Medicina Xinesa Cistanche Composició química i anàlisi dels components del cos Ⅲ

Capítol 2 Estudi qualitatiu sobre la composició química de Cistanche deserticola

Cistanche és la tija carnosa de la fulla escamosa secaCistanche deserticola YC.Mai Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. És una de les famoses medicines tradicionals xineses nutritives del yang renal. Té les funcions deronyó-yang nutritiuTé un efecte laxant i s'utilitza sovint per tractar la impotència, la infertilitat, el dolor de cintura i genolls, la debilitat dels músculs i els ossos, la sequedat intestinal i el restrenyiment, etc. Té efectes farmacològics com anti- demència, malaltia anti-Parkinson, protecció de la isquèmia cerebral i millora de les capacitats d'aprenentatge i memòria. Per tal d'aclarir la base material deleficàcia de Cistanche deserticola, aquest capítol utilitza HPLC i LC-IT-TOF-MS per caracteritzar de manera exhaustivacomponents químics de Cistanche. A partir d'un resum sistemàtic de les regles de craqueig de diversos tipus de components químics, s'analitzen sistemàticament les propietats de Cistanche deserticola. Composició química, per proporcionar dades riques de fonts fiablesdilucidació en profunditatde les propietats medicinals deCistanche deserticolaen viu.

QUANT TEMPS TREGA A FUNCIONAR CISTANCHE?

Secció 1 Materials experimentals

1.Instrument

Espectròmetre de masses líquids Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS (equipat amb 2 bombes LC-20ADXR, mostreig automàtic SIL-20AC, forn de columna CTO-20AC, detector UV SPD-M20A, Màquina de gas de descontaminació DGU-20A3R, CBM-20Un controlador, font d'ions ESI, Shimadzu Company, Japó), sistema de purificació d'aigua ultrapura Milli-Q (Milipore Company, EUA): balança analítica electrònica Mettler ME204 ( Mettler Toledo Company, Suïssa).

2. Reactius

El metanol de grau de cromatografia i espectrometria de masses, acetonitril i àcid fòrmic de grau d'espectrometria de masses es van comprar a Thermo-Fisher Company (Pittsburgh, PA, EUA). L'aigua era aigua ultrapura Milli-Q feta al laboratori (Millipore, Bedford, MA, EUA). La resta de reactius són tots de grau analític.

Salidròsid, 6-desoxicatalpol, 8-àcid epilogànic, equinacòsid, acteòsid, isòsid Verbascòsid (isoacteòsid) i pinoresinol- -D-glucopiranòsid (pinoresinol- -D-glucopiranòsid) tots dos van ser proporcionats pel grup de recerca del professor Tu Pengfei al Laboratori clau de fàrmacs naturals i biomimètics de la Universitat de Pequín. El sarcòsid F (cistanosideF) es va comprar a Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistàsid A (cistanoside A), 2'-acetilacteòsid (2'-acetilacteòsid), 2'-acetilpoliumosid (2'-acetilpoliumòsid), cistàsid poliglucòsid (poliumòsid) ), cistanoside E (cistanosideE), isocistanoside E (isocistanòsideE), cistanoside C (cistanosideC), isocistanoside C (isocistanòsideC) i cistanoside D (cistanosideD) es van comprar a Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., tubuloside A (tubulòsideA) i tubuloside B (tubulòsideB) es van comprar a Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.

Secció 2 Contingut experimental

1. Preparació de la mostra

1.1 Preparació de la substància de referència

Peseu amb precisió les quantitats adequades de diverses substàncies de referència a la "Secció 1 Materials experimentals" anterior i prepareu solucions d'emmagatzematge de 10 mM amb DMSO. Pipeteu amb precisió 2 ml de cada solució madre i diluïu-la amb acetonitril al 25% per fer una solució de control mixta de 2 μM. 1.2 Preparació de la solució d'assaig

L'extracte aquós de Cistanche deserticola va ser elaborat pel nostre laboratori i la mostra s'emmagatzema al Centre de Recerca de Modernització de Medicina Tradicional Xinesa, Escola de Medicina Tradicional Xinesa, Universitat de Medicina Xinesa de Beijing. Agafeu 20 mg de pols de Cistanche deserticola, afegiu-hi 40 ml d'aigua per dissoldre, agitar i barrejar, centrifugar a 10000 rpm durant 10 min i prendre el sobrenedant. És a dir, s'obté la solució de prova.

3. Condicions d'espectrometria de masses

Font d'ions electrospray (ESI), el mode d'escaneig consisteix a escanejar ions positius i negatius simultàniament i activar automàticament l'espectrometria de masses multinivell. El rang d'exploració massiva de MS'~MS' per als ions positius és m/z50~800, i per als ions negatius és m/z100~1000. Els voltatges de la cambra de polvorització són de 4,5 kV i -3,5 kV respectivament: el cabal de gas atomitzador (Nz) és d'1,5 Lmin; la pressió del gas d'assecat és de 110MPa; la tensió de detecció és d'1,55 kV; les temperatures del tub dessolvent corbat (CDL) i del mòdul de calefacció són de 200 graus. La pressió de la cambra de col·lisió és d'1,5e-Pa; la pressió de la trampa d'ions és de 2,8e-Pa; el nombre de repeticions de les primeres etapes positives i negatives és 1 i el temps d'acumulació d'ions és de 30 ms; el nombre de repeticions de la segona etapa positiva i negativa és 2 i el temps d'acumulació d'ions és de 20 ms. ; L'energia de dissociació induïda per col·lisió (CID) és del 50%.

Secció 3 Resultats i discussió

Selecció de columna

Per obtenir una millor separació cromatogràfica, hem seleccionat àmpliament columnes cromatogràfiques de diferents fabricants i especificacions, com ara la columna cromatogràfica ACEUltraCore 2.5 SuperC8 (3.0x150mm, 2.5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Escòcia), Shiseido Capcell Core Ci8 (2,1 mm x 150 mm, 2,7 μm), columna Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, EUA) i columna Capcell Core ADME (2,1 x 150 mm, 2,7 μm, Shiseido Corporation, Japó). Mitjançant una comparació sistemàtica, es va trobar que quan s'utilitza la columna cromatogràfica Capcell Core ADME (2,1x150 mm, 2,7 μm, Shiseido Co., Ltd., Japó), cada senyal cromatogràfic es pot separar millor (figura 3-1).

2. Selecció de les condicions de la fase líquida

Atès que els principals components químics deCistanche deserticolasón glicòsids de feniletanol, lignans, iridoides i altres compostos, generalment respon millor en condicions d'ions negatius. Per identificar components químics de baix nivell a l'extracte d'aigua de Cistanche deserticola, s'especula que és possible que s'hagin d'afegir àcids a la fase mòbil per millorar la potència. Per tant, aquest experiment va utilitzar aigua-metanol, aigua-acetonitril, 0,1% àcid fòrmic aigua-metanol i 0,1% àcid fòrmic aigua-acetonitril com a sistemes de fase mòbil per a la investigació. Es va trobar que el 0,1% d'àcid fòrmic aigua-acetonitril tenia el millor efecte de separació, amb una bona forma de pic i una gran capacitat de pic, de manera que es van seleccionar 0,1% d'aigua d'àcid fòrmic i acetonitril com a fase mòbil. 3. Anàlisi qualitativa dels components químics. Utilitzeu 19 substàncies de referència existents per explorar les regles de fragmentació de l'espectrometria de masses de diversos tipus de compostos a Cistanche deserticola. Les substàncies de referència mixtes són cromatogrames PDA a 340 nm a la columna ADME i gràfics BPC en modes d'ions positius i negatius. Vegeu la figura 3-1. Vam revisar la literatura rellevant a través de PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP i Wanfang, etc., i vam construir una base de dades feta per compte propi de components químics de Cistanche deserticola. A partir de la comparació de les regles de fragmentació de l'espectrometria de masses i els temps de retenció de compostos coneguts, vam identificar preliminarment 45 compostos a Cistanche deserticola. compostos, inclosos 31 glicòsids de feniletanol, 9 iridoides, 3 benzilglicòsids i 2 lignans, tal com es mostra a la taula 3-1.

En comparar el temps de confidencialitat, l'espectre de MS i l'espectre de MS de la substància de referència, compostos 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 es van identificar seqüencialment amb precisió com a genipina, cistanqueïna F, cistanqueòsid E, echinaceaside, crisantoside, cistanchein A, tuberosina A, larchresinol 4-0- -D glucòsid, mullein glicòsids, isocannabinoide glicòsid, pinoresina monometil èter glicòsid, cistàl verbasco2'glicòsid, C, isocistancòsid C, tuberosina B i cistanche glicòsid D.

Aquest experiment utilitza la tecnologia HPLC-IT-TOF-MS per analitzar sistemàticament de manera ràpida i precisa els components químics complexos de l'extracte d'aigua de Cistanche deserticola, que proporciona una base per a una anàlisi integral de qualitat de Cistanche deserticola i la investigació sobre substàncies farmacològiques in vivo.

Figura 3-1 Cromatograma de substàncies de referència mixtes A dalt: gràfic BPC en mode d'ions positius: A baix: gràfic BPC en mode d'ions negatius

Figura 3-1 Cromatograma de substàncies de referència mixtes A dalt: gràfic BPC en mode d'ions positius: A baix: gràfic BPC en mode d'ions negatius