Propietats químiques d'un mannoglucà de Cistanche Deserticola

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

1. Materials

Es van utilitzar pastes orals per a cavalls de dos fabricants diferents que contenien 10 mg/g (A) o 20 mg/g (B) d'ivermectina, respectivament. Es va realitzar l'assaig quantitatiu d'ivermectina i el contingut era del 104,4 al 107,7 per cent de la concentració declarada.

2. Prova de dissolució

La prova es va realitzar amb un Ph. Eur. aparell de paleta (Pharma Test, Heinberg, Alemanya), a agitacions de 75 rpm o 50 rpm, a 37 -0,5 C. Laurilsulfat de sodi (BDH Chemicals, Poole, Anglaterra) 0,5 per cent (p /v) es va utilitzar una solució aquosa com a mitjà de dissolució (900 ml). La pasta (4 g d'A o 2 g B) es va col·locar al recipient amb una xeringa amb una cànula (A) o deixant caure la mostra a la superfície del medi de dissolució (B). Passats els intervals de temps (15, 30, 45, 60 min i 2 h), es va retirar una mostra del medi de dissolució (2 ml), es va filtrar a través d'un filtre de vidre i es va analitzar.

3. Anàlisi HPLC

La determinació d'ivermectina es va realitzar amb un mètode HPLC modificat tal com es descriu a Ph. Eur. Les solucions analitzades es van diluir amb metanol (1: 10). El sistema HPLC constava d'una columna d'octadecil (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), un integrador D-12500 A, un detector UV-Vis L{{7} }, bomba L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Alemanya). Es va utilitzar una barreja d'acetonitril: metanol: aigua (64: 24: 16) com a fase mòbil amb un cabal d'1, 9 ml/min. El volum de la mostra injectada era de 20 ml i la detecció es va realitzar a 254 nm.

4. Estudis de solubilitat

Es va sacsejar un accés de la substància en matràs de vidre ben tancats amb un dissolvent adequat (taula 1) durant 20 h a 37 0,1 C. Les suspensions es van filtrar i el filtrat, després de la dilució en metanol, es va analitzar per HPLC. .

5. Estabilitat en solució àcida

Les solucions d'ivermectina en HCl {{0}}.1 M es van emmagatzemar en vials de vidre ben tancats a 20 C i 37 C. Els cromatogrames de les solucions es van registrar a t ¼ 0 i després d'1, 2 i 6 h. Es va calcular l'àrea de la ivermectina (temps de retenció 10,5 min) i els pics addicionals.

Referències

Guia de la FDA per a la indústria: formes de dosificació semisòlids no estèrils SUPAC-SS. Ampliació i canvis posteriors a l'aprovació: química, fabricació i controls; proves d'alliberament in vitro i documentació de bioequivalència in vivo. Maig de 1997. Directrius FIP per a les proves de dissolució de productes orals sòlids (1997) Dissolut. Tecnol. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Directrius FIP/AAPS per a la prova de dissolució/alliberament in vitro de formes de dosificació noves/especials, AAPS PharmSciTech, 4 (1) article 7 Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, School de Ciències Farmacèutiques, Centre de Ciències de la Salut de la Universitat de Pequín, Beijing, Xina

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Rebut el 13 de febrer de 2004, acceptat el 4 d'abril de 2004, el Prof. Dr. Pengfei Tu, Centre de Recerca Moderna de Medicina Tradicional Xinesa, Escola de Ciències Farmacèutiques, Centre de Ciències de la Salut de la Universitat de Pequín, núm. 38, Carretera Xueyuan , Districte de Haidian, Beijing 100083, Xina Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Un nou manoglucan deCistanche deserticolade la Xina es caracteritza. El compost és responsable d'una lleu estimulació de la proliferació de limfòcits T i B induïda per mitògens.

Cistanche deserticolaYC Ma és un holoparàsit que creix a les arrels de la planta dicotiledónea Haloxylon ammodendron Bunge que es troba àmpliament distribuïda al nord-oest de la Xina. Com que és un tònic important en la medicina oriental, s'han reivindicat molts components actius i activitats farmacològiques (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Aquestes propietats podrien estar associades amb alguns dels components polisacàrids deCistancheque encara no s'han investigat. S'han aïllat i caracteritzat polisacàrids pèctics mitogènics i polisacàrids neutresCistanche deserticolade Mongòlia (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Aquí informem de les propietats químiques d'un nou manoglucàCistanche deserticolade la Xina, que és responsable de l'estimulació lleu de la proliferació de limfòcits T i B induïda per mitògens. Després de les tiges deCistanche deserticolaYC Ma es va extreure amb etanol al 95 per cent, es va utilitzar aigua destil·lada freda per extreure el residu. L'extracte d'aigua freda es va precipitar amb EtOH, la proteïna es va eliminar i es va dialitzar, obtenint el polisacàrid cru CCDP. El polisacàrid brut es va fraccionar en una columna DEAE i una columna Sephadex G-150 per obtenir un polisacàrid lliure de proteïnes (CDP-6), que comprenia glucosa (89,2 per cent) i manosa (1{{58}). },4 per cent ), i del qual es va estimar que el Sr mitjà era de 6.8 -104. El polisacàrid CDP-6 va mostrar [a 20 D 42 (c 1, H2O). Les configuracions absolutes dels sucres es van determinar mitjançant GC de TMS (– )-2-butilglicòsids. El CDP-6 es va metilar (Needs et al. 1993), es va hidrolitzar, es va convertir en acetats d'alditol i es va analitzar per GC i GC-MS (taula). Aquest resultat, juntament amb les dades de proporció molar de l'anàlisi de metilació, va suggerir que el CDP-6 té un Glcp enllaçat predominantment 1,6-i una columna vertebral 1,6- enllaçat en menor mesura ramificat a O{{ 24}} de manosa. L'anàlisi de metilació de dos polímers (CDP-6-1, CDP{-6-2) de la hidròlisi parcial va confirmar que el CDP-6 té una columna vertebral que consta d'1,6-residus de glucosil enllaçats i 1,6-residus de manosil enllaçats, que estan substituïts a l'O-3 de la manosa per ramificacions que consisteixen en els residus terminals, 1,6- de glucosil enllaçats i 1,3,{{38} }residus de manosil enllaçats. Segons les proporcions molars i la literatura (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), l'espectre de RMN 13C del CDP-6 mostrava senyals deguts als carbonis anomèrics de l'a-d-Glcp (C{{45} }} a 98,4 ppm), bd-Map (C-1 a 104,3-104,9 ppm) i ad-Map (C{-1 a 1{00,0 ppm). L'espectre de RMN 1H de CDP-6-2 en D2O va mostrar senyals de protons corresponents a l'ad-Glcp (H{-1 a 4,94–4,95 ppm) i a-d-Map (H{-1 a 4,96–5,00 ppm). L'espectre de RMN 13C de CDP-6-2 en D2O mostrava senyals de protons corresponents a l'aD-Glcp (C-1 a 98,6 ppm) i ad-Map (C-1 a 98,4 ppm). S'informa que els manoglucans tenen una columna vertebral 1,4-glucopirananà enllaçat i 1,4-manopiranan enllaçat (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 té algunes característiques estructurals diferents pel seu a-1,6-Glcp enllaçat i b{-1,6-linked Map backbone, i està substituït per branques de manoglucan (Fig.). Per tal d'investigar l'ús deCistanche deserticolaa la medicina popular, es va avaluar l'efecte del CDP-6 sobre els sistemes de cèl·lules T i B. Es va trobar que estimula suaument la proliferació de limfòcits T i B induïda per mitògens.

Experimental

1. Procediments generals

La rotació òptica es va mesurar amb un polarímetre automàtic W22-1S. Els espectres IR es van determinar amb un espectròmetre Perkin-Elmer 599B. L'anàlisi GC es va realitzar en un instrument Agilent HP6890N, equipat amb un detector FID. La GC-MS es va realitzar en un instrument Finnigan Trace GC-MS. L'homogeneïtat i el Mr de CDP-6 es van estimar a partir de la corba de calibratge del volum d'elució de dextrans estàndard, que es va realitzar a

un aparell Agilent de la sèrie 1100 amb una columna Shodex KS-805. Els espectres de RMN 1H i RMN 13C es van registrar amb un instrument INOVA-500. El contingut de proteïnes es va analitzar pel mètode de Bradford (Andre et al. 1975). Els monosacàrids es van analitzar pel que fa al seu acetat d'alditol després d'haver estat hidrolitzats (2 M TFA, 2 h, 110 C), reduïts i acetats. Els hidrolitzats es van analitzar mitjançant TLC en una placa de gel de sílice que contenia un 5% de fosfat dihidrogen sòdic en BuOH-EtOAc-alcohol isopropílic-HOAC--H2Opiridina (3,5: 10: 6: 3,5: 3: 3) i es van detectar sucres ruixant amb orcinol. -H2SO4. Els acetats d'alditol resultants es van analitzar mitjançant GLC mitjançant una columna capil·lar HP-5 (30 m 0,32 mm). El CDP-6 va ser metilat pel mètode Ciucanu, seguit d'hidròlisi, i es va analitzar com acetats d'alditol parcialment metilats per GC-MS. Després de la hidròlisi parcial, els productes es van dialitzar i es van separar, obtenint dos polímers, CDP-6-1 i CDP{-6-2.

2. Material vegetal

La planta es va recollir a la província de Mongòlia Interior a la Xina l'agost de 2001 i va ser identificada per Hu-Biao Chen, Departament de Medicina Natural, Escola de Ciències Farmacèutiques, Centre de Ciències de la Salut de la Universitat de Pequín. Es va dipositar un exemplar de val [E-1-(9)] d'aquesta planta a l'Escola de Ciències Farmacèutiques de la Universitat de Pequín. 3. Extracció, aïllament i purificació del polisacàrid CDP-6 La tija deCistanche deserticolaYC Ma (1500 g) es va extreure amb etanol al 95 per cent (6 L) a reflux. El residu sec insoluble en etanol es va macerar tres vegades amb aigua destil·lada freda cada 12 h. L'extracte d'aigua freda es va filtrar i el filtrat es va centrifugar. Després de la precipitació amb quatre volums d'EtOH (agitant i reposant durant 24 h a 4 C), es va obtenir el producte precipitat (35,5 g). La proteïna del precipitat es va eliminar pel mètode de Savage. Després de la dissolució en aigua destil·lada, el residu (25,5 g) es va dialitzar i liofilitzar (rendiment: 10,6 g). El polisacàrid brut (8 g) es va dissoldre en aigua destil·lada (100 ml, 8 per cent p/v) i es va separar mitjançant una columna DEAE (70 5 cm, el gradient de 0-2 M NaCl, per 1, 5 L). Es va obtenir una fracció eluïda amb aigua (600 mg). Es va purificar una mostra (250 mg) mitjançant cromatografia de permeació de gel en columna sobre columnes Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 ml, 5 ml per fracció). Les fraccions de CDP-6 (1500–1600 ml) es van reunir, es van dialitzar i es van liofilitzar. Després de ser dessalat per Sephadex G-25 (60 1 cm). Es va obtenir CDP-6 (110 mg) i es va determinar com un pic únic per HPSGC.

Reconeixement:L'autor agraeix al doctor Baomei Shao i al professor Xiaoming Gao, de l'Escola de Ciències Mèdiques Bàsiques del Centre de Ciències de la Salut de la Universitat de Pequín, per mesurar l'activitat immunomoduladora del CDP-6.