Components bioactius de les medicines naturals xineses. XXXVI.1) Quatre nous oligoglicòsids feniletanoides acilats, kankanòsids J1, J2, K1 i K2, de tiges de Cistanche Tubulosa

Yingni PAN, Toshio MORIKAWA, Kiyofumi NINOMIYA, Katsuya IMURA, Dan YUAN, Masayuki YOSHIKAWA i Osamu MURAOKA

Institut de Tecnologia i Recerca Farmacèutica, Universitat de Kinki; 3–4–1 Kowakae, Higashi-Osaka, Osaka 577–8502, Japó: Escola de Medicina Tradicional Xinesa, Shenyang Pharmaceutical University; 103 Wenhua Rd., Shenyang 110016, República Popular de la Xina: i Kyoto Pharmaceutical University; Misasagi, Yamashina-Ku, Kyoto 607–8412, Japó. Rebut el 28 de novembre de 2009; acceptat el 2 de febrer de 2010; publicat en línia el 4 de febrer de 2010

Contacte:joanna.jia@wecistanche.com

Resum

Quatre nous aminoglucòsids feniletanoides acilats, kankanòsids J1 (1), J2 (2), K1 (3) i K2 (4), es van aïllar de tiges deCistanchetubulosa(Orobanchaceae) juntament amb l'isocampneòsid I (5). Les seves estructures es van dilucidar a partir d'evidències químiques i fisicoquímiques. Entre ells, es va trobar que 3-5 inhibeixen la citotoxicitat induïda per la D-galactosamina en hepatòcits de ratolí de cultiu primari.

Cistanchetubulosa té molts efectes, feu clic aquí per saber-ne més

Paraules clau:Cistanchetubulosa; costat lancà; glucòsid feniletanoide; Orobanchaceae; activitat hepatoprotectora.

Durant els nostres estudis sobre components bioactius de les medicines naturals xineses,1—3) vam trobar que l'extracte metanòlic de tiges seques deCistanchetubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) va mostrar activitats vasorelaxants4) i hepatoprotectores.1) A partir de les tiges seques de C.tubulosa, es van aïllar cinc iridoides, kankanòsids A—D i kankanol, un glucòsid monoterpè, kankanòsid E, dos aminoglucòsids feniletanoides, kankanòsids F i G, i un oligosucre acilat, la kancanosa, juntament amb 30 constituents coneguts.4,5) Recentment, hem aïllades addicionalment 19 aminoglucòsids feniletanoides inclosos els kankanòsids H1, H2 i I 1) i dos oligosucres acilats de tiges fresques de C. tubulosa. 1) A més, es va trobar que els principals glucòsids feniletanoides, l'equinacòsid, l'acteòsid i l'isoacteòsid, inhibeixen l'augment dels nivells sèrics d'aspartat aminotransferasa (sAST) i d'alanina aminotransferasa (sALT) en ratolins ferits hepàtics induïts per D-galactosamina (D-GalN) es van dilucidar els lipopolisacàrids a dosis de 25-100 mg/kg per os (po) i els requisits estructurals dels glucòsids feniletanoides per a l'activitat hepatoprotectora.1) Com a estudi continuat sobre els components de les tiges fresques de C.tubulosa, vam aïllar encara més quatre nous oligoglicòsids feniletanoides acilats, kankanòsids J1 (1), J2 (2), K1 (3) i K2 (4). Aquest article tracta l'aïllament i l'elucidació de l'estructura de 1—4.

Tiges fresques de C.tubulosa(cultivats a Urumqi, província de Xinjiang, Xina) es van extreure amb metanol a reflux per produir un extracte metanòlic (8,36 per cent de les tiges fresques). A partir de l'extracte metanòlic, es van obtenir fraccions eluïdes amb H2O i MeOH (5,63 per cent i 2,73 per cent, respectivament) mitjançant cromatografia en columna Diaion HP-20 (H2O→MeOH) tal com es va descriure anteriorment.1) Mitjançant les cromatografies intensives a la fracció eluïda amb MeOH, quatre nous oligoglicòsids feniletanoides, kancanosids J1 (1, 0.0002 per cent ), J2 (2, 0 0,0002 per cent), K1 (3, 0,0002 per cent) i K2 (4, 0,0005 per cent) juntament amb l'isocampneòsid I6) (5, 0,0006 per cent) es van aïllar.

Estructures dels kankanòsids J1 (1) i J2 (2) El kankanòsid J1 (1) es va obtenir com una pols blanca amb rotació òptica negativa ([a]D 25 - 6.5 graus en MeOH). L'espectre IR d'1 va mostrar bandes d'absorció a 3414, 1734, 1719, 1701, 1638, 1508, 1159, 1067 i 1046 cm- 1 atribuïbles als hidroxils carbonils, funcions èteres i anells aromàtics. Els espectres FAB-MS d'ions positius i negatius d'1 van mostrar pics d'ions quasimoleculars a m/z 719 (M-Na) i m/z 695 (MH), i la fórmula molecular es va determinar com a C32H40O17 mitjançant positius d'alta resolució. mesura d'ions FAB-MS. Els espectres de RMN 1 H i 13C d'1 (CD3OD, taules 1, 2), que van ser assignats per diversos experiments de RMN,7) van mostrar senyals assignables a un grup metoxi [d 3,21 (3H, s, 7- OCH3)], un metilè i una metina que tenen una funció d'oxigen [d 3,58, 4.00 (1H cadascun, tots dos m, 8-H2), 4,18 (1H, semblant a dd, J ca. 4, 8 Hz, 7-H)], protons aromàtics de tipus ABC orto i meta-acoblats [d 6,63 (1H, dd, J 1,8, 8,2 Hz, 6-H), 6,74 (1H) , d, J 1,8 Hz, 2-H), 6,74 (1H, d, J 8,2 Hz, 5- H)], un fragment bD-glucopiranosil [d 4,54 (1H, d, J 7,8 Hz) , Glc-1-H)] i un fragment aL-ramnopiranosil [d 1,07 (3H, d, J 6,4 Hz, Rha-6-H3), 4,80 (1H, br s, Rha{{103} }H)] juntament amb un grup acetil [d 2.00 (3H, s)] i un grup trans-cafeoil {una trans-olefifina [d 6,26, 7,59 (1H cadascun, tots dos d, J{{ 114}},0 Hz, 8-, 7-H)] i protons aromàtics de tipus ABC orto i meta-acoblats [d 6,77 (1H, d, J 8,2 Hz, 5- H), 6,95 (1H, dd, J- 1,8, 8,2 Hz, 6-H), 7,04 (1H, d, J 1,8 Hz, 2-H)]}. Els espectres 1H- i 13C-RMN d'1 eren superposables als del campneòsid I1,8—10) (6), excepte els senyals deguts al grup acetil. Les connectivitats dels fragments aminoglucòsids i acils en 1 es van confirmar mitjançant l'experiment de correlació d'enllaços múltiples heteronuclears (HMBC), que va mostrar correlacions a llarg abast entre els següents parells de protons i carbonis: 7-OCH3 i 7- C ( dC 83,3); Glc-1-H i 8-C (dC 74,1); Glc-2-H [d 4,91 (1H, dd, J{{- 7,8, 9,2 Hz)] i el carboni acetil carbonil (dC 171,4); Glc-4-H [d 4,99 (1H, dd, J 9,2, 9,6 Hz)] i el carboni trans-cafeoil carbonil (dC 168,1); i Rha-1-H i Glc{-3-C (dC 80,5) (Fig. 1). Finalment, la hidròlisi alcalina d'1 amb un 5 per cent d'hidròxid de potassi (KOH) va alliberar àcid trans-cafeic, que es va identificar mitjançant anàlisi HPLC, juntament amb un producte desacilat. El producte desacilat es va tractar successivament amb àcid clorhídric (HCl) 1,0 M per alliberar L-ramnosa i D-glucosa, que es van identificar mitjançant anàlisi HPLC mitjançant un detector de rotació òptic.1—5) Així, es va dilucidar l'estructura del kankanòsid J1 a ser 2-metoxi-2-(3,4-dihidroxi fenil)etil OaL-ramnopiranosil-(1→3)-2-O-acetil-4-O-trans- cafeoil-bD-glucopiranòsid (1).

Kankanoside J2 (2) es va aïllar com una pols blanca amb rotació òptica negativa ([a]D 25 - 18.1 graus en MeOH). Mitjançant la mesura FAB-MS d'ions positius d'alta resolució, es va trobar que la fórmula molecular de 2 era la mateixa que la d'1. Les dades de RMN 1 H i 13C de 2 (CD3OD, taules 1, 2) eren molt similars als de 1, excepte pels senyals deguts al pont etílic de la fracció aglicona {un grup metoxi [d 3,24 (3H, s, 7-OCH3)], un metilè [d 3,63 (1H, m) , 3,83 (1H, dd, J- 3.2, 11.0 Hz), 8-H2] i una metina que porta una funció d'oxigen [d 4,22 (1H, dd, J{ {38}},2, 8,2 Hz, 7-H)]}. La hidròlisi alcalina de 2 amb un 5% de KOH va alliberar àcid trans-cafeic juntament amb un producte desacilat, i el producte desacilat es va tractar successivament amb HCl 1.0 M per alliberar L-ramnosa i D-glucosa. Com es mostra a la figura 1, es van observar les mateixes correlacions de llarg abast que en el cas d'1 a l'experiment HMBC. En conseqüència, es va revelar que l'estructura plana del kankanòsid J2 (2) era la mateixa que la d'1 i es va dilucidar que era 7-isòmer d'1. 11)

Les estructures dels kankanòsids K1 (3) i K2 (4) Els kankanòsids K1 (3) i K2 (4), C36H48O21, també es van obtenir com a pols blanques amb rotacions òptiques negatives (3: [a]D 25 - 75.3 graus). 4: [a]D 25 - 7.4 graus tots dos en MeOH). Els espectres de RMN 1H i 13C de 3 i 4 (CD3OD, taules 1, 2) mostraven senyals assignables a un grup metoxi [3: d 3,23 (3H, s, {{30}} OCH3) ; 4: d 3,25 (3H, s, 7-OCH3)], un metilè i una metina que tenen una funció d'oxigen {3: d [3,62 (1H, dd, J- 3.4,11.{{ 52}} Hz), 4.{{70}}2 (1H, dd, J{- 8.1, 11.{0 Hz), 8-H2] , 4,34 (1H, dd, J- 3,4, 8,1 Hz, 7-H); 4: d [3,72 (1H, dd, J- 9.1, 11.{{{110}} Hz), 3,84 (1H, dd, J{- 3,1, 11,0 Hz), 8-H2], 4,37 (1H, dd, J- 3,1, 9,1 Hz, 7-H)}, protons aromàtics de tipus ABC orto i meta-acoblats [ 3: d 6,68 (1H, dd, J- 2,0, 8,1 Hz, 6-H), 6,76 (1H, d, J{- 8,1 Hz, 5- H), 6,80 (1H, d, J- 2,0 Hz, 2-H); 4: d 6,67 (1H, dd, J- 1,9, 8,2 Hz, 6-H), 6,76 (1H, d, J{- 8,2 Hz, 5- H), 6,78 (1H, d, J- 1,9 Hz, 2-H)], dos fragments de bD-glucopiranosil [3: d 4,31 (1H, d, J- 7. 9 Hz, terminal-Glc-1-H), 4,40 (1H, d, J{- 7,9 Hz, interior-Glc{-1-H); 4: d 4,26 (1H, d, J- 7,7 Hz, terminal-Glc-1-H), 4,44 (1H, d, J{- 7,9 Hz, interior-Glc-1- {164}}H)], i un fragment aL-ramnopiranosil [3: d 1,08 (3H, d, J 6,4 Hz, Rha-6-H3), 5,19 (1H, d, J- 1. 7 Hz, Rha-1-H); 4: d 1,08 (3H, d, J- 6,2 Hz, Rha{-6-H3), 5,20 (1H, d, J{- 1,6 Hz, Rh-1- H)] juntament amb un grup trans-cafeoil {una trans-olefifina [3: d 6,27, 7,60 (1H cadascun, tots dos d, J- 15,8 Hz, 8-, 7- H); 4: d 6,28, 7,60 (1H cadascun, tots dos d, J- 15,8 Hz, 8-, 7-H)] i protons aromàtics de tipus ABC orto i meta-acoblats [ 3: d 6,78 (1H, d, J- 8,3 Hz, 5-H), 6,96 (1H, dd, J{- 1,9, 8,3 Hz, 6- H), 7,05 (1H, d, J- 1,9 Hz, 2-H)]; 4: d 6,78 (1H, d, J- 8,4 Hz, 5-H), 6,96 (1H, dd, J{- 1,9, 8,4 Hz, 6- H), 7,05 (1H, d, J- 1,9 Hz, 2-H)}. Els senyals de protons i carboni dels espectres de RMN 1 H i 13C de 3 i 4 eren superposables als de l'echinacòsid, 1,4,12) excepte els senyals deguts al grup metoxi 7-. Les connectivitats del grup trans-cafeoil i els fragments de glicosil en 3 i 4 es van dilucidar sobre la base dels experiments HMBC tal com es mostra a la figura 1. Finalment, la hidròlisi alcalina de 3 i 4 amb un 5 per cent de KOH va donar els productes desacilats juntament amb trans. -àcid cafeic. Aquests productes desacilats es van tractar successivament amb HCl 1, 0 M per alliberar L ramnosa i D-glucosa, respectivament. En conseqüència, es va determinar que l'estructura dels kankanòsids K1 i K2 era 2-metoxi-2-(3,{4-dihidroxi fenil)etil OaL-ramnopi-ranosil-(1→3)-[bD -glucopiranosil-(1→6)]-4-O-trans-caf-feel-bD-glucopiranòsid (3 i 4).11,13)

acteòsidencistancheté molts efectes en la memòria

Anteriorment, extracte metanòlic de tiges de C.tubulosai diversos components feniletanoides com l'echinacòsid,acteòsid, iisoacteòsides va trobar que mostraven efectes hepatoprotectors sobre la lesió hepàtica induïda per D-galactosamina (D-GalN) / ​​lipopolisacàrid en ratolins i efecte inhibidor sobre la citotoxicitat induïda per D-GalN en hepatòcits de ratolí de cultiu primari. 3) i K2 (4) i isocampneòsid I (5) sobre la citotoxicitat induïda per D-GalN en hepatòcits de cultiu primari. Tot i que les seves activitats eren més febles que les de l'echinacòsid (IC50 10,2 mM),acteòsid(4,6 mM) i isoacteòsid (5,3 mM), els principals constituents feniletanoides de les tiges de C. tubulosa, 1) 3—5 van mostrar una activitat moderada.14)

Experimental

Per obtenir dades espectrals i físiques s'han utilitzat els següents instruments: rotacions específiques, polarímetre digital Horiba SEPA-300 (l- 5 cm); espectres UV, espectròmetre Shimadzu UV-1600; espectres IR, espectròmetre Shimadzu FTIR-8100; 1 espectres de RMN H i 13C, espectròmetres JEOL JNM-ECA600 (600, 150 MHz) i JEOL JNM-ECS400 (400, 100 MHz) amb tetrametilsilà com a estàndard intern; FAB-MS i FAB-MS d'alta resolució, espectròmetre de masses JEOL JMS-SX 102A; Detector HPLC, Shimadzu RID-10un índex de refracció, Shimadzu SPD-10A UV-VIS i detectors de rotació òptica Shodex OR-2. La columna HPLC, Cosmosil 5C18-MS-II i les columnes pNAP (Nacalai Tesque Inc., 250 4,6 mm id) i (250 20 mm id) es van utilitzar amb finalitats analítiques i preparatives, respectivament.

acteòsidencistanchetenen bons efectes sobre el ronyó

Per a la cromatografia es van utilitzar les condicions experimentals següents: cromatografia en columna de gel de sílice en fase normal (CC), gel de sílice 60N (Kanto Chemical Co., Ltd., malla 63—21{0, esfèrica, neutral); gel de sílice de fase inversa CC, Diaion HP-20 (Nippon Rensui) i Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silesia Chemical, Ltd., malla 100-200); TLC de fase normal, plaques de TLC prerevestides amb gel de sílice 60F254 (Merck, 0,25 mm); TLC de fase inversa, plaques de TLC prerevestides amb gel de sílice RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm); HPTLC de fase inversa, plaques de TLC prerevestides amb gel de sílice RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm), la detecció es va aconseguir mitjançant polvorització amb un 1% de Ce (SO4) 2-10% H2SO4 aquós, seguit d'un escalfament .

Material vegetal

Aquest ítem es va descriure en un informe anterior.1)

Extracció i aïllament

Tiges fresques de C.tubulosa(2, 98 kg) es van tallar finament i es van extreure tres vegades amb metanol a reflux durant 3 h. L'evaporació del dissolvent a pressió reduïda va proporcionar un extracte metanòlic (249,1 g, 8,36 per cent). L'extracte metanòlic es va sotmetre a Diaion HP- 20 CC (5,0 kg, H2O → MeOH) per donar fraccions eluïdes amb H2O i MeOH (167,84 g, 5,63 per cent i 81,21 g, 2,73 per cent, respectivament). La fracció eluïda amb MeOH (61,00 g) es va sotmetre a gel de sílice en fase normal CC [1,8 kg, CHCl3– MeOH–H2O (15: 3: 0.4→1{{36) }} : 3 : 0.5→6 : 4 : 1, v/v/v)→MeOH] per donar set fraccions [Fr. 1 (1,12 g), 2 (9,56 g), 3 ({{1{{109}}4}},89 g), 4 (1{{{12{{13{0 }}}},69 g), 5 (8,84 g), 6 (12,52 g) i 7 (4,60 g)], tal com es va descriure anteriorment.1) La fracció 4 (1{{167} },69 g) es va separar mitjançant gel de sílice CC de fase inversa [500 g, MeOH–H2O (30 : 7{0, v/v) →MeOH→acetona] per donar quatre fraccions [Fr. 4-1 (878,2 mg), 4-2 (7,06 g), 4-3 (1,57 g) i {{8{{2{{2{{251 }}7}}2}}}} (792,8 mg)]. La fracció 4-3 (1,57 g) es va purificar per HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (20 : 8{0, v/ v)] per donar 11 fraccions {Fr. 4-3-1 (30,4 mg), 4-3-2 (55,2 mg), 4-3- 3 [ campneòsid I (6, 22,1 mg, 0,0010 per cent )], 4-3-4 [ acteòsid (224,6 mg, 0,010 per cent )], 4-3-5 (27,4 mg), 4-3-6 (43,6 mg), 4-3-7 [ isoacteòsid (825,0 mg, 0,037 per cent )], 4-3-8 [ siringalida A 3 -OaL-ramnopiranòsid (37,6 mg, 0,0017 per cent )], 4-3-9 (39,8 mg), 4-3-10 [2 -acetillacteòsid (85,4 mg, 0,0038 per cent )] i 4-3-11 (64,6 mg)}, tal com es va descriure anteriorment.1) La fracció 4-3-5 (27,4 mg) es va purificar més per HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (18: 82, v/v)] per donar isocampneòsid I (5, 8,5 mg, 0,0004 per cent). La fracció 4-3-6 (43,6 mg) es va purificar encara més per HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (18: 82, v/v)] per donar 5 (3,7 mg, 0,0002 per cent) juntament amb kankanòsids H 1 1) (17,0 mg, 0,0008 per cent ) i H2 1) (3,3 mg, 0,0001 per cent ). La fracció 4-3-9 (39,8 mg) es va purificar més per HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (18: 82, v/v)] per donar kankanòsids J1 (1, 3,7 mg, 0,0002 per cent). ) i J2 (2, 3,5 mg, 0,0002 per cent) per combinar amb kankanòsid I1) (15,4 mg, 0,0007 per cent) i isoacteòsid1) (3,1 mg, 0,0001 per cent). La fracció 5 (8, 84 g) es va separar mitjançant gel de sílice CC de fase inversa [400 g, MeOH–H2O (20: 80 → 30: 70, v/v) → MeOH → acetona] per donar set fraccions [Fr. 5-1 (870,2 mg), 5-2 (478,9 mg), 5-3 (3,72 g), 5-4 (979,9 mg), 5-5 (1,19 g), 5-6 (1,27 g) i 5-7 (130,1 mg)]. La fracció 5-3- 4 (72,3 mg) es va purificar més per HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (10: 90, v/v)] per donar kancanosids K1 (3, 5,1 mg, 0,0002 per cent) i K2 (4, 10,6 mg, 0,0005 per cent) juntament amb campneòsid II1) (7, 10,6 mg, 0,0005 per cent).

acteòsidencistanchepot tractarronyómillora la malaltiarenalfunció

Hidròlisi alcalina i àcida de kankanòsids J1 (1), J2 (2), K1 (3) i K2 (4)

Les solucions d'1-4 (1,0 mg cadascuna) en hidròxid de potassi aquós al 5% (KOH, 0,5 ml) es van agitar a 40 graus durant 1 h. Cada solució es va neutralitzar amb Dowex HCR W2 (forma H) i la resina es va eliminar per filtració. L'evaporació del dissolvent dels filtrats a pressió reduïda va produir els corresponents productes desacilats, que es van sotmetre a anàlisi HPLC [columna: Cosmosil pNAP, 250-4,6 mm id; fase mòbil: CH3CN–1 per cent d'AcOH aquós (15: 85, v/v); detecció: UV (254 nm); Velocitat de companyonia: 1,0 ml/min] per donar àcid trans-cafeic (tR 9,9 min de 1—4). A continuació, es va dissoldre cadascuna en HCl 1,0 M (1,0 ml) i es va escalfar a 80 graus durant 3 h. Després de refredar-se, la mescla de reacció es va neutralitzar amb Amberlite IRA-400 (forma OH) i les resines es van eliminar per filtració. Després d'eliminar el dissolvent a pressió reduïda, el residu es va separar mitjançant la columna de cartutx Sep-Pak C18 (H2O → MeOH). La fracció eluïda amb H2O es va sotmetre a anàlisi HPLC en les condicions següents: columna HPLC, Kaseisorb LC NH2-60-5, 4,6 mm id- 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tòquio, Japó); detecció, rotació òptica [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tòquio, Japó); fase mòbil, CH3CN–H2O (85: 15, v/v); velocitat de col·laboració 0,8 ml/min]. La identificació de L-ramnosa (i) i D-glucosa (ii) d'1-4 presents a les fraccions eluïdes amb H2O es va dur a terme comparant els seus temps de retenció i rotació òptica amb els de mostres autèntiques [i, tR 9,9 min ( negatiu)] i [ii, tR 17,9 min (positiu)].

Agraïments

TM, KN i OM van comptar amb el suport del projecte "Centre de recerca d'alta tecnologia" per a universitats privades: subvenció de fons del Ministeri d'Educació, Cultura, Esports, Ciència i Tecnologia (MEXT) del Japó, 2007-2011 i també amb el suport d'un Subvenció per a la investigació científica del MEXT. MY i HM van rebre el suport del 21st COE Program, Academic Frontier Project i una subvenció per a la investigació científica de MEXT.

Referències i notes

1) Part XXXV: Morikawa T., Pan Y., Ninomiya K., Imura K., Matsuda H., Yoshikawa M., Yuan D., Muraoka O., Bioorg. Med. Chem., 18, 1882—1890 (2010).

2) Morikawa T., Xie H., Wang T., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Biodiv., 6, 411—420 (2009).

3) Muraoka O., Morikawa T., Zhang Y., Ninomiya K., Nakamura S., Ma tsuda H., Yoshikawa M., Tetrahedron, 65, 4142—4148 (2009).

4) Yoshikawa M., Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Nakamura S., Mu raoka O., Bioorg. Med. Chem., 14, 7468—7475 (2006).

5) Xie H., Morikawa T., Matsuda H., Nakamura S., Muraoka O., Yoshikawa M., Chem. Farmàcia. Bull., 54, 669—675 (2006).

6) Si C.-L., Liu Z., Kim J.-K., Bae Y.-S., Holzforschung, 62, 197—200 (2008).

7) Els espectres de RMN 1 H i 13C de 1-4 es van assignar amb l'ajut de la millora sense distorsió mitjançant transferència de polarització (DEPT), espectroscòpia de correlació de filtre quàntic doble (DQF COSY), coherència quàntica múltiple heteronuclear (HMQC) i heteronuclear Experiments de correlació d'enllaços múltiples (HMBC).

8) Imakura Y., Kobayashi S., Mima A., Phytochemistry, 24, 139—146 (1985).

9) Wu J., Huang J., Xiao Q., Zhang S., Xiao Z., Li Q., ​​Long L., Huang L., Magn. Res. Chem., 42, 659—662 (2004).

10) Kitagawa S., Tsukamoto H., Hisada S., Nishibe S., Chem. Farmàcia. Bull., 32, 1209—1213 (1984).

11) No s'han determinat les estereoquímiques de la posició 7-a 1-4.

12) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Farmàcia. Bull., 35, 3309—3314 (1987).