PART 1 El liposoma del glicòsid de feniletanol inhibeix l'activació de l'HSC induïda per PDGF mitjançant la regulació de la via de senyalització FAK/PI3K/Akt

Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye i Tao Liu 1*

1 Departament de Toxicologia, Escola de Salut Pública, Universitat Mèdica de Xinjiang, Regió Autònoma Uigur de Xinjiang, Xinyi Road No.393, Urumqi 830011, Xina

2 Laboratori clau de medicina uigur, Institut de Materia Medica de Xinjiang, regió autònoma uigur de Xinjiang, districte de Tianshan, Xinhua South Road No. 140, Urumqi 830004, Xina

Per a més informació poseu-vos en contacte amb:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola té molts efectes, feu clic aquí per saber-ne més

Resum: Cistanche tubulosaés una medicina herbal tradicional xinesa que s'utilitza àmpliament per regular la immunitat iglicòsids feniletanoides(CPhG) es troben entre els components principals responsables d'aquesta activitat. Tanmateix, l'aplicació de CPhG es veu afectada negativament per la seva mala absorció i la seva baixa utilització oral. El lliurament de fàrmacs dirigit és una adreça de desenvolupament important per a la farmacèutica. Estudis anteriors han indicat que els CPhG podrien bloquejar la conducció de les vies de senyalització en TGF-p1/smad i inhibir l'activació de les cèl·lules estelades hepàtiques (HSC). L'objectiu d'aquest estudi era avaluar l'efecte anti-fibrosi hepàtica dels liposomes CPhG mitjançant la inhibició de l'activació de HSC, la promoció de l'apoptosi, el bloqueig del cicle cel·lular, la supressió de la conducció de les vies de senyalització en la cinasa d'adhesió focal (FAK)/fosfatidilinositol-3- quinasa (PI3K)/proteïna quinasa B (Akt), i determinar que són activitat hepatoprotectora in vitro. Els estudis d'alliberament in vitro van demostrar que els liposomes CPhG tenen un efecte d'alliberament sostingut en comparació amb els CPhG de fàrmacs. La proliferació de HSC es va inhibir després del tractament amb els liposomes CPhG (29,45, 14,72, 7,36 ^g/mL), amb valors IC50 de 42,54 Rg/mL en l'assaig MTT. Diferents concentracions dels liposomes CPhG podrien inhibir la proliferació de HSC, promoure l'apoptosi i bloquejar el cicle cel·lular. El mètode MTT va mostrar una inhibició òbvia de la proliferació de HSC després del tractament amb el liposoma CPhG i el factor de creixement derivat de plaquetes de rata recombinant-BB (rrPDGF-BB). Els nivells de col·lagen-1, inhibidor de la metalopeptidasa 1 (TIMP{-1), actina del múscul llis (a-SMA) i PI3K/Akt fosforilada es van regular a la baixa i la metaloproteinasa de la matriu-1 (MMP{ {23}}) es va regular a l'alça, mitjançant un pretractament amb diferents concentracions de liposomes CPhG. A més, 29,45 Rg/mL de liposomes CPhG podrien disminuir l'expressió de la proteïna FAK i la proteïna PI3K i Akt fosforilada aigües avall de FAK per sobreexpressió del gen FAK. Aquest experiment suggereix que els liposomes CPhG poden inhibir l'activació dels HSC inhibint FAK i després reduint l'expressió d'Akt/PI3K fosforilats, proporcionant així noves idees sobre l'aplicació de CPhG per a la fibrosi hepàtica.

Paraules clau: glicòsids feniletanoidesliposoma; cèl·lules estelades hepàtiques; proliferació; apoptosi; cicle cel·lular; FAK/PI3K/Akt,

factors, com el TGF-p1, l'alcohol, les toxines i l'esteatosi, poden provocar l'activació dels HSC. El PDGF també pot provocar l'activació de HSC [4]. Actualment, les estratègies terapèutiques dirigides als HSC per prevenir la fibrosi hepàtica inclouen la inhibició de l'activació, la proliferació i el cicle cel·lular dels HSC, així com l'estimulació de l'apoptosi dels HSC [5].

Cistanche tubulosa(família Orobanchaceae), una planta parasitària, es cultiva àmpliament a la regió sud de Xinjiang a la Xina.C. tubulosas'ha demostrat que presenta diverses activitats, com ara millorar la immunitat de l'organisme, millorar la resistència de l'organisme, nodrir els ronyons, tractar la impotència i augmentar la intel·ligència;

1. Introducció

també té propietats anti-oxidació i anti-envelliment [6]. Aquesta planta conté glicòsids feniletanoides (CPhG), iridoides i polisacàrids, dels quals els CPhG són algunes de les principals espècies bioactives actives [7]. En un estudi anterior, vam trobar que els CPhG podrien bloquejar la conducció de les vies de senyalització en TGF-p1/smad, inhibir l'activació d'HSC i exercir efectes preventius sobre la fibrosi hepàtica induïda per l'albúmina sèrica bovina en rates [7,8]. Tanmateix, els CPhG tenen una bona solubilitat en aigua i una pobra solubilitat en lípids i es veuen afectats per factors externs com l'acidesa i els enzims de descomposició, que redueixen l'estabilitat i l'eficàcia dels CPhG [9]. Després de l'administració intragàstrica, els CPhG són inestables al tracte gastrointestinal de les rates i la hidròlisi dels enllaços glicòsids es podria produir fàcilment. La biodisponibilitat oral de les rates era només del 0,83 per cent, per la qual cosa és difícil determinar el seu paper terapèutic [10]. Per tant, hem de trobar un fàrmac antifibròtic segur, eficaç, sostingut i dirigit per als HSC per millorar la seva eficàcia terapèutica. Els sistemes de lliurament de fàrmacs de nanopartícules ofereixen una estratègia alternativa per superar aquestes deficiències a causa dels seus avantatges, com ara una gran capacitat de càrrega de fàrmacs i una llarga circulació sanguínia [11]. Tenen una forta afinitat amb el fetge i poden lliurar directament fàrmacs a les cèl·lules mitjançant endocitosi i fusió. Els liposomes no modificats es distribueixen principalment als teixits o òrgans desenvolupats pel sistema reticuloendotelial (RES) i tenen la funció d'orientar-se passivament al fetge [12]. Per tant, es van preparar liposomes CPhG mitjançant dispersió de membrana i encapsulació secundària per proporcionar un efecte anti-fibrosi. En aquest estudi, vam tenir com a objectiu investigar els efectes dels liposomes CPhG sobre la proliferació de HSC, l'apoptosi i el cicle cel·lular, així com els seus mecanismes.

2. Resultats

2.1. Propietats físiques del liposoma CphG

Les propietats físiques dels liposomes CPhG preparats eren les següents: la mida de la partícula era (216,7 ± 3,47) nm, el potencial Zeta era (-55},6 ± 1,3) mV. Com es mostra a la figura 1, les partícules eren rodones, recobertes amb un gruix uniforme a la superfície i la distribució de la mida de les partícules era uniforme. La càrrega de fàrmacs i l'eficiència d'encapsulació dels liposomes CPhG van ser (3,71 ± 0,32) per cent i (38,46 士 7,85) per cent.

2.2. Alliberament in vitro dels liposomes i CPhG CPhG

La taxa d'alliberament acumulada estimada es va calcular i es va representar en funció del temps per als liposomes CPhG i els CPhG (figura 2). En el present estudi; la taxa d'alliberament dels CPhG després de 12 h es va normalitzar al 100 per cent, mentre que la dels liposomes CPhG era propera al 100 per cent després de 24 h, i la taxa d'alliberament dels CPhG va augmentar amb el temps. Les dades es van analitzar utilitzant diferents models d'ajustament per als mecanismes d'alliberament controlat, incloses les equacions d'ordre zero, de primer ordre i de Higuchi. Les equacions ajustades i els coeficients de correlació per als tres models de llançament es mostren a la taula 1.

El millor model que s'adapta als liposomes CPhG i CPhG són les equacions d'Higuchi i de primer ordre. L'estudi d'alliberament in vitro dels liposomes CPhG no va mostrar cap efecte d'explosió. Es va seleccionar la funció de distribució més adequada per calcular els paràmetres de dissolució T50 (dissolució 50 per cent). Els resultats mostren que el temps de retenció mitjà dels liposomes CPhG és més llarg que el dels CPhG, i el T50 dels liposomes CPhG és de 9,39 h. En comparació amb les 1, 69 h per als CPhG, els liposomes CPhG presenten un efecte d'alliberament sostingut evident (taula 2).

Primer vam investigar els efectes citotòxics dels liposomes CPhG sobre HSC amb un assaig MTT in vitro. Els HSC es van exposar a diferents concentracions dels liposomes CPhG, que van des de 0 fins a 117,79 卩g/mL durant 24 h. Els liposomes CPhG van disminuir la viabilitat dels HSC de manera dependent de la dosi, i el seu valor IC50 va ser de 42,535 (p. ex./mL. L'efecte dels liposomes CPhG (29,45, 14,72 i 7,36 ^g/mL) a les cèl·lules a 24, 48 i 72 h es mostra a la figura 3. Després del tractament amb els liposomes CPhG, la proliferació de HSC es va inhibir significativament en diferents moments (figura 3).

L'alliberament de lactat deshidrogenasa (LDH) d'HSC es va detectar després de 24 h de tractament amb diferents concentracions del liposoma CPhG. Els resultats es mostren a la taula 3. Els HSC tractats amb els liposomes CPhG no van tenir cap efecte significatiu en l'alliberament de LDH.

2.4. Els liposomes CPhG indueixen l'apoptosi dels HSC i detenen el cicle cel·lular

Els HSC es van exposar als liposomes CPhG (29, 45, 14, 72, 7, 36 卩g/mL) durant 24 hores i es va realitzar una tinció doble d'annexina-V-FITC/PE per detectar l'apoptosi mitjançant citometria de flux, tal com es mostra a la figura 4a. L'apoptosi total de les cèl·lules va augmentar estadísticament en comparació amb el grup control (p <0.05). després="" de="" 24="" h="" de="" tractament="" amb="" hsc="" per="" a="" cada="" grup="" de="" dosi,="" els="" liposomes="" cphg="" (29,="" 45="" ^="" g/ml)="" podrien="" induir="" apoptosi="" tardana="" dels="" hsc,="" i="" el="" percentatge="" de="" cèl·lules="" apoptòtiques="" tardanes="" era="" superior="" al="" de="" les="" cèl·lules="" apoptòtiques="" primerenques.="" la="" proporció="" de="" cèl·lules="" apoptòtiques="" primerenques="" era="" molt="" més="" alta="" que="" les="" cèl·lules="" apoptòtiques="" tardanes="" dels="" grups="" tractats="" amb="" liposoma="" cphg="" (14,72="" i="" 7,36="" |^g/ml).="" aquests="" resultats="" indiquen="" clarament="" que="" els="" liposomes="" cphg="" indueixen="" l'apoptosi="" dels="" hepatòcits,="" especialment="" en="" les="" etapes="" últimes="" dels="" hsc.="" a="" més,="" l'apoptosi="" total="" va="" augmentar="" amb="" la="" dosi="" dels="" liposomes="" cphg.="" aquests="" resultats="" suggereixen="" que="" els="" liposomes="" cphg="" poden="" inhibir="" l'activació="" dels="" hsc="" i="" la="" fibrosi="" hepàtica="" induint="" l'apoptosi="" dels="">

Per determinar l'efecte dels liposomes CPhG en el cicle cel·lular dels HSC, els HSC es van tractar amb els liposomes CPhG a concentracions de 29, 45, 14, 72 i 7, 36 昭 / mL durant 24 h i es van analitzar mitjançant citometria de flux (figura 4b). Els resultats van mostrar que la proporció de cèl·lules en la fase G0/G1 va augmentar significativament (p <{{10}},05), mentre="" que="" el="" percentatge="" de="" cèl·lules="" en="" la="" fase="" s="" va="" ser="" significativament="" reduït="" (p="">< 0,05).="" a="" més,="" la="" proporció="" de="" cèl·lules="" a="" la="" fase="" g2/m="" es="" va="" reduir="" significativament="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" control=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">

2.5. Estudi sobre el(s) mecanisme(s) d'acció dels liposomes C PhG in vitro

2.5.1. Els liposomes CPhG inhibeixen la proliferació de HSC mitjançant l'estimulació rrPDGF-BB

Per investigar més els efectes dels liposomes CPhG sobre la proliferació estimulada pel rrPDGF-BB dels HSC, es va realitzar un assaig MTT per mesurar la viabilitat dels HSC que es van tractar amb concentracions preestablertes dels liposomes CPhG durant 24, 48 i 72 h. Figura 5).

Després de 24 h de tractament amb HSC estimulats per rrPDGF-BB i 29,45, 14,721 i 7,36 昭/mL dels liposomes CPhG, les taxes de supervivència de les cèl·lules de cada grup de dosi van ser del 67,5%, 75,3% i 89,2%, respectivament. Després de 48 h, la taxa de supervivència va ser del 49,2%, 58,6% i 73,5%, respectivament, a les cèl·lules.
de cada grup de dosis. Després de 72 h de tractament, les taxes de supervivència de les cèl·lules de cada grup de dosi van ser del 45,3 per cent, 59,2 per cent i 79,2 per cent, respectivament. Els resultats van mostrar que els liposomes CPhG tenien un efecte inhibidor significatiu sobre els HSC estimulats per rrPDGF-BB, i aquest efecte inhibidor es va fer més evident a mesura que augmentava la dosi. Es suggereix que l'efecte inhibidor dels liposomes CPhG sobre els HSC contribueix a l'activitat anti-proliferació de CPhGliposomo.

2.5.2. Els liposomes CPhG inhibeixen l'activació de HSC in vitro

Els HSC a l'espai de Disse produeixen components de l'ECM com el col·lagen-1, (s-SMA i el col·lagen III. Els HSC també produeixen altres factors que regulen el desenvolupament d'ECM, com els MMP i els TIMP). Per investigar més els mecanismes induïts per rrPDGF-BB en HSC, vam avaluar l'expressió de proteïnes relacionades amb ECM, incloent col·lagen -1, Cosma, col·lagen III, MMP-1 i TIMP{{8} }. La figura 6a demostra que els grups de liposomes CPhG (29,45,14,72, 7,36 4g/mL) podrien reduir els nivells d'expressió d'ARNm de col·lagen-1, a-SMA i TIMP{{18} } i augmentar el nivell d'expressió d'ARNm de MMP-1 més que el grup rrPDGF-BB.

Figura 6. Efectes dels liposomes CPhG sobre les expressions de col·lagen-1, a-SMA, TIMP-1 i MMP-1 en HSC. (a) L'expressió d'ARNm del col·lagen -1, a-SMA, TIMP-1 i MMP-1 en HSC (assaig RT-PCR). (b) L'expressió proteica del col·lagen{{10}} i a-SMA. A, el grup de control; B, el grup tractat amb rrPDGF-BB; C, el grup tractat rrPDGF-BB més CPhG liposoma 29,45 g/mL; D, el liposoma rrPDGF-BB més CPhG 14,72 (grup tractat _ig/mL; E, el liposoma rrPDGF-BB més CPhG 7.3 6 卩g/m L grup tractat; Les dades s'expressen com a mitjana 土 SD . ** p <0,01, significativament="" diferent="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" d'hsc="" activats="" per="" rrpdgf-bb.="" #="" p="">< 0,05,="" significativament="" diferent="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" control.="" 6-actina="" s'utilitzava="" com="" a="" control="">

Els liposomes CPhG també van elevar els nivells d'ARNm de MMP-1. Els nivells d'a-SMA i col·lagen-1 es van expressar molt en els HSC activats per rrPDGF-BB. En canvi, els liposomes CPhG van disminuir els nivells d'a-SMA i col·lagen -1 (Figura 6b). Especialment a una concentració elevada (29,45 ^g/mL), el liposoma CPhG va reduir l'augment de l'expressió de col·lagen-1 i a-SMA mitjançant rrPDGF-BB.

Els liposomes 2.53 CPhG inhibeixen la via de senyalització PI3K/Akt

PI3K/Akt és una important via de transducció del senyal mediada pels receptors de la tirosina cinasa. La via de senyalització PI3K/Akt actua com a sensor en resposta a estímuls extracel·lulars i media els senyals cel·lulars, jugant així un paper crític en l'apoptosi i la proliferació cel·lular, afectant l'activitat de les molècules efectores aigües avall [13]. Per tal de verificar si la via PI3K/Akt participa en els efectes antiproliferació dels liposomes CPhG sobre HSC, es van examinar els nivells d'expressió i fosforilació de PI3K/Akt mitjançant l'anàlisi de western blot. Els resultats van mostrar que els nivells de p-PI3K i p-Akt van disminuir constantment en HSC després de 24 hores de tractament amb els liposomes CPhG, cosa que indica que els efectes antiproliferació dels liposomes CPhG contra HSC estan relacionats amb la desactivació de la via PI3K/Akt. , tal com es mostra a la figura 7.

2.5.4. Els liiposomes CPhG poden disminuir l'expressió de proteïnes de la via PI3K / Akt en HSC del plasmidi de sobreexpressió FAK mediat per rrPDGF-BB

FAK és un gen crític que regula la via de senyalització PI3K/Akt. La FAK activada pot fosforilar PI3K, la qual cosa condueix encara més a la fosforilació d'Akt. FAK media la transducció del senyal del receptor de la tirosina-proteïna quinasa, la integrina i altres vies cap a les cèl·lules, que són la unió i el centre de diverses vies intracel·lulars durant l'activació dels HSC. Per tant, vam especular

que els liposomes CPhG podrien suprimir l'activitat de la via de senyalització PI3K/Akt perjudicant l'activació de FAK. Posteriorment vam confirmar aquesta hipòtesi demostrant la sobreexpressió del gen FAK.

(pEX{{0}}NC) més el grup de liposoma CPhG 29,45 Lg/mL va disminuir significativament (p <0,01).

taca externa amb anticossos primaris específics. ** p < 0,01,="" significativament="" diferent="" en="" comparació="">

l'estimulació rrPDGF-BB més el grup pEX-3-FAK. més p <0.05, significativament="" diferent="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" tractat="" amb="" rrpdgf-bb.="" &="" p=""><0, 01,="" significativament="" diferent="" en="" comparació="" amb="" l'estimulació="">

més el grup pEX-3-NC. -L'actina es va utilitzar com a control intern.

cistanche pot anticancerígen

3. Discussió

S'ha demostrat que els CPhG tenen una varietat d'activitats biològiques, inclosa activitat antiinflamatòria [14,15], activitat antiosteoporosi [16,17], efecte sedant [18], activitat antifatiga [19], efecte neuroprotector [19] 20], i activitat hepatoprotectora [21,22]. Yang et al. va trobar que un extracte deC. tubulosapodria retardar significativament el progrés de la fibrosi hepàtica química experimental mitjançant la inhibició de la síntesi de col·lagen i la disminució de l'estrès oxidatiu [22]. Tanmateix, l'eficàcia dels CPhG com

Els protectors de calor estan limitats per la seva poca permeabilitat i baixa biodisponibilitat [23]. Per tant, és necessari ampliar l'aplicació dels CPhG desenvolupant un sistema de lliurament eficient per superar aquests contratemps.

En els darrers anys, tant la investigació de fàrmacs com la investigació clínica han confirmat que l'ús de nanopartícules com a portadors de fàrmacs pot millorar l'eficàcia dels fàrmacs in vivo. Els liposomes són algunes de les nanopartícules més importants [24].

Els liposomes es poden utilitzar com a portadors de fàrmacs per administrar amb èxit fàrmacs antiinflamatoris, fàrmacs anticancerígens, antibiòtics, fàrmacs antifúngics i altres categories diferents de fàrmacs [25]. Els liposomes també poden millorar l'estabilitat del fàrmac, augmentar la solubilitat del fàrmac i promoure la biocompatibilitat [26]. D'altra banda, els estudis han demostrat que el sistema d'administració de fàrmacs de nanopartícules sòlides (en el rang de 10-1000 nm) pot concentrar el 80 per cent de la dosi del fàrmac al fetge, permetent que el fàrmac entri. les cèl·lules hepàtiques [27]. Jing Zhu et al. va trobar que els liposomes de galanina tenien bons efectes d'orientació hepàtica [28]. Per tant, l'efecte d'orientació passiva dels medicaments nanoxinesos es pot utilitzar per tractar malalties del fetge o altres malalties. La mida de partícula dels liposomes CPhG preparats en el present estudi, que té un cert grau d'orientació hepàtica, és (216,7 ± 3,47) nm. El comportament d'alliberament de fàrmacs és una propietat important dels sistemes de lliurament de nanomedicaments. Com que els CPhG tenen una bona solubilitat en aigua, s'utilitza una solució tampó de PBS (pH=6.0) com a medi d'alliberament. A partir de la corba d'alliberament, es pot veure que abans de 2 h, el percentatge d'alliberament de liposomes CPhG era inferior al 40 per cent, no es va produir cap alliberament sobtat i hi va haver un cert efecte d'alliberament sostingut en comparació amb l'alliberament de CPhG. A partir de l'equació de la corba d'alliberament ajustada, l'alliberament dels liposomes CPhG a la solució tampó fosfat a pH=6,0 és coherent amb l'equació de Higuchi.

cistanchellaunaanti-apoptosi

En les malalties hepàtiques cròniques, l'activació contínua dels HSC condueix a la fibrosi hepàtica [29]. Per tant, la inhibició de l'activació, la proliferació i el cicle cel·lular dels HSC, o induir l'apoptosi de HSC, pot ser un nou punt de partida per a la teràpia dirigida de la fibrosi hepàtica [30-33]. Molts estudis han trobat que l'apoptosi és la clau per revertir la fibrosi hepàtica mitjançant la promoció de l'apoptosi [34]. El desenvolupament de la fibrosi hepàtica depèn de l'activació dels HSC, que poden oferir el potencial d'inhibir l'activació de HSC i induir l'apoptosi per prevenir o tractar la fibrosi hepàtica [35,36]. La LDH és un enzim del citosol cel·lular, que s'allibera al medi de cultiu quan la membrana cel·lular està danyada. Per aquests motius, hem realitzat estudis in vitro sobre les taxes de viabilitat cel·lular, el contingut de LDH a les cèl·lules i l'apoptosi i el cicle cel·lular dels HSC exposats als liposomes CPhG. Els resultats van mostrar que els liposomes CPhG inhibeixen fortament la viabilitat i la proliferació dels HSC i augmenten el percentatge de cèl·lules apoptòtiques de manera dependent de la concentració. A més, els resultats del cicle cel·lular indiquen que els liposomes CPhG podrien induir l'aturada del cicle cel·lular en la fase G1. Els resultats mostren que la clau dels liposomes CPhG per prevenir i tractar la fibrosi hepàtica és regular la proliferació cel·lular, l'apoptosi i el cicle cel·lular. En comparació amb el grup control en blanc, el contingut de LDH entre cada grup té una tendència a l'augment gradual. Tanmateix, no hi va haver cap diferència significativa (p > 0.05), cosa que indica que tot i que l'activitat disminueix per als HSC afectats pels liposomes CPhG, la majoria de les membranes cel·lulars romanen intactes. La inhibició de la proliferació de HSC pels liposomes CPhG no es deu a la toxicitat dels fàrmacs per a les cèl·lules.

El PDGF és el factor més crític que afecta la proliferació de HSC. Els receptors PDGF (PDGF-Ra i -p) pertanyen a la família dels receptors de la tirosina cinasa. PDGF-AA s'uneix exclusivament a PDGF-Ra, mentre que les cadenes PDGF-B s'uneixen i es dimereixen tant amb PDGF-Ra com amb -p [37]. Després de la unió del lligand al PDGF-R, els receptors es dimeritzen, la qual cosa condueix posteriorment a la fosforilació d'un residu intern de tirosina i a l'activació de diverses vies de senyalització aigües avall, induint finalment la proliferació i migració d'HSC activats. Aquest procés provoca una producció i deposició excessives de col·lagen i altres ECM, promovent així el desenvolupament i la progressió de la fibrosi hepàtica [38]. Breitkopf et al. va demostrar que la sobreexpressió hepàtica de PDGF-BB provoca la proliferació de HSC i la fibrosi hepàtica [39]. En el nostre estudi, hem utilitzat rrPDGF-BB com a estimulador per activar els HSC, i cada grup de liposomes CPhG dosificat podria inhibir la proliferació d'HSC i presentar una relació dosi-efecte aparent. Es suggereix que l'efecte inhibidor dels liposomes CPhG sobre els HSC contribueix a l'activitat antiproliferació dels liposomes CPhG.

L'activació dels HSC s'associa amb molts canvis en els patrons d'expressió gènica de les cèl·lules. En particular, els canvis en l'expressió gènica del col·lagen -1 i l'a-SMA estan més correlacionats amb les propietats de fibrosi dels HSC activats [40]. Les MMP són endopeptidases dependents del zinc que tenen un paper important en la degradació de tots els components de la proteïna ECM en condicions fisiològiques i patològiques. Els MMP i els TIMP medien la síntesi i la degradació de l'ECM, respectivament. Els MMP poden promoure la degradació de l'ECM. El delicat equilibri entre MMP i TIMP determina l'aparició de fibrosi hepàtica [29]. En comparació amb el grup rrPDGF-BB, l'expressió de TIMP-1, a-SMA i col·lagen-1 en els grups de liposomes CPhG va augmentar significativament, mentre que l'expressió de MMP-9 va disminuir. El tractament amb liposoma CPhG va revertir notablement les expressions anormals induïdes per rrPDGF-BB en HSC. Aquestes dades indiquen que els liposomes CPhG possiblement inhibeixen la generació d'ECM restablint l'equilibri entre MMP i TIMP, augmentant així els nivells de MMP-1 i disminuint l'expressió de TIMP{-1, a-SMA i col·lagen-1 i potencialment promoure la degradació de la matriu extracel·lular.

FAK és una mena de complex d'adhesió focal. PDGF també pot activar FAK interaccionant amb la proteïna ECM mitjançant la integrina [41]. El complex d'adhesió focal proporciona un sensor directe per a la integritat de l'entorn extracel·lular. L'activació de FAK provoca l'activació de PI3K. S'ha demostrat que PI3K està implicat en la proliferació de diversos tipus de cèl·lules [42]. El seu paper crucial en els HSC es va demostrar mitjançant l'ús d'inhibidors específics de PI3K LY294002 i wortmannin per bloquejar la mitogènesi i la quimiotaxi induïda per PDGF sense afectar l'autofosforilació del receptor de PDGF [43]. PI3K es recluta en receptors PDGF fosforilats dimeritzats, que activen la proteïna cinasa C (PKC), Akt i les cinases p70S6 (p70S6K) [44]. S'ha informat que es va utilitzar un FAK dominant-negatiu (Ad-FAKCD) per bloquejar l'activitat de FAK i inhibir l'activació de PI3K induïda per la proliferació de PDGF i HSC després del tractament amb PDGF [45]. Per tant, vam plantejar la hipòtesi que la via FAK/PI3K/Akt és un possible objectiu per als liposomes CPhG.

Els nostres resultats demostren que, en comparació amb l'estimulació rrPDGF-BB més el grup X-3-FAK, els nivells d'expressió de proteïnes de FAK, PI3K fosforilat i Akt fosforilat es van regular a la baixa en l'estimulació rrPDGF-BB més X-3-FAK més grup de liposoma CPhG 29,45 Lg/mL. Aquests resultats mostren que el tractament amb liposoma CPhG 29,45 Lg/mL podria disminuir l'expressió de la proteïna FAK i les proteïnes PI3K i Akt fosforilades aigües avall de FAK.

Amb l'aprofundiment de la investigació sobre la química i la farmacologia de la medicina tradicional xinesa, s'han trobat i confirmat més i més ingredients actius de la medicina tradicional xinesa. El paclitaxel, l'artemisinina i altres fàrmacs han estat àmpliament reconeguts com a fàrmacs de tractament de primera línia per a malalties relacionades a tot el món. Tanmateix, al mateix temps, s'ha trobat que, tot i que l'efecte farmacològic in vitro de molts ingredients mèdics xinesos és molt fort, tenen poca solubilitat en aigua, una vida mitjana curta, poca estabilitat, baixa biodisponibilitat, efectes secundaris tòxics i molts. altres problemes que limiten molt la seva aplicació medicinal i clínica. El sistema de lliurament de nanomedicaments és un nou sistema de lliurament de fàrmacs amb un gran potencial de desenvolupament i és un punt calent en la investigació farmacèutica moderna. La seva aplicació en la investigació i desenvolupament de noves formes de medicines tradicionals xineses no només millora les formes tradicionals de les medicines xineses, sinó que també millora l'efecte curatiu de les medicines tradicionals xineses fins a cert punt i augmenta l'estabilitat dels fàrmacs in vivo. A més, els liposomes no modificats són absorbits principalment pel RES, depenent de la seva mida de partícula, propietats superficials i altres factors. També estan dirigits passivament al fetge. Per tal de millorar l'eficiència de l'orientació hepàtica dels liposomes normals, la concentració del teixit diana es pot augmentar connectant lligands específics o grups funcionals específics.

Per tant, en futures investigacions, hauríem de donar importància a les propietats físiques i químiques de l'extracció i purificació de CPhG, com ara la solubilitat, l'estabilitat, l'acidesa i l'alcalinitat, així com l'estudi de la biofarmacèutica i la farmacocinètica. Hauríem d'establir una teoria única de disseny de formulacions, una plataforma tecnològica de preparació i un mètode d'avaluació de la qualitat per als CPhG i també desenvolupar una varietat de sistemes de càrrega de nanomedicaments per a CPhG, per garantir que els CPhG s'utilitzin el més a fons possible. Aprofitar al màxim aquests avantatges serà la direcció de la nostra investigació futura.