El glucòsid total de cistanche té efectes sobre l'olfacte?

Contacte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

L'efecte dels glucòsids totals de cistanche sobre les cèl·lules olfactives de la rata i la seva secreció de factors neurotròfics

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

La lesió medul·lar (SCI) és una lesió greu del centresistema nerviós, que representa el {{0}},2% —0,5% del total del trauma. En les fractures de la columna, el 16 per cent —40 per cent es complica per lesions medul·lars, sovint deixant una discapacitat severa, provocant Dificultats en la vida diària que afecten la qualitat de vida dels pacients i causant una gran càrrega per a la família i la societat.OlfactiuLes cèl·lules d'encaix (OEC) són un tipus especial de cola nerviosa. Les cèl·lules plasmàtiques poden migrar al cervell ambolfactiuaxons nerviosos i poden segregar molts factors de creixement com ara NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropèptid-Y i S-100. A causa d'aquestes característiques deolfactiurevestint cèl·lules, les OEC es consideren una de les cèl·lules de llavors prometedores per al trasplantament de cèl·lules per reparar la SCI. Actualment, el tractament de la LME en l'àmbit de la medicina rehabilitadora es basa principalment en la rehabilitació integral. Per tal de trobar un mètode més eficaç, s'ha dut a terme la recerca següent sobre l'efecte decistanchetotalglicòsidssobre els OEC:

Glucòsid total de Cistanche per a cèl·lules d'encaix olfactori

1 Material i mètodes

1.1 Materials experimentals

rata Wistar (proporcionada pel Centre d'Animals de la Universitat de Mongòlia Interior);cistanchetotalglicòsids, medi DMEM/F12, sèrum fetal de vedella (FCS), poli-D-lisina, arabinòsid (Ara-C), tripsina, solució D-Hanks, conill anti-p75NGFR (Santa Cruz), kit ELISA (Promega), incubadora cel·lular (Thermo-HEPA Classe 100), microscopi de contrast de fase invertit (Olympus CKX41, Japó), banc de treball ultra net (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) L'empresa, SW-CJ-2FD), enzim analitzador d'etiquetes (Wellscan MKH), citòmetre de flux, etc.

1.2 Mètodes de recerca

1.2.1 Cultiu, purificació i identificació d'OEC: es van sacrificar rates Wistar per decapitació i es van remullar amb vi durant 5 minuts. El crani anterior es va obrir per exposar elolfactiubombeta. Els dosolfactiuels bulbs es van eliminar completament sota un microscopi de dissecció. Rentar amb solució D-Hanks; tallar elolfactiubulb amb tisores microquirúrgiques, afegiu 2 ml de 0,25 per cent de pancreatina i incubar a 37 graus durant 20 minuts; afegir un medi de cultiu D MEM/F12 que conté un 10 per cent de sèrum de vedella a un tub de centrífuga de 2 ml La digestió es va acabar al mig; la pipeta de bus va aspirar el teixit incompletament digerit a 800 rpm i es va centrifugar durant 5 min, va descartar el sobrenedant; finalment es va utilitzar el medi condicionat (20 per cent FCS més 20|i, mol/LForskolin més 20|ig/mlBPE més DMEM/F12) Convertiu-lo en una suspensió unicel·lular de lx 107 ml, inoculeu-lo en un matràs de cultiu cel·lular recobert de polilisina, col·loqueu-lo. en una incubadora de 37 graus, 5 per cent de CO2, i després afegir Arac La purificació es va dur a terme a les 36 h. Utilitzeu anticossos secundaris IgG anti-conill de conill anti-p75E i FITC per a la identificació de cèl·lules immunohistoquímiques i l'observació al microscopi de fluorescència.

1.2.2 Utilitzeu MTT i citometria de flux per determinar l'efecte deglucòsids totals de cistancheactivatolfactiucèl·lules revestidores: inocular les cultivades i purificadesolfactiurevestir cèl·lules en una placa de 96-pous a 1X106 i afegirglucòsids totals de cistanche(les concentracions d'acció són Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), mesurar el valor de DO i mesurar la citometria de flux cel·lular després de 24 h d'acció. Configura el grup de control iGlucòsids totals de Cistanchediferents grups de concentració: Grup A (Grup de control): s'utilitza medi de cultiu que conté sèrum com a control negatiu; Grup B (glucòsids totals de cistanchegrup de concentració baixa: llig/ml); Grup C (concentració mitjana de glucòsids totals de cistanche Grup: L10jxg/MK); Grup D (glucòsids totals de cistanchegrup d'alta concentració: 100|xg/mlo): 15 rates en cada grup.

1.2.3 Determinació del contingut de factor neurotròfic en el sobrenedant per ELISA: inocular el cultiu i purificatolfactiuencobrint cèl·lules en una placa de 6-pou a 1x106, afegiuglucòsids totals de cistanche(la mateixa concentració que l'anterior) després de 24 hores i actuar durant 24 hores, i recollir el sobrenedant per separat, desat a -80 llarg. El contingut de factors de creixement nerviós en el líquid es va determinar mitjançant el mètode ELISA.

1.3 Anàlisi estadística

Les dades d'aquest estudi es tracten com a dades de mesura i les dades obtingudes s'expressen com a mitjana ± desviació estàndard i s'utilitza el programari estadístic SPSS 11.0 per a l'anàlisi estadística. Les dades obtingudes s'analitzen mitjançant anàlisi de variància i P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Resultats

2.1 L'efecte decistancheglucòsids totals activatsolfactiurevestint cèl·lules

2.1.1 Resultats de la determinació del mètode de metil oxazolil tetrazol (MT): Grup A: 0,617±0,149; Grup B: 0,589±0,147; Grup C: 0,761±0,138; Grup D: 0,732±0,234. Comparació entreGlucòsids totals de Cistanche group (B) and Control group (A), P>0.05, la diferència no era significativa;Glucòsids totals de CistancheGrup de concentració de 10 mg/ml, 100 mg/ml (C, D) en comparació amb el grup de control (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 El resultat de la determinació per citometria de flux es mostra a la figura 1. En comparació amb el grup control, elglucòsids totals de cistancheEl grup control era més alt que el grup Control i el percentatge de cèl·lules apoptòtiques era inferior al grup Control.

2.2 Resultats de l'assaig immunoabsorbent lligat a enzims (ELISA).

Els resultats de la prova van mostrar que el contingut del factor neurotròfic derivat de la línia de cèl·lules glials (GDNF): abans de la dosificació: 302,1±16,6 pg/ml, grup A: 340,5±13,2pg/ml; grup B: 333,2±23,6pg/ml; Grup C: 355,2±17,6pg/ml; Grup D; 379,2 ± 15,3 pg/ml. En comparació amb la preadministració, el contingut del GDNF va augmentar significativament; en comparació amb el grup de control (A), el contingut GDNF delGlucòsids totals de CistancheEl grup de concentració de 100 mg/ml (D) va augmentar significativament.

3 Discussió

La dificultat en la regeneració dels axons és una de les principals raons per les quals és difícil recuperar-se després d'una lesió medul·lar. Els OEC tenen un paper en la regeneració dels axons de les neurones centrals que altres tipus de cèl·lules són difícils de substituir. En els darrers anys, la recerca deolfactiules cèl·lules encaixades s'han convertit en un punt calent.OlfactiuLes cèl·lules d'encaix són un tipus especial de cèl·lules glials que tenen les característiques de les cèl·lules de Schwann i els astròcits. S'originen de laolfactiumembrana basal i estan àmpliament distribuïts a la superfície de laolfactiumucosa,olfactiunervi, iolfactiubombeta. Té la capacitat de dividir i regenerar-se per a la vida i pot acompanyar-loolfactiuaxons nerviosos per migrar al cervell. Els axons delolfactiuel nervi pot passar per la unió entre el sistema nerviós perifèric i el sistema nerviós central cada 30-60 dies, tornar a créixer alolfactiufunda i establir connexions sinàptiques4.OlfactiuLes cèl·lules que encapsulen poden segregar molts factors de creixement com ara NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropèptid-Y i S-100. Els estudis han demostrat que el factor de creixement nerviós (NGF) pot prevenir l'atròfia de les neurones del nucli vermell espinal i enfortir el tracte corticoespinal Sprout i promoure la regeneració de la via nerviosa de la medul·la espinal del nucli vermell; tant el factor neurotròfic derivat del cervell (BDNF) com la neurotrofina-3 (NT{-3) poden prevenir l'apoptosi cel·lular del nucli vermell de la medul·la espinal en rates adultes amb lesió axotomitzada i rescatar les neurones moribundes i promoure la regeneració axonal P. A més,olfactiuLes cèl·lules encaixades també expressen altres factors a les seves membranes cel·lulars, com el factor d'adhesió de cèl·lules nervioses (N-CAM), que estan implicats en l'adhesió cel·lular i el creixement dels axons. A causa d'aquestes característiques deolfactiurevestint cèl·lules, les OEC es consideren una de les cèl·lules de llavors prometedores per al trasplantament de cèl·lules per reparar la SCI.

Els components químics deCistancheinclouen principalment glicòsids feniletanoides, iridoides, components volàtils, lignans, polisacàrids i alcaloides. L'estudi va trobar queCistanchei els seus components químics tenen efectes neuroprotectors. Deng et al. va estudiar l'efecte de la tubulosa B sobre l'apoptosi de les neurones SH-SY5Y induïda pel factor de necrosi tumoral (TNF). Els resultats van mostrar que després de 100 ug/ Les neurones SH-SY5Y després de 36 hores de tractament amb TNF per L mostraven característiques típiques d'apoptosi, mentre que el tractament de tubulina B durant 2 hores podria reduir significativament l'apoptosi induïda pel TNF. A més, els estudis també han demostrat que els glucòsids feniletanoides poden inhibir l'apoptosi de les cèl·lules granulars del cerebel de rata mitjançant la inhibició de la caspasa-3 i la caspasa{-8, i contra el negre del ratolí C57 causat per la metil fenil tetrahidropiridina (MPTP). El dany de les neurones dopaminèrgiques de qualitat té un efecte protector. No només això, sinóCistanchetambé pot alleujar diversos danys com la isquèmia-reperfusió del sistema nerviós. L'experiment de lesió per isquèmia cerebral del ratolí mostra que el rang d'infart de 24 hores i 48 hores després de la isquèmia en el grup d'isquèmia-reperfusió cerebral és del 72,98% i del 60,45% de mitjana. En canvi, elcistancheEls grups de dosis grans, mitjanes i baixes de glucòsids totals (250.0mg·kg/d; 125,0mg·kg/d; 62,5mg·kg/d), respectivament, poden fer que el cervell dels ratolins després d'isquèmia-reperfusió cerebral 24h La mida de l'infart es va reduir al 25,94%, 25,81% i 31,13%, i la mida de l'infart cerebral es va reduir al 22,14%, 20,06% i 22,27% després de 48 hores. Hi va haver una diferència significativa entre els dos, mostrant un efecte inhibidor significatiu sobre l'apoptosi neuronal.

En aquest estudi, diferents concentracions deglucòsids totals de cistanchees van aplicar a les OEC. El mètode MTT i la mesura de citometria de flux van confirmar que 10mg/ml100mg/mlglucòsids totals de cistanchepot promoure la proliferació deolfactiurevestint cèl·lules. Els resultats de la citometria de flux ho van demostrarglucòsids totals de cistanchepot promoure la proliferació deolfactiuencaixant cèl·lules Afavoreix principalment la proliferació del cicle G1 deolfactiuespermatozoides i redueix significativament les cèl·lules apoptòtiques. Per tant,Glucòsids totals de Cistancheno només pot promoure la proliferació deolfactiuencapsulen les cèl·lules, però també augmenten l'activitat cel·lular i inhibeixen la seva apoptosi. L'assaig immunoabsorbent lligat a enzims ho demostraGlucòsids totals de Cistanchepot promoure significativament la secreció de GDNF perolfactiurevestint cèl·lules. Els resultats anteriors proporcionen una base experimental per a l'aplicació clínica deGlucòsids totals de Cistanche.

Referències

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, et al. Factors que afecten la qualitat de vida dels pacients amb lesió medul·lar durant la rehabilitació [J]. Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. làmina pròpia iolfactiuLes cèl·lules que encapsulen el toro presenten una integració i migració diferencials i promouen el brot de l'axó deferent a la medul·la espinal lesionada [J]. J Neurosci,2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. cèl·lules olfactives encaixants: el seu paper en la reparació del sistema nerviós central[J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Multipotència de purificada. trasplantament de cèl·lules basals de glucosa aolfactiuepiteli [J]. J Comp Neurol,2004, 46914):457—474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. cèl·lula marostromal que expressa BDNF; suporta un creixement axonal extens als llocs d lesió medul·lar [J]. Exp Neurol, 2005,191(2):344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD, et al. Efecte protector de la tubulosa B sobre l'apoptosi induïda per TNF a les cèl·lules neuronals [J]. Acta Pharmacol Sin,2004,25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.Feniletanoideglicòsidsdes deCistancssalsa inhibeix l'apoptosi induïda per l'ió 1-metil-4-fenilpiridini a les neurones[J]. J Ethnopharmacol,2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Song L.Pu X, et al. Efecte neuroprotector