Estudi sobre les activitats antioxidants dels glicòsids feniletanoides de Cistanche Deserticola

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li et al (Laboratori central de la Universitat Normal de Changchun, Changchun, Jilin 130032)

Resum[ Objectiu ] La investigació pretenia estudiar sistemàticament les activitats antioxidants dels glicòsids feniletanoides deCistanchedeserticola. [Mètode] Es van utilitzar dos sistemes model, l'assaig de radical lliure 2,2-difenil-l -picrilhidrazil (DPPH ') i l'assaig de fotoquimioluminescència (PCL), per mesurar l'activitat antioxidant de l'extracte de C. deserticola, acteòsid, isoacteòsid i equinacòsid. [Resultat] Els resultats van mostrar que els continguts fenòlics totals (TPC) en equinacòsid, acteòsid, isoacteòsid i extracte d'etanol del 80 per cent de C. deserticola eren de 753,95, 659,94, 356,14 i 14,73 mg d'àcid gàl·lic /g de mostra. L'extracte de C. deserticola va mostrar una forta activitat antioxidant en l'experiment PCL, seguit de l'echinacòsid, l'acteòsid i l'isoacteòsid. Tanmateix, l'echinacòsid va mostrar una forta activitat antioxidant en l'experiment de DPPH, seguit de l'acteòsid, l'isoacteòsid i l'extracte de C. deserticola.

[Conclusió]Aquesta investigació podria proporcionar referències per a l'estudi farmacològic i de l'activitat biològica dels glucòsids feniletanoides de C. deserticola.

Paraules clau Cistanche deserticola ; Acteòsid; Isoacteòsid; Echinacòsid ; Activitat antioxidant; DPPH ; PCL

Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma.) és una planta de laCistanchegènere (Oro-banehaeeeae) de laCistanchegènere (Cistanche). La tija carnosa seca de Cistanche amb fulles escamoses. Un gran nombre d'estudis han trobat que els principals ingredients actius de les plantes de Cistanche són compostos de glicòsids d'alcohol fenetílic. . El compost de glicòsid de feniletanol pertany a un tipus de compost polifenol, que es distribueix àmpliament en molts tipus de plantes. Els estudis de proves farmacològiques han demostrat que aquests compostos tenen una àmplia gamma d'activitats farmacològiques i biològiques, com ara activitats anti-hepatotoxines, antiinflamatòries, analgèsiques i antioxidants. Entre ells, el més cridaner és que el compost de fenoxietanol glicòsid té molt bona activitat antioxidant. L'autor va realitzar principalment una anàlisi sistemàtica de l'activitat antioxidant dels compostos de glicòsids d'alcohol fenetílic enCistanche, utilitzant dos mètodes d'avaluació in vitro d'antioxidants, a saber, fotoehemiluminesència (PCL) i 2,2-difenil-1-pieril-hidroxil (DPPH') Es van utilitzar dos sistemes diferents per mesurar l'activitat antioxidant dels 80 percentatge d'extracte d'etanolCistanche, ergosteròsid, isoergòsid, iequinacòsid.

1 Material i mètodes

1.1 Mostres i reactius

Cistanche (Cistanche deserticola)Els materials medicinals es van comprar a Beijing Tongrentang Pharmacy.Ergosteroside, isoergòsid,equinacòsid, Folin. El reactiu Ciocalteu, l'àcid gàl·lic, el 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH.), etc. es van comprar a SigmaChemicalCo. Company (Sant Louis, Mo). El dissolvent utilitzat per a l'anàlisi de PCL va ser proporcionat per Analytik Jena AG (Berlín, Alemanya). Altres reactius són tots reactius analítics (produïts per Beijing Chemical Plant). L'aigua és aigua ultrapura (18,2 nPa).

1.2 Extracció de mostres

Pesa amb precisió 2,0005 g deCistanchepols de mostra, utilitzeu 50rnl d'etanol al 80 per cent per a l'extracció d'ultrasons a temperatura ambient durant 0,5 h, extreu dues vegades, filtreu la solució de mostra, evaporeu rotatoriment fins a sequedat (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche deserticola.

1.3 Determinació del contingut total de polifenols de la mostra

El contingut total de fenol de la mostra es determina mitjançant el mètode F{{0}}lin-Ciocaheu, i el resultat s'expressa en mil·ligrams d'àcid gàlic per gram d'extracte. Agafeu una solució mostra amb una concentració determinada de 0.2rnI (per fer que l'absorbància caigui sobre la corba estàndard), afegiu 1 ml de reactiu Folin-Ciocaheu amb una concentració de 0.5mol/L i a continuació, afegiu 0,8 ml d'una solució de carbonat sòdic amb una concentració del 7,5 per cent per barrejar bé, es col·loca a temperatura ambient durant 0,5 h, i després es va mesurar l'absorbància a 765 nm (espectrofotòmetre ultraviolat visible: DU800, Beckman Couher, Inc. EUA). Utilitzeu una solució d'àcid gàlic (l'interval de concentració de massa és de 0,02-0,20me,/m1) per fer la corba estàndard i totes les proves es repeteixen dues vegades.

1.4 Anàlisi in vitro de l'activitat antioxidant

1.4.1 Determinació del mètode PCL.

La prova va utilitzar Photochem@ (Berlín, Alemanya) antioxidant ultraràpid i analitzador automàtic de radicals lliures. El principi és generar radicals lliures per mètode fotoquímic i utilitzar el mètode de quimioluminescència per detectar radicals lliures. A l'experiment, es va utilitzar un fotosensibilitzador amb efecte d'excitació fotoquímica per excitar les molècules de reacció, de manera que sota l'acció de la làmpada ultraviolada, la reacció d'oxidació es va produir 1000 vegades. Escolliu el mètode PCL-ACW-Kit Mesureu l'activitat antioxidant dels components solubles en aigua de les submostres de psyllium. Pipeteu 1.0ml de tampó de reacció (incloent la concentració de 0,1 moL/L de carbonat de sodi, valor de pH d'10,5 i concentració de 0},1 mmol/LNA, un EDTA, 1,5 ml de diluent ACW (aigua ), concentració 1mmol/LLumino1) actua com a fotosensibilitzant per excitar les molècules de reacció, de manera que es generen ràpidament radicals lliures, i alhora com una substància fotoquimioluminiscent. Tant la mostra com l'estàndard són de 10" l. Mitjançant la mesura de diferents concentracions (0,5, 1,0, 2,0 i 3,0 nmol/L) de L. L'equació de la corba estàndard de l'àcid ascòrbic és Y=24,640Ox més 2,9311, R²=0,9969. Cal diluir la mostra o solució estàndard a la prova de manera que l'interval de temps de retard quedi dins del rang lineal de la corba estàndard. Photochem genera la corba estàndard i prova l'activitat antioxidant de la mostra automàticament, i l'activitat antioxidant de la mostra és equivalent a L. Calculat pel nombre de nanomols d'àcid ascòrbic.

1.4.2 Determinació del mètode DPPH.

El radical difenilpicrilhidrazino [DPPH ·] és un radical estable centrat en nitrogen amb una màxima absorció a una longitud d'ona de 515 nm. [DPPH ·] solució de metanol és de color morat i la seva concentració té una relació lineal amb l'absorbància." Després d'afegir antioxidants a la solució de metanol [DPPH ·], els antioxidants es poden combinar amb [DPPH ·] radicals lliures o substituir-los per fer [DPPH ·] ] El nombre de radicals lliures disminueix, i el color de la solució es torna més clar, la qual cosa es manifesta per la disminució contínua de l'absorbància a la longitud d'ona de 515 nm fins a assolir l'estabilitat." A la prova, es va utilitzar etanol en comptes de metanol. Peseu [DPPH ·] amb precisió i configureu la concentració a 0. [DPPH ·] solució d'etanol de 0.040 76mg/ml, s'obté la corba estàndard de [DPPH ·]: Y: 18.032x-0,0016 , R=0,9993. El mètode per mesurar la taxa residual de radicals lliures fa referència a la literatura [16]. Utilitzant etanol com a dissolvent, prepareu diferents concentracions de mostra i solució estàndard, agafeu 0,1 ml de mostra o solució estàndard respectivament i afegiu 3,9 ml de solució estàndard [DPPH·] amb una concentració de massa de 2,5 mg/L (actualment s'utilitza)), substituïu la solució de mostra per etanol com a blanc. Agiteu la solució barrejada, utilitzeu una cubeta per mesurar la seva absorbància en diferents moments a una longitud d'ona de 515 nm i convertiu-la a la concentració de massa de [DPPH·] segons la corba estàndard per calcular la taxa residual de [DPPH·]. Segons la taxa residual de [DPPH ·] i la quantitat corresponent de mostra afegida, es pot dibuixar una corba per eliminar els radicals lliures [DPPH -] de la mostra. Segons la corba de relació entre la concentració de massa de [DPPH ·] i l'absorbància, l'absorbància mesurada després de l'addició de l'eliminador de radicals lliures es pot convertir en la concentració de massa de [DPPH ·] per calcular la [DPPH ·] després del addició de l'eliminador de radicals lliures. La fórmula de càlcul per a la taxa residual és la següent: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r{=0×100 per cent on [DPPH·] és la concentració en massa de DPPH · en un moment determinat del procés d'eliminació de radicals lliures, [DPPH·]:. És la concentració de massa original de DPPH·. Segons el nombre d'antioxidants afegits i la taxa residual de [DPPH ·], es fa la corba de relació entre ambdós i es pot obtenir l'equació de regressió mitjançant l'anàlisi de regressió lineal. Segons l'equació de regressió, es pot calcular la dosi d'antioxidants quan la taxa residual de [DPPH ·] és del 50 per cent. Mitja inhibició. Segons la corba d'eliminació de radicals lliures [DPPH·] de diferents concentracions de mostres o estàndards, calculeu la quantitat EC de la mostra quan la concentració de massa original de [DPPH·] es redueix al 50 per cent (estat estacionari). Com més petit sigui l'EC, la capacitat d'eliminar els radicals lliures, més fort". Prova 3 vegades en paral·lel.

cistanche

2 Resultats i anàlisi

2.1 Determinació del contingut total de polifenols de la mostra En la determinació del contingut total de polifenols, el contingut total de polifenols deequinacòsidés el més alt, que és de 753,95 mg d'àcid gàl·lic/g. Seguit pels glucòsids ergoesteroides, glucòsids isoergosteroides i extractes bruts deCistanche, que van ser 468,3, 356,14 i 14,73 mg d'àcid gàlic/g, respectivament.

2.2 Determinació de l'activitat antioxidant de la mostra

2.2.1 Resultats de la determinació del mètode PCL-ACW. A la prova antioxidant PCL-ACW, la capacitat antioxidant d'1txgCistancheel material medicinal és equivalent a la capacitat antioxidant de 15,68 nmol d'àcid L-ascòrbic; 1 gequinacòsidequival a la capacitat antioxidant de 14,03 nmol d'àcid ascòrbic Activitat: 1txgergosteròsidequival a 11,44 nmolL una capacitat antioxidant de l'àcid ascòrbic; 1 Ixg isomergosteroside és equivalent a l'activitat antioxidant de 8,24 nmol d'àcid ascòrbic.

2.2.2 Resultats de mesurament del mètode DPPH. A la taula 1 es pot veure que està esborrat. L'ordre de la capacitat dels radicals lliures ésergosteròsid, equinacòsid, isoergòsid i l'extracte brut deCistanche, entre els quals ergo costat iequinacòsidtenen bàsicament la mateixa capacitat antioxidant en la prova DPPH. Es pot veure a partir d'això. Com que s'utilitzen diferents sistemes de proves d'antioxidants in vitro per mesurar mostres, el mecanisme dels efectes antioxidants és diferent i els resultats poden ser inconsistents. Això també s'ha comprovat en la prova. Per tant, és necessari seleccionar altres sistemes d'anàlisi d'antioxidants per a una posterior verificació.

equinacosia

referències

[1] Yang Cuiping, Su Weiwei. Progrés de la investigació de la sopa de carn[J]·Chinese Medicinal Materials, 2001, 24(12): 907-909.

[2]Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei Progrés de la investigació sobre els components químics de les plantes de Cistanche[J].Chinese Herbal Medicine,2003,34(5):473 -476.

[3]HIROMI KOBAYASHI, HIROKO KARASAWA JOSHIO MIYASE. Estudis sobre els constituents Cistanchis Herba. hola. Aïllament i estructures de nous glucòsids fenilpropanoides, Cistanòsids A i B[J]. Chem. Pharm Bull, 19^,32(10):3009 -3014.

[4]LI LI, RONG TSAO, RAYMOND YANG, et al. Aïllament i purificació de glicòsids feniletanoides a partir deCistanche deserticolamitjançant cromatografia a contracorrent d'alta velocitat[J]. Food Chemistry,2008,1(^:702-710.

[5]LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ, et al. Aïllament i purificació d'actèc^ide i isoacteòsid de Plantago psyllium L. mitjançant cromatografia a contracorrent d'alta velocitat [J]. Journal of Chromatography A,2005,1063: 161-169.

[6]RAVN H, NISHIBE S, SASAHARA M, et al. Compostos fenòlics de Plantago Asiatica[J]. Phytochemistry, 1990, 29: 3627-3631.

[7]TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Glicòsids fenòlics d'arrels malaltes de Rehmannia gluiinosa var. purpurea [J]. Phytochemistry, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya, et al. Cistanche cistanche glucòsids totals in vitro eliminant els radicals lliures i efectes protectors sobre el dany de l'ADN induït per OH [J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2001, 36(1): 29-31.

[9]XIONG Q, HASE K, TEZUKA Y, et al. Activitat hepatoprotectora dels feniletanoides a partir deCistanche deserticola[J]. Planta Med, 1998,64:120.

[10]SCHAPOVAL EES, WINTER DE VARGAS MR, CHAVES CG, et al. Activitats antiinflamatòries i antinociceptives d'extractes i compostos aïllats de Stachytarpheta cayeunensis [J]. J Ethnopharmacol, 1998, 60: 53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG RL, et al. Protecció dels glicòsids fenilpropanoides de Pediculars contra l'hemòlisi oxidativa in vitro [J]. Planta Med, 1993,59:315—317.

[12] HE ZD, LAU KM, Xu HX, et al. Activitat antioxidant dels glucòsids feniletanoides del càncer de Brandisia [J]. Etnofarmacologia, 2000, 71:483-486.

[13]XIONG Q, KADOTA S, TANI T, et al. Efectes antioxidants del feniletanoide deCistanche deserticola[J]. Biol Pharm Bull, 1996,19: 1580-1585.

[14]TSAO R, YANG R, XIE S, et al. Quins compostos polifenòlics contribueixen a l'activitat antioxidant total de la poma? [J]. J Agric Food Chem, 2005,53:4989-4995.

[15] POPOV IN, LEWIN G. Hiotochemiluminescent detection of antiradical activity: U. testing of nonenzymic water-soluble antioxidants [J]. Free Rad Biol Med, 1994, 17: 267-271.

[16]BRAND-WILLIAMS W, CUVEHER ME, BERGET C. Ús d'un mètode de radicals lliures per avaluar l'activitat antioxidant [J]. Lebensm Wiss Technol, 1995,28:25-30.

[17] Li Chunyang, Xu Shiying, Wang Zhang. Mètode DPPH per determinar la capacitat de les proantocianidines de llavors de raïm per eliminar els radicals lliures [J]. Journal of Food and Biotechnology, 2006, 25(2)" 02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V, et al. Avaluació de l'activitat antioxidant mitjançant diferents mètodes in vitro [J]. Free Radical Research, 2002,36(2):177-187.