Un règim heteròleg d'amortiment AZD1222 i de reforç de BNT162b2 provoca anticossos neutralitzadors de manera més eficient, però no cèl·lules T de memòria, que el règim homòleg BNT162b2

abstracte

Antecedents: es necessiten anàlisis comparatives de les respostes immunitàries específiques del SARS-CoV-2- provocades per diversos règims d'impuls primari per establir règims eficients per al control de COVID-19. Mètode: en aquest estudi de cohort observacional prospectiu, immunoglobulina G (IgG) específica d'espiga i anticossos neutralitzants (nAbs) al costat de respostes de cèl·lules T específiques d'espiga en grups d'edat de vacunació homòleg BNT162b2/BNT162b2 o AZD1222/AZD1222/AZD1222/heteròleg. Es va avaluar la vacunació BNT162b2 i la infecció/vacunació prèvia per SARS-CoV-2 de tipus salvatge. Resultats: Les respostes immunitàries màximes es van aconseguir després de la segona dosi de vacuna en els grups vacunats naïf i després de la primera dosi en el grup d'infecció/vacunació anterior. Els títols màxims d'IgG i nAb anti-espiga van ser significativament més alts en els grups de vacunació AZD1222/BNT162b2 i d'infecció/vacunació prèvia que en els grups BNT162b2/BNT162b2 o AZD1222/AZD1222. Tanmateix, la freqüència de les cèl·lules CD4 més T que produeixen interferó c va ser més alta al grup de vacunació BNT162b2/BNT162b2. Es van observar resultats similars en l'anàlisi de cèl·lules T polifuncionals. Quan es van analitzar les respostes de nAb i CD4 més les cèl·lules T contra la variant Delta, el grup d'infecció/vacunació anterior va mostrar respostes més altes que els grups d'altres règims de vacunació homòlegs o heteròlegs. Conclusió: els nAb s'obtenen de manera eficient mitjançant la vacunació heteròloga AZD1222/BNT162b2, així com la infecció/vacunació prèvia, mentre que les respostes de cèl·lules T CD4 més específiques d'espiga s'obtenen de manera eficient mitjançant la vacunació homòloga BNT162b2. La immunitat de reconeixement de variants es genera de manera més eficient per la infecció/vacunació prèvia que els altres règims de vacunació homòlegs o heteròlegs.

cistanche tubulosa: millora el sistema immunitari

1. Introducció

El coronavirus 2 de la síndrome respiratòria aguda severa (SARS-CoV-2) s'ha estès a nivell mundial des de la seva aparició el desembre de 2019 i s'ha accelerat el desenvolupament de vacunes efectives contra la malaltia del coronavirus 2019 (COVID-19) [1]. ]. L'èxit de l'esforç es va veure amb relativa rapidesa, i diverses vacunes que utilitzen proteïna d'espiga (S) com a antigen de la vacuna van demostrar amb èxit la seguretat i l'eficiència en la prevenció de COVID simptomàtic-19. Concretament, la vacuna basada en ARNm BNT162b2 (Comirnaty, Pfifizer-BioNTech) i la vacuna basada en vectors d'adenovirus AZD1222 (Vaxzevria, AstraZeneca) es van aprovar inicialment i es van administrar àmpliament com a règim de reforç de dues dosis. Dues dosis de BNT162b2 tenien un 95 per cent (interval de confiança [IC] del 95 per cent, 90-98 per cent) d'eficàcia contra la COVID--19 [2] simptomàtica, i dues dosis d'AZD1222 tenien un 70 per cent (IC del 95 per cent, 55-81). percentatge) eficàcia [3]. Curiosament, els règims de reforç heteròlegs de vacunes COVID-19 autoritzades van guanyar un interès substancial i es van començar posteriorment a diversos països malgrat les dades insuficients sobre la immunogenicitat i la seguretat. BNT162b2 donat com a dosi de reforç en individus vacunats amb AZD1222 va induir títols d'anticossos (Ab) d'immunoglobulina G (IgG) sòlids, respostes d'anticossos neutralitzants (nAb) i cèl·lules T d'interferó-c plus (IFN-c plus) [4] ,5]. Tanmateix, pocs estudis han avaluat l'eficàcia de la vacunació heteròloga AZD1222/BNT162b2 en comparació amb la vacunació homòloga BNT162b2/BNT162b2 [6–8], i aquests estudis no tenien una avaluació exhaustiva de les respostes de cèl·lules T específiques de S. En conseqüència, encara no està clar si la vacunació heteròloga AZD1222/BNT162b2 dóna com a resultat respostes de nAb o cèl·lules T amb variants creuades potents. Es pot observar un altre exemple d'impuls de cebament heteròleg en individus que havien estat infectats amb SARS-CoV-2 i després vacunats contra el virus. Diversos estudis van suggerir que es detecten nivells d'Ab i nAb d'unió específica en nivells elevats en individus amb infecció i vacunació anteriors, tot i que no hi va haver anàlisis comparatives [9,10]. Els treballadors sanitaris amb infecció prèvia per SARS-CoV-2 tenen títols Ab més alts en resposta a una sola dosi de vacuna d'ARNm que els que no estaven infectats anteriorment [11]. A més, els individus amb infecció prèvia mostren respostes millorades de cèl·lules T específiques de S i respostes de cèl·lules B de memòria que secreten Ab després de la dosi principal sense la dosi de reforç [12]. En el present estudi, vam examinar exhaustivament la immunogenicitat humoral i cel·lular dels règims d'impuls primari homòlegs i heteròlegs en una cohort observacional prospectiva amb comparacions paral·leles d'Ab, nAb d'unió específica de S i respostes de cèl·lules T CD4 més específiques. . També vam avaluar els resultats immunològics dels participants que havien estat infectats amb SARS-CoV-2 salvatge i van rebre vacunes COVID{-19 per determinar si la infecció i la vacunació anteriors provoquen de manera eficient respostes immunes contra la variant Delta.

Beneficis de cistanche per a homes enforteixen el sistema immunitari

2. Mètodes

2.1. Estudiar disseny

El març de 2021 es va establir una cohort prospectiva multicèntrica per estudiar les respostes immunitàries a la vacunació contra la COVID-19. Els participants d'aquesta cohort van ser reclutats voluntàriament entre els treballadors sanitaris i inicialment es va programar per rebre dues dosis de BNT162b2 a un interval de 3-setmanes o AZD1222 a un interval de 12-setmanes. Tanmateix, una part dels individus vacunats amb AZD1222 van rebre la dosi de reforç de BNT162b2 entre maig i juny de 2021 i es van incloure al grup de vacunació AZD1222/BNT162b2. Entre els participants de la cohort, els que tenien una infecció prèvia per SARSCoV-2 de tipus salvatge i van rebre BNT162b2 o AZD1222 com a grup d'infecció/vacunació prèvia. Tots els receptors de la vacuna analitzats en aquest estudi eren equiparats per edat entre els grups. Es van recollir mostres de sang perifèrica de tots els participants de la cohort en cada moment (T): abans i 3 setmanes després de la 1a dosi de vacuna (T1 i T2, respectivament), 5 setmanes després de la 1a dosi de BNT162b2 o 11 setmanes després de la 1a dosi. dosi AZD1222 (T3) i 14 setmanes després de la 1a dosi de vacuna (T4). A la figura 1 es proporciona una representació esquemàtica del protocol d'estudi. Per a la comparació, es van obtenir mostres convalescents de pacients no vacunats infectats amb SARSCoV-2 variant Delta confirmada per reacció en cadena de la polimerasa de transcripció inversa en temps real mitjançant Seegene Allplex { {38}}Kit d'assaig nCoV (Seegene, Corea) i kit de seqüenciació del genoma complet Illumina BTSeq SARS-CoV-2 (Celemics Inc, Corea) en un seqüenciador MiSeq (mode d'extrem aparellat 150-bp; Illumina, San Diego, CA, EUA). La seqüència base obtinguda mitjançant BTseq es va comparar amb la seqüència de referència NCBI NC_045512.2 mitjançant el programari IGV 2.10 per confirmar la variant Delta. L'estudi va ser aprovat pels comitès de revisió institucional de cada institut participant i es va dur a terme d'acord amb els principis de la Declaració d'Hèlsinki. Tots els participants van proporcionar el consentiment informat per escrit abans de la inscripció.

2.2. Participants de l'estudi

Aquesta cohort estava formada per 22 participants que van rebre la vacunació homòloga BNT162b2/BNT162b2 (edat mitjana, 38,0 anys; 31,8% homes), 20 participants que van rebre la vacunació homòloga AZD1222/AZD1222 (edat mitjana, 39,7%; homes) 23. , i 9 participants que van rebre la vacuna heteròloga AZD1222/BNT162b2 (edat mitjana, 38,2 anys; 33,3% homes). Dels 11 participants amb infecció prèvia per SARS-CoV-2 de tipus salvatge (edat mitjana, 38,5 anys; 27,3 per cent d'homes), 2 i 9 van ser vacunats amb BNT162b2/BNT162b2 i AZD1222/AZD1222, respectivament. Les dades demogràfiques dels diferents grups vacunats es mostren a la taula complementària 2. Tots els participants amb infecció prèvia per SARS-CoV-2 de tipus salvatge van experimentar COVID-19 asimptomàtic o lleu, i 3 d'ells tenien pneumònia. El temps mitjà des de la confirmació de la COVID-19 fins a la primera vacunació va ser de 121,5 (rang interquartil [IQR], 102,3–252,5) dies. Les dades demogràfiques dels participants amb infecció i vacunació prèvia per SARS-CoV-2 de tipus salvatge es proporcionen a la taula suplementària 1. Es van obtenir mostres de convalescents de 17 pacients (edat mitjana, 53 anys; 52,9% homes) infectats amb el SARS. -CoV-2 Variant Delta i hospitalitzat per COVID-19 moderat a crític (moderat, 17,6 per cent; greu, 35,3 per cent; malalt crític, 47,1 per cent). El temps mitjà des de l'aparició dels símptomes relacionats amb la COVID{70}} fins al mostreig va ser de 24 (IQR, 22-32) dies. Les dades demogràfiques dels participants convalescents del SARS-CoV-2 Delta es proporcionen a la taula suplementària 2 i a la taula 3.

2.3. Anticossos d'unió

Els Abs d'unió específic de SARS-CoV-2 S es van analitzar mitjançant un immunoassaig comercial. El test de proteïna anti-S Elecsys (Roche Diagnostics, Alemanya) és un immunoassaig d'electroquimioluminescència que s'utilitza per detectar anticossos específics de SARS-CoV-2 S a l'analitzador Cobas e411 (Roche Diagnostics, Alemanya), amb un rang de mesura de -2 {8}}.4 U/ml a 250 U/ml (fins a 2500 U/ml amb una dilució 1:10 integrada i fins a 12.500 U/ml amb una dilució 1:50 integrada). El domini d'unió al receptor recombinant de la proteïna S es va utilitzar amb un principi sandvitx de doble antigen. Els antígens del reactiu capturen predominantment IgG anti-SARSCoV-2. El test de proteïnes anti-nucleocàpsida Elecsys (Roche Diagnostics, Alemanya) es va utilitzar per detectar infeccions anteriors per SARS-CoV-2, amb un índex de tall d'1,0.

Beneficis del suplement de cistanche: augmenta la immunitat

2.4. Assaig de neutralització de reducció de plaques

Assajos de neutralització de reducció de plaques per a virus SARS-CoV- 2 de tipus salvatge (BetaCoV/Korea/KCDC03/2020) i la soca variant Delta YS117 (número d'accés GenBank MZ798798 i número d'accés GISAID EPI{{ {8}}ISL_3411836) es van realitzar mitjançant mostres de plasma. El virus es va cultivar en cèl·lules Vero E6 en un laboratori de nivell 3 de bioseguretat del Centre d'Investigació Biomèdica d'Avison a Seül, Corea. Les mostres de plasma inactivat (135 ll) de mostres de plasma inactivades es van diluir 2- vegades en sèrie (1:40 a 1:1280) i es van afegir a un volum igual de 100 vegades la dosi infecciosa de cultiu de teixits del 50 per cent (TCID50) de la virus. Els aïllats que contenien 100 vegades el TCID50 es van incubar en plaques de 96-pous durant 60 min a 37 °C. Les mescles de virus-plasma es van incubar durant 60 min a 37 °C en una incubadora de CO2. A continuació, les barreges de virus i plasma es van afegir a cèl·lules Vero E6 sembrades en una placa de 24-pou amb 1 x 105 cèl·lules/pou i es van incubar durant 1 h a 37 °C. Mitjans de superposició composts per un 2% de sèrum fetal boví (FBS) en DMEM i es va afegir agar a l'1 per cent a les cèl·lules E6 i es va incubar durant 3 dies a 37ºC en una incubadora de CO2. Després de formar una placa, es van utilitzar una solució de formaldehid al 10 per cent i un 0, 33 per cent de vermell neutre en solució salina tamponada amb fosfat (PBS) per fixar i tenyir la capa de cultiu cel·lular. La dilució neutralitzant de cada mostra es va determinar identificant el pou amb la dilució plasmàtica més alta sense un efecte citopàtic observable. Les dosis de neutralització del 50% (ND50) es van expressar com la dilució recíproca del plasma, que va donar lloc a una reducció del 50% del nombre de plaques en comparació amb el control positiu del virus. Es va utilitzar el mètode Spearman-Kärber per calcular els títols ND50. En comparació amb els sèrums estàndard internacionals de l'OMS (NIBSC 20–136; títol de nAb: 1000 UI/mL), els títols de nAb es van convertir en unitats internacionals per mil·lilitre (IU/mL).

Fig. 1. Representació esquemàtica de les cohorts de receptors de la vacuna. Esquema d'estudi per a la detecció d'anticossos d'unió específiques del SARS-CoV-2, anticossos neutralitzants i respostes de cèl·lules T en mostres de sang perifèrica d'individus vacunats per COVID-19. L'estudi inclou BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n=9) i SARS-CoV de tipus salvatge anterior{{20 }} grups d'infecció/vacunació (n=11). Entre la infecció/vacunació prèvia per SARS-CoV-2 de tipus salvatge, 2 i 9 es van vacunar amb BNT162b2/BNT162b2 i AZD1222/AZD1222, respectivament. La història d'infecció per SARS-CoV-2 es va confirmar mitjançant una prova positiva d'anticossos anti-SARS-CoV-2 nucleocàpsida. T, punt temporal; setmanes, setmanes.

2.5. Assajos de cèl·lules T

Les cèl·lules mononuclears de sang perifèrica (PBMC) es van aïllar mitjançant centrifugació de gradient de densitat mitjançant tubs Leucosep (Greiner Bio-One) que contenien medi de separació de limfòcits. Després de la centrifugació a 800 g durant 15 min amb la frenada, es va recollir la fracció cel·lular enriquida que consta de PBMC i es va rentar amb 20 ml de PBS. Després de la centrifugació a 300 g durant 10 min, el pellet cel·lular es va tornar a suspendre en 10 ml de PBS per comptar. Després de la centrifugació a 300 g durant 10 min, les cèl·lules es van criopreservar en FBS amb un 10 per cent de sulfòxid de dimetil a 180 ºC fins al seu ús. Per a la tinció intracel·lular de citocines (ICS) d'IFN-c, interleucina-2 (IL{-2) i factor de necrosi tumoral (TNF), hem utilitzat conjunts de pèptids de pèptids 15-mer superposats per 11 aminoàcids que cobreixen les parts immunodominants de la proteïna S SARS-CoV-2 Wuhan (aa 304–338, 421–475, 492–519, 683–707, 741–770, 785–802 i 885–1273; Miltenyi; Biotec). Per comparar les respostes de les cèl·lules T amb les soques Wuhan i Delta, hem utilitzat dos conjunts diferents de grups de pèptids S que comprenen regions no conservades de seqüències S entre les soques Wuhan i Delta (llinatge B.1.617.2) (Miltenyi Biotec). Després de descongelar les PBMC i reposar-les durant la nit, es van estimular les 1  106 PBMC amb agrupacions de pèptids a una concentració final d'1 mg/mL i CD28/CD49d antihumà (1 mg/mL; BD Biosciences) durant 1 h en un { {45}}Placa de pous en medi RPMI-1640 que conté un 1% de penicil·lina-estreptomicina, 2 mM de L-glutamina i un 10% de FBS. El cultiu de PBMC es va incubar durant 5 hores més després de l'addició de brefeldina A i monensina (BD Biosciences) a 37 °C en un 5% de CO2. Després de l'estimulació, les cèl·lules es van rentar amb PBS i es van tenyir amb Live/Dead-Aqua (Invitrogen) durant 20 min a temperatura ambient, seguit d'un còctel d'abs superficials durant 20 min a temperatura ambient, inclòs anti-CD14- BV510, anti-CD19-BV510, anti-CD4- BV650, anti-CD{3-BV786 i anti-CD{8-APC-Cy7 (BD Bioscience). Les cèl·lules es van fixar i permeabilitzar mitjançant un conjunt de tampons de tinció de factor de transcripció Foxp3 (eBioscience) i després es van tenyir amb un còctel d'Abs intracel·lulars, inclosos anti-TNF-FITC, anti-IL-2-PE (eBioscience) i anti- IFN-c-APC (BD Biosciences) durant 20 min a temperatura ambient. Un cop finalitzada la tinció, les cèl·lules es van analitzar en un instrument LSR II amb FACSDiva (BD Biosciences) i les dades es van analitzar al programari FlowJo (FlowJo LLC).

planta de cistanche per augmentar el sistema immunitari

2.6. Anàlisi estadística

Les dades representades a escala lineal es van expressar com a mitjana ± desviació estàndard. Les dades representades en escales logarítmiques es van expressar com a mitjana geomètrica ± desviació estàndard geomètrica. Es van aplicar les proves Mann-Whitney U o Wilcoxon per a comparacions no aparellades o aparellades, respectivament. Les anàlisis estadístiques van ser {{{0}}a cua, amb P <0,05 considerat significatiu. Totes les anàlisis es van realitzar a R studio o GraphPad Prism v9.0.

3. Resultats

3.1. Cinètica de les respostes immunitàries provocades per diferents règims de vacunació

Primer, vam examinar els títols d'IgG anti-S després de la vacunació amb diferents règims. Com era d'esperar, la primera dosi va augmentar significativament els títols d'IgG anti-S (T2) i la segona dosi va augmentar encara més els títols d'IgG anti-S en la vacunació homòloga BNT162b2/BNT162b2 (T3) i AZD1222/AZD1222 (T4) i AZD1222/ heteròleg. Grups de vacunació BNT162b2 (T4) (Fig. 2A). En el grup d'infecció/vacunació anterior, la primera dosi va augmentar al màxim els títols d'IgG anti-S (T3), però la segona dosi no va augmentar encara més els títols d'IgG anti-S (T4). També es van examinar les respostes de cèl·lules T CD4 més específiques de S després de l'estimulació directa ex vivo amb agrupacions de pèptids que cobreixen la seqüència de proteïnes S de tipus salvatge de SARSCoV-2 Wuhan. D'acord amb l'ICS, la primera dosi va augmentar significativament la freqüència de les cèl·lules productores d'IFN-c entre les cèl·lules CD4 més T, i la segona dosi va augmentar encara més significativament la freqüència en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2 (T3) i AZD1222/BNT162b2 (T4). (Fig. 2B). Als grups d'AZD1222/AZD1222 i d'infecció/vacunació anteriors, la primera dosi va augmentar significativament la freqüència de les cèl·lules IFN-c més entre les cèl·lules CD4 més T, però la segona dosi no va augmentar encara més la freqüència.

3.2. Comparació dels títols d'Ab entre diferents règims

A continuació, vam comparar els títols màxims d'unió Ab entre els diferents règims de vacunació. Com a títols màxims, vam seleccionar títols anti-S IgG després de la segona dosi en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 i AZD1222/BNT162b2 i després de la primera dosi en el grup d'infecció/vacunació anterior. Els títols màxims d'IgG anti-S van ser significativament més alts en el grup de vacunació AZD1222/BNT162b2 que en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2 o AZD1222/AZD1222 (Fig. 3A). De la mateixa manera, els títols màxims d'IgG anti-S van ser significativament més alts en el grup d'infecció/vacunació anterior que en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2 o AZD1222/AZD1222. No hi va haver cap diferència en els títols d'IgG anti-S entre els grups d'AZD1222/BNT162b2 i d'infecció prèvia/vacunació. També es van avaluar els títols de nAb en els moments màxims: després de la segona dosi en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 i AZD1222/BNT162b2 i després de la primera dosi en el grup d'infecció/vacunació anterior. Notablement, els títols de nAb van ser significativament més alts en el grup de vacunació AZD1222/BNT162b2 que en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2 o AZD1222/AZD1222 (Fig. 3B). A més, els títols de nAb van ser significativament més alts en el grup d'infecció/vacunació anterior que en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2 o AZD1222/AZD1222. No hi va haver cap diferència en els títols de nAb entre els grups AZD1222/BNT162b2 i els grups d'infecció/vacunació anteriors. El nivell de resposta humoral provocada pels diversos règims de vacunació es va classificar en responents forts, moderats i cap/febles segons la classificació percentil. La proporció de respostes fortes va ser més alta en el grup d'infecció/vacunació prèvia, seguit del grup de vacunació AZD1222/BNT162b2 pel que fa a l'anàlisi d'IgG anti-S (Fig. 3C) i nAb (Fig. 3D). En conjunt, aquests resultats indiquen que el cebament i l'impuls heteròleg, que inclou tant la vacunació AZD1222/BNT162b2 com la infecció/vacunació prèvia, és més eficient en la generació de respostes humorals que el cebament i l'impuls homòleg.

3.3. Comparació de respostes de cèl·lules T CD4 més específiques de S entre diferents règims

També es van comparar les respostes de cèl·lules CD4 més T específiques entre els diferents règims de vacunació en els moments màxims: després de la segona dosi en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 i AZD1222/BNT162b2 i després de la primera dosi en els grups de vacunació anteriors. grup d'infecció/vacunació. A diferència dels títols anti-S IgG i nAb, la freqüència de les cèl·lules IFN-c més entre les cèl·lules CD4 més T va ser més alta en el grup de vacunació BNT162b2/BNT162b2 (Fig. 4A). La proporció de respostes fortes també va ser més alta en el grup de vacunació BNT162b2/BNT162b2, seguit del grup d'infecció/vacunació prèvia (Fig. 4B). Aquests resultats mostren que la immunització amb el segon impuls homòleg de BNT162b2 provoca respostes de cèl·lules T de memòria de manera més eficient que la segona vacunació heteròloga o la vacunació de la primera dosi després de la infecció natural per SARS-CoV-2. Per contra, els règims d'impuls primari heteròlegs tenen més probabilitats de desenvolupar nivells més alts de respostes immunitàries humorals. També es va analitzar la freqüència relativa de cèl·lules CD4 més T polifuncionals que produeixen simultàniament múltiples citocines (és a dir, IFN-c, IL-2 i/o TNF). El grup de vacunació BNT162b2/BNT162b2 va mostrar freqüències significativament més altes de cèl·lules polifuncionals produint 2 citocines entre cèl·lules CD4 més T específiques de S que els grups de vacunació AZD1222/AZD1222 o AZD1222/BNT162b2 (Fig. 4C). No hi va haver cap diferència en la freqüència entre la vacunació BNT162b2/BNT162b2 i els grups d'infecció/vacunació anteriors. La freqüència de cèl·lules polifuncionals va ser significativament més alta en el grup de vacunació AZD1222/BNT162b2 que en el grup de vacunació AZD1222/AZD1222. Els gràfics circulars que representen cèl·lules CD4 més T positives simples, dobles i triples en termes de producció de citocines que responen a conjunts de pèptids superposats S també van indicar una freqüència relativament alta de cèl·lules dobles o triples positives a la vacunació BNT162b2/BNT162b2 i anteriors. infecció/- grups de vacunació (Fig. 4D).

3.4. Respostes immunitàries contra la variant Delta entre diferents règims

Finalment, vam analitzar les respostes immunitàries contra la variant Delta. En aquesta anàlisi, hem inclòs individus convalescents que es van recuperar de la infecció de SARS-CoV-2 Delta per comparar-los. Els títols de nAb específics de la variant Delta eren significativament més alts en el grup d'infecció/vacunació anterior que en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 o AZD1222/BNT162b2, i eren fins i tot més alts que els dels individus convalescents de Delta. . També vam examinar les respostes de cèl·lules T CD4 més contra la proteïna S de la variant Delta. En aquesta anàlisi, vam realitzar ICS d'IFN-c després de l'estimulació directa ex vivo utilitzant dos conjunts diferents de grups de pèptids S que comprenien regions no conservades de seqüències S entre les soques Wuhan i Delta i vam calcular la proporció de la freqüència de l'IFN-c més específic de Delta. cèl·lules a la freqüència de les cèl·lules IFN-c més específiques de Wuhan S. Com era d'esperar, la proporció va ser més alta en els individus convalescents del Delta. Curiosament, la proporció era més alta en el grup d'infecció/vacunació anterior que en el grup de vacunació BNT162b2/BNT162b2 (Fig. 5B), tot i que les respostes de cèl·lules T específiques de Wuhan S CD4 més eren més altes en el grup de vacunació BNT162b2/BNT162b2 (Fig. 4A). En conjunt, aquests resultats indiquen que nAb i CD4 més les respostes de cèl·lules T que reconeixen la variant Delta es generen de manera més eficient per infecció/vacunació prèvia que els règims de vacunació homòlegs o heteròlegs.

Fig. 2. Respostes d'anticossos i cèl·lules T provocades per diversos règims de primer impuls. Respostes immunes longitudinals segons el calendari de mostreig des de la prevacunació fins a les 14 setmanes posteriors a la primera vacunació. (A) Es van mesurar anticossos d'unió específics d'espiga SARS-CoV-2 a BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n {{{ 20}}) i grups d'infecció/vacunació prèvia (n=6). (B) Les respostes de les cèl·lules T CD4 més específiques del SARS-CoV-2 es van mesurar a BNT162b2/BNT162b2 (n=19), AZD1222/AZD1222 (n=18), AZD1222/BNT162b2 (n=9) i grups d'infecció/vacunació prèvia (n=7). Les dades es presenten com a mitjana geomètrica ± SD geomètrica (A) o mitjana ± SD (B). Les anàlisis estadístiques entre punts de temps dins de cada grup es van realitzar mitjançant la prova de rang signat de Wilcoxon. ns, no significatiu; *P <0.05, **P <0,01, ***P <0,001, ****P <0,0001.

Fig. 3. Respostes immunes humorals en els moments màxims. (A) Es van comparar anticossos d'unió específics per a pics SARS-CoV-2 entre BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/ AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n {{{ 15}}) i grups d'infecció/vacunació prèvia (n=6) en els moments punta. (B) Els anticossos neutralitzants es van comparar entre BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n=9) i la infecció/vacunació prèvia ( n=11) grups en els punts de màxima hora. Els punts de temps màxim es van seleccionar de la següent manera: després de la segona dosi en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 i AZD1222/BNT162b2 i després de la primera dosi en el grup d'infecció/vacunació anterior. Les dades es presenten com a mitjana geomètrica ± SD geomètrica i s'analitzen per a la seva importància mitjançant la prova de Mann-Whitney. (C i D) Els percentatges de participants amb diferents nivells de respostes immunes humorals. La quantificació del tipus de resposta (fort, moderat i cap/feble) s'expressa com una fracció del nombre de receptors de la vacuna de cada grup. Els tipus de resposta es van determinar mitjançant la puntuació percentil calculada de tots els participants vacunats. ns, no significatiu; *P <{{40}}.05, **P <0,01, ***P <0,001, ****P <0,0001.

4. Discussió

Les vacunes d'ARNm autoritzades actualment i les vacunes de vectors d'adenovirus han demostrat una eficàcia notable per prevenir la COVID-19. No obstant això, s'ha considerat que la vacunació heteròloga de primer impuls millora la immunogenicitat i mitiga l'escassetat de subministrament intermitent [13]. A més, s'han plantejat problemes de seguretat amb les vacunes de vectors d'adenovirus després del reconeixement d'esdeveniments adversos greus, inclosa la trombosi venosa que amenaça la vida associada a la vacunació AZD1222, especialment en dones més joves [14,15]. Aquests han donat lloc a una immunització de reforç d'ARNm heteròleg per a aquells que ja havien rebut la primera dosi d'AZD1222. Tot i que no es disposava de dades d'eficiència, moltes autoritats sanitàries nacionals van adoptar règims heteròlegs de vacunes contra la COVID-19 autoritzades. Per tant, un estudi comparatiu de les respostes immunitàries humorals i cel·lulars provocades per diversos règims de vacunació de primer impuls és informatiu i ajuda a entendre millor els reptes del món real. En el present estudi, hem demostrat la inducció diferencial de la immunitat humoral i cel·lular mitjançant vacunes heteròlogues de reforç (taula suplementària 4). En fort contrast tant amb els nivells d'Ab d'unió específica com amb els títols de neutralització, que eren més alts al grup de vacunació AZD1222/BNT162b2, les respostes de cèl·lules T específiques de CD4 i T van ser més altes al grup de vacunació BNT162b2/BNT162b2, no a la vacunació AZD1222/BNT162b2. grup. Els nivells relativament baixos de respostes de cèl·lules CD4 més T específiques de S en els participants vacunats AZD1222/BNT162b2-eren inesperats i encara poden posar aquests individus en risc d'infecció severa per SARS-CoV-2. Les nostres troballes difereixen de les informades per Schmidt i els seus col·legues, que van suggerir que, després de l'augment de BNT162b2 heteròleg, els títols de nAb i les respostes de cèl·lules T van augmentar significativament en individus amb AZD1222-[7]. Tanmateix, la freqüència absoluta de les cèl·lules CD69 més IFN-c més entre les cèl·lules CD4 més T només es va augmentar marginalment, i aquest estudi va impedir anàlisis en profunditat de la polifuncionalitat de les respostes de cèl·lules T específiques de S. Per a les persones que estaven infectades prèviament, la primera dosi de vacuna pot actuar com a immunització de reforç i induir potentment respostes humorals i cel·lulars [16,17]. Com que es suposa que el títol de nAb és un correlat clau de la protecció contra la infecció per SARS-CoV-2 [18], els nostres resultats encaixen bé amb la recent troballa d'un impuls beneficiós a la immunitat adquirida per infecció, amb una efectivitat ajustada de la vacuna de > 90 per cent després de la primera dosi en receptors de la vacuna que tenien una infecció prèvia per SARS-CoV-2 [19]. A més, malgrat l'escapada considerable de les respostes de nAb contra la variant Delta entre els participants de l'estudi, vam observar els nivells més alts de nAb que reconeixien la variant Delta en el grup de participants amb infecció prèvia per SARS-CoV-2 de tipus salvatge i vacunació. Tanmateix, d'acord amb el grup de vacunació heteròleg AZD1222/BNT162b2, aquells amb infecció prèvia que van ser vacunats tenien una resposta de cèl·lules CD4 més T específica de S més feble que els individus amb vacunació homòloga BNT162b2/BNT162b2 sense infecció prèvia. En particular, els nostres resultats mostren que dues dosis de BNT162b2 condueixen a una inducció fiable i robusta de respostes de cèl·lules T i CD4 específiques de S, significativament més altes que altres règims de vacunació de reforç. Aquestes troballes són coherents amb un informe recent sobre quatre vacunes COVID-19 diferents [20], mentre que la nostra anàlisi incloïa règims d'impuls primari heteròlegs i immunitat híbrida d'infeccions i vacunacions anteriors. En conseqüència, les plataformes de vacunes d'ARNm es podrien seleccionar per la seva capacitat d'induir respostes de cèl·lules CD4 més T de memòria robustes. A mesura que la incidència d'infeccions innovadores després de la vacunació augmenta a tot el món, hi ha un interès creixent en la protecció de la immunitat contra COVID greu-19. A mesura que continuen sorgint noves variants del SARS-CoV-2 i evadint les defenses immunitàries humorals, la immunitat cel·lular, que s'adreça a un ampli espectre d'epítops del SARS-CoV{-2 reconeguts per les cèl·lules T, pot proporcionar una immunitat protectora estable [21]. ], tot i que els determinants de les respostes cel·lulars en la protecció mediada per vacunes encara no estan definits amb precisió. Per tant, encara no està clar si l'augment de la immunogenicitat humoral de la vacunació heteròloga AZD1222/BNT162b2 es tradueix de manera consistent en una protecció millorada, i això requereix un estudi addicional. A més, cal investigar si les persones que han desenvolupat respostes pobres de cèl·lules T després de la vacunació, com les que es van preparar amb AZD1222, poden beneficiar-se de les formulacions de la vacuna de cèl·lules T [22]. Tant la immunitat induïda per la infecció com la induïda per la vacuna disminueixen de manera natural amb el temps; tanmateix, sembla que es confereix una protecció més gran a les persones que havien estat infectades prèviament amb SARS-CoV-2 [23]. En individus vacunats, la infecció innovadora amb la variant Omicron indueix respostes de nAb més petites que la infecció amb la variant Delta [24], i se sap relativament poc sobre les conseqüències potencials de la immunitat híbrida conferides per la infecció i la vacunació amb diferents soques. No obstant això, la presència de cèl·lules T polifuncionals específiques de S en participants prèviament infectats i vacunats en el nostre estudi és coherent amb una disminució més lenta de la protecció contra COVID-19 greu en aquesta població i pot contribuir a modificar la gravetat de la malaltia després de la reinfecció per SARS. -CoV-2 variants [25,26]. L'estudi actual té diverses limitacions. En primer lloc, les petites mides de mostra de la cohort fan que l'anàlisi estadística robust sigui un repte; per tant, les nostres troballes s'hauran de validar encara més en cohorts més grans. En segon lloc, no vam poder provar mostres en moments posteriors per determinar la durabilitat i la disminució de les respostes immunes humorals i cel·lulars. En tercer lloc, els nostres resultats poden subestimar l'impacte dels epítops de cèl·lules T subdominants fora dels epítops dominants. En quart lloc, només hem estudiat els limfòcits circulants i es poden requerir estudis futurs sobre el drenatge dels ganglis limfàtics després de la vacunació per entendre els mecanismes subjacents a les respostes diferencials observades aquí. En resum, l'estudi actual amb comparacions directes i coincidents per edat il·lumina la discordant immunogenicitat humoral i cel·lular de l'encebament i l'augment heteròleg en el context de l'exposició a l'antigen SARS-CoV-2. Les nostres troballes posen de manifest com l'experiència immunològica individual configura la resposta immune posterior provocada per la vacunació contra la COVID{107}}. Les dades addicionals d'efectivitat del món real i les investigacions de laboratori informaran encara més sobre l'estratègia de vacunació més adequada per protegir-se de les variants emergents del SARS-CoV-2, amb implicacions per al desenvolupament de plataformes de vacunes de nova generació.

Fig. 4. Respostes immunes cel·lulars en els moments màxims. (A) Es van comparar les freqüències de les cèl·lules IFN-c més específiques entre les cèl·lules CD4 més T entre BNT162b2/BNT162b2 (n=19), AZD1222/AZD1222 (n=18), AZD1222/BNT162b2 ( n=9) i grups d'infecció/vacunació prèvia (n=7) en els moments punta. Els punts de temps màxim es van seleccionar de la següent manera: després de la segona dosi en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 i AZD1222/BNT162b2 i després de la primera dosi en el grup d'infecció/vacunació anterior. (B) Els percentatges de participants amb diferents nivells de respostes immunes cel·lulars. La quantificació del tipus de resposta (fort, moderat i cap/feble) s'expressa com una fracció del nombre de receptors de la vacuna de cada grup. Els tipus de resposta es van determinar mitjançant la puntuació percentil calculada de tots els participants vacunats. (C) Les freqüències de les cèl·lules CD4 més T específiques d'espiga polifuncional que produeixen qualsevol combinació d'IFN-c, IL-2 o TNF en cada grup de participants vacunats. (D) La fracció de cèl·lules CD4 més T específiques d'espiga és positiva per a un nombre determinat de citocines. Les dades es presenten com a mitjana ± SD. La importància es va analitzar mitjançant la prova de Mann-Whitney (A i C). ns, no significatiu; *P <0.05, **P <0.01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

A més, l'ingredient de la medicina tradicional xinesaherba de cistanchetambé pot millorar la immunitat, el mecanisme de Cistanche deserticola per millorar la immunitat

Beneficis del suplement de cistanche: com enfortir el sistema immunitari

Feu clic aquí per veure els productes Cistanche Enhance Immunity

【Demanar més】 Correu electrònic:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Cistanche tubulosaEls polisacàrids poden promoure la proliferació de limfòcits T i B, però l'efecte de proliferació dels limfòcits B és significativament més fort que el dels limfòcits T. Els polisacàrids de Cistanche deserticola afavoreixen l'alliberament de la citocina IL22 dels limfòcits, que està relacionada amb la promoció de la proliferació de limfòcits esplènics. Cistanche deserticola pot activar els macròfags i regular el sistema immunitari. Els polisacàrids de Cistanche deserticola, l'equinàsid i el pilòsid tenen efectes significatius sobre la formació i l'activitat dels limfòcits humans. Pot augmentar la resposta de proliferació dels limfòcits, millorant així la funció immune del cos.

extracte de cistanche

Els components funcionals deCistanche tubulosaEls glucòsids totals tenen un impacte significatiu en la recuperació cel·lular després del dany per radiació de 60 Coy i també poden millorar la funció immune contra el dany per radiació.

L'extracte de Cistanche tubulosa no només pot compensar la deficiència immune innata, sinó que també pot millorar la immunitat adquirida.

Fig. 5. Respostes immunes de variants creuades contra el Delta provocades per diversos règims de primer impuls. (A) Les mostres de plasma es van analitzar mitjançant assajos de neutralització de reducció de placa per a la variant Delta del SARS-CoV-2 a BNT162b2/BNT162b2 (n {{10}}), AZD1222/AZD1222 (n {{{ 13}}), AZD1222/BNT162b2 (n=9), grups d'infecció/vacunació prèvia (n=11) i grups delta-convalescents (n {{2{0}}). Els anticossos neutralitzadors delta es van comparar entre els grups en els punts següents: després de la segona dosi en els grups de vacunació BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 i AZD1222/BNT162b2 i després de la primera dosi en el grup de vacunació/infecció prèvia. (B) Les PBMC es van analitzar mitjançant una tinció intracel·lular d'IFN-c després de l'estimulació directa ex vivo mitjançant dos conjunts diferents de grups de pèptids S que comprenien regions no conservades de seqüències d'espiga entre les soques Wuhan i Delta a BNT162b2/BNT162b2 (n {{37} }), AZD1222/AZD1222 (n {{4{0}}), AZD1222/BNT162b2 (n=9), infecció/vacunació prèvia (n {= 7) i Delta-convalescent ( n=17) grups. A cada grup es va calcular la proporció de la freqüència de les cèl·lules CD4 més T que produeixen IFN-c contra l'espiga Delta i la freqüència de les cèl·lules CD4 més T que produeixen IFN-c contra l'espiga de Wuhan. Les dades es presenten com a mitjana geomètrica ± SD geomètrica (A) o mitjana ± SD (B) i s'analitzen per a la seva importància mitjançant la prova de Mann-Whitney. ns, no significatiu; *P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001, ****P <0,0001.

Referències

[1] Bok K, Sitar S, Graham BS, et al. Desenvolupament accelerat de vacunes contra la COVID-19: fites, lliçons i perspectives. Immunitat 2021;54:1636–51. https://doi. org/10.1016/j.immuni.2021.07.017.

[2] Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, et al. Seguretat i eficàcia de la vacuna d'ARNm BNT162b2 Covid-19. N Engl J Med 2020;383:2603–15. https://doi.org/ 10.1056/NEJMoa2034577.

[3] Falsey AR, Sobieszczyk ME, Hirsch I, et al. Fase 3 Seguretat i eficàcia de la vacuna AZD1222 (ChAdOx1 nCoV-19) Covid-19. N Engl J Med 2021;385:2348–60. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2105290.

[4] Borobia AM, Carcas AJ, Pérez-Olmeda M, et al. Immunogenicitat i reactogenicitat del reforç de BNT162b2 en participants amb ChAdOx1-S-primed (CombiVacS): un assaig de fase 2 multicèntric, obert, aleatoritzat, controlat. Lancet 2021;398:121–30. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21) 01420-3.

[5] Barros-Martins J, Hammerschmidt SI, Cossmann A, et al. Respostes immunitàries contra variants del SARS-CoV-2 després de la vacunació heteròloga i homòloga ChAdOx1 nCoV-19/BNT162b2. Nat Med 2021;27:1525–9. https://doi.org/ 10.1038/s41591-021-01449-9.

[6] Hillus D, Schwarz T, Tober-Lau P, et al. Seguretat, reactogenicitat i immunogenicitat de la immunització de reforç homòloga i heteròloga amb ChAdOx1 nCoV-19 i BNT162b2: un estudi de cohort prospectiu. The Lancet Respir Med 2021;9:1255–65. https://doi.org/10.1016/S2213-2600(21)00357- X.

[7] Schmidt T, Klemis V, Schub D, et al. Immunogenicitat i reactogenicitat de la vacunació heteròloga ChAdOx1 nCoV-19/ARNm. Nat Med 2021;27:1530–5. https://doi.org/10.1038/s41591-021-01464-w.

[8] Liu X, Shaw RH, Stuart ASV, et al. Seguretat i immunogenicitat de programes d'impuls primari heteròlegs versus homòlegs amb una vacuna COVID-19 amb vectors adenovirals i ARNm (Com-COV): un assaig de no inferioritat, aleatoritzat, simple cec. Lancet 2021;398:856–69. https://doi.org/10.1016/S0140- 6736(21)01694-9.

[9] Krammer F, Srivastava K, Alshammary H, et al. Respostes d'anticossos en persones seropositives després d'una dosi única de la vacuna d'ARNm SARS-CoV-2. N Engl J Med 2021;384:1372–4. https://doi.org/10.1056/NEJMc2101667.

[10] Bradley T, Grundberg E, Selvarangan R, et al. Respostes d'anticossos després d'una dosi única de la vacuna d'ARNm SARS-CoV-2. N Engl J Med 2021;384:1959–61. https:// doi.org/10.1056/NEJMc2102051.

[11] Saadat S, Rikhtegaran Tehrani Z, Logue J, et al. Títols d'anticossos d'unió i neutralització després d'una dosi única de vacuna en treballadors sanitaris infectats prèviament amb SARS-CoV-2. JAMA 2021;325:1467–9. https://doi.org/ 10.1001/jama.2021.3341.

[12] Reynolds CJ, Pade C, Gibbons JM, et al. La infecció prèvia per SARS-CoV-2 rescata les respostes de cèl·lules B i T a variants després de la primera dosi de vacuna. Science 2021;372:1418–23. https://doi.org/10.1126/science.abh1282.

[13] Ledford H. Podria estar barrejant vacunes contra la COVID per augmentar la resposta immune? Nature 2021;590:375–6. https://doi.org/10.1038/d41586-021-00315-5.

[14] Schultz NH, Sorvoll IH, Michelsen AE, et al. Trombosi i trombocitopènia després de la vacunació ChAdOx1 nCoV-19. N Engl J Med 2021;384:2124–30. https:// doi.org/10.1056/NEJMoa2104882.

[15] Greinacher A, Thiele T, Warkentin TE, et al. Trombocitopènia trombòtica després de la vacunació ChAdOx1 nCov-19. N Engl J Med 2021;384:2092–101. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2104840.

[16] Mazzoni A, Di Lauria N, Maggi L, et al. La vacunació d'ARNm de primera dosi és suficient per reactivar la memòria immunològica del SARS-CoV-2 en subjectes que s'han recuperat de la COVID-19. J Clin Invest 2021;131:e149150.

[17] Samanovic MI, Cornelius AR, Gray-Gaillard SL, et al. S'observen respostes immunitàries robustes després d'una dosi de la vacuna d'ARNm BNT162b2 en individus experimentats amb SARS-CoV-2-. Sci Transl Med 2022;14:eabi8961.. https://doi.org/ 10.1126/scitranslmed.abi8961.

[18] Khoury DS, Cromer D, Reynaldi A, et al. Els nivells d'anticossos neutralitzants són molt predictius de la protecció immune de la infecció simptomàtica per SARS-CoV-2. Nat Med 2021;27:1205–11. https://doi.org/10.1038/s41591-021-01377-8.

[19] Hall V, Foulkes S, Insalata F, et al. Protecció contra el SARS-CoV-2 després de la vacunació de Covid- 19 i la infecció prèvia. N Engl J Med 2022;386:1207–20. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2118691.

[20] Zhang Z, Mateus J, Coelho CH, et al. Memòria immune humoral i cel·lular a quatre vacunes contra la COVID-19. Cel·la 2022;185:2434–51. https://doi.org/10.1016/ j.cell.2022.05.022.

[21] Vardhana S, Baldo L, Morice WG, et al. Entendre les respostes de les cèl·lules T a la COVID-19 és essencial per informar les estratègies de salut pública. Sci Immunol 2022;7:eabo1303.. https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo1303.

[22] Moss P. La resposta immunitària de les cèl·lules T contra SARS-CoV-2. Nat Immunol 2022;23:186–93. https://doi.org/10.1038/s41590-021-01122-w.

[23] Goldberg Y, Mandel M, Bar-On YM, et al. Protecció i disminució de la immunitat natural i híbrida al SARS-CoV-2.N Engl. J Med 2022;386:2201–12. https://doi. org/10.1056/NEJMoa2118946.

[24] Rossler A, Knabl L, von Laer D, et al. Perfil de neutralització després de la recuperació de la infecció per SARS-CoV-2 Omicron. N Engl J Med 2022;386:1764–6. https://doi. org/10.1056/NEJMc2201607.

[25] Guerrera G, Picozza M, D'Orso S, et al. La vacunació BNT162b2 indueix cèl·lules T específiques de SARS-CoV-2-duradores amb un fenotip de memòria de cèl·lules mare. Sci Immunol 2021;6(eabl5344). https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abl5344.

[26] Goldblatt D. SARS-CoV-2: de la immunitat de ramat a la immunitat híbrida. Nat Rev Immunol 2022;22:333–4. https://doi.org/10.1038/s41577-022-00725-0.