Acteòsid, un component de Stachys Sieboldii MIQ, pot ser un agent antinefritic prometedor: efecte de l'acteòsid sobre la nefritis anti-GBM de tipus creixent a rates

Per a més informació:ali.ma@wecistanche.com

Kazumi Hayashi, Tadashi Nagamatsu, Mikio Ito, Tomohisa Hattori i Yoshio Suzuki

Departament de Farmacologia, Facultat de Farmàcia, Universitat Meijo, 150 Yagotoyama, Tenpaku-Ku, Nagoya 468, Japó

RESUM

Efectes deacteòsid(ACT) sobre anti-GBM de tipus creixentnefritisen rates es van investigar. Quan les rates van ser tractades ambActeòsiddes del primer dia després de la injecció iv de sèrum anti-GBM,Acteòsidva inhibir l'elevació de l'excreció de proteïnes a l'orina. En elActeòsidrates tractades, els continguts de colesterol i creatinina i la producció d'anticossos contra la r-globulina de conill als plasmes eren inferiors als de les rates control nefrítiques. L'observació histològica va demostrar que aquest agent va suprimir la hipercel·lularitat i la incidència de la formació de mitja lluna, l'adhesió de la paret capil·lar a la càpsula de Bowman i la necrosi fibrinoide als glomèruls. A més, els dipòsits d'IgG i C3 de rata al GBM van ser significativament menors alActeòsidgrup tractat que en el grup control nefrític. Quan es va iniciar el tractament a partir del 20è dia després de la injecció iv de sèrum anti-GBM, per la qual s'havia establert la malaltia,Acteòsidva donar lloc a un efecte similar en elnefríticrates com s'ha dit anteriorment. Aquests resultats suggereixen que l'Acteòside pot ser un medicament útil contra la glomerulonefritis de progressió ràpida, que es caracteritza per lesions glomerulars greus amb mitja lluna difusa.

Paraules clau: anti-GBM de tipus creixentnefritis,Acteòsid, Rata-IgG, Rata-C3

Feu clic per utilitzar Cistanche amb Acteoside

Chyorogi Stachys sieboldii MIQ (Labiatae) es prescriu per a moltes malalties, i aquest tubercle és utilitzat com a aliment per xinesos, russos i japonesos. Investigacions recents han demostrat que chyrogi té acció anti-anòxia (1), acció inhibidora de l'activitat de la hialuronidasa (2) i acció immunosupressora (3).

D'altra banda, s'ha esmentat que la resposta immune participa en el desenvolupament de la nefritis. Per dir-ho més concretament, la lesió glomerular està mediada per la deposició del complex immune als glomèruls, seguida d'una reacció immunoinflamatòria, inclosa l'activació del complement i l'alliberament d'altres mediadors inflamatoris. En estudis recents, s'ha prestat molta atenció a la contribució de la resposta immune mediada per cèl·lules en el desenvolupament de la glomerulonefritis (4, 5). A més, Neild et al. (6) van informar que la supressió de la funció de les cèl·lules T per la ciclosporina A (CyA) va bloquejar el desenvolupament posterior de lesions glomerulars en la nefritis aguda de la malaltia. Vam informar que la mizoribina (7), l'azatioprina (7), CyA (8), la metilprednisolona (9) i alguns components vegetals (10) tenen acció immunosupressora van mostrar un efecte saludable sobre la nefritis anti-GBM. Tot i que aquests agents immunosupressors exerceixen una acció antinefrítica, és difícil utilitzar-los en assaigs clínics a causa dels seus efectes secundaris (11). Per tant, s'espera que es desenvolupi un nou agent immunosupressor per al tractament de la nefritis en fase clínica.

L'objectiu del present estudi era dilucidarefecte antinefrític de l'acteòsid, un component de chyorogi, en la nefritis anti-GBM de tipus crentic en rates.

MATERIALS I MÈTODES

Animals

Rates mascles de la soca Sprague-Dawley, amb un pes aprox. Es van utilitzar 160 g (Nihon SLC, Hamamatsu) per a tots els experiments. Aquests animals es van allotjar en una habitació amb aire condicionat a 23 ± 1 C durant el període experimental.

Drogues

L'estructura química de l'acteòsid (ACT) (Tsumura Co., Ltd., Tòquio) es mostra a la figura 1. Aquest component es va extreure de la part aèria de chyorogi (Stachys sieboldii MIQ). La puresa de l'ACT es va verificar per HPLC (Columna: TSK gel ODS-80TM (4.0 id x 25{0 mm); Fase mòbil: 20% CH3CN/H2O, que conté 10 AcOH; Caudal: 0,7 ml/min; Temp.: temperatura ambient; Detectar: ​​UV 254 nm) a Tsumura Co., Ltd. L'ACT utilitzat en aquests experiments tenia una puresa superior a 9970. L'ACT es va dissoldre en aigua destil·lada. També es van utilitzar dipiridamol (Dip) (Boehringer Ingelheim, Alemanya) i azatioprina (Aza) (Sigma, St. Louis, MO, EUA); Aquestes drogues es van suspendre en 1070 goma aràbiga.

Inducció de nefritis anti-GBM de tipus mitja lluna

La nefritis anti-GBM de tipus creixent es va induir immunitzant les rates que havien rebut una dosi nefritogènica de sèrum anti-GBM (anti-GBM) de conill amb r-globulina de conill (rG) segons una lleugera modificació del mètode anteriorment informat ( 12). En aquest experiment, les rates pesaven aprox. Es van administrar 16 0 g 0,6 ml/animal de sèrum anti-GBM a la vena de la cua.

L'efecte dels fàrmacs de prova es va estimar administrant-los des del primer dia després de la injecció de sèrum anti-GBM (fase heteròloga) o el 20è dia després de la injecció de sèrum antiGBM (fases autòlogues). En els experiments, es van recollir mostres d'orina de 24-h i després es van dividir les rates en 5 o 6 grups de 8 rates, de manera que el contingut mitjà de proteïnes a l'orina de 24-h de cada grup era d'un nivell similar.

Avaluació de l'efecte antinefrític dels fàrmacs de prova

En l'experiment de tractament amb fàrmacs de la fase heteròloga, quatre grups van rebre per via oral 3, 10 o 30 mg/kg/dia d'ACT o 100 mg/kg/dia de Dip, respectivament, en un volum d'1 ml per 100 g. del pes corporal, diàriament des del primer dia o l'endemà de la injecció iv de sèrum anti-GBM fins al 40è dia. En els experiments de tractament farmacològic des de la fase autòloga, a tres o quatre grups se'ls va administrar oralment 3, 10 o 30 mg/kg dia d'ACT (A) o 30 mg/kg/dia d'ACT, 100 mg/kg/dia de Immersió o 50 mg/kg/dia d'Aza (B), respectivament, en un volum d'1 ml per 100 g de pes corporal, diàriament des del 20è dia després de la injecció iv de sèrum anti-GBM fins al 40è (A) o el 45è. (B) dia. Al grup restant se li va donar oralment el vehicle (aigua destil·lada) en lloc de les drogues de prova i va servir com a control nefrític. A més, es va utilitzar un grup no tractat (normal) per a la comparació amb els grups nefrítics.

Recollides d'orina i sang

Les mostres d'orina de {{0}}h es van obtenir mantenint cada animal en una gàbia metabòlica individual durant 24 hores. Al començament de la recollida d'orina, cada animal va rebre 8 ml d'aigua destil·lada per via oral sense alimentar-se. L'orina es va centrifugar a 3,000 rpm durant 15 min a 41ºC i el sobrenedant es va utilitzar per a la determinació de proteïnes. L'últim dia de l'experiment, es van extreure 2,0 ml de sang de la vena renal de cada rata anestesiada amb una xeringa d'un sol ús i es van posar en un tub que contenia 0,125 ml d'heparina. La sang es va centrifugar a 5,000 rpm per obtenir plasma per a la determinació d'alguns paràmetres.

Determinacions de proteïnes urinàries i continguts plasmàtics de colesterol i creatinina

L'excreció de proteïnes urinàries es va determinar pel mètode de Kingsbury et al. (13) i expressat com a mg/orina de 24 h. El contingut de colesterol es va determinar amb un kit d'assaig comercial (Determine TC-5; Kyouwa Medix Co., Ltd, Tòquio) (14) i es va expressar com a mg/dl de plasma. El contingut de creatinina es va determinar mitjançant un kit de determinació de creatinina (CRE-EN; Kainos, Inc., Tòquio) i es va expressar com a mg/dl de plasma/100 g de pes corporal.

Mesura del títol d'anticossos plasmàtics contra -G

El títol d'anticossos plasmàtics contra rG es va determinar mitjançant hemaglutinació indirecta mitjançant glòbuls vermells d'ovella sensibilitzats (15).

Mesura del nivell de CH50 del complement plasmàtic

El nivell de CH50 del complement plasmàtic es va determinar pel mètode de Mayer (16).

Valoració dels paràmetres histopatològics

Per a l'estudi microscòpic lleuger, es van aïllar els ronyons de rates anestesiades amb pentobarbital, després es van deshidratar i es van arreglar immersant els teixits gradualment en diverses tradicions preocupants de l'alcohol etílic de baix a alt. A continuació, els teixits es van incrustar en parafina i es van seccionar en rodanxes de 2 a 3 em gruixuts. En els estudis de nefritis anti-GBM de tipus mitja lluna, les seccions es van tacar amb hematoxilina i eosina i tricrom de Masson. El nombre de nuclis (hipercel·lularitat), la formació de mitja lluna, l'adhesió de la càpsula de Bowman a la paret capil·lar (adhesió) i la necrosi fibrinoide als glomèruls es van observar amb un microscopi de llum. Per avaluar aquests paràmetres, es va seleccionar una secció transversal equatorial mitjançant mètodes de mostreig aleatori. Es van observar cinquanta glomèruls/seccions transversals, i la taxa d'aparició de formació de mitja lluna, adhesió i necrosi fibrinoide es va expressar com els percentatges dels glomèruls (incidència) amb aquestes alteracions morfològiques tal com es va descriure anteriorment (17). L'avaluació va ser realitzada per una persona diferent que no coneixia la identitat de cada mostra. Per avaluar la hipercel·lularitat, es va seleccionar una secció transversal equatorial mitjançant un mètode de mostreig aleatori. El nombre de nuclis (inclosos els nuclis de cèl·lules glomerulars i leucòcits exsudatius) es va comptar i es va expressar com el nombre mitjà per secció transversal glomerular en 10 glomèruls/secció.

Immunohistoquímica

En teixits per a la tinció immunoenzimàtica d'IgG de rata, les seccions de parafina es van tallar tal com es descriu anteriorment i les seccions es van tractar amb un 0,1 per cent de proteasa en 0.05 M Tris- Tampó HCl durant 7 min i després rentat en solució salina tamponada amb fosfat 0,01 M (PBS), pH 7,4. A continuació, les seccions es van incubar amb anticossos monoclonals de ratolí IgG anti-rata (mAb) (Cappel, West Clester, PA, EUA) a una dilució d'1:100 durant 90 min. Les seccions es van rentar de nou amb PBS, es van tractar amb peròxid d'hidrogen al 0,3 per cent en metanol durant 20 min per bloquejar la peroxidasa endògena i es van incubar amb IgG anti-ratolí purificada per afinitat biotinilada i peroxidasa de rave picant avidinada amb 3,3'-diaminobenzidina tetrahidroclorur (DAB) (Vecta Stain ABC Kit; Vector institution, Burlingame, CA, EUA). Tots els passos es van realitzar a temperatura ambient.

Els teixits per a la tinció immunoenzimàtica de l'antigen nuclear de cèl·lules proliferants (PCNA), que és un marcador de la proliferació cel·lular, es van fixar en formalina al 10 per cent en PBS, i els teixits incrustats en parafina es van tenyir pel mateix procediment que el de la IgG de rata, excepte per a l'ús d'un mAb (19A2; Coulter Immunology, Hialeah, FL, EUA) al PCNA.

Quantificació d'IgG de rata, C3 i PCNA en seccions de teixit

L'àrea total d'IgG de rata immunoreactiva i C3 al glomèrul es va mesurar en 30 glomèruls per secció mitjançant un analitzador d'imatges (Toyobo Image analyzer V1; Toyobo Co., Ltd., Tòquio) i es va presentar com a mm2/secció transversal glomerular (GCS). ). Les cèl·lules positives per PCNA al glomèrul es van comptar amb l'analitzador d'imatges i els resultats es van expressar com el nombre de cèl·lules/GCS

Anàlisis estadístics

Les dades representen la mitjana ± SD i els resultats es van avaluar estadísticament mitjançant ANOVA. Quan aquests resultats eren paramètrics, es van avaluar estadísticament mitjançant la prova de Duncan. Quan els resultats eren no paramètrics, es van avaluar estadísticament mitjançant la prova de Kruskal-Wallis. El percentatge d'inhibició es va calcular de la següent manera:

Percentatge d'inhibició (percentatge)=(Control -Fàrmac de prova) x 100 / (Control -Normal)

RESULTATS

Efecte de l'acteòsid en la nefritis anti-GBM de tipus creixent

Excreció de proteïnes urinàries (Figs. 2 i 3): Quan es va iniciar el tractament amb ACT a partir de l'endemà de la injecció de sèrum anti-GBM (fase heteròloga), la primera supressió significativa de la proteïna urinària es va observar el 5è dia a 30 mg. /kg, po; el 20è dia a 3 i 10 mg/kg, po; i el 40è dia amb Dip a 100 mg/kg, po

Quan es va administrar ACT a partir del 20è dia després de la injecció de sèrum antiGBM (fase autòloga), ACT a 10 i 30 mg/dia va inhibir l'elevació de l'excreció de proteïnes a l'orina al 30è dia. D'altra banda, Aza a 50 mg/kg era més feble que ACT a 30 mg/kg, encara que no significativament, i Dip no va tenir cap efecte.

Continguts de colesterol plasmàtic i creatinina (taula 1): els continguts de colesterol i creatinina plasmàtics es van determinar el dia 40 o 45. El contingut de colesterol plasmàtic a les rates de control nefrític va ser notablement elevat. En canvi, l'elevació del contingut de colesterol es va reduir amb ACT (30 mg/kg) de la fase heteròloga en un 60 per cent del nivell de control i amb ACT (30 mg/kg) de la fase autòloga en 62'o del control. nivell. El contingut de creatinina plasmàtica a les rates nefrítiques també va ser elevat. D'altra banda, a l'ACT (30 mg/kg) de les dues rates tractades en fase, el contingut de creatinina plasmàtica era similar al de les rates normals.

Títol d'anticossos de plasma contra rG: les rates nefrítiques havien mostrat una producció d'anticossos marcadament accelerada. La producció accelerada d'anticossos es va suprimir al 72 per cent del nivell de control mitjançant el tractament amb ACT (10 i 30 mg/kg) de la fase heteròloga (taula 2), ACT (30 mg/kg) de la fase autòloga i Aza a 70 i 51 per cent del nivell de control, respectivament (dades no mostrades), i no es va veure afectat per Dip.

Observació histològica (taula 3, figures 4 i 5): l'examen microscòpic lleuger dels glomèruls nefrítics va revelar lesions caracteritzades per la formació de mitja lluna severa, adhesió, necrosi fibrinoide i proliferació de cèl·lules mesangials. L'observació histològica va demostrar que l'ACT (tant de la fase heteròloga com de l'autòloga) va inhibir la hipercel·lularitat i la incidència de formació de mitja lluna, adhesió i necrosi fibrinoide als glomèruls al dia 40 o 45. Les lesions de les rates nefrítiques tractades amb Dip i Aza també eren menors que les de les rates de control nefrític. Tanmateix, quan les rates nefrítiques van ser tractades amb Dip des de la fase autòloga, els canvis histològics es van veure poc afectats per Dip (dades no mostrades).

La proliferació de cèl·lules glomerulars, és a dir, l'augment de cèl·lules positives per PCNA als glomèruls, es va observar arates nefrítiques. En canvi, el dia 30, una reducció del 52 per centes va observar una ció en la proliferació cel·lular, i això es va associar wamb una reducció significativa de les cèl·lules glomerularslularitat en comparació amb el control (taula 3).

Deposició de reactiu immune (Taula 2 i Fig. 6): Va ser possible observar dipòsits d'IgG de rata i C3 al GBM a les rates control nefrítiques; tanmateix, no es van trobar en rates normals. L'ACT (30 mg/kg) de la fase heteròloga va reduir la deposició d'IgG de rata al GBM en un 72 per cent del nivell de control. A més, l'ACT (3, 10 i 30 mg/kg) de la fase heteròloga va reduir la deposició de C3 de rata al GBM entre un 60 i un 69 per cent al 40è dia. Fins i tot quan es va donar ACT des de la fase autòloga, la inhibició de la deposició d'IgG de rata i C3 va ser similar als resultats anteriors. La immersió no va afectar la deposició d'IgG i C3 de rata. Aza, però, va reduir la deposició d'IgG i C3 de rata al GBM en un 67 i un 68 per cent, respectivament (dades no mostrades).

Efecte de l'ACT sobre l'activitat del complement i els dipòsits de C3 sobre el GBM en la nefritis anti-GBM de tipus original (Fig. 7)

La nefritis anti-GBM de tipus original es va induir a rates mitjançant la injecció de 0, 6 ml de sèrum anti-GBM a les venes de la cua, tal com es va descriure anteriorment (18). Les rates nefrítiques es van tractar prèviament i després amb ACT a 30 mg/kg, po i factor de verí de cobra (CVF) (Sigma) a 10 fig/rata, ip, tres vegades, cada 8 hores. Els tractaments ACT i CVF van reduir l'excreció de proteïnes urinàries amb un percentatge inhibidor d'aprox. 35 graus i 71 per cent, respectivament. El CH50 a les rates de control nefrític va ser notablement inferior al de les rates normals 24 hores després de la inducció de la nefritis. L'ACT va inhibir la disminució de CH50 i l'augment de la deposició de C3 al GBM en rates de control nefrític. CVF va abolir la deposició de CH50 i C3. A més, en l'experiment in vitro, ACT va inhibir l'activació del complement en un 37 per cent. Quan es va administrar ACT a rates normals, ACT va reduir l'activació del complement en l'experiment ex vivo (dades no mostrades).

DISCUSSIÓ

La glomerulonefritis de progressió ràpida i les malalties renals de la síndrome de Goodpasture són malalties malignes que es transformen en insuficiència renal 2 o 3 mesos després del desenvolupament de la malaltia (19). Les característiques d'aquesta nefritis implicaven hipercel·lularitat, infiltració marcada de neutròfils i monòcits i formació de mitja lluna als glomèruls. La teràpia de còctels amb agents immunosupressors, antiagregants plaquetaris i esteroides s'ha aplicat principalment a aquesta malaltia. D'altra banda, tot i que CyA és un immunosupressor superior que exerceix un efecte beneficiós sobre la nefritis experimental (6, 8), s'ha informat que CyA provoca disfunció renal i provoca alteració histològica irreversible en els glomèruls (11). La metilprednisolona té molts efectes secundaris. A més, el fenomen del rebot i la síndrome d'abstinència després d'un llarg tractament amb aquest medicament són dos dels problemes. Per tant, s'ha de desenvolupar un nou agent immunosupressor per al tractament de la nefritis que tingui menys efectes secundaris.

La nefritis anti-GBM de tipus creixent és un model experimental que mostra alteracions histològiques i patològiques similars a les de la glomerulonefritis de progressió ràpida i la malaltia renal de la síndrome de Goodpasture (20). El desenvolupament i la progressió d'aquesta nefritis consta de 2 fases que estan mediades per respostes immunitàries. La reacció primerenca, l'anomenada fase heteròloga, es deu a la deposició d'anticossos anti-GBM, seguida de l'acumulació de granulòcits polimorfonuclears depenent del complement (21, 22). La fase tardana (fase autòloga) es desenvolupa mitjançant la unió d'anticossos autòlegs dipositats al llarg del GBM i l'afluència de monòcits/macròfags als glomèruls després d'aquesta reacció (22, 23). Aquesta nefritis es caracteritza per una proteïna urinària bifàsica i una hipercel·lularitat que implica la formació de mitja lluna i necrosi fibrinoide. Es creu que la formació de mitja lluna està mediada per macròfags migrats i cèl·lules epitelials proliferades (22, 24).

Abans vam informar que la mizoribina i l'Aza, un agent immunosupressor (7), van inhibir l'elevació d'anticossos plasmàtics contra IgG de conill i Pachyman, el component principal de Poria cocos (18), van disminuir el grau de deposició de C3 al GBM, i tots dos van ser marcadament efectiu contra la nefritis anti-GBM.

Els tractaments ACT van suprimir el desenvolupament de la glomerulonefritis anti-GBM avaluada mitjançant la reducció de la proteinúria i el colesterol plasmàtic, la prevenció del deteriorament de la funció renal i la prevenció de canvis histològics progressius, inclòs el desenvolupament de creixents glomerulars i hipercel·lularitat. El dia 40, l'ACT només a 30 mg/kg va reduir significativament la quantitat de deposició d'IgG de rata al GBM mediada per la supressió de la producció d'anticossos en aquest model nefrític. D'altra banda, la quantitat de dipòsits de C3 al GBM es va reduir per ACT a 3, 10 o 30 mg/kg. A més, l'ACT va inhibir significativament l'activació del complement tant en experiments in vitro com ex vivo. La reducció de CH50 en rates de control nefrític va ser inhibida per ACT. Les dades anteriors suggereixen que l'ACT inhibeix la lesió renal suprimint l'activació del complement, perquè el complex d'atac a la membrana del complement (MAC) està implicat en la patogènesi de la lesió glomerular (25), i el MAC sublític té potencials mediadors inflamatoris que podrien estar associats amb danys glomerulars. proliferació de cèl·lules mesangials i difusions de matriu extracel·lular, com les espècies reactives d'oxigen (26), proteases (27), prostaglandines (28) i interleucina-1 com les citocines (29), així com col·lagen (30).

Es creu que l'activació del complement està estretament relacionada amb la infiltració de leucòcits. En estudis recents, es va informar que C5a va provocar l'adhesió de monòcits i neutròfils a cèl·lules mesangials i cèl·lules endotelials, respectivament (31, 32). Per tant, en un estudi posterior, investigarem l'efecte de l'ACT sobre l'acumulació de leucòcits als glomèruls.

REFERÈNCIES

1 Yamahara J, Kitani T, Kobayashi H i Kawahara Y: Estudis sobre Stachys sieboldii MIQ. II Acció antianòxia i components actius. Yakugaku Zasshi 110, 932-935 (1990) (Abstrin English)

2 Takeda Y, Fujita T, Satoh T i Kakegawa H: Sobre els constituents glicosídics de Stachys sieboldii MIQ. i els seus efectes sobre l'activitat de la hialuronidasa. Yakugaku Zasshi 105, 955-959 (1985) (Abstr en anglès)

3 Sasaki H, Nishimura H i Morita T: principis immunosupressors dels glotons de Rehmannia var. hueichingensis. Planta Med 55, 458-462 (1989)

4 Saito T i Atkins RC: Contribució dels leucòcits mononuclears a la progressió de l'esclerosi glomerular focal experimental. Kidney Int 37, 1076-1083 (1990)

5 Tipping PG, Neale TJ i Holdsworth SR: participació dels limfòcits T en la glomerulonefritis experimental induïda per anticossos. Kidney Int 27, 530-537 (1985)

6 Neild GH, Ivory K i Williams DG: La ciclosporina A inhibeix la malaltia del sèrum sactus en conills. Clin Exp Immunol 52, 586-594 (1983)

7 Okamoto K, Ito M i Suzuki Y: estudis sobre l'efecte antinefrític sobre la mizoribina (p-INN, Bredinin®), un nou agent immunosupressor i azatioprina (2): efecte sobre la nefritis anti-GBM de tipus crentic en rates. Jpn J Pharmacol 34, 33-41 (1984)

8 Nagamatsu T, Kojima N, Kondo N, Hattori T, Kojima R, Ito M i Suzuki Y: supressió per ciclosporina A de la nefritis anti-GBM en rates. Jpn J Pharmacol 58, 27-36 (1992)

9 Taniguchi H, Nagamatsu T, Kojima R, Ito M i Suzuki Y: Acció antinefrítica marcada i efectes menys adversos del sultanat de metilprednisolona per administració intermitent a rates. Jpn J Pharmacol 64, 79-88 (1994)

10 Hattori T, Furuta K, Hayashi K, Nagamatsu T, Ito N i Suzuki Y: Estudis sobre els efectes antinefrítics dels components de les plantes (6): efectes antinefrítics i mecanismes de la drina del fel·logen (OB-5) sobre la tipus de nefritis anti-GBM en rates (2). Jpn J Pharmacol 60, 187-195 (1992)

11 Mason J: Els efectes de Sandimmune sobre el ronyó. Clin Res Bull 6, 47-51 (1989)

12 Ito M, Yamada H, Okamoto Y i Suzuki Y: nefritis de tipus creixent induïda per sèrum anti-membrana basal glomerular (GBM) en rates. Jpn J Pharmacol 33, 1145-1154 (1983)

13 Kingsbury FB, Clark CP, Williams G i Post AL: La determinació ràpida de l'albúmina a l'orina. J Lab Clin Med 11, 981-989 (1926)

14 Zurkowski P: Un mètode ràpid per a la determinació del colesterol amb un sol reactiu. Clin Chem 10, 451-453 (1964)

15 Mcleish KR, Clark CP, Williams G i Post AL: supressió de la síntesi d'anticossos per la prostaglandina E com a mecanisme per prevenir la glomerulonefritis del complex immune murí. Lab Invest 47, 147-152 (1982)

16 Mayer MM: Complement i fixació del complement. A Experimental Immunochemistry, pp 133-240, Charles C. Thomas, Springfield (1961)

17 Hattori T, Ito M, Nagamatsu T i Suzuki Y: estudis sobre l'efecte antinefrític de TJ-8014, una nova herba medicinal japonesa (3): efectes sobre la nefritis anti-GBM de tipus crentic en rates. Jpn J Pharmacol 52, 131-140 (1990)

18 Hattori T, Hayashi K, Nagao T, Furuta K, Ito M i Suzuki Y: Estudis sobre els efectes antinefrítics dels components vegetals (3): Efecte de pachyman, el component principal de Poria cocos Wolf sobre l'origen nal-type anti-GBM nefritis en rates i els seus mecanismes. JpnJ Pharmacol 59, 89-96 (1992)

19 Shibata S, Miyakawa Y, Naruse T, Nagasawa T i Takuma T: una glicoproteïna que indueix anticossos nefrotòxics: el seu aïllament i purificació de la membrana basal glomerular de rata. J Immunol 102, 593 601 (1969)

20 Falk RJ: Malaltia renal associada a ANCA. Kidney Int 38, 998-1010 (1990) 21 Mulligan MS, Johnson KJ, Todd RF III, Issekutz TB, Miyasaka M, Tamatani T, Smith CW, Anderson DC i Ward PA: Requisits per a les molècules d'adhesió de leucòcits en la nefritis nefrotòxica. J Clin Invest 91, 577-587 (1993)

22 Nahas AME: Factors de creixement i esclerosi glomerular. Kidney Int 41, Supp 36, S15-S20 (1992)

23 Boyce NW, Holdsworth SR, Dijkstra CD i Atkins RC: Quantificació de fagòcits mononuclears intraglomerulars en glomerulonefritis experimental a la rata mitjançant anticossos monoclonals específics. Patologia 19, 290-293 (1987)

24 Becker GJ, Hancock WW, Stow JL, Glasgow EF, Atkins RC i Thomson NM: Implicació dels macròfags en la glomerulonefritis immune complexa crònica experimental. Nephron 32, 227-233 (1982) 25 Perkinson DT, Baker PT, Couser WG, Johnson BJ i Adler S: Deposició complexa d'atac de membrana en lesió glomerular experimental. Am J Pathol 120, 121-128 (1985)

26 Alder S, Baker PJ, Johnson RJ, Ochi RF, Pritzl P i Couser WG: el complex d'atac de membrana complement estimula la producció de metabòlits reactius d'oxigen per cèl·lules mesangials de rates cultivades. J Clin Invest 77, 762-767 (1986)

27 Johnson RJ, Couser WG i Alpers CE: La proteasa neutrofilistina humana, l'esterasa i la catepsina G poden mediar la lesió glomerular in vivo. J Exp Med 168, 1169-1174 (1988)

28 Cybusky AV, Lieberthal W, Quigg RJ, Rennke HG i Salant DJ: un paper del tromboxà en la lesió glomerular mediada pel complement. Am J Pathol 128, 45-51 (1987)

29 Lovett D, Hansch G, Resch K i Gemsa D: activació de cèl·lules mesangials glomerulars per components del complement terminal. Estimulació de l'alliberament del factor prostanoide i interleucina-L. Immunobiology 168, 34-35 (1986)

30 Torbohm I, Schonermark M, Wingen AM, Berger B, Rother K i Hansch GM: C5b_8 i C5b{_9 modulen l'alliberament de col·lagen de les cèl·lules epitelials glomerulars humanes. Kidney Int 37, 1098-1104 (1990)

31 Lo SK, Detmers PA, Levin SM i Wrigh SD: Adhesió transitòria de neutròfils a l'endoteli. J Exp Med 169, 1779 -1793 (1989) 32 Brady HR, Denton MD, Jimenez W, Takata S, Palliser D i Brenner BM: Els quimioatractius provoquen l'adhesió dels monòcits a les cèl·lules mesangials humanes i lesions de les cèl·lules mesangials. Kidney Int 42, 480-487 (1992)