisacàrid i de l'activitat biològica. El mètode de resina d'adsorció macroporosa és un mètode de decoloració d'ús habitual [17-19]. Com que encara no està clar la composició del pigmentCistanche tubulosa, de manera que el grup de recerca va utilitzar experiments d'adsorció estàtica per seleccionar la resina d'adsorció macroporosa AB-8 més adequada a partir de resines d'adsorció macroporosa de diferents polaritats. El polisacàrid de Cistanche deserticola té una bona capacitat de retenció. Per tal d'aconseguir un millor efecte de decoloració, aquesta investigació es basa en la investigació anterior i s'han utilitzat experiments ortogonals per determinar el procés de decoloració (rentat). El cabal de desorció, el temps de decoloració i la concentració de massa de la mostra s'han optimitzat. Com a resultat, el mètode de decoloració òptim per al polisacàrid de Cistanche tubulosa va ser un cabal d'elució d'1, 2 BV/h, un temps de decoloració de 9 h i una concentració de massa de mostra de 25 mg/mL. Els resultats de l'experiment de verificació mostren que el mètode de decoloració és factible.

La puresa i el tipus de polisacàrids naturals són factors importants que afecten la seva activitat. Per tant, la recerca rellevant sobre els mètodes d'aïllament i purificació dels polisacàrids segueix sent el focus del treball de recerca dels polisacàrids actius naturals. Els mètodes utilitzats habitualment per a la separació de polisacàrids inclouen la precipitació, la cromatografia en gel, la cromatografia d'intercanvi d'anions, la cromatografia en columna de resina macroporosa i la ultrafiltració [20]. A causa de les diferents composicions dels monosacàrids, els polisacàrids tenen diferents propietats de càrrega. Es poden dividir en polisacàrids neutres i polisacàrids àcids. Els polisacàrids neutres són polímers compostos per dos o més monòmers diferents a base de sucre que no contenen àcids orgànics. Els polisacàrids àcids són més complexos que els polisacàrids neutres pel que fa a la composició i l'estructura, tret que contenen més de dos monòmers a base de sucre. , També conté àcid urònic mono Body [21]. La cromatografia en columna d'intercanvi d'anions utilitza la diferència de càrrega dels polisacàrids per separar els polisacàrids neutres dels polisacàrids àcids [22]. Per aquest motiu, aquest estudi va utilitzar una columna de cromatografia de columna d'intercanvi iònic DEAE-650M per separar els polisacàrids de Cistanche Tubula i es van separar un total d'1 polisacàrid neutre i 5 polisacàrids àcids. Els macròfags són cèl·lules immunocompetents que poden regular la immunitat englossant i matant microorganismes patògens. Els estudis han demostrat que quan el cos humà és estimulat per danys patològics o mecànics, una intervenció farmacològica pot activar els macròfags per millorar la capacitat fagocítica dels macròfags induïts per LPS, inhibint així la producció de NO i una sèrie de cèl·lules inflamatòries com la IL{{ 9}} i secreció del factor TNF, protegint així l'hoste dels patògens [23]. Amb aquesta finalitat, aquest estudi va provar els efectes de diversos polisacàrids de Cistanche tubulosa sobre la taxa de proliferació de cèl·lules RAW264.7, així com els efectes sobre els macròfags induïts per LPS per alliberar NO, IL-6 i TNF-. Com a resultat, dins del rang de concentració de massa de 12,5, 25 i 50 ug/mL, no només va promoure la proliferació de cèl·lules RAW264.7, sinó que també va inhibir significativament la proliferació de cèl·lules RAW264.7.

Elpolisacàrid de Cistanche tubulosaa les cèl·lules RAW264.7 induïdes per LPS per alliberar NO, IL-6 i TNF- són CT2. Estudis rellevants han demostrat que la composició de monosacàrids i el pes molecular dels polisacàrids afectaran el seuimmunomoduladorsactivitat. Els monosacàrids com la galactosa, l'arabinosa, la manosa i la glucosa estan correlacionats positivament amb l'activitat immune dels polisacàrids [24]. Els polisacàrids amb pesos moleculars més grans poden contenir nusos múltiples altament repetitius més alts Estructura, poden connectar de manera creuada els receptors de la superfície de la membrana plasmàtica de manera multidireccional i específicamentmillora la funció immunomoduladoraefecte [25]. Per tant, la composició de monosacàrids del polisacàrid àcid CT2 en aquest estudi pot contenir monosacàrids especials o múltiples monosacàrids que estan relacionats positivament amb l'activitat immune, i el pes molecular pot ser més gran que els polisacàrids neutres i altres polisacàrids àcids, però calen més investigacions per confirmar. . En resum, el procés optimitzat de decoloració de la resina d'adsorció macroporosa en aquesta investigació és estable i factible; Es poden separar 1 polisacàrid neutre i 5 polisacàrids àcids de l'extracte aquàtic de Cistanche cistanche cistanche, entre els quals destaca l'activitat immunològica del polisacàrid àcid CT2 Stronger. Aquest estudi pot establir les bases experimentals per al desenvolupament i la utilització de polisacàrids Cistanche Tubula.