Els glucòsids totals de Cistanche Deserticola afavoreixen la recuperació de la funció neurològica induint la regeneració neurovascular mitjançant la via Nrf- 2/Keap-1 en rates MCAO/R

Antecedents:

S'ha informat que la medicina tradicional xinesa Cistanche deserticola és vàlida per a malalties cardiovasculars i cerebrovasculars. No obstant això, els seus components actius per a la protecció de l'ictus isquèmic no estan clars. El nostre objectiu és explorar els components actius de C. deserticola contra l'ictus isquèmic, així com els seus mecanismes potencials.

Mètodes:

Hem investigat els efectes protectors del cervell dels extractes de C. deserticola, glucòsids totals (TG), polisacàrids (PS) i oligosacàrids (OS) en un model de rata d'oclusió-reperfusió de l'artèria cerebral mitjana (MCAO/R). 2, 3, 5-La tinció de clorur de trifeniltetrazoli (TTC) es va utilitzar per avaluar el volum d'infart cerebral i es va adoptar l'assaig blau d'Evans per avaluar la permeabilitat de la barrera hematoencefàlica (BBB). A continuació, les expressions CD31, a-SMA, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, ZO-1, claudin-5, occludin, Keap{-1 i Nrf{{ 13}} es van analitzar mitjançant western blotting o immunofluorescència, i les activitats MDA, SOD, CAT i GSH-Px es van analitzar mitjançant kits.

Resultats:

El tractament amb TG va disminuir notablement les puntuacions de dèficit neurològic i els volums d'infart, va promoure l'angiogènesi i la remodelació neuronal i va mantenir eficaçment la integritat de la barrera hematoencefàlica en comparació amb el grup model. A més, els TG van disminuir significativament els nivells de MDA i van augmentar les activitats antioxidants (SOD, CAT i GSH-Px) al cervell. Mentrestant, els TG van reduir notablement l'expressió de Keap-1 i van facilitar la translocació nuclear de Nrf-2. Per contra, no es van observar efectes protectors per als grups PS i OS.

Conclusió:

Els TG són els principals components actius de C. deserticola contra MCAO/lesió cerebral induïda, i la protecció es fa principalment a través de la via Nrf-2/Keap-1.

Feu clicProducte d'extracte natural de Cistanche Deserticola

INTRODUCCIÓ

Es considera que els ictus són una de les principals causes de mort i discapacitat al món (Donnan et al., 2008). Gairebé el 87% de tots els casos d'ictus són provocats per un ictus isquèmic (Ovbiagele i Nguyen-Huynh, 2011). Actualment, l'agent més eficaç i l'únic fàrmac aprovat per la FDA que s'utilitza per al tractament de l'ictus isquèmic és un activador de plasminogen tissular recombinant. No obstant això, una gran quantitat de pacients amb ictus no responen a aquest fàrmac, a causa de la seva estreta finestra de temps terapèutica i del risc greu de complicacions hemorràgiques (Lee et al., 2012; Schellinger i Kohrmann, 2014). Un repte important del tractament trombolític és la lesió per isquèmia/reperfusió (I/R), que es considera una causa principal de lesió cerebral i destrucció de la funció. La reperfusió després de la isquèmia cerebral augmenta el risc d'hemorràgia cerebral alhora que condueix a lesions neurovasculars i produeixen espècies reactives d'oxigen (ROS) excessives que danyen la barrera hematoencefàlica (Alluri et al., 2015). Diversos estudis han confirmat que la interrupció de la BBB és una de les principals causes de la patogènesi de l'ictus isquèmic (Cao et al., 2016b).

El BBB està format principalment per cèl·lules endotelials, pericits, astròcits, neurones i membranes basals. Els components bàsics de la BBB són cèl·lules endotelials microvasculars cerebrals que estan unides per unions estretes, restringint així les molècules exògenes al cervell. Les alteracions patològiques de les unions estretes, especialment l'ocludina, la claudina-5 i la zonula occludens-1 (ZO-1), afecten significativament la funció BBB durant un ictus isquèmic, especialment la permeabilitat de la barrera (Liu et al. al., 2014; Hu et al., 2018; Liu et al., 2019). Durant els períodes I/R, l'excés de ROS és un dels principals factors que condueixen al dany directe de les neurones cerebrals (Ding et al., 2014). La sobreproducció de ROS condueix a la degradació de determinades unions i a la interrupció de la BBB, la qual cosa fa que molècules exògenes entren al cervell a través de la BBB, donant lloc a un agreujament del dany cerebral (Cheon et al., 2016; Zhang QY et al., 2017). Per tant, s'ha considerat que la protecció del BBB mitjançant antioxidants és una manera potencial de prevenir lesions de reperfusió.

A més de la ruptura del BBB, I/R pot provocar lesions neurovasculars i mort neuronal (Jung et al., 2010). Durant un ictus, l'augment de la mort de les cèl·lules neuronals pot resultar de l'estrès oxidatiu (Chi et al., 2018), i nombrosos estudis han demostrat que ROS agreuja la gravetat de l'ictus i el dany neurològic (Kondo et al., 1997; Crack et al., 2001; Crack et al., 2006). Tot i que els assaigs clínics no han obtingut resultats satisfactoris, la neuroprotecció segueix sent una estratègia prometedora per al tractament de l'ictus isquèmic agut (Moretti et al., 2015). Per tant, trobar fàrmacs de neuroprotecció efectius per tractar els ictus és un benefici per als pacients amb ictus.

La medicina tradicional xinesa (MTC) pren mesures per intervenir contra el desequilibri intern del cos (Gaire, 2018). A causa de la complexa patogènesi dels ictus isquèmics, l'efecte multifactorial de la MTC i els seus components actius tenen un paper crític en el tractament dels ictus. Cistanche deserticola YC Ma, molt estesa a zones àrides o semiàrides per tota Mongòlia i el nord-oest de la Xina, ha estat una herba de TCM àmpliament utilitzada per al tractament de diverses malalties com l'oblit i la depressió durant més d'1,000 anys a la Xina . Els estudis farmacològics moderns van indicar que els extractes bruts de C. deserticola mostraven múltiples activitats farmacològiques, com ara millorar la funció d'aprenentatge i memòria, neuroprotecció, millorar la immunitat, efectes antioxidants, antienvelliment i antifatiga (Ko i Leung, 2007; Wang et al. , 2012; Li et al., 2015). L'anàlisi química de C. deserticola va demostrar que els seus components principals inclouen glicòsids feniletanoides, glicòsids iridoides, polisacàrids i oligosacàrids (Jiang i Tu, 2009). Tanmateix, els components actius de C. deserticola per a la protecció del cervell no estan molt clars.

La propietat neuroprotectora de C. deserticola implica el seu potencial terapèutic en malalties cognitives com l'ictus i la depressió, així com la malaltia d'Alzheimer (Wang et al., 2017). Tanmateix, la investigació sobre l'impacte de C. deserticola en els ictus, inclosos els seus components actius i mecanismes d'acció, és molt limitada.

En el treball actual, hem explorat l'efecte protector de tres extractes de C. deserticola, glicòsids totals (TG, glucòsids feniletanoides i altres glicòsids), polisacàrids (PS) i oligosacàrids (OS) sobre lesions cerebrals I/R. Les nostres troballes poden contribuir a l'aplicació clínica precisa de C. deserticola i proporcionar un agent candidat per a la teràpia d'ictus isquèmic.

MATERIALS I MÈTODES

Productes químics i reactius

Les tiges de Cistanche deserticola van ser comprades a Alashan, Mongòlia Interior, i identificades per un dels autors (P.-F. Tu). Els TG, els PS i els OS es van preparar segons el nostre mètode informat anteriorment (Gao et al., 2015). L'anàlisi quantitativa dels TG es va realitzar mitjançant cromatografia líquida d'alt rendiment (HPLC) tal com s'ha descrit anteriorment (Li et al, 2019), i el seu cromatograma es mostra a la figura 1. Els components principals dels TG són l'echinacòsid, el tubulòsid A, l'acteòsid, l'isoacteòsid, i 2'-acetilacteòsid; els seus continguts són 163,05 mg/g, 4,125 mg/g, 41,66 mg/g, 22,655 mg/g i 12,045 mg/g, respectivament. Els continguts de PS i OS són del 69,42 per cent i del 65,24 per cent, respectivament, segons es determina per HPLC i l'anàlisi d'àcid fenol-sulfúric, respectivament (Zhang A. et al., 2018; Shi et al, 2019).

Les referències estàndard d'equinacòsid (A0282), tubulòsid A (A0942), acteòsid (A0280), isoacteòsid (A0281) i 2'-acetilacteòsid (A0943) es van comprar a Chengdu Must Biotechnology (Sichuan, Xina). Les pureses de tots els estàndards són més del 98 per cent. Els kits d'H&E de taques Nissl es van comprar a Boster (Wuhan, Xina). Edaravone (T0407-1) ​​es va comprar a Target Mol (Xangai, Xina). S'han comprat MAP anti-rata de conill-2 (ab32454), Nrf-2 (ab31163), PDGFRb (ab32570), Keap-1 (ab66620) i CD31 antirata de ratolí (ab24590) d'Abcam Inc (Cambridge, MA, EUA). Conill antirata Claudin5 (BS1069), ZO-1 (BS9802M) i Occludin (BS72035) es van comprar a Bioworld Technology (Nanjing, Xina). Cell Signaling Technology Inc. (Boston, MA, EUA) va ser la font de sinapsina antirata de conill-1 (SYN,5297T), PSD95 (3450T), a-Smooth Muscle Actin (a-SMA,19245T). GAPDH (HRP-60004) es va comprar a Proteintech Group, Inc. (Chicago, EUA).

Els anticossos secundaris van ser subministrats per Zhongshan Golden Bridge Biotechnology (Beijing, Xina). Hoechst 33258 es va obtenir de Beyotime (Jiangsu, Xina).

Animals

Les rates Sprague-Dawley (mascles, amb un pes de 250 a 300 g) es van obtenir de Vital River Laboratory Animal Technology (Beijing, Xina) i es van allotjar en una habitació amb aire condicionat mantinguda en un cicle de llum/foscor de 12 hores. Tots els experiments amb animals es van realitzar mitjançant les directrius ARRIVE d'investigació animal (Kilkenny et al., 2010; McGrath et al., 2010) i van ser aprovats pel Comitè Institucional de Cura i Ús d'Animals del Centre de Ciències de la Salut de la Universitat de Pequín (LA2019123).

Protocols experimentals amb animals

Les rates van ser sotmeses a MCAO/R, tal com es va descriure anteriorment (Wang et al., 2018). Breument, es van exposar l'artèria caròtida comuna esquerra (CCA), l'artèria caròtida externa (ECA) i l'artèria caròtida interna (ICA) i es va inserir una sutura de monofilament de niló 3-0 des de l'ECA a l'ICA fins a arribar al mig. artèria cerebral (ACM). Després d'1,5 h d'oclusió de MCA, es va simular la reperfusió eliminant el filament. Durant el procediment quirúrgic, la temperatura corporal de totes les rates es va mantenir a 37,0 graus.

Administració de fàrmacs

Les rates es van separar aleatòriament en sis grups mitjançant el programari SPSS versió 22.0 tal com es descriu (Jiang et al., 2014): grup normal (NOR); grup de models (MOD); grup edaravona (medicament positiu, 6 ml/kg, EDI); grup TGs (280 mg/kg, TGs); Grup PS (280 mg/kg, PS) i grup SO (280 mg/kg, OS). Els TG, els PS i els SO es van administrar una vegada al dia després de MCAO/R durant 14 dies. Els grups NOR i MOD es van tractar amb solució salina normal. El nombre d'animals es mostra a la taula 1.

Mesurament del pes i puntuacions modificades de dèficit neurològic (NSS)

El pes corporal es va controlar el dia 14 mitjançant una bàscula digital ADVENTURE™ (OHAUS, Nova Jersey, EUA). La massa es va avaluar segons el mètode descrit per FJ Wang (Wang et al., 2018), amb revisions menors.

2, 3, 5-Tinció de clorur de trifeniltetrazoli (TTC)

El volum de l'infart es va mesurar tal com es va descriure anteriorment (Wang et al., 2015). En resum, els cervells es van seccionar en set blocs coronals igualment espaiats (2 mm). Aquestes seccions es van tacar amb un 2% de TTC (Coolaber, Pequín, Xina) a 37 graus durant 15 min. Volum de l'infart (per cent)=(volum de l'hemisferi isquèmic ipsilateral - volum de l'hemisferi isquèmic contralateral)/volum de l'hemisferi isquèmic contralateral × 100.

Tinció de Nissl i H&E

Les rates van ser profundament anestesiades i tot el cervell es va treure ràpidament del crani i es va fixar amb un 4% de paraformaldehid i es va incrustar en cera de parafina i es va seccionar en rodanxes de 7 µm de gruix. Les seccions es van tenyir amb Nissl i H&E. En aquest estudi, es van capturar sis camps aleatoris de 200 × 200 µm a cada mostra de teixit amb un microscopi de llum. El nombre de cossos de Nissl es va comptar amb la versió 6.0 del programari IPP (Media Cybernetics, Bethesda, EUA).

Assaig Evans Blue

Les rates es van injectar amb un 2 per cent d'EB (Coolaber Science & Technology Co., LTD) després de MCAO/R. Dues hores més tard, les rates van ser anestesiades i tot el cervell es va eliminar ràpidament i es va homogeneïtzar en acetona. Els sobrenedants es van analitzar a 620 nm mitjançant un lector d'absorbància de 800 TS (BioTek, EUA).

Mesura de les activitats de la catalasa (CAT), la superòxid dismutasa (SOD), el malondialdehid (MDA) i la glutatió peroxidasa (GSH-Px)

Totes les mostres de sèrum es van centrifugar a 4,000 × rpm durant 15 min a 4 graus i després es van analitzar per detectar les activitats de MDA, CAT, SOD i GSH-Px seguint les instruccions del fabricant (Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd, Xina).

Anàlisi de Western Blotting

Els teixits cerebrals (100 mg) recollits de cada rata es van homogeneïtzar i lisar en tampó de lisi RIPA i després es van analitzar per detectar la concentració de proteïnes mitjançant un kit de BCA (Beijing TransGen Biotech Co., Ltd.). Les proteïnes totals del teixit es van carregar en gels SDS-PAGE al 10% i es van transferir a una membrana de nitrocel·lulosa. La membrana es va bloquejar amb llet desnatada al 5%, després es va incubar durant la nit amb anticossos primaris a 4 graus. Després es va incubar la membrana amb un anticòs secundari. L'anàlisi de Western blot es va analitzar mitjançant el sistema d'imatge digital Kodak (5200 Multi, Tanon, Xina).

Anàlisi immunofluorescent

Es va realitzar una tinció d'immunofluorescència per a CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, occludina, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, Nrf-2 i Keap-1. Els anticossos primaris contra Nrf-2, CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, occludina, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP{-2 i Keap-1 es van diluir a 1 :200 i 1:100, respectivament. Els anticossos secundaris de la IgG anti-conill de ratolí Alexa Flur 488 i la IgG de cabra anti-conill de rodamina (TRITC) es van diluir a 1:200. Els nuclis es van tacar amb Hoechst 33258. Les imatges es van capturar mitjançant el sistema automatitzat d'imatges de patologia quantitativa Vectra® Polaris™ (PerkinElmer, EUA). L'expressió de proteïnes es va analitzar mitjançant la versió 6.0 del programari IPP.

Anàlisi estadística

Totes les dades es van descriure com a mitjana ± SD. La versió 22 del programari SPSS.0 es va realitzar per a l'anàlisi estadística. Es va utilitzar ANOVA unidireccional en comparar diferents grups. Es va considerar que P <{3}},05 era la diferència estadística.

RESULTATS

Els TG augmenten el pes corporal i redueixen els danys cerebrals en rates MCAO/R

Després de 14 dies de curació amb TG, PS, Oss i EDI, es van avaluar els pesos corporals, els dèficits neurològics i els volums d'infart de rates I/R. Els resultats van mostrar que els pesos corporals del grup MOD es van reduir molt, mentre que els pesos disminuïts en els grups TG, PS i EDI van augmentar (figura 2A). Les puntuacions de dèficit neurològic es van reduir substancialment per EDI i TG (figura 2B). Les rodanxes de cervell de les rates del grup NOR eren de color vermell intens i no hi va haver infarts, mentre que les rates del grup MOD van mostrar un gran infart cerebral ipsilateral. Després del tractament amb TG, els volums d'infart es van reduir significativament (figures 2C, D). El tractament amb PS i OS no va mostrar cap efecte evident sobre els índexs anteriors. Les dades anteriors van mostrar que els TG podrien alleujar notablement la lesió cerebral induïda per I/R, però els PS i els SO no ho van poder.

Els TG milloren el dany histopatològic en rates MCAO/R

Per determinar alguns dels efectes del tractament amb TG, PS i OS sobre el dany histopatològic, es va fer una tinció de H&E per revelar danys patològics. Les estructures histomorfològiques dels cervells del grup NOR es van organitzar regularment. Els canvis de morfologia en els grups TGs van ser més lleus que els del grup MOD. Tanmateix, els grups de tractament amb PS i OS no van mostrar cap millora significativa dels canvis de morfologia (figura 3).

Els TG atenuen la lesió neuronal després de les rates induïdes per I/RI

La tinció de Nissl va mostrar els canvis histopatològics de les neurones a la penombra de la zona isquèmica. Com es mostra a la figura 4, les neurones normals tenien un nuclèol clar i una estructura intacta. Al grup MOD, les neurones tenien espais intercel·lulars engrandits. Els bonics cossos van desaparèixer, encongits i profundament tacats. Tanmateix, aquests canvis poques vegades es van observar als grups EDI, TG i PS. Aquests resultats van il·lustrar que els TG i els PS podrien atenuar significativament la lesió neuronal induïda per isquèmia/reperfusió.

Els TG atenuen la interrupció del BBB després de les rates tractades amb I/RT

L'assaig blau d'Evans és un mètode clàssic per investigar el canvi de permeabilitat BBB. Els resultats de l'experiment van mostrar que es va observar un augment del blau d'Evans al grup MOD, mentre que el blau d'Evans va disminuir significativament a les rates tractades amb TG i EDI. A més, no hi va haver cap diferència significativa entre els grups de teràpia amb PS i SO (figura 5). Aquests resultats van suggerir que els TG podrien atenuar significativament la interrupció del BBB.

Els TG promouen l'angiogènesi en rates lesionades per I/R

Estudis més recents mostren que l'angiogènesi té un paper crític en la recuperació funcional neurològica i els resultats pronòstics després d'un ictus isquèmic agut (Yuen et al., 2015). Per avaluar els efectes dels TG, PS i OS sobre l'angiogènesi, es van utilitzar CD31 i a-SMA per quantificar els nombres capil·lars. La tinció d'immunofluorescència va mostrar que el grup MOD va provocar una disminució notable de les expressions de CD31 (figures 6A, B) i aSMA (figures 6C, D) a la penombra de les àrees isquèmiques de rates I/R, en comparació amb les rates normals. Aquest resultat va il·lustrar que I/R podria causar danys vasculars a la penombra de l'escorça dels hemisferis isquèmics. Tanmateix, el tractament amb TG i EDI va augmentar notablement la densitat capil·lar, l'angiogènesi i l'arteriogènesi, tal com indica l'augment de les expressions de CD31 i a-SMA. Aquests resultats suggereixen que els TG podrien promoure l'angiogènesi a la penombra isquèmica de rates I/R, però els PS i OS no ho podrien.

Els TG augmenten l'expressió de proteïnes d'unió estreta en rates lesionades per I/R

La interrupció del BBB pot augmentar el contingut d'aigua cerebral i la inflor dels teixits, donant lloc a lesions cerebrals. Les proteïnes d'unió estreta són components estructurals importants de la BBB (Tenreiro et al., 2016; Jiang et al., 2018). Per provar si el tractament amb TG, PS i OS després de l'ictus podria influir en la integritat de la BBB, les expressions de ZO-1, claudina-5 i ocludina es van realitzar mitjançant anàlisi d'immunofluorescència. Els resultats van indicar que les expressions de claudina -5, occludina i ZO-1 es van reduir visiblement al grup MOD. No obstant això, van augmentar substancialment després de 14 dies de la seva administració. Els grups PS i OS no van mostrar canvis significatius en aquestes expressions de proteïnes (figura 7). Aquestes dades van indicar que els TG podrien regular les expressions de proteïnes d'unió estreta i mantenir la integritat del BBB després de la lesió I/R.

Els TG augmenten la cobertura de pericits als capil·lars en rates lesionades per I/R

La cobertura de pericits als capil·lars té un paper crític en el manteniment de la integritat de la BBB (Armulik et al., 2010; Daneman et al., 2010). Així, vam provar si la cobertura de pericits es podia augmentar amb el tractament amb TG, PS i OS. Els resultats de l'anàlisi d'intensitat d'immunofluorescència van mostrar que tant les expressions PDGFRb com CD31 es van reduir dràsticament al grup MOD. L'administració de TG a les rates I/R va recuperar o fins i tot augmentar significativament les intensitats d'expressió del PDGFRb i CD31, però no es va observar cap diferència en els grups de tractament amb PS i OS (figura 8). Així, el tractament dels TG podria augmentar significativament la cobertura de pericits. Aquestes troballes van confirmar a més que els TG poden mantenir la integritat de la BBB després d'I/R.

Els TG promouen la remodelació neuronal en rates lesionades per I/R

Segons nombrosos estudis, la neurogènesi després d'un ictus pot millorar significativament la recuperació funcional (Grefkes i Ward, 2014; Zhang et al., 2019). La sinaptofisina (SYN), les proteïnes de densitat postsinàptica 95 (PSD-95) i la proteïna 2 associada a microtúbuls (MAP-2) es van utilitzar com a marcadors per examinar la plasticitat neuronal a la penombra isquèmica de l'escorça. Per avaluar els efectes del tractament amb TGs, PS i OS sobre la neurogènesi en rates lesionades per I/R, es va realitzar la immunofluorescència i el western blot per a les expressions SYN, PSD95 i MAP-2. Com es mostra a les figures 9 i 10, els nivells d'expressió SYN, PSD95 i MAP-2 en rates I/R després de 14 dies de reperfusió van disminuir en comparació amb les rates NOR, mentre que la curació de TG i PS podria augmentar significativament. regular els seus nivells d'expressió. El grup SO no va tenir cap canvi significatiu en comparació amb el grup MOD. Les dades van indicar que la cura de TG i PS va poder promoure de manera espectacular la remodelació neuronal després de la lesió I/R.

Els TG alteren les expressions Nrf-2 i Keap-1 en rates ferides per I/R

L'estrès oxidatiu és el principal mecanisme patogènic en la lesió I/R (Ya et al., 2018; Yu et al., 2018). Els estudis van comprovar que Nrf-2 és un regulador mestre de les respostes antioxidants (Thompson et al., 2015). Per investigar les respostes oxidatives mediades per Nrf-2 i Keap-1 després de la lesió I/R, vam avaluar l'expressió citoplasmàtica així com la translocació nuclear de Keap-1. Mentrestant, també es va analitzar l'expressió de Nrf-2 als teixits cerebrals de rates lesionades per I/R (figures 10 i 11). Segons l'anàlisi d'immunofluorescència, es va trobar que Nrf-2 es trobava principalment al citoplasma del grup NOR. Al grup TGs, l'expressió de Nrf-2 en la localització citoplasmàtica es va regular a la baixa, però es va augmentar al nucli, i també es va observar una disminució de l'expressió de Keap-1. Les dades van mostrar que la protecció del cervell dels TG podria estar associada amb la modulació de Nrf-2 i Keap-1.

Els TG atenuen l'estrès oxidatiu del teixit cerebral en rates lesionades per I/R

Per confirmar els efectes antioxidants dels TG, es van avaluar les activitats de SOD, CAT, GSH-Px i MDA en rates lesionades per I/R. A la figura 12, el contingut de MDA va augmentar notablement al grup MOD i, al mateix temps, es van reduir les activitats de SOD, CAT i GSH-Px, en comparació amb les rates normals. Per contra, el tractament amb TG va provocar una disminució significativa del contingut de MDA i un augment de les activitats de SOD, CAT i GSH-Px. Aquests resultats van confirmar encara més l'activitat antioxidant dels TG.

DISCUSSIÓ

Molts estudis suggereixen que la MTC C. deserticola té àmplies activitats biològiques, per exemple, millora la capacitat d'aprenentatge, la memòria i la immunitat (Dong et al., 2007; Jiang i Tu, 2009; Wang et al., 2017; Xia et al., 2007; 2018). Tanmateix, els components actius de C. deserticola per a la neuroprotecció encara no estan clars. El treball actual pretén examinar els components actius de C. deserticola contra l'ictus isquèmic en el model MCAO/R. Es van utilitzar tres extractes de C. deserticola (TG, PS i OS) per avaluar els seus efectes sobre rates MCAO/R, així com els possibles mecanismes. L'ictus és una malaltia cerebrovascular aguda freqüent. Els estudis epidemiològics mostren que l'ictus és més freqüent en homes que en dones (Sealy-Jefferson et al., 2012; Guzik i Bushnell, 2017).

Així, en el nostre experiment, es van adoptar rates mascles per a les proves. Els nostres resultats van demostrar que la inducció I/R accelerava l'estrès oxidatiu i el volum de l'infart, trencant la BBB i provocant lesions nervioses i cerebrovasculars. Després del cribratge, es va trobar que els TG disminuïen el volum de l'infart i promouen la remodelació neuronal i l'angiogènesi. A més, es va observar que els TG mantenien la integritat de la BBB després de la lesió I/R. Per contra, els PS i els SO no alleugen significativament la lesió I/R. Així, els TG es consideren la fracció activa principal de C. deserticola per a la neuroprotecció, potencialment mitjançant la promoció de la remodelació neuronal, l'angiogènesi i la integritat de la BBB mitjançant l'activació de la via Nrf2/Keap-1.

L'evidència creixent indica que l'establiment d'una circulació col·lateral efectiva és molt important per evitar la formació d'infarts i penombra isquèmica, i és un tractament crític en una fase inicial de l'ictus isquèmic (ElAli, 2016; Iwasawa et al., 2016). La proliferació de cèl·lules endotelials vasculars i cèl·lules musculars llises després d'un infart isquèmic determina l'establiment de la circulació col·lateral.

Tanmateix, els models d'isquèmia tenen un fenomen comú, és a dir, l'estrès oxidatiu existia àmpliament a la microvasculatura cerebral. Les dades de l'estudi han demostrat que un gran nombre d'antioxidants poden alterar la funció del BBB i les propietats de l'angiogènesi (Mentor i Fisher, 2017). CD31 i a-SMA són els marcadors de cèl·lules endotelials vasculars i de cèl·lules musculars llises, respectivament (Saboor et al., 2016). Per investigar l'efecte de la proliferació cel·lular esmentada anteriorment dels extractes de C. deserticola, es van examinar les expressions de CD31 i a-SMA a l'homogeneïtat de penombra isquèmica cerebral. Les nostres dades van demostrar que els TG van millorar de manera sorprenent les expressions de CD31 i a-SMA. Tanmateix, no hi va haver diferències significatives entre els grups PS i OS. Per tant, vam deduir que els TG poden reduir el dany cerebral mitjançant la promoció de l'angiogènesi mitjançant l'augment de les expressions de CD31 i a-SMA, mentre que els PS i els SO no proporcionaven aquesta protecció contra el dany cerebral. Aquests resultats van confirmar a més que només els TG podrien prevenir la lesió cerebral I/R.

L'ictus isquèmic es pot pensar com el resultat d'una isquèmia cerebral causada per un deteriorament de la plasticitat neuronal o la remodelació de les àrees cerebrals. La majoria dels pacients amb ictus pateixen dèficits neurològics. Activar la neurogènesi és una estratègia prometedora per als pacients amb ictus per millorar les seves funcions neurològiques (Cramer i Chopp, 2000). La neurogènesi participa directament en la recuperació de la funció neurològica després d'una lesió cerebral I/R (Zhang et al., 2019). Investigacions anteriors mostren que els TG poden millorar la taxa de supervivència de les cèl·lules piramidals de l'hipocamp i induir la neurogènesi (Lian et al., 2017). L'estrès oxidatiu provoca la pèrdua de neurones durant moltes malalties, com ara Parkinson, ictus, etc. (Duan i Si, 2019; Singh et al., 2019). Nrf-2 transcriu molts gens relacionats amb la neuroprotecció a la seva regió promotora, incloent principalment SOD, MDA, CAT i glutamil cisteïna lligases, etc. (Satoh et al., 2006). Les proteïnes SYN, PSD-95 i MAP-2, que estan estretament associades amb la formació sinàptica i la neurotransmissió, es poden considerar marcadors de la plasticitat neuronal de recerca a la regió de la penombra isquèmica. Després d'estudiar, vam trobar que la curació amb TG podria augmentar significativament les expressions de PSD95, SYN i MAP-2, cosa que indica que la protecció cerebral dels TG es va correlacionar amb una plasticitat neuronal millorada durant I/R. Tanmateix, és una llàstima que no hi hagi una diferència òbvia entre els PS i els grups de SO. Aquests resultats van indicar que els TG podrien millorar la neuroplasticitat després d'una lesió cerebral I/R.

La investigació per imatge en pacients amb ictus va demostrar que la disfunció BBB es pot considerar un atribut sorprenent del cervell per isquèmic (Bang et al., 2007). Els TJ, que es componen de proteïnes citoplasmàtiques, proteïnes transmembrana i molècules d'adhesió d'unió entre cèl·lules endotelials capil·lars, són molt importants per mantenir la integritat del BBB (Ye et al., 2019). Entre elles, ZO-1, claudina-5 i ocludina són les proteïnes més importants dels TJ. L'evidència creixent indica que l'augment de la permeabilitat de la BBB induïda per la isquèmia generalment es correlaciona amb les alteracions de ZO-1, claudina-5 i ocludina (Cao et al., 2016a; Page et al., 2016; Yu). et al., 2017; Liu et al., 2018).

En aquest treball, els resultats van demostrar que, tot i que els TG podrien augmentar significativament les expressions de proteïnes ZO-1, claudina{-5 i ocludina als teixits cerebrals induïts per MCAO, ni els PS ni els OS ho van fer. El BBB està format per cèl·lules endotelials cerebrals i està estretament associat amb els pericits (Nyul-Toth et al., 2016). Els pericits són vitals per a la integritat del BBB (Bell et al., 2010). L'ictus isquèmic desencadena la mort dels pericits i el despreniment de les cèl·lules endotelials del cervell en la fase aguda, desestabilitzant així la microvasculatura i alterant les propietats del BBB (Zechariah et al., 2013). Les nostres dades van mostrar que els TG podrien augmentar la cobertura dels pericits als capil·lars i augmentar els nivells d'expressió de ZO-1, claudina-5 i ocludina. Aquests fenòmens van demostrar que els TG podrien protegir eficaçment la integritat del BBB després d'una lesió cerebral I/R. En resum, els TG poden atenuar la lesió cerebral de múltiples maneres, com ara la promoció de l'angiogènesi, la millora de la plasticitat neuronal i el manteniment de la integritat de la BBB.

A continuació, vam investigar la via de senyalització per explorar el mecanisme subjacent a la protecció del cervell de TG. El procés de lesió I/R és multifactorial i, per tant, hi ha nombrosos mecanismes implicats en la patogènesi. L'estrès oxidatiu és un factor de risc fonamental que contribueix a la lesió cerebral induïda per I/R (Suda et al., 2013), com el dany de l'estructura BBB, la disfunció endotelial vascular i l'agreujament de la lesió neuronal isquèmica (Xiong et al., 2015; Caglayan). et al., 2019; Priestley et al., 2019).

Així, l'estrès oxidatiu s'ha convertit en un objectiu terapèutic atractiu en la lesió cerebral induïda per I/R. Els enzims de la fase 2, que estan mediats pel factor nuclear E2-factor relacionat{-2 (Nrf-2), s'han considerat un mitjà important pel qual les neurones es protegeixen contra l'estrès oxidatiu (Suzuki i Yamamoto). , 2015; Ya et al., 2018). L'evidència creixent indica que l'activació de Nrf-2 durant l'I/R és un objectiu terapèutic potencial per a la neuroprotecció (Ding et al., 2015; Zhang R. et al., 2017). Nrf-2, com a regulador important de la defensa antioxidant endògena, media el nivell d'hemoxigenasa 1 (HO{-1) i altres enzims antioxidants, com la NAD(P)H quinona oxidoreductasa 1 (NQO1), SOD, CAT, GSH i MDA (Siow et al., 2007; Ding et al., 2014). A més, Nrf-2 té un paper regulador important en l'angiogènesi. El present estudi mostra que Nrf-2 es pot millorar i activar significativament en el procés de desenvolupament vascular (Wei et al., 2013).

Tal com es va descriure anteriorment (Jiang i Tu, 2009), els TG contenen molts compostos bioactius, per exemple, equinacòsid, tubulòsid A, acteòsid, isoacteòsid i 2'-acetilacteòsid, i alguns d'ells van mostrar funcions neuroprotectores després d'una lesió cerebral I/R. Peng et al., 2016). L'echinacòsid té molts efectes farmacològics, com ara l'antioxidació, la antisenescència, la neuroprotecció, la antiinflamació, la promoció de la cicatrització, l'hepatoprotecció, la promoció de la formació òssia i les activitats antitumorals (Yu et al., 2016; Li et al., 2018; Zhang Y. et al., 2018; Ji et al., 2019; Xu et al., 2019).

Recentment, l'echinacòsid s'ha identificat com un potent antioxidant al sistema nerviós central (Lu et al., 2016). L'echinacòsid pot reduir el contingut de MDA i millorar les activitats de SOD i GSHPx en lesions cerebrals isquèmiques, i l'anàlisi d'acoblament molecular va mostrar que l'equinacòsid pot unir-se a Keap-1, donant lloc a la translocació nuclear de Nrf-2 (Li et al. al., 2018). L'estudi Xia va demostrar que l'acteòsid podria disminuir el volum de l'infart i el contingut d'aigua cerebral per millorar els dèficits neurològics en rates MCAO/R mitigant l'estrès oxidatiu (Xia et al., 2018). Altres estudis han demostrat que l'isoacteòsid podria augmentar l'activitat dels enzims antioxidants cel·lulars, SOD i CAT a les cèl·lules V79-4 tractades amb H2O2-(Chae et al., 2005). A partir dels informes anteriors dels compostos actius continguts en els TG, és possible deduir que els TG podrien protegir contra l'ictus isquèmic mitjançant les vies d'antioxidació.

Vaig informar sobre els efectes neuroprotectors dels glicòsids feniletanoides (PhG) sobre l'apoptosi induïda per H2O2-a les cèl·lules PC12 mitjançant la via Nrf2/ARE (Li et al., 2018). Aquests PhG es van suprimir significativament provocant la translocació nuclear de Nrf2 i augmentant les expressions de HO-1, NQO1, subunitat catalítica de glutamat-cisteïna lligasa (GCLC) i subunitat modificadora de glutamat-cisteïna lligasa (GCLM) (Li et al., 2018). ; Gong et al., 2019).

Per tant, aquestes troballes suggereixen que la via Nrf-2/ARE té un paper crucial en els efectes protectors mediats per PhG sobre les cèl·lules neuronals. De la mateixa manera, en aquest estudi, vam trobar que els TG podrien disminuir el nivell de MDA i augmentar els nivells de SOD, CAT i GSH-Px a les rates I/R. Mentrestant, els TG podrien augmentar l'expressió de Nrf2 al nucli, reduir l'expressió corresponent al citoplasma i disminuir significativament l'expressió de Keap-1. Per tant, la via Nrf-2/Keap{-1 pot estar implicada en efectes neuroprotectors mediats per TG. En el futur, es realitzarà una validació addicional d'aquesta via en cultiu cel·lular in vitro amb models de lesió per privació d'oxigen-glucosa/reoxigenació. A més, els extractes de C. deserticola es van administrar al nostre estudi durant 14 dies contínuament. Com que la neurogènesi adulta afectaria la interpretació dels efectes neuroprotectors durant 14 dies de reperfusió, la neurogènesi no es pot excloure del nostre disseny experimental actual per explorar l'efecte neuroprotector dels TC. Aquesta és la limitació de la nostra recerca.

En conclusió, són els TG de C. deserticola els que poden millorar l'angiogènesi i la neurogènesi, així com mantenir la integritat de la BBB en rates lesions I/R, però no els PS i OS. Els efectes podrien estar mediats per l'activació de la via Nrf-2/Keap-1.

DECLARACIÓ DE DISPONIBILITAT DE DADES

Les dades brutes que recolzen les conclusions d'aquest article seran posades a disposició dels autors, sense reserves indegudes, a qualsevol investigador qualificat.

DECLARACIÓ ÈTICA

Aquest treball es va dur a terme segons les directrius per a experiments amb animals de la Universitat de Pequín. Els protocols d'estudi van ser aprovats pel Comitè Institucional de Cura i Ús d'Animals del Centre de Ciències de la Salut de la Universitat de Pequín (LA2019123).

APORTACIONS DE L'AUTOR

YJ, KZ i PT van dissenyar la investigació. FW va realitzar la investigació. FW i RL van analitzar les dades. FW, RL i JC van escriure el manuscrit i l'anàlisi HPLC. JC, KZ, YJ i PT van revisar el manuscrit.

FINANÇAMENT

Aquest estudi va comptar amb el suport del National Key Research and Development Project (2017YFC1702400, 2019YFC1711000), la National Natural Science Foundation of China (81773932) i el National Key Technology R+D Program "New Drug Innovation" of China (2018ZX09711001-008-003 ).

REFERÈNCIES

Alluri, H., Anasooya Shaji, C., Davis, ML i Tharakan, B. (2015). La privació de glucosa d'oxigen i la reoxigenació com a model de lesió in vitro per isquèmia-reperfusió per estudiar la disfunció de la barrera hematoencefàlica. J. Vis. Exp. 99, e52699. doi: 10.3791/52699

Armulik, A., Genove, G., Mae, M., Nisancioglu, MH, Wallgard, E., Niaudet, C., et al. (2010). Els pericits regulen la barrera hematoencefàlica. Nature 468 (7323), 557–561. doi: 10.1038/nature09522

Bang, OY, Buck, BH, Saver, JL, Alger, JR, Yoon, SR, Starkman, S., et al. (2007). Predicció de la transformació hemorràgica després de la teràpia de recanalització mitjançant ressonància magnètica de permeabilitat T2*. Ann. Neurol. 62 (2), 170– 176. doi: 10.1002/ana.21174

Bell, RD, Winkler, EA, Sagare, AP, Singh, I., LaRue, B., Deane, R., et al. (2010). Els pericits controlen les funcions neurovasculars clau i els fenotips neuronals al cervell adult i durant l'envelliment cerebral. Neurona 68 (3), 409–427. doi: 10.1016/j.neuron.2010.09.043

Caglayan, B., Kilic, E., Dalay, A., Altunay, S., Tuzcu, M., Erten, F., et al. (2019). L'isotiocianat d'al·li atenua l'estrès oxidatiu i la inflamació mitjançant la modulació de les vies Nrf2/HO-1 i NF-kappaB en lesions cerebrals traumàtiques en ratolins. Mol. Biol. Rep 46 (1), 241–250. doi: 10.1007/s11033-018-4465-4

Cao, G., Jiang, N., Hu, Y., Zhang, Y., Wang, G., Yin, M., et al. (2016a). La ruscogenina atenua la disfunció de la barrera hematoencefàlica induïda per la isquèmia cerebral suprimint l'activació de l'inflamsoma TXNIP/NLRP3 i la via MAPK. Int. J. Mol. Ciència. 17 (9), 1–17. doi: 10.3390/ijms17091418

Cao, G., Ye, X., Xu, Y., Yin, M., Chen, H., Kou, J., et al. (2016b). La injecció de pols YiQiFuMai millora la disfunció de la barrera hematoencefàlica i l'edema cerebral després d'una lesió focal d'isquèmia-reperfusió cerebral en ratolins. Drug Des. Dev. Allà. 10, 315–325. doi: 10.2147/dddt.S96818

Chae, S., Kim, JS, Kang, KA, Bu, HD, Lee, Y., Seo, YR, et al. (2005). Activitat antioxidant de l'isoacteòsid de Clerodendron trichotomum. J. Toxicol. Entorn. Salut A 68 (5), 389–400. doi: 10.1080/15287390590900750

Cheon, SY, Cho, KJ, Kim, SY, Kam, EH, Lee, JE i Koo, BN (2016). El bloqueig de la cinasa 1 que regula el senyal d'apoptosi atenua l'activitat de la metaloproteinasa 9 de la matriu a les cèl·lules endotelials del cervell i l'apoptosi posterior a les neurones després d'una lesió isquèmica. Davant. Neurosci cel·lular. 10, 213. doi: 10.3389/fncel.2016.00213

Chi, H., Chang, HY i Sang, TK (2018). Mecanismes de mort de cèl·lules neuronals en les principals malalties neurodegeneratives. Int. J. Mol. Ciència. 19 (10), 1–18. doi: 10.3390/ ijms19103082

Crack, PJ, Taylor, JM, Flentjar, NJ, de Haan, J., Hertzog, P., Iannello, RC, et al. (2001). Augment de la mida de l'infart i apoptosi exacerbada al cervell del ratolí eliminador de glutatió peroxidasa-1 (Gpx-1) en resposta a lesions per isquèmia/reperfusió. J. Neurochem. 78 (6), 1389–1399. doi: 10.1046/j.1471- 4159.2001.00535.x

Crack, PJ, Taylor, JM, Ali, U., Mansell, A. i Hertzog, PJ (2006). La contribució potencial de NF-kappaB a la mort de cèl·lules neuronals en el ratolí knockout de glutatió peroxidasa-1 en resposta a lesions per isquèmia-reperfusió. Traç 37 (6), 1533–1538. doi: 10.1161/01.Str.0000221708.17159.64

Cramer, SC i Chopp, M. (2000). La recuperació recapitula l'ontogènia. Tendències Neurosci. 23 (6), 265–271. doi: 10.1016/s0166-2236(00)01562-9

Daneman, R., Zhou, L., Kebede, AA i Barres, BA (2010). Els pericits són necessaris per a la integritat de la barrera hematoencefàlica durant l'embriogènesi. Nature 468 (7323), 562–566. doi: 10.1038/nature09513

Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Wang, M., Zhang, T., Park, J., et al. (2014). La neuroprotecció per l'àcid acetil-11-ceto-beta-boswellic, en lesions cerebrals isquèmiques, implica la via de defensa Nrf2/HO-1. Ciència. Rep 4, 7002. doi: 10.1038/srep07002

Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Li, Y. i Wen, A. (2015). El posttractament amb 11- àcid ceto-beta-boswellic millora la lesió per isquèmia-reperfusió cerebral: via Nrf2/HO-1 com a mecanisme potencial. Mol. Neurobiol. 52 (3), 1430–1439. doi: 10.1007/s12035-014-8929-9

Dong, Q., Yao, J., Fang, JN i Ding, K. (2007). Caracterització estructural i activitat immunològica de dos polisacàrids extraïbles en aigua freda de Cistanche deserticola YC Ma. Hidrocarburs. Res. 342 (10), 1343–1349. doi: 10.1016/j.carres.2007.03.017

Donnan, GA, Fisher, M., Macleod, M. i Davis, SM (2008). Ictus. Lancet 371 (9624), 1612–1623. doi: 10.1016/s0140-6736(08)60694-7

Duan, Q. i Si, E. (2019). El microARN-25 agreuja la lesió neuronal de l'hipocamp induïda per Abeta1-42- en la malaltia d'Alzheimer mitjançant la regulació a la baixa de KLF2 mitjançant la via de senyalització Nrf2 en un model de ratolí. J. Cell Biochem. 120 (9), 15891–15905. doi: 10.1002/jcb.28861

ElAli, A. (2016). La implicació de la senyalització de la unitat neurovascular en el control de l'equilibri subtil entre lesió i reparació després d'un ictus isquèmic. Regenerador Neural. Res. 11 (6), 914–915. doi: 10.4103/1673-5374.184485

Gaire, BP (2018). La fitoterapia en l'ictus isquèmic: reptes i perspectives. Barbeta. J. Integr. Med. 24 (4), 243–246. doi: 10.1007/s11655-018-2828-2

Gao, Y., Jiang, Y., Dai, F., Han, Z., Liu, H., Bao, Z., et al. (2015). Estudi sobre constituents laxants a Cistanche deserticola YC Ma. Mod. Barbeta. Med. 17 (04), 19–22 més 26. doi: 10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.003

Gong, X., Xu, Y., Ren, K., Bai, X., Zhang, C. i Li, M. (2019). Els glucòsids feniletanoides de Paraboea martini protegeixen les cèl·lules del feocromocitoma de rata (PC12) de lesions cel·lulars induïdes pel peròxid d'hidrogen. Biosci. Biotecnologia. Bioquímica. 83 (12), 2202–2212. doi: 10.1080/09168451.2019.1654359

Grefkes, C. i Ward, NS (2014). Reorganització cortical després de l'ictus: quant i com de funcional? Neurocientífic 20 (1), 56–70. doi: 10.1177/ 1073858413491147

Guzik, A. i Bushnell, C. (2017). Epidemiologia de l'ictus i gestió dels factors de risc. Continuum (Minneap Minn) 23 (1, Cerebrovascular Dis), 15– 39. doi: 10.1212/con.0000000000000416

Hu, S., Wu, Y., Zhao, B., Hu, H., Zhu, B., Sun, Z., et al. (2018). Panax notoginseng Les saponines protegeixen les cèl·lules endotelials microvasculars cerebrals contra la disfunció de la barrera induïda per la privació d'oxigen-glucosa/reperfusió mitjançant l'activació de la via de senyalització antioxidant PI3K/Akt/Nrf2. Molècules 23 (11), 1–17. doi: 10.3390/molecules23112781

Iwasawa, E., Ichijo, M., Ishibashi, S. i Yokota, T. (2016). Desenvolupament agut de la circulació col·lateral i perspectives terapèutiques en l'ictus isquèmic. Regenerador Neural. Res. 11 (3), 368–371. doi: 10.4103/1673-5374.179033

Ji, S., Li, S., Zhao, X., Kang, N., Cao, K., Zhu, Y., et al. (2019). Paper protector dels glicòsids feniletanoides, Torenòsid B i Savatiside A, en la malaltia d'Alzheimer. Exp. Allà. Med. 17 (5), 3755–3767. doi: 10.3892/item.2019.7355

Jiang, Y. i Tu, PF (2009). Anàlisi de constituents químics en espècies de Cistanche. J. Cromatogr. 1216 (11), 1970–1979. doi: 10.1016/ j.chroma.2008.07.031

Jiang, T., Yu, JT, Zhu, XC, Wang, HF, Tan, MS, Cao, L., et al. (2014). El precondicionament agut de metformina confereix neuroprotecció contra la isquèmia cerebral focal mitjançant la preactivació de l'autofàgia dependent de l'AMPK. Br. J. Pharmacol. 171 (13), 3146–3157. doi: 10.1111/bph.12655

Jiang, X., Andjelkovic, AV, Zhu, L., Yang, T., Bennett, MVL, Chen, J., et al. (2018). Disfunció de la barrera hematoencefàlica i recuperació després d'un ictus isquèmic. Prog. Neurobiol. 163-164, 144–171. doi: 10.1016/j.pneurobio.2017.10.001

Jung, JE, Kim, GS, Chen, H., Maier, CM, Narasimhan, P., Song, YS, et al. (2010). Reperfusió i disfunció neurovascular en l'ictus: des de mecanismes bàsics fins a estratègies potencials per a la neuroprotecció. Mol. Neurobiol. 41 (2-3), 172–179. doi: 10.1007/s12035-010-8102-z

Kilkenny, C., Browne, WJ, Cuthill, IC, Emerson, M. i Altman, DG (2010). Millorar els informes de recerca en biociència: les directrius ARRIVE per informar de la investigació en animals. PLoS Biol. 8 (6), e1000412. doi: 10.1371/journal. bio.1000412

Ko, KM i Leung, HY (2007). Millora de la capacitat de generació d'ATP, l'activitat antioxidant i les activitats immunomoduladores per part de les herbes tonificants xineses Yang i Yin. Barbeta. Med. 2, 3. doi: 10.1186/1749-8546-2-3

Kondo, T., Reaume, AG, Huang, TT, Carlson, E., Murakami, K., Chen, SF, et al. (1997). La reducció de l'activitat de CuZn-superòxid dismutasa agreuja la lesió de les cèl·lules neuronals i la formació d'edema després d'una isquèmia cerebral focal transitòria. J. Neurosci. 17 (11), 4180–4189. doi: 10.1523/JNEUROSCI.17-11-04180

Lee, M., Saver, JL, Alger, JR, Hao, Q., Starkman, S., Ali, LK, et al. (2012). Alteracions de la permeabilitat de la barrera hematoencefàlica en l'ictus isquèmic de la circulació posterior: freqüència i relació amb la transformació hemorràgica. J. Neurol. Ciència. 313 (1-2), 142–146. doi: 10.1016/j.jns.2011.08.048

Li, N., Wang, J., Ma, J., Gu, Z., Jiang, C., Yu, L., et al. (2015). Efectes neuroprotectors de la teràpia amb herba a distància en pacients amb malaltia d'Alzheimer moderada. Altern de complement basat en Evid. Med. 2015, 103985. doi: 10.1155/2015/103985

Li, M., Xu, T., Zhou, F., Wang, M., Song, H., Xiao, X., et al. (2018). Efectes neuroprotectors de quatre glicòsids feniletanoides sobre l'apoptosi induïda per H (2) O (2) a les cèl·lules PC12 mitjançant la via Nrf2/ARE. Int. J. Mol. Ciència. 19 (4), 1–17. doi: 10.3390/ijms19041135

Li, R., Zhao, M., Tu, P. i Jiang, Y. (2019). Determinació simultània de cinc glicòsids feniletanoides en Cistanches Herba mitjançant anàlisi quantitativa de diversos components mitjançant un únic marcador. J. Chin. Farmàcia. Ciència. 28 (08), 537–546. doi: 10.5246/jcps.2019.08.051

Lian, J., Wang, L., Zhao, F., Lin, S., Yan, X., Jia, J., et al. (2017). Efectes dels glucòsids de cistanche sobre la plasticitat morfològica sinàptica en ratolins accelerats per la senescència. J. Baotou Medl Coll. 33 (08), 78–80. doi: 10.16833/j.cnki.jbmc.2017.08.036

Liu, Y., Wang, D., Wang, H., Qu, Y., Xiao, X. i Zhu, Y. (2014). L'efecte protector de HET0016 sobre l'edema cerebral i la disfunció de la barrera hematoencefàlica després d'isquèmia/reperfusió cerebral. Cervell Res. 1544, 45–53. doi: 10.1016/ j.brainres.2013.11.031

Liu, P., Zhang, R., Liu, D., Wang, J., Yuan, C., Zhao, X., et al. (2018). Investigació en el temps de la permeabilitat de la barrera hematoencefàlica i els canvis de proteïnes d'unió estreta en un model de rata d'isquèmia focal permanent. J. Physiol. Ciència. 68 (2), 121– 127. doi: 10.1007/s12576-016-0516-6

Liu, S., Chang, L. i Wei, C. (2019). La via de l'eriçó sonor media la protecció induïda per la càpsula Tongxinluo contra la interrupció de la barrera hematoencefàlica després de l'ictus isquèmic en ratolins. Clin bàsic. Pharmacol. Toxicol. 124 (6), 660– 669. doi: 10.1111/bcpt.13186

Lu, CW, Lin, TY, Huang, SK i Wang, SJ (2016). L'equinacòsid inhibeix l'alliberament de glutamat suprimint l'entrada de Ca (2 més) dependent de la tensió i la proteïna cinasa C a les terminals nervioses cerebrocorticals de rata. Int. J. Mol. Ciència. 17 (7), 1–13. doi: 10.3390/ijms17071006

McGrath, JC, Drummond, GB, McLachlan, EM, Kilkenny, C. i Wainwright, CL (2010). Directrius per informar d'experiments amb animals: les directrius ARRIVE. Br. J. Pharmacol. 160 (7), 1573–1576. doi: 10.1111/j.1476-5381.2010.00873.x

Mentor, S. i Fisher, D. (2017). L'estrès reductor antioxidant agressiu perjudica l'angiogènesi de les cèl·lules endotelials cerebrals i la funció de la barrera hematoencefàlica. Curr. Neurovasc Res. 14 (1), 71–81. doi: 10.2174/1567202613666161129113950

Moretti, A., Ferrari, F. i Villa, RF (2015). Neuroprotecció per a l'ictus isquèmic: estat actual i reptes. Pharmacol. Allà. 146, 23–34. doi: 10.1016/j.pharmthera.2014.09.003

Nyul-Toth, A., Suciu, M., Molnar, J., Fazakas, C., Hasko, J., Herman, H., et al. (2016). Diferències en l'estructura molecular de la barrera hematoencefàlica a l'escorça cerebral i la substància blanca: un estudi in silico, in vitro i ex vivo. Am. J. Physiol. Circ del cor. Physiol. 310 (11), H1702–H1714. doi: 10.1152/ajpheart.00774.2015

Ovbiagele, B. i Nguyen-Huynh, MN (2011). Epidemiologia de l'ictus: avançar en la nostra comprensió del mecanisme i la teràpia de la malaltia. Neuroterapèutica 8 (3), 319–329. doi: 10.1007/s13311-011-0053-1

Page, S., Munsell, A. i Al-Ahmad, AJ (2016). La hipòxia/isquèmia cerebral altera selectivament els complexos d'unió estreta a les cèl·lules endotelials microvasculars del cervell humà derivats de cèl·lules mare. Barreres de fluids CNS 13 (1), 16. doi: 10.1186/ s12987-016-0042-1

Peng, F., Chen, J., Wang, X., Xu, C., Liu, T. i Xu, R. (2016). Canvis en els nivells de glucòsids feniletanoides, activitat antioxidant i altres trets de qualitat en rodanxes de cistanche deserticola mitjançant processament al vapor. Chem. Farmàcia. Bou. (Tòquio) 64 (7), 1024–1030. doi: 10.1248/CPB.c16-00033

Priestley, JRC, Fink, KE, McCord, JM i Lombard, JH (2019). L'activació de NRF2 amb Protandim atenua la disfunció vascular induïda per la sal i la rarefacció microvascular. Microcirculació, 26 (7), e12575. doi: 10.1111/misc.12575

Saboor, F., Reckmann, AN, Tomczyk, CU, Peters, DM, Weissmann, N., Kaschtanow, A., et al. (2016). Les cèl·lules de la paret vascular que expressen nestina impulsen el desenvolupament de la hipertensió pulmonar. Eur. Respir. J. 47 (3), 876–888. doi: 10.1183/13993003.00574-2015

Satoh, T., Okamoto, SI, Cui, J., Watanabe, Y., Furuta, K., Suzuki, M., et al. (2006). Activació de la via Keap1/Nrf2 per a la neuroprotecció mitjançant inductors de fase II electròfils [correcció d'electròfils]. Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 103 (3), 768–773. doi: 10.1073/pnas.0505723102

Schellinger, PD i Kohrmann, M. (2014). S'estableix una finestra de temps de 4.5-hores per a la trombòlisi intravenosa amb activador de plasminogen de tipus tissular recombinant. Traç 45 (3), 912–913. doi: 10.1161/ strokeaha.113.002700

Sealy-Jefferson, S., Wing, JJ, Sanchez, BN, Brown, DL, Meurer, WJ, Smith, MA, et al. (2012). Diferències de sexe per edat i ètnia en el risc d'ictus. Gend Med. 9 (2), 121–128. doi: 10.1016/j.genm.2012.02.002

Shi, Z., Wu, Y., Zhu, Y., Cui, Wang, M., Yin, H., et al. (2019). Determinació quantitativa de betaïna, manitol, fructosa, glucosa i sacarosa a Cistanches Herba per HPLC-ELSD. Mod. Barbeta. Med. 32 (6), 1–11. doi: 10.13313/j.issn.1673-4890.20190320006

Singh, D., Reeta, KH, Sharma, U., Jagannathan, NR, Dinda, AK i Gupta, YK (2019). Efecte neuroprotector del fumarat de monometil sobre la lesió per isquèmia-reperfusió en rates: paper de la via Nrf2/HO1 a la regió peri-infart. Neuroquimia. Int. 126, 96–108. doi: 10.1016/j.neuint.2019.03.010

Siow, RC, Ishii, T. i Mann, GE (2007). Modulació de l'expressió gènica antioxidant per 4-hidroxinonenal: paper ateroprotector de la via de transcripció Nrf2/ARE. Redox Rep. 12 (1), 11–15. doi: 10.1179/ 135100007x162167

Suda, S., Katsura, K., Kanamaru, T., Saito, M. i Katayama, Y. (2013). L'àcid valproic atenua la lesió per isquèmia-reperfusió al cervell de rata mitjançant la inhibició de l'estrès oxidatiu i la inflamació. Eur. J. Pharmacol. 707 (1-3), 26–31. doi: 10.1016/j.ejphar.2013.03.020

Suzuki, T. i Yamamoto, M. (2015). Base molecular del sistema Keap1-Nrf2. Radic Lliure. Biol. Med. 88 (Pt B), 93–100. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2015.06.006

Tenreiro, MM, Ferreira, R., Bernardino, L. i Brito, MA (2016). Resposta cel·lular de la barrera hematoencefàlica a lesions: biomarcadors potencials i dianes terapèutiques per a la regeneració cerebral. Neurobiol. Dis. 91, 262–273. doi: 10.1016/j.nbd.2016.03.014

Thompson, JW, Narayanan, SV, Koronowski, KB, Morris-Blanco, K., Dave, KR i Perez-Pinzon, MA (2015). Vies de senyalització que condueixen a la neuroprotecció mitocondrial isquèmica. J. Bioenerg. Biomembre. 47 (1-2), 101–110. doi: 10.1007/s10863-014-9574-8

Wang, T., Zhang, X. i Xie, W. (2012). Cistanche deserticola YC Ma, "Desert ginseng": una revisió. Am. J. Chin. Med. 40 (6), 1123–1141. doi: 10.1142/s0192415x12500838

Wang, X., Wang, S., Wang, J., Guo, H., Dong, Z., Chai, L., et al. (2015). Efecte neuroprotector de xueshuantong per a injecció (liofilitzat) en el model d'isquèmia cerebral de rata transitòria i permanent. Altern de complement basat en Evid. Med. 2015, 134685. doi: 10.1155/2015/134685

Wang, D., Wang, H. i Gu, L. (2017). Les activitats antidepressives i de millora cognitiva de l'herba tradicional xinesa cistanche. Altern de complement basat en Evid. Med. 2017, 3925903. doi: 10.1155/2017/3925903

Wang, FJ, Wang, SX, Chai, LJ, Zhang, Y., Guo, H. i Hu, LM (2018). La injecció de Xueshuantong (liofilitzada) combinada amb la injecció liofilitzada salvianòlica protegeix contra lesions focals d'isquèmia/reperfusió cerebral en rates mitjançant l'atenuació de l'estrès oxidatiu. Acta Pharmacol. Sin. 39 (6), 998–1011. doi: 10.1038/aps.2017.128Wei, Y., Gong, J., Thimmulappa, RK, Kosmider, B., Biswal, S. i Duh, EJ (2013). Nrf2 actua de manera autònoma cel·lular a l'endoteli per regular la formació de cèl·lules de punta i la ramificació vascular. Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 110 (41), E3910–E3918. doi: 10.1073/pnas.1309276110

Xia, D., Zhang, Z. i Zhao, Y. (2018). L'acteòsid atenua l'estrès oxidatiu i l'apoptosi neuronal en rates amb lesió focal d'isquèmia-reperfusió cerebral. Biol. Farmàcia. Bou. 41 (11), 1645–1651. doi: 10.1248/bob.b18-00210

Xiong, W., MacColl Garfinkel, AE, Li, Y., Benowitz, LI i Cepko, CL (2015). NRF2 promou la supervivència neuronal en la neurodegeneració i el dany nerviós agut. J. Clin. Invertir. 125 (4), 1433–1445. doi: 10.1172/jci79735

Xu, HT, Zhang, CG, He, YQ, Shi, SS, Wang, YL i Chou, GX (2019). Els glucòsids feniletanoides de la Schnabelia centifolia (Benth.) PDCantino afavoreixen la proliferació d'osteoblasts. Fitoquímica 164, 111–121. doi: 10.1016/j.phytochem.2019.05.003

Ya, BL, Liu, Q., Li, HF, Cheng, HJ, Yu, T., Chen, L., et al. (2018). L'àcid úric protegeix contra l'estrès oxidatiu induït per la isquèmia/reperfusió cerebral focal mitjançant l'activació de Nrf2 i la regulació de l'expressió del factor neurotròfic. Òxid. Med. Cell Longev 2018, 6069150. doi: 10.1155/2018/6069150

Ye, ZY, Xing, HY, Wang, B., Liu, M. i Lv, PY (2019). El DL-3-ftàlid de butil protegeix la barrera hematoencefàlica contra lesions d'isquèmia/hipòxia mitjançant la regulació de les proteïnes de la unió estreta. Barbeta. Med. J. (anglès) 132 (11), 1344–1353. doi: 10,1097/cm9,0000000000000232

Yu, Q., Li, X. i Cao, X. (2016). Efectes cardioprotectors de l'extracte ric en glucòsids feniletanoides de Cistanche deserticola en l'infart de miocardi induït per isquèmia-reperfusió en rates. Ann. Vasc. Surg. 34, 234–242. doi: 10.1016/j.avsg.2016.04.002

Yu, N., Wang, Z., Chen, Y., Yang, J., Lu, X., Guo, Y., et al. (2017). L'efecte millorador de la punció de sang a la mà de dotze punts Jing-well sobre l'edema cerebral induït per la isquèmia cerebral mitjana permanent mitjançant la protecció de les unions estretes de la barrera hematoencefàlica. BMC Complement Altern. Med. 17 (1), 470. doi: 10.1186/s12906-017-1979-6

Yu, W., Gao, D., Jin, W., Liu, S. i Qi, S. (2018). El propofol prevé l'estrès oxidatiu disminuint l'acumulació isquèmica de succinat en la lesió focal d'isquèmia-reperfusió cerebral. Neuroquimia. Res. 43 (2), 420–429. doi: 10.1007/ s11064-017-2437-z

Yuen, CM, Chung, SY, Tsai, TH, Sung, PH, Huang, TH, Chen, YL, et al. (2015). L'ona de xoc extracorpòria atenua eficaçment el volum de l'infart cerebral i millora la funció neurològica de la rata després d'un ictus isquèmic agut. Am. J. Trad. Res. 7 (6), 976–994.

Zechariah, A., ElAli, A., Doeppner, TR, Jin, F., Hasan, MR, Helfrich, I., et al. (2013). El factor de creixement endotelial vascular afavoreix la cobertura dels pericits dels capil·lars cerebrals, millora el flux sanguini cerebral durant la isquèmia cerebral focal posterior i preserva la penombra metabòlica. Traç 44 (6), 1690–1697. doi: 10.1161/strokeaha.111.000240

Zhang, QY, Wang, ZJ, Sun, DM, Wang, Y., Xu, P., Wu, WJ, et al. (2017). Nous efectes terapèutics de la tinença sobre l'ictus isquèmic: nous mecanismes d'integritat de BBB. Òxid. Med. Cell Longev 2017, 7150376. doi: 10.1155/2017/7150376

Zhang, R., Xu, M., Wang, Y., Xie, F., Zhang, G. i Qin, X. (2017). Nrf2-un objectiu terapèutic prometedor per a la defensa contra l'estrès oxidatiu en l'ictus. Mol. Neurobiol. 54 (8), 6006–6017. doi: 10.1007/s12035-016-0111-0

Zhang, A., Yang, X., Li, Q., Yang, Y., Zhao, G., Wang, B., et al. (2018). Activitat immunoestimuladora de polisacàrids extraïbles amb aigua de Cistanche deserticola com a adjuvant vegetal in vitro i in vivo. PLoS One 13 (1), e0191356. doi: 10.1371/journal.pone.0191356

Zhang, Y., Wang, K., Chen, H., He, R., Cai, R., Li, J., et al. (2018). Lignans antiinflamatoris i glicòsids feniletanoides de l'arrel d'Isodon terricolous (D.Don) Kudo. Fitoquímica 153, 36–47. doi: 10.1016/ j.phytochem.2018.05.017

Zhang, K., Zhang, Q., Deng, J., Li, J., Li, J., Wen, L., et al. (2019). La via de senyalització ALK5 media la neurogènesi i la recuperació funcional després d'isquèmia / reperfusió cerebral en rates mitjançant Gadd45b. Mort cel·lular Dis. 10 (5), 360. doi: 10.1038/s41419-019-1596-z

Conflicte d'interessos:

Els autors declaren que la investigació es va dur a terme en absència de cap relació comercial o financera que es pugui interpretar com un potencial conflicte d'interessos.

L'editor de gestió va declarar una afiliació compartida, encara que no hi havia cap altra col·laboració, amb els autors KZ i YJ, en el moment de la revisió.

Copyright © 2020 Wang, Li, Tu, Chen, Zeng i Jiang. Aquest és un article d'accés obert distribuït sota els termes de la llicència de reconeixement de Creative Commons (CC BY). Es permet l'ús, la distribució o la reproducció en altres fòrums, sempre que s'acreditin l'autor o autors originals i els propietaris dels drets d'autor i es cite la publicació original d'aquesta revista, per pràctica acadèmica acceptada. No es permet cap ús, distribució o reproducció que no compleixi aquestes condicions.

For more information:1950477648nn@gmail.com