HRM UPLC-Q-Orbitrap HRMS combinats amb atracament molecular per investigar les bases materials del sabor amarg i la relació de sabor a Cistanchia desertica

Abstracte

 

Basat en cromatografia líquida d’ultra rendiment-quadrupol-electrostàtic de camp Orbitrap d’alta resolució d’espectrometria de masses (UPLC-Q-Orbitrap HRMs) i HRMs moleculars, les substàncies que presenten substàncies de cistancis de cistancis es van investigar per establir un fonament de recerca per a la desbordament i la correcció del gust i per investigar la seva relació amb la reacció amb l’eficàcia del gust amarga. En primer lloc, es va utilitzar HRMS UPLC-Q-Orbitrap per caracteritzar els constituents de C. deserticola, i es van identificar 69 components químics. L’atracament molecular d’aquests components químics amb el receptor del gust amarg va donar lloc a la cribratge de 20 substàncies de presentació amarga, incloent 6 glicòsids de feniletanol, 5 flavonoides, 3 àcids fenòlics, 2 terpenes de cicloalkenil, 2 alcaloides i 2 components més. Els extractes del mateix origen es van recollir del mateix lloc d’origen i es van investigar les substàncies de presentació amarga mitjançant atracament molecular. Altres components, nou lots de mostres fresques de C. deserticola es van recollir a partir de diferents mesos del mateix origen, dividits en diferents mesos i parts diferents, i el valor quantitatiu de l’amargor de les mostres es va determinar mitjançant el mètode de la llengua electrònica i els contents de sis components en les mostres (pineconotilòsids, tricoteceno glicosida, tubulina a, iso-Trichothecene Glycoside, Iso-Trichothecene, Glycoside, Iso-Trichothecene, Glycoside, Iso-Trichothecene, Iso-Trichothecen El jinshihuaoside i el jingnipinòsid) es van determinar mitjançant cromatografia líquida d’alt rendiment (HPLC) i es va determinar els glicòsids de feniletanol total en les mostres mitjançant el mètode espectrofotomètric uvvisible. Mètode fotomètric per determinar el contingut dels glicòsids feniletanol totals, els polisacàrids totals, els alcaloides totals, els flavonoides totals i els àcids fenòlics totals en les mostres, i es combinaran amb l’anàlisi de quimiometries sobre aquesta base i es verificaran per l’anàlisi de correlació de Pearson, l’anàlisi de correlació grisa i l’ortogona en les parcials de les places de quadres de l’amfitrió per verificar l’anàlisi de les components amargs per verificar per verificar l’anàlisi de les components amargades per verificar per verificar l’amfitrió de les parcials de les parcials de les parcials. C. Deserticola, que estaven d’acord amb els resultats de l’acobament molecular; i finalment, amb les substàncies que presenten amarg com a objecte de l’estudi.

Cistanchis Deserticola Extracte

 

Finalment, es va realitzar la predicció i anàlisi farmacològica de xarxa amb la substància amarga com a objectiu, i es va investigar la relació entre l'objectiu de la substància amarga i l'eficàcia amarga. Els resultats van mostrar que els objectius clau de la substància B Itter eren EGFR, PIK3CB i PTK2, i que la substància amarga podria exercir l'eficàcia amarga a través de l'accions sobre els objectius de malaltia rellevants, cosa que significa que la substància amarga de C. desert és la base material de l'eficàcia amarga. En conclusió, aquest estudi va demostrar que els glicòsids de feniletanol, principalment pinealòsids, mauritiana glicòsid i gibbe reellin, són la base materia "Eficàcia del gust" de la medicina tradicional xinesa en el futur. Les substàncies amargs de C. desert, tenen un sabor i un efecte amargs, que proporcionaran idees i referències per a la futura investigació sobre la relació entre el gust i l'efecte en la medicina tradicional xinesa

 

 

 

Paraules clau Cistanchis Deserticola Extracte; UPLC-Q-Orbitrap HRMS; Farmacologia de la xarxa; Docking molecular; llengua electrònica; substàncies amargues;Relació d’efecte saborós

 

CISTANCHE DESERCITICOLA YC MA.és un paràsit d’arrel perenne de la família Orobanchaceae, el gènere Cistanche, conegut comunament com a Desert Cistanche [1]. El clàssic d'herbes de Shennong afirma que Cistanche té un gust dolç i lleugerament càlid. Tot i això, en realitat té un sabor amarg persistent i lleuger després de ser pres. El "sabor" dels cinc sabors de la medicina tradicional xinesa es va determinar originalment a partir del gust real del medicament quan es va tastar, però perquè el gust del medicament està estretament relacionat amb el seu efecte, va evolucionar gradualment cap a explicar i resumir l'efecte del medicament per "sabor" [2]. Cistanche es registra en molts llibres mèdics antics clàssics. Té els efectes de nutrir el ronyó i reomplir essència, humitejar els intestins i alleujar el restrenyiment. Des de l’antiguitat, s’ha utilitzat per tractar malalties relacionades amb la deficiència de ronyó, incloent disfunció sexual, infertilitat femenina, pèrdua d’essència i sang, dolor de la cintura i genolls, intestins secs i restrenyiment, etc. [3]. L’amargor de la medicina tradicional xinesa és un dels cinc sabors de la teoria de la medicina tradicional xinesa i és una base teòrica important per guiar l’ús clínic de la medicina tradicional xinesa. L’amargor és un dels cinc sabors de la medicina tradicional xinesa. Les seves característiques són purgatives, assecades i ferms [4], i té un paper important en l’orientació clínica de la medicina tradicional xinesa. La majoria de medicaments tradicionals xinesos i preparacions de medicina tradicional xinesa tenen un sabor amarg. La medicina tradicional xinesa creu que les substàncies aromatitzants amargues (en endavant, es coneixen substàncies amargues) en medicaments amargs són les substàncies efectives [5]. Tanmateix, la relació entre substàncies amargs en medicaments tradicionals xinesos i la seva eficàcia amarga encara no està clara. Encara hi ha una investigació científica rellevant sobre si les substàncies amargues en els medicaments tradicionals amargs tenen eficàcia amarga. Cistanche conté una gran varietat de components químics, principalment feniletanol glicòsids, terpenes èters ciclopentà, lignans i els seus glicòsids, sucres, etc. A més, també conté flavonoides, àcids fenòlics, alcaloides, olis volàtils, aminoàcids, en elements de traces i altres components [6]. Entre ells, es considera que els compostos de feniletanol glicòsid són els principals components efectius de Cistanche [7]. Cishanche Deserticola té dues temporades de recol·lecció: la primavera i la tardor. Els estudis han demostrat que el contingut de polisacàrids de la primavera cistanche desertaticola és baix, el contingut de glicòsid de feniletanol és elevat i el gust és amarg, però la seva capacitat antioxidant és forta [8]. Es pot veure que els seus components amargs tenen una certa correlació amb l'eficàcia del fàrmac, però la base material del gust amarg de la cistanche deserticola encara no està clara, cosa que pot limitar el seu desenvolupament més.

Per tal d’explorar la base de substància amarga deCishanche DeserticolaI la seva relació amb l’eficàcia amarga (relació d’efecte saborós), aquest estudi va prendre l’extracte de Cistanche Deserticola com a objecte d’investigació, i va analitzar les substàncies amargs de la cistanche desertarticola mitjançant cromatografia líquida de rendiment ultra-alt-cromatografia-quadrupole-quadrupole-electrostatic Field Spectrometry Mass Spectrometry (UPLC-q-Orbrap HRMS) i Molecular Mass Mass; El contingut dels principals components medicinals amargs es va determinar perCromatografia líquida d’alt rendiment (HPLC), i el contingut de cada categoria important de substàncies amargues es va determinar mitjançant espectrofotometria visible per UV. El grau d’amargor es va avaluar mitjançant llengua electrònica i els components amargs es van trobar en combinació amb quimiometrics; i la tecnologia de farmacologia de xarxa es va utilitzar per realitzar la via KEGG i l’anàlisi d’enriquiment sobre els objectius de substàncies amargs en la medicina tradicional xinesa, i els objectius de substàncies amargs es van correlacionar amb els objectius de la seva eficàcia amarga, per tal d’explorar la relació entre substàncies amargues i eficàcia amarga en la medicina tradicional xinesa. Les idees de recerca es mostren a la figura 1. Aquest estudi va fer un ús complet dels mètodes de recerca tecnològica modernes per explorar la informació del gust de Cistanche Deserticola, revelant la seva base de materials amargs i la seva relació amb efecte gustós. S’espera que proporcioni una referència per a l’anàlisi científica de la base material del gust de la medicina tradicional xinesa i que proporcioni una base per al desenvolupament i la utilització precisos i precisos dels recursos de cistanche deserticola, fent que la teoria de cinc sabors sigui més clara, més objectiva i estandarditzada, explicant científicament la connotació científica de la teoria de l’amargor i proporcionant idees de recerca i referències per a explorar la relació veritable i el sabor de la relació tradicional de la moda i el sabor.

 

 

Fig. 1 Ruta d’estudi sobre la relació entre substàncies que presenten amargs i eficàcia amarga dels extractes de cistanche deserticola

 

1 materials

1.1 Materials medicinals

Li Mingjie es van recollir mostres de Fresh Cishanche Deserticola a Aksu, Xinjiang, de desembre de 2023. Les mostres van ser identificades per Li Mingjie, un farmacèutic de l'Hospital del Poble del Comtat de Shaya, com a tiges de carn seca amb les fulles d'escala de cistanche desertola, una planta del gènere Cishanche a la família OrobancheAceae. Els exemplars de vals es van emmagatzemar al Laboratori de Recerca en Farmàcia de la Xinjiang Medical University. Les mostres es van netejar d’impureses, tallades fresques i blanquejades en aigua durant 5 min segons la literatura, i després es van processar, assecar -se a 60 graus, aixafades i tamisades a través d’un tamís de malla 40-, vegeu Taula 1.

 

Mostres de taula Informació de Cishanche Deserticola

 

Número	Codi	Temps de recollida	Pretractament abans d’assecar -se	Lloc de detecció
1	M1	2023-04-10	Sencer - llesques de plantes	Tota la planta
2	M2	2023-05-08	Sencer - llesques de plantes	Tota la planta
3	M3	2023-06-15	Sencer - llesques de plantes	Tota la planta
4	M4	2023-07-10	Sencer - llesques de plantes	Tota la planta
5	M5	2023-08-11	Sencer - llesques de plantes	Tota la planta
6	M6	2023-09-10	Sencer - llesques de plantes	Tota la planta
7	M7	2023-10-09	Sencer - llesques de plantes	Tota la planta
8	M8	2023-11-14	Sencer - llesques de plantes	Tota la planta
9	M9	2023-12-10	Sencer - llesques de plantes	Tota la planta
10	P1	2023-08-11	Secció: llesques específiques	Epidermis superior
11	P2	2023-08-11	Secció: llesques específiques	Còrtex superior
12	P3	2023-08-11	Secció: llesques específiques	Pit superior
13	P4	2023-08-11	Secció: llesques específiques	Epidermis mitjana
14	P5	2023-08-11	Secció: llesques específiques	Còrtex mitjà
15	P6	2023-08-11	Secció: llesques específiques	Pit del mig
16	P7	2023-08-11	Secció: llesques específiques	Epidermis inferior
17	P8	2023-08-11	Secció: llesques específiques	Còrtex inferior
18	P9	2023-08-11	Secció: llesques específiques	Pit inferior

 

1.2 Bases de dades i programari

TCMSP (https://tcmspw.com/tcmsp.php), Genecards (https://www.genecards.org), omim (https://www.omim.org), uniprot (https://www.uniprot.org), pdb), PDB (http://www.rcsb.org), String (https://string-db.org), pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/), David (https://david.ncifcrf.gov/), Alphafold Structure Database Database (https://alphafold.ebi.ac.uk/), alphafold2 i autodockvina (https://alphafold.ebi.ac.uk/) es van utilitzar per a l’abocament molecular. IBM SPSS Statistis 25 es va utilitzar per a l'anàlisi de Pearson. Programari: L’anàlisi de l’associació gris es va realitzar mitjançant el lloc web en línia SPSSPRO (https://www.spspro.com), es va realitzar una anàlisi parcial de quadrats ortogonals (OPLS-DA) mitjançant el programari SIMCA14.1 i l’anàlisi de farmacologia de xarxa mitjançant programari Cytoscape.

 

1.3 Instruments i reactius

Cromatògraf líquid de Vanquish Ultra-High Performance, Orbitrap Exploris 120 Espectròmetre de masses d’alta resolució (Thermofisher Scientific, EUA); Sa -402 b llengua electrònica (insent, Japó); LC -20 un cromatògraf líquid d’alt rendiment (Shimadzu, Japó); Espectrofotòmetre visible per UV (Shanghai Youke Instrument Co., Ltd.); AUW2200 Balanç electrònic (fàbrica de Shimadzu Filipines); Netejador d’ultrasons SK250 (Shanghai Kedao Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); DHG -9246 Un forn d'assecat de temperatura constant de temperatura elèctrica (Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.); Plusel+Chorusl Ultrapure Water Instrument (Veolia, França).
Les substàncies de referència echinacòsid (puresa superior o igual al 98%, nombre de lot PCL-#-A003), verbascosida (puresa superior o igual al 98%, nombre de lot PCL-#-M235), tubulòsid A (puresa superior o igual al 99%, nombre de blat de boca PCL-#-T003), Scutellarin (puresa més gran que o igual a 99%, nombre de bota PCL-#-D005), i Isovatrascoside (puresa superior o igual al 98%, el número de lot PCL-#-I236) es van comprar a Sichuan Puxi'ao Standard Material Technology Co., Ltd.; Les substàncies de referència genipòsid (puresa superior o igual al 98%, nombre de lot WP23120502), rutina (puresa superior o igual al 98%, nombre de lot WP32110405), àcid galic (puresa superior o igual al 98%, nombre de lots WP32140706) i betaine (puresa més gran que o igual al 98%, nombre de batch WP33654874) es van comprar a Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.; La sal de reinstein, la glucosa anhidra (grau analític), l’acetonitril, el metanol (grau cromatogràfic) i l’àcid fosfòric es van comprar a Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.